生物制藥考試終審稿)

1、文稿歸稿存檔編號：KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-生物制藥試題1、簡述基因工程藥物生產(chǎn)的基本過程？（I）目的基因的分離和提?。?）.目的基因與載體結(jié)合構(gòu)建重組體（3）重組體導(dǎo)入 宿主細(xì)胞（4）重組體的篩選、鑒定和分析（5）目的基因的表達(dá)上游階段：主要是分離目的基因、構(gòu)建工程菌。目的基因獲得后，最主要的就是目的 基因的表達(dá)。選擇基因表達(dá)系統(tǒng)主要考慮的是保證表達(dá)的蛋白質(zhì)功能，其次是表達(dá)的量和 分離純化的難易。此階段的工作主要在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)完成。下游階段：從工程菌的大量培養(yǎng)一直到產(chǎn)品的分離純化和質(zhì)量控制。此階段是將實(shí)驗(yàn) 室的成股票產(chǎn)業(yè)化、商品化，主要包括工程

2、菌大規(guī)模發(fā)酵最佳參數(shù)的確立，新型生物反應(yīng) 器的研制，高效分離介質(zhì)及裝置的開發(fā)，分離純化的優(yōu)化控制，高純度產(chǎn)品的制備技術(shù)， 生物傳感器等一系列儀器表的設(shè)計(jì)和制造，電子計(jì)算機(jī)的優(yōu)化控制等。2. 現(xiàn)代生物技術(shù)包括哪些在生物制藥領(lǐng)域的主要應(yīng)用是什么酶工程、發(fā)酵工程、細(xì)胞工程、基因工程、蛋白質(zhì)工程1. 抗生素不僅可用于治療細(xì)菌感染而且可用于治療腫瘤以及病毒引起的疾病。一個(gè) 好的抗生素應(yīng)具有較廣的抗菌譜外，還應(yīng)具有較好的選擇性，不產(chǎn)生過敏和耐藥性，有高 度的穩(wěn)定性，收率高，成本低，適于工業(yè)生產(chǎn).目前生產(chǎn)和應(yīng)用的抗生素還不能完全滿足 以上要求 利用發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)的“抗生素”可以把微生物代謝產(chǎn)生有用的物質(zhì)起到對

3、人類 疾病的預(yù)防和治療。還可以通過發(fā)酵工程技術(shù)生產(chǎn)維生素類藥物，多烯脂肪酸，醫(yī)用酶制 劑。2. 運(yùn)用固定化技術(shù)制備藥物及中間體固定化技術(shù)主要指酶、完整細(xì)胞的固定化，采 用固定化技術(shù)后，酶既不會流失，也不會污染產(chǎn) 品質(zhì)量。固定化細(xì)胞可以使酶在細(xì)胞內(nèi) 環(huán)境中發(fā)揮作用，酶活力損失少，而且免除了破碎細(xì)胞提取胞內(nèi)酶的手續(xù)。固定化酶在 經(jīng)過濾或離心后可以長期重復(fù)使用，而且它的穩(wěn)定性也得 到提高，在實(shí)際應(yīng)用中，固定 化酶可以裝在反應(yīng)器中，使整個(gè)生產(chǎn)連續(xù)化進(jìn)行，有利于生產(chǎn) 的自動化控制，提高生產(chǎn) 率。3. 利用動物、植物細(xì)胞和組織培養(yǎng)來提供藥物，通過動物細(xì)胞培養(yǎng)，已可獲得病毒 疫茵、干擾素、激素、單克隆抗體、

4、免疫制劑及特殊的酶和物質(zhì)。把植物細(xì)胞或組織從植 物體內(nèi)分離出來，并在比較簡單的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)可獲得藥品，具有不受氣候影響、穩(wěn) 定供應(yīng)、在控制條件下生產(chǎn)、可采用連續(xù)方法生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。4. 基因工程技術(shù)在藥物生產(chǎn)過程中主要用子改良工業(yè)生產(chǎn)菌種、提高菌種生產(chǎn)能力 和性能、提高有效組分含量、簡化工藝提高收率、有利于提取精制等后處理工序，并可 大大減少 環(huán)境污染等。隨著對各種工業(yè)生產(chǎn)的微生物藥物生物合成途徑的深人了解以及 基因重組技術(shù)的不斷發(fā)展，應(yīng)用基因工程技術(shù)定向構(gòu)建高產(chǎn)菌株，改進(jìn)藥物生產(chǎn)工藝。3、什么是人類基因組計(jì)劃它對生物制藥有什么意義定義：人類基因組計(jì)劃是美國科學(xué)家于1985年率先提出的，旨在闡

