DNA的粗提取和鑒定

1、1課題課題 DNA的的粗粗提取與鑒定提取與鑒定染色體成分染色體成分蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)RNA(少量少量)DNA234酶的專(zhuān)一性酶的專(zhuān)一性）高溫高溫DNADNA耐高溫耐高溫DNADNA和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性不同：蛋白質(zhì)、和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性不同：蛋白質(zhì)、DNADNA熱穩(wěn)定性不同。大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受熱穩(wěn)定性不同。大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60608080的高溫，而的高溫，而DNADNA在在8080以上才會(huì)變性。以上才會(huì)變性。DNADNA對(duì)洗滌劑耐受性對(duì)洗滌劑耐受性 洗滌劑能夠瓦解細(xì)胞膜，但對(duì)洗滌劑能夠瓦解細(xì)胞膜，但對(duì)DNADNA沒(méi)有影響。沒(méi)有影響。洗滌劑洗滌劑51 1）不同濃度）不同濃度NaClNaCl中中DN

2、ADNA溶解度不同。溶解度不同。 2 2）DNADNA與其他細(xì)胞成分在酒精中溶解度不同，與其他細(xì)胞成分在酒精中溶解度不同，DNADNA不溶于酒精，細(xì)不溶于酒精，細(xì)胞中某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。胞中某些蛋白質(zhì)則溶于酒精。3 3）DNADNA和蛋白質(zhì)對(duì)酶耐受性不同：酶的專(zhuān)一性和蛋白質(zhì)對(duì)酶耐受性不同：酶的專(zhuān)一性蛋白酶水解蛋蛋白酶水解蛋白質(zhì)。但是對(duì)白質(zhì)。但是對(duì)DNADNA沒(méi)有影響。沒(méi)有影響。4 4）DNADNA和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性不同：蛋白質(zhì)、和蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性不同：蛋白質(zhì)、DNADNA熱穩(wěn)定性不同。熱穩(wěn)定性不同。大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受60608080的高溫，而的高溫，而DNADNA在

3、在8080以上才會(huì)變以上才會(huì)變性。性。5 5）DNADNA和蛋白質(zhì)對(duì)洗滌劑耐受性不同：洗滌劑能夠瓦解細(xì)胞膜，和蛋白質(zhì)對(duì)洗滌劑耐受性不同：洗滌劑能夠瓦解細(xì)胞膜，但對(duì)但對(duì)DNADNA沒(méi)有影響。沒(méi)有影響。提取提取DNA的原理包括的原理包括DNA的的 兩個(gè)方面兩個(gè)方面 溶解性和耐受性溶解性和耐受性1.DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)原理的粗提取實(shí)驗(yàn)原理6雞血紅細(xì)胞、白細(xì)胞中都有細(xì)胞雞血紅細(xì)胞、白細(xì)胞中都有細(xì)胞核，含大量的核，含大量的DNA,DNA,既經(jīng)濟(jì)又易取既經(jīng)濟(jì)又易取 73 3、方法與過(guò)程、方法與過(guò)程 1).1).制雞血細(xì)胞液制雞血細(xì)胞液0.1g/mL檸檬酸鈉檸檬酸鈉100mL活活雞鮮血雞鮮血180mL500m

4、L燒杯中，玻棒燒杯中，玻棒攪拌攪拌，離心或靜置沉淀。離心或靜置沉淀。離心或靜置后去掉上清液離心或靜置后去掉上清液血漿血漿血細(xì)胞血細(xì)胞8方法步驟方法步驟 加入物質(zhì)加入物質(zhì) 目的目的 1 1.制備雞血細(xì)胞液制備雞血細(xì)胞液 檸檬酸鈉溶液檸檬酸鈉溶液 2 2.提取雞血細(xì)胞細(xì)胞核物質(zhì)提取雞血細(xì)胞細(xì)胞核物質(zhì) 20 m120 m1蒸餾水（過(guò)濾：去除破裂的細(xì)胞膜和核膜等）蒸餾水（過(guò)濾：去除破裂的細(xì)胞膜和核膜等） 幻燈片 18 3 3.溶解細(xì)胞核內(nèi)的溶解細(xì)胞核內(nèi)的 DNADNA 2 mo12 mo1 L L 的的NaClNaCl溶液溶液4040mLmL 幻燈片 18 4 4.析出含析出含DNADNA的黏稠物的黏

