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1、實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一 半抗原免疫原的制備半抗原免疫原的制備 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康? 1 了解半抗原免疫原的合成方法及基本原理；了解半抗原免疫原的合成方法及基本原理； 2 將半抗原吲哚乙酸用混合酸酐法與載體蛋白牛將半抗原吲哚乙酸用混合酸酐法與載體蛋白牛血清白蛋白偶聯(lián)。血清白蛋白偶聯(lián)。吲哚乙酸吲哚乙酸分子量: 175.18 半抗原半抗原- -載體連接方法載體連接方法3 3氯甲酸異丁脂法氯甲酸異丁脂法半抗原半抗原-COOH-COOH載體蛋白載體蛋白-NH-NH2 2Cl-COO-CHCl-COO-CH2 2CH(CHCH(CH3 3) )2 2半抗原半抗原-COO-COO-CH-COO-COO-CH2 2CH(

2、CHCH(CH3 3) )2 2半抗原半抗原-CO-CO-NHNH- -載體蛋白載體蛋白實(shí)驗(yàn)原理：實(shí)驗(yàn)原理：HO-HO-CHCH2 2CH(CHCH(CH3 3) )2 2 試劑和儀器：試劑和儀器： 試劑：試劑：吲哚乙酸吲哚乙酸(IAA(IAA)，牛血清白蛋白，牛血清白蛋白(BSA)，三，三正丁胺，正丁胺，N-N二甲基甲酰胺二甲基甲酰胺(DMF)，氯甲酸異丁，氯甲酸異丁酯，酯，NaOH； 儀器：反應(yīng)器，磁力攪拌器，微量加樣器，滴管儀器：反應(yīng)器，磁力攪拌器，微量加樣器，滴管等。等。 實(shí)驗(yàn)步驟：實(shí)驗(yàn)步驟：52.3mgIAA 2mlN-N二甲基甲酰胺二甲基甲酰胺(DMF) 75l三正丁胺三正丁胺 4

3、0l氯甲酸異丁酯氯甲酸異丁酯 磁磁力攪拌分鐘力攪拌分鐘 形成形成IAA混合酸酐混合酸酐210mgBSA 11ml蒸餾水蒸餾水11mlDMF 420l1mol/lNaOH 攪拌攪拌 實(shí)驗(yàn)步驟：實(shí)驗(yàn)步驟：將將IAA混合酸酐逐滴加入到混合酸酐逐滴加入到BSA溶液中溶液中繼續(xù)攪拌繼續(xù)攪拌1h200l1mol/lNaOH攪拌攪拌5h反應(yīng)物裝入透析袋反應(yīng)物裝入透析袋 對(duì)對(duì)10%DMF透析透析d 對(duì)蒸餾水透析對(duì)蒸餾水透析4d取出反應(yīng)物分裝取出反應(yīng)物分裝-20 保存保存不斷攪拌不斷攪拌 思考題思考題：小分子半抗原為什么要與載體蛋白先偶聯(lián)才能小分子半抗原為什么要與載體蛋白先偶聯(lián)才能作為免疫原？作為免疫原？載體蛋白的選擇原則。載體蛋白的選擇原則。半抗原與載體偶聯(lián)時(shí)，因其所帶基團(tuán)的

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