動物基因工程

1、 新鮮組織或細(xì)胞新鮮組織或細(xì)胞Genome DNATotal RNA 文庫構(gòu)建文庫構(gòu)建 引物、酶、引物、酶、dNTP、模板和、模板和Mg2+1）來自水生棲熱菌）來自水生棲熱菌 Thermusaquaticus；2）良好的耐良好的耐熱性；熱性；3）Mg2+依賴性；依賴性；4）無校正功能）無校正功能巢式巢式PCR PCR 原位原位PCRPCR不對稱不對稱PCR PCR 共享引物共享引物PCR PCR 重組重組PCRPCR彩色彩色PCRPCR 1)質(zhì)粒圖譜登記號：質(zhì)粒圖譜登記號：00522)質(zhì)粒名稱：質(zhì)粒名稱：pBudCE4.13)來源：來源：Invitrogen4)用途：真核表達(dá)載體用途：真核表達(dá)

2、載體5) 詳細(xì)資料詳細(xì)資料6)是否可以共享是否可以共享7)聯(lián)系方式：聯(lián)系方式：PM人工培養(yǎng)的人成骨細(xì)胞人工培養(yǎng)的人成骨細(xì)胞人成骨細(xì)胞內(nèi)的人成骨細(xì)胞內(nèi)的pEGFPpEGFP蛋白表達(dá)蛋白表達(dá) 1982年，英國的年，英國的自然自然雜志發(fā)表了一篇文章：有兩個美國實雜志發(fā)表了一篇文章：有兩個美國實驗小組利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將大鼠生長激素重組基因?qū)氲叫∈篁炐〗M利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將大鼠生長激素重組基因?qū)氲叫∈笫芫阎惺芫阎?培育出具快速生長效應(yīng)的培育出具快速生長效應(yīng)的“轉(zhuǎn)基因超級鼠轉(zhuǎn)基因超級鼠”。轉(zhuǎn)基因。轉(zhuǎn)基因鼠比與它同胎所生的小鼠生長速度快鼠比與它同胎所生的小鼠生長速度快23倍，體積大一倍。倍，體積大一倍

3、。轉(zhuǎn)基因：轉(zhuǎn)基因：1 1）將人工分離和修飾過的基因?qū)氲缴矬w基因組中，由于）將人工分離和修飾過的基因?qū)氲缴矬w基因組中，由于導(dǎo)入基因的表達(dá)，引起生物體的性狀的可遺傳的修飾，稱之為導(dǎo)入基因的表達(dá)，引起生物體的性狀的可遺傳的修飾，稱之為轉(zhuǎn)基因技術(shù)。轉(zhuǎn)基因技術(shù)。2 2）轉(zhuǎn)基因技術(shù)就是指利用分子生物學(xué)技術(shù)，將某些生物的基）轉(zhuǎn)基因技術(shù)就是指利用分子生物學(xué)技術(shù)，將某些生物的基因轉(zhuǎn)移到其它物種中，改造生物的遺傳物質(zhì)，使遺傳物質(zhì)得到因轉(zhuǎn)移到其它物種中，改造生物的遺傳物質(zhì)，使遺傳物質(zhì)得到改造的生物在性狀、營養(yǎng)和消費品質(zhì)等方面向人類需要的目標(biāo)改造的生物在性狀、營養(yǎng)和消費品質(zhì)等方面向人類需要的目標(biāo)轉(zhuǎn)變。轉(zhuǎn)變。轉(zhuǎn)

4、基因動物：轉(zhuǎn)基因動物：所謂轉(zhuǎn)基因動物就是指以實驗方法將外源基因?qū)雱游锶旧w所謂轉(zhuǎn)基因動物就是指以實驗方法將外源基因?qū)雱游锶旧w基因組內(nèi)穩(wěn)定整合并能遺傳給后代的一類動物。基因組內(nèi)穩(wěn)定整合并能遺傳給后代的一類動物。1 1、顯微注射法、顯微注射法：將將DNADNA注射到胚胎的細(xì)胞核注射到胚胎的細(xì)胞核內(nèi)，再把注射過內(nèi)，再把注射過DNADNA的胚胎移植到動物體內(nèi)，使之發(fā)的胚胎移植到動物體內(nèi)，使之發(fā)育成正常的幼仔。育成正常的幼仔。 2 2、體細(xì)胞核移植方法、體細(xì)胞核移植方法：先在體外培養(yǎng)的先在體外培養(yǎng)的體細(xì)胞中進(jìn)行基因?qū)氩⒑Y選。然后將帶轉(zhuǎn)基因體體細(xì)胞中進(jìn)行基因?qū)氩⒑Y選。然后將帶轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞移植到去