5、稠物 蒸餾水蒸餾水 5 5.濾取含濾取含DNADNA的黏稠物的黏稠物 6 6.將將DNADNA的黏稠物再溶解的黏稠物再溶解 2 mol2 molL L 的的NaClNaCl溶液溶液20 mL20 mL 7 7.過(guò)濾含過(guò)濾含DNADNA的的NaCNaCl l 溶液溶液 8 8.提取含有雜質(zhì)較少的提取含有雜質(zhì)較少的 DNADNA 冷卻的冷卻的9595的酒精的酒精50 mL50 mL 幻燈片 18 A A:(1)1)向試管中加入向試管中加入2 mol2 molL L 的的NaClNaCl溶液溶液5 5mLmL (2)2)加入加入DNADNA (3)43)4 mLmL二苯胺試劑二苯胺試劑 9 9.DN

6、ADNA的鑒定的鑒定 B B:(1)(1)向試管中加入向試管中加入2mol2molL L 的的NaClNaCl溶液溶液5 5mLmL (2)4 m2)4 mL 二苯胺試劑二苯胺試劑 用多層紗布用多層紗布過(guò)濾過(guò)濾，含，含DNA的粘稠物留在紗布上。的粘稠物留在紗布上。 用兩層紗布過(guò)濾用兩層紗布過(guò)濾濾液中含有濾液中含有DNA。911整個(gè)實(shí)驗(yàn)中整個(gè)實(shí)驗(yàn)中加入加入“兩次蒸餾水，兩次蒸餾水，三次三次NaClNaCl溶液溶液，一次酒精，一次酒精”NaClNaCl酒精最好用酒精最好用95%95%的冷酒精的冷酒精; ;加蒸餾水或加入酒精用玻棒攪拌時(shí)加蒸餾水或加入酒精用玻棒攪拌時(shí), ,動(dòng)作要?jiǎng)幼饕p緩且朝一個(gè)方向

7、輕緩且朝一個(gè)方向。保證保證DNADNA分子的完整性。分子的完整性。121.1.下圖為下圖為“DNADNA粗提取和鑒定粗提取和鑒定”實(shí)驗(yàn)的相關(guān)操作。這些操作目的正實(shí)驗(yàn)的相關(guān)操作。這些操作目的正確的是確的是（）A.A.是洗滌血細(xì)胞，去除血細(xì)胞表面的雜質(zhì)是洗滌血細(xì)胞，去除血細(xì)胞表面的雜質(zhì)B.B.是溶解是溶解DNADNA，去除不溶于酒精的雜質(zhì)，去除不溶于酒精的雜質(zhì)C.C.是溶解是溶解DNADNA，去除不溶于，去除不溶于2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液的雜質(zhì)溶液的雜質(zhì)D.D.是稀釋是稀釋NaClNaCl溶液，去除不溶于低濃度溶液，去除不溶于低濃度NaClNaCl溶液的雜質(zhì)溶液的雜質(zhì)是

8、釋放核物質(zhì)是釋放核物質(zhì)是提純是提純DNADNA，去除溶于酒，去除溶于酒精的雜質(zhì)，精的雜質(zhì)，稀釋稀釋NaClNaCl溶液，析出溶液，析出DNADNA。C13植物細(xì)胞植物細(xì)胞需要先用需要先用洗滌劑洗滌劑（洗發(fā)香波、沐浴液、洗潔（洗發(fā)香波、沐浴液、洗潔精等）精等）溶解細(xì)胞膜。溶解細(xì)胞膜。 洗滌劑可以瓦解細(xì)胞膜洗滌劑可以瓦解細(xì)胞膜的原因是：的原因是：洗滌液中含有十二烷基硫酸鈉和洗滌液中含有十二烷基硫酸鈉和堿，堿，它們可使細(xì)胞膜破裂，蛋白它們可使細(xì)胞膜破裂，蛋白質(zhì)變性，使蛋白質(zhì)與質(zhì)變性，使蛋白質(zhì)與DNADNA分離開(kāi)來(lái)。分離開(kāi)來(lái)。 動(dòng)物細(xì)胞膜是不用試劑（動(dòng)物細(xì)胞膜是不用試劑（洗滌劑）洗滌劑）破壞的，破壞的