5、明人類基因組30 億個(gè)堿基對的序列，發(fā)現(xiàn)所有人類基因并搞清其在染色體上的位置，破譯人類全部遺傳信 息，使人類第一次在分子水平上全面地認(rèn)識自我。意義：1.人類基因組研究為生物制藥提供了明確的目標(biāo)，對人類基因組的研究最終 將闡明疾病的發(fā)生機(jī)理和遺傳基礎(chǔ)。而這些問題一旦明確，生物制藥就有了明確的目標(biāo)， 從而極大地減少藥物研究的盲目性。2. 人類基因組研究推動了基因工程藥物的發(fā)展通過人類基因組研究，許多致病基因 將被查明。無論在疾病的診斷還是防治方面，都為基因工程藥物提供了廣闊的研究領(lǐng)域。 通過正?；蚝椭虏』虻谋容^，我們將能發(fā)現(xiàn)征服疾病的途徑，這些途徑可能相當(dāng)一部 分是基因工程藥物。因此，人類基因

6、組的研究為生物制藥提供了難得的發(fā)展機(jī)遇?？梢韵?信，隨著人類基因組研究的進(jìn)展，通過轉(zhuǎn)基因工程或克隆技術(shù)生產(chǎn)的試劑盒或治療藥品將 逐漸增多。同時(shí)，基因工程藥物的發(fā)展也使治療成本大幅降低，4、什么是分子標(biāo)記？簡述分子標(biāo)記在藥用植物中的應(yīng)用。定義：分子標(biāo)記是生物遺傳標(biāo)記的一種。指受基因控制并且能夠穩(wěn)定遺傳的，能代表 個(gè)體或群體的遺傳特征,并可被用作遺傳分析的物質(zhì)。廣義的分子標(biāo)記是指可遺傳的并可檢測的DNA序列或蛋白質(zhì)。狹義分子標(biāo)記是指能反 映生物個(gè)體或種群間基因組中某種差異的特異性DNA片段。概念：是以個(gè)體間遺傳物質(zhì)內(nèi)核昔酸序列變異為基礎(chǔ)的遺傳標(biāo)記，是DNA水平遺傳多 態(tài)性的直接的反映。應(yīng)用：DNA

7、作為植物的遺傳物質(zhì)，具有穩(wěn)定、可靠、不受外界因素影響的特點(diǎn)，目前 利用不同種類的分子標(biāo)記開展中草藥植物的種屬分類工作取得了很大進(jìn)展。采用的分子標(biāo) 記多種多樣，以RAPD標(biāo)記較多見。所涉及的中草藥植物總計(jì)達(dá)到近百種之多，對于不同的 中草藥的不同種的分類來講,利用分子標(biāo)記技術(shù)不僅可以對分析結(jié)果進(jìn)行聚類分析,而且可 以獲得與種有關(guān)的DNA帶型。1. 近緣藥用植物品種的DNA分子鑒定 近緣藥用植物品種的鑒定往往采用傳統(tǒng)的生藥 學(xué)方法,但近緣藥用植物品種在外觀形態(tài)、組織特征、化學(xué)成分等方面十分相似,難以準(zhǔn)確 辨認(rèn)。而DNA分子遺傳標(biāo)記能夠從分子水平上檢測生物的遺傳背景差異。2. 藥用植物道地性分析 藥材