5、掉細(xì)胞核的卵細(xì)胞中，生產(chǎn)重構(gòu)胚胎。細(xì)胞移植到去掉細(xì)胞核的卵細(xì)胞中，生產(chǎn)重構(gòu)胚胎。3 3逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法：逆轉(zhuǎn)錄病毒感染法：最早用來得到轉(zhuǎn)基最早用來得到轉(zhuǎn)基因小鼠的方法，利用逆轉(zhuǎn)錄載體將遺傳信息以因小鼠的方法，利用逆轉(zhuǎn)錄載體將遺傳信息以RNARNA分分子的形式，在逆轉(zhuǎn)錄整合酶和逆轉(zhuǎn)錄基因組末端的特子的形式，在逆轉(zhuǎn)錄整合酶和逆轉(zhuǎn)錄基因組末端的特異性核酸序列的作用下，反轉(zhuǎn)錄并整合到宿主基因組異性核酸序列的作用下，反轉(zhuǎn)錄并整合到宿主基因組中去，最終得到轉(zhuǎn)基因小鼠。中去，最終得到轉(zhuǎn)基因小鼠。4 4胚胎干細(xì)胞法：胚胎干細(xì)胞法：將轉(zhuǎn)染的胚胎干細(xì)胞注射將轉(zhuǎn)染的胚胎干細(xì)胞注射入受體囊胚腔，可參與嵌合體的形成，將

6、來出生的動入受體囊胚腔，可參與嵌合體的形成，將來出生的動物的生殖系統(tǒng)就有可能整合上外源基因，通過雜交繁物的生殖系統(tǒng)就有可能整合上外源基因，通過雜交繁育得到純合目的基因的個體，即為轉(zhuǎn)基因動物。育得到純合目的基因的個體，即為轉(zhuǎn)基因動物。1 1、研究基因的結(jié)構(gòu)與功能，了解動物生命現(xiàn)、研究基因的結(jié)構(gòu)與功能，了解動物生命現(xiàn)象的內(nèi)在本質(zhì)。象的內(nèi)在本質(zhì)。2 2、建立多種疾病的動物模型，研究發(fā)病機理、建立多種疾病的動物模型，研究發(fā)病機理及治療方法。及治療方法。3 3、改善動物生產(chǎn)性能，提高動物育種效率。、改善動物生產(chǎn)性能，提高動物育種效率。4 4、作為醫(yī)用或食用蛋白的生物反應(yīng)器。可以、作為醫(yī)用或食用蛋白的生物

7、反應(yīng)器?？梢酝ㄟ^家畜乳腺分泌大量安全、高效、廉價的人通過家畜乳腺分泌大量安全、高效、廉價的人體藥用蛋白。體藥用蛋白。四個主要國家轉(zhuǎn)基因作物種植面積占全球。四個主要國家轉(zhuǎn)基因作物種植面積占全球。美國占，達(dá)萬公頃，轉(zhuǎn)基因作物產(chǎn)美國占，達(dá)萬公頃，轉(zhuǎn)基因作物產(chǎn)量也居世界第一，美國種植的的大豆、量也居世界第一，美國種植的的大豆、的棉花和的玉米都是轉(zhuǎn)基因作物。的棉花和的玉米都是轉(zhuǎn)基因作物。阿根廷占，達(dá)萬公頃。阿根廷占，達(dá)萬公頃。加拿大占，達(dá)萬公頃。加拿大占，達(dá)萬公頃。中國第四位，占，達(dá)萬公頃。中國第四位，占，達(dá)萬公頃。歐盟國家歐盟國家總總面積不到萬公頃，面積不到萬公頃，.左右。左右。 2002年數(shù)據(jù)1 1

8、、食品安全問題：、食品安全問題：1 1）未知的可能副作用？）未知的可能副作用？2 2）外源基因在人體內(nèi)表達(dá)？）外源基因在人體內(nèi)表達(dá)？2 2、技術(shù)問題：、技術(shù)問題：1 1）成本；）成本；2 2）成功率；）成功率；3 3）基因組的有效整合、穩(wěn)定遺傳；）基因組的有效整合、穩(wěn)定遺傳；基因敲除（基因敲除（gene knock outgene knock out） 1997年年2月月22日，英國日，英國“Nature”刊登了愛丁堡羅斯林研究刊登了愛丁堡羅斯林研究所維爾穆特的研究成果，即所維爾穆特的研究成果，即“多莉多莉”羊的克隆成功，從此震羊的克隆成功，從此震驚了世界。驚了世界。1998年年4月與威爾士山

9、羊戴維產(chǎn)下邦尼，證明了克隆月與威爾士山羊戴維產(chǎn)下邦尼，證明了克隆動物也能生育。動物也能生育。2003.2.14日蘇格蘭向外界宣布：多莉日蘇格蘭向外界宣布：多莉因早衰并患有肺炎，被迫實施了安樂死。因早衰并患有肺炎，被迫實施了安樂死。由于早衰問由于早衰問題，人們題，人們懷疑懷疑“多莉多莉是穿著羔羊服裝的老羊是穿著羔羊服裝的老羊” 。 細(xì)胞核移植得到的個體都叫做細(xì)胞核移植得到的個體都叫做克隆克隆。 核移植核移植是指利用顯微外科手術(shù)的方法將是指利用顯微外科手術(shù)的方法將胚胎細(xì)胞胚胎細(xì)胞或或成體細(xì)胞成體細(xì)胞的細(xì)胞核移人去核的卵母細(xì)胞中，構(gòu)建成的細(xì)胞核移人去核的卵母細(xì)胞中，構(gòu)建成重組胚，通過體內(nèi)或體外培養(yǎng)、胚胎移植，產(chǎn)生與重組胚，通過體內(nèi)或體外培養(yǎng)、胚胎移植，產(chǎn)生與供體細(xì)胞基因型相同的后代的技術(shù)過程，又稱為動供體細(xì)胞基因型相同的后代的技術(shù)過程，又稱為動物克