乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用課件

1、乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用HBcAg的檢測的檢測(jin c)與應(yīng)用與應(yīng)用 檢驗(yàn)科檢驗(yàn)科 胡亞遠(yuǎn)胡亞遠(yuǎn) 第一頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用第二頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用第三頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用第四頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用第五頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用第六頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用第七頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用 機(jī)體的機(jī)體的Th1型免疫反應(yīng)可促進(jìn)病原體的清除型免疫反應(yīng)可促進(jìn)病原體的清除(qngch)(qngch)，而，而Th2型免疫反應(yīng)則可加重機(jī)體的病理損害，在型免疫反應(yīng)則可加重機(jī)體的病理損害，在

2、HBcAg誘導(dǎo)下誘導(dǎo)下，外周血單個(gè)核細(xì)胞（，外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）產(chǎn)生）產(chǎn)生Th1類細(xì)胞因子量明類細(xì)胞因子量明顯增高；在顯增高；在HBeAg誘導(dǎo)下，誘導(dǎo)下，Th2類細(xì)胞因子量明顯增高。慢類細(xì)胞因子量明顯增高。慢性性HBV感染進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)治療的一個(gè)目標(biāo)就是使感染進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)治療的一個(gè)目標(biāo)就是使HBeAg特異特異性性T細(xì)胞由細(xì)胞由Th2細(xì)胞主導(dǎo)型轉(zhuǎn)化為細(xì)胞主導(dǎo)型轉(zhuǎn)化為Th1細(xì)胞型，細(xì)胞型，HBcAg有望有望打破打破HBeAg誘導(dǎo)的免疫耐受狀態(tài)而增強(qiáng)誘導(dǎo)的免疫耐受狀態(tài)而增強(qiáng)Th1細(xì)胞優(yōu)勢表達(dá)細(xì)胞優(yōu)勢表達(dá)達(dá)到治療的目的。慢性乙型肝炎患者和達(dá)到治療的目的。慢性乙型肝炎患者和HBV慢性攜帶者慢性攜帶

3、者體內(nèi)針對體內(nèi)針對HBV的特異性的特異性CTL應(yīng)答明顯低下，糾正這種應(yīng)答明顯低下，糾正這種CTL低反應(yīng)狀態(tài)，對于機(jī)體有效地清除低反應(yīng)狀態(tài)，對于機(jī)體有效地清除HBV至關(guān)重要。至關(guān)重要。 第八頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用第九頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用第十頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用第十一頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用檢測(jin c) 第十二頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用第十三頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用第十四頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用第十五頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用第十六頁，共四十二頁。乙肝核心抗原

4、的檢測與應(yīng)用 慢性活動(dòng)性肝炎中血慢性活動(dòng)性肝炎中血HBcAg陽性率明陽性率明顯高于顯高于ASC（無癥狀病毒攜帶者），說明血（無癥狀病毒攜帶者），說明血HBcAg陽性較多見于病變活動(dòng)較重的慢性陽性較多見于病變活動(dòng)較重的慢性肝炎肝炎(n yn)(n yn)而較少見于病變較靜止的而較少見于病變較靜止的ASC。血清中的血清中的HBcAg陽性與肝臟病變活動(dòng)程度陽性與肝臟病變活動(dòng)程度有關(guān)，且對估計(jì)預(yù)后有很好價(jià)值。有關(guān)，且對估計(jì)預(yù)后有很好價(jià)值。HBcAg檢出結(jié)果是：肝硬化慢性乙型肝檢出結(jié)果是：肝硬化慢性乙型肝炎中型慢性乙型肝炎輕型。炎中型慢性乙型肝炎輕型。 第十七頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用 （

5、1）對血液內(nèi)）對血液內(nèi)HBV的開殼處理，能直接檢測的開殼處理，能直接檢測HBcAg，能比，能比HBeAg更客觀地反映血更客觀地反映血HBV的存在，以的存在，以及作出數(shù)量多少的判斷，可替代及作出數(shù)量多少的判斷，可替代HBeAg而作為病毒復(fù)而作為病毒復(fù)制和傳染性的敏感指標(biāo)，是病毒存在的直接標(biāo)志。它制和傳染性的敏感指標(biāo)，是病毒存在的直接標(biāo)志。它與與HBV復(fù)制標(biāo)志呈正相關(guān)，可以反映復(fù)制標(biāo)志呈正相關(guān)，可以反映HBV活動(dòng)活動(dòng)(hu dng)(hu dng)的的復(fù)制程度。復(fù)制程度。HBcAg與乙型肝炎病毒其他五項(xiàng)標(biāo)志物相與乙型肝炎病毒其他五項(xiàng)標(biāo)志物相比更是反映比更是反映HBV復(fù)制的直接證據(jù)。它可與其他的復(fù)制

6、的直接證據(jù)。它可與其他的HBV血清學(xué)標(biāo)志物起到相互配合和相互補(bǔ)充的作用。血清學(xué)標(biāo)志物起到相互配合和相互補(bǔ)充的作用。 第十八頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用 （2）有助于對乙型肝炎病情和預(yù)后的判斷，）有助于對乙型肝炎病情和預(yù)后的判斷，HