霉菌和毒素檢測(cè)方法ppt課件

1、食品中霉菌及毒素的檢測(cè)方法專 業(yè)：食品科學(xué)Number 1研討背景及意義研討背景及意義 Number 2霉菌的檢測(cè)方法霉菌的檢測(cè)方法 Number 3毒素的檢測(cè)方法毒素的檢測(cè)方法 Number 4參考文獻(xiàn)參考文獻(xiàn)目目 錄錄contentscontents霉菌 霉菌廣泛分布于自然界中，由于其可構(gòu)成各種微小的孢子， 因此很容易污染食品。霉菌毒素 霉菌毒素是霉菌產(chǎn)生的一種有毒的次生代謝產(chǎn)物，毒素污染會(huì)導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)價(jià)值降低，引起動(dòng)物疾病，并直接或間接危害人類安康。1 研討背景及意義 自從20 世紀(jì) 60 年代發(fā)現(xiàn)強(qiáng)致癌的黃曲霉毒素以來(lái),霉菌與霉菌毒素對(duì)食品的污染日益引起注重。我國(guó)在2019 年公布了國(guó)家規(guī)

2、范 GB2761-2019食品中真菌毒素限量,各級(jí)食品監(jiān)視檢測(cè)機(jī)構(gòu)全面開展霉菌的檢測(cè)任務(wù)。方法01GB4789.15-2019 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)。方法02食品中霉菌和酵母計(jì)數(shù) PetrifilmTM測(cè)試片法。2.1霉菌檢測(cè)方法03菌落計(jì)數(shù)結(jié)果和報(bào)告結(jié)果和報(bào)告0405鏡檢鏡檢培育培育0201樣品的稀釋樣品的稀釋2.1食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù) 2.1.1 樣品的稀釋 2.1.2 培育 肉眼察看，必要時(shí)可用放大鏡，記錄各稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的霉菌和酵母數(shù)。以菌落構(gòu)成單位colony forming units，CFU表示。 選取菌落數(shù)在 10 CFU150 CFU的平板，根據(jù)菌落形狀分

3、別計(jì)數(shù)霉菌和酵母數(shù)霉菌蔓延生長(zhǎng)覆蓋整個(gè)平板的可記錄為多不可計(jì)。菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。 2.1.3 菌落計(jì)數(shù) 2.1.4.1 結(jié)果 計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)計(jì)算。 假設(shè)一切平板上菌落數(shù)均大于 150 CFU，那么對(duì)稀釋度最高的平板進(jìn)展計(jì)數(shù)，其他平板可記錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。 假設(shè)一切平板上菌落數(shù)均小于 10 CFU，那么應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。 假設(shè)一切稀釋度平板均無(wú)菌落生長(zhǎng)，那么以小于 1 乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算；如為原液，那么以小于 1計(jì)數(shù)。 2.1.4.2 報(bào)告 1)菌落數(shù)在 100 以內(nèi)時(shí)，按“四舍五入

4、原那么修約，采用兩位有效數(shù)字報(bào)告。 2)菌落數(shù)大于或等于 100 時(shí)，前 3 位數(shù)字采用“四舍五入原那么修約后，取前 2 位數(shù)字，后面用0 替代位數(shù)來(lái)表示結(jié)果；也可用 10 的指數(shù)方式來(lái)表示，此時(shí)也按“四舍五入原那么修約，采用兩位有效數(shù)字。 3)稱重取樣以 CFU/g 為單位報(bào)告，體積取樣以 CFU/mL 為單位報(bào)告，報(bào)告或分別報(bào)告霉菌和/或酵母數(shù)。 2.1.5 鏡檢B.1 檢樣的制備：取定量檢樣,加蒸餾水稀釋至折光指數(shù)為 1.34471.3460即濃度為7.9%8.8%，備用。 B.2 顯微鏡規(guī)范視野的校正：將顯微鏡按放大率 90125 倍調(diào)理規(guī)范視野，使其直徑為 1.382 mm。 B.3

5、 涂片：洗凈郝氏計(jì)測(cè)玻片，將制好的規(guī)范液，用玻璃棒均勻的攤布于計(jì)測(cè)室，以備察看。 B.4 觀測(cè)：將制好之載玻片放于顯微鏡規(guī)范視野下進(jìn)展霉菌觀測(cè)，普通每一檢樣察看 50 個(gè)視野，同一檢樣應(yīng)由兩人進(jìn)展察看。 B.5 結(jié)果與計(jì)算：在規(guī)范視野下，發(fā)現(xiàn)有霉菌菌絲其長(zhǎng)度超越規(guī)范視野1.382mm)的1/6或三根菌絲總長(zhǎng)度超越規(guī)范視野的1/6即測(cè)微器的一格時(shí)即為陽(yáng)性+，否那么為陰性-，按100個(gè)視野計(jì)，其中發(fā)現(xiàn)有霉菌菌絲體存在的視野數(shù)，即為霉菌的視野百分?jǐn)?shù)。 2.1 食品中霉菌和酵母計(jì)數(shù) PetrifilmTM測(cè)試片法PetrifilmTM霉菌和酵母測(cè)試片： 1測(cè)試片中添加抗生素，可抑制細(xì)菌生長(zhǎng)； 2含有酵

6、母菌指示劑，使酵母菌更易計(jì)數(shù)； 3適用與菌落總數(shù)、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、單增李斯特氏菌。酶酶 聯(lián)聯(lián) 免免 疫疫 吸吸 附附 法法熒光檢測(cè)熒光檢測(cè)法法近紅外光近紅外光譜法譜法微柱法微柱法薄層色譜薄層色譜法法. . 氣相色譜氣相色譜和氣質(zhì)譜和氣質(zhì)譜聯(lián)用法聯(lián)用法高效液相高效液相色譜法和色譜法和液質(zhì)聯(lián)用液質(zhì)聯(lián)用2.2 霉菌毒素檢測(cè)方法 ELISA 是利用抗原抗體反響原理 ，知抗原吸附在酶標(biāo)板上 參與酶標(biāo)志抗體和樣品提取液并混合均勻，充分反響后用去離子水洗去多余抗體，再參與酶的底物，產(chǎn)生有色物質(zhì)，最后參與終止液使反響終止。柳其芳 2019 ELISA法操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)速度快、本錢低，適用于大批量樣品的

7、快速挑選。蔣建云 2019 等也用此法檢測(cè)飼料中黃曲霉毒素 B1 的含量，不但特異性強(qiáng) 提取純化步驟簡(jiǎn)單，結(jié)果也易判讀 回收率在 90%左右。 2.2.1 酶 聯(lián) 免 疫 吸 附 法 2.2.2 熒光檢測(cè)法 熒光檢測(cè)法 FLD 常結(jié)合免疫親和柱運(yùn)用，是美國(guó) AOAC 的規(guī)范檢測(cè)方法，我國(guó)國(guó)標(biāo)(GB/T 18979-2019)也采用此法檢測(cè)黃曲霉毒素的含量，檢測(cè)樣品經(jīng)甲醇/水提取后、過濾、稀釋。用含有黃曲霉毒素特異抗體的免疫親和柱層析凈化，超純水洗去雜質(zhì)，甲醇洗脫，參與溴溶液衍生后用熒光光度計(jì)測(cè)定。趙東豪等 2021 此法也常用來(lái)檢測(cè)玉米赤霉烯酮等。熒光檢測(cè)法方便、快捷、破費(fèi)少、不需運(yùn)用霉菌毒素

8、的規(guī)范品，減少對(duì)人的損傷 也常作為快速挑選方法運(yùn)用。 2.2.3近紅外光譜法 近紅外光譜法NIR是近年來(lái)開展得比較快的光譜分析技術(shù)。 NIR 可以用來(lái)檢測(cè)小麥中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇等霉菌毒素。運(yùn)用 NIR 分析，樣品不需預(yù)處置，多種組分可以同時(shí)測(cè)定，分析速度快，重現(xiàn)性好，但是此方法必需先建立準(zhǔn)確的校正模型， 適用于經(jīng)常性質(zhì)量控制分析。 2.2.4 微柱法 微柱法：將樣品提取液經(jīng)過氧化鋁-硅鎂型吸附劑填充的微柱，樣品中的雜質(zhì)被氧化鋁吸附，霉菌毒素那么被硅鎂型吸附劑吸附，在紫外分析燈下察看熒光環(huán)與規(guī)范比較定量 本法簡(jiǎn)便快速、靈敏度高。主要用于飼料中黃曲霉毒素的挑選。微柱凝膠免疫監(jiān)測(cè)儀 2.2.5

9、薄層色譜法 薄層色譜法：將樣品提取液在薄層板上點(diǎn)樣， 展開后，用吸收法或熒光法對(duì)被測(cè)樣品與規(guī)范品掃描測(cè)定。對(duì)于黃曲霉毒素B1的檢測(cè)，我國(guó)國(guó)標(biāo)采用(TLC)法，該方法更適于確認(rèn)黃曲霉毒素 存在與否。氣相色譜和氣質(zhì)聯(lián)用法2.2.5 氣相色譜和氣質(zhì)聯(lián)用法 氣相色譜和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法20世紀(jì)70年代，氣相色譜和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法開場(chǎng)用于霉菌毒素的檢測(cè)毒素等單端孢霉烯族毒素。常采用氣相色譜法檢測(cè)，食品中毒素的檢測(cè)，由于未知成分較多，普通采用與質(zhì)譜聯(lián)用，靈敏度也有較大的提高，檢測(cè)限更低。 高效液相色譜法較早用于霉菌毒素的檢測(cè) 常用的檢測(cè)器有熒光、紫外、二極管陣列、蒸發(fā)光散射等檢測(cè)器，目前運(yùn)用最廣泛的檢測(cè)霉菌毒素的方法 涉及到畜牧化工和食品等各行業(yè)。2.5.6. 高效液相色譜和液質(zhì)聯(lián)用液相色譜HPLC-MS具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確度和選擇性好等特點(diǎn)，可以對(duì)霉菌毒素進(jìn)展準(zhǔn)確的定性分析，不但檢測(cè)霉菌毒素還可以檢測(cè)構(gòu)造類似的其他物質(zhì) ,但是儀器設(shè)備比較昂貴 檢測(cè)本錢高 操作步驟復(fù)雜 因此目前國(guó)內(nèi)的普及率不高。2.5.6 高效液相色譜和液質(zhì)聯(lián)用4 參考文獻(xiàn)1 龔阿瓊，胡駿鵬.常見霉菌毒素的危害及檢測(cè)方法J,2019;2 施震地.食品中霉菌檢測(cè)方法探求J，2019；3 GB4789.15-2019 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)；4