8、的“道地性”是中草藥研究的一個(gè)重要的方面。采用DNA分子診斷技術(shù)并輔以形態(tài)學(xué)分析,可以從分子水平上來揭示藥材的“道地性”。3. 分子標(biāo)記輔助藥用植物育種品質(zhì)選育傳統(tǒng)上主要是依據(jù)一些形態(tài)、生理生化性狀 選擇親本及子代。分子標(biāo)記相對于形態(tài)標(biāo)記具有無可比擬的優(yōu)越性。在基因定位基礎(chǔ)上， 借助與有利基因緊密連鎖的DNA標(biāo)記,在群體中選擇具有某些理想基因型和基因型組合的 個(gè)體,結(jié)合常規(guī)手段,培育優(yōu)良品種。這種將標(biāo)記基因型鑒定整合于經(jīng)典育種研究中的新型 育種方法,稱為分子標(biāo)記輔助選擇。利用分子標(biāo)記技術(shù)在農(nóng)作物中定位了大量的主效和微效基因，有關(guān)的分子標(biāo)記輔助選 擇己成功展開并獲得了顯著的進(jìn)展。在中草藥植物的育

9、種研究方面,可以利用分子標(biāo)記在 育種過程中進(jìn)行親本性狀的鑒定、檢測,輔助選擇親本及子代,加速品種的培育、縮短育種 周期。5、什么是反義RNA?與傳統(tǒng)藥物相比，反義RNA作為基因治療藥物的主要優(yōu)點(diǎn)。定義：反義RNA是指與mRNA互補(bǔ)的RNA分子，也包括與其它RNA互補(bǔ)的RNA分子。 由于核糖體不能翻譯雙鏈的RNA,所以反義RNA與mRNA特異性的互補(bǔ)結(jié)合，即抑制了該 m 的翻譯。通過反義RNA控制mRNA的翻譯是原核生物基因表達(dá)調(diào)控的一種方式。定義：通過人工合成反義RNA的基因，并將其導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄成反義RNA,即能抑制 某特定基因的表達(dá)，阻斷該基因的功能，有助于了解該基因?qū)?xì)胞生長和分化的作用

10、。反義RNA,根據(jù)反義RNA的作用機(jī)制可將其分為3類：I類反義RNA直接作用于靶 mRNA的SD序列和（或）部分編碼區(qū)，直接抑制翻譯，或與靶mRNA結(jié)合形成雙鏈RNA,從 而易被RNA酶III降解；Il類反義RNA與mRNA的非編碼區(qū)結(jié)合，引起mRNA構(gòu)象變化，抑 制翻譯；III類反義RNA則直接抑制靶mRNA的轉(zhuǎn)錄。1. 從癌組織中分離出mRNA,合成相應(yīng)的反義RNA。將反義RNA引入癌細(xì)胞阻止癌基 因的表達(dá)，抑制癌蛋白的產(chǎn)生，從而可控制細(xì)胞的惡性增殖。反義RNA可以特異性地抑制 癌基因的異常表達(dá)或抑制腫瘤癌細(xì)胞特異蛋白質(zhì)的表達(dá)，誘導(dǎo)腫瘤癌細(xì)胞調(diào)亡，因而可 應(yīng)用于癌癥的發(fā)病機(jī)制和治療研究。2

11、. 在治療病毒性感染疾病上，由于病毒核酸的序列比較明確，易于人工合成相應(yīng)的 反義寡聚核昔酸,來抑制病毒基因的表達(dá)。反義RNA能有效地阻斷La CrOSSe病毒 (LCV ),并且來自dengne VirUSeS區(qū)的反義RNA更能有效阻止同源病毒的復(fù)制，且阻 斷時(shí)間和最小片段的反義RNA都能確定，它可以彌補(bǔ)接種等傳統(tǒng)方法存在的不易達(dá)到阻止 效果和效率較低的缺點(diǎn)。(1) 特異性強(qiáng) 反義RNA在宿主細(xì)胞內(nèi)可以特異性地識別、關(guān)閉某一基因，阻斷 靶基因的表達(dá)，我至可以選擇性地抑制單一啟動子控制的多基因區(qū)內(nèi)某一基因的表達(dá)，而 不影響其它基因的表達(dá)。(2) 操作簡便，靶mRNA范圍廣 可以大量地設(shè)計(jì)合成反義RNA (或反義RNA片 段)，僅需要知道病毒、基因或病變細(xì)胞的序列信息及其編碼