9、，因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞膜外面沒(méi)因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞膜外面沒(méi)有細(xì)胞壁的保護(hù)有細(xì)胞壁的保護(hù)，放在清水中自，放在清水中自然的就會(huì)吸水而脹破，釋放出其然的就會(huì)吸水而脹破，釋放出其中的中的DNADNA等物質(zhì)。等物質(zhì)。 142.2.（20072007年高考生物試題）年高考生物試題） 在某些深海魚(yú)中發(fā)現(xiàn)的抗凍蛋白基因，對(duì)提高在某些深海魚(yú)中發(fā)現(xiàn)的抗凍蛋白基因，對(duì)提高農(nóng)作物的抗寒能力有較好的應(yīng)用價(jià)值，該基因農(nóng)作物的抗寒能力有較好的應(yīng)用價(jià)值，該基因可以從這些魚(yú)的可以從這些魚(yú)的DNADNA中擴(kuò)增得到。中擴(kuò)增得到。試述在提取和試述在提取和純化純化DNADNA時(shí)影響提純效果的因素及其依據(jù)。（時(shí)影響提純效果的因素及其依據(jù)。（列列舉兩點(diǎn)）

10、舉兩點(diǎn)） 選擇選擇NaCl溶液的合適濃度，利用溶液的合適濃度，利用DNA和其它雜質(zhì)在和其它雜質(zhì)在不同不同NaCl溶液中溶解溶液中溶解 度不同的特性，達(dá)到分離目的；度不同的特性，達(dá)到分離目的；加人一定量酒精，使部分蛋白質(zhì)雜質(zhì)溶解于酒精，加人一定量酒精，使部分蛋白質(zhì)雜質(zhì)溶解于酒精， 與與DNA分離；分離；加人蛋白酶，除去蛋白質(zhì)雜質(zhì)的干擾；加人蛋白酶，除去蛋白質(zhì)雜質(zhì)的干擾；控制控制DNA提取的溫度，使大多數(shù)蛋白質(zhì)雜質(zhì)變性。提取的溫度，使大多數(shù)蛋白質(zhì)雜質(zhì)變性。153.3.（多選）下（多選）下表是關(guān)于表是關(guān)于DNADNA粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中所使用粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中所使用的材料、操作及其作用的表述。正確的是

11、（的材料、操作及其作用的表述。正確的是（ ）試劑試劑操作操作作用作用A A檸檬酸鈉溶液檸檬酸鈉溶液與雞血混合與雞血混合防止血液凝固防止血液凝固B B蒸餾水蒸餾水與雞血細(xì)胞混合與雞血細(xì)胞混合保持細(xì)胞形狀保持細(xì)胞形狀C C蒸餾水蒸餾水加入到溶解有加入到溶解有DNADNA的的NaClNaCl中中析出析出DNADNA絲狀物絲狀物D D冷卻的酒精冷卻的酒精加入到過(guò)濾后加入到過(guò)濾后DNADNA的的NaClNaCl中中產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)AC164.4.實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)中NaClNaCl的物質(zhì)的量濃度為的物質(zhì)的量濃度為2 mol2 molL L和和0.14 mol0.14 molL L對(duì)對(duì)DNAD

12、NA有何影響有何影響? ?3.3.在在DNADNA的粗提取實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，兩次向燒杯中的粗提取實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是加入蒸餾水的作用是( )( )。A.A.稀釋血液、沖洗樣品稀釋血液、沖洗樣品B.B.使血細(xì)胞破裂、降低使血細(xì)胞破裂、降低NaClNaCl濃度使?jié)舛仁笵NADNA析出析出C.C.使血細(xì)胞破裂、增大使血細(xì)胞破裂、增大DNADNA溶解量溶解量 D.D.使血細(xì)胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的使血細(xì)胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的DNADNAB答：前者是答：前者是溶解溶解DNADNA，后者是使，后者是使DNADNA析出析出5.DNA5.DNA遇二苯胺遇二苯胺( (沸水浴沸水浴) )會(huì)染成會(huì)染成( ) ( ) A. A.磚紅色磚紅色 B.B.橘黃色橘黃色 C.C.紫色紫色 D.D.藍(lán)色藍(lán)色D17 6.DNA6.DNA在在 NaClNaCl溶液中的溶解度有兩重性，隨著溶液中的溶解度有兩重性，隨著 NaClNaCl溶溶液濃度的變化而變化。液濃度的變化而變化。(1)(1)請(qǐng)?jiān)谙铝袧舛鹊恼?qǐng)?jiān)谙铝袧舛鹊?NaClNaCl溶液中，選出能使溶液中，選出能使DNADNA析出最徹析出最徹底的一種和溶解度最高的一種底的一種和溶解度最高的一種_。 A A0.14 mol/L0.14 mol/LB B2 mol/L2 mol/L C C0.15 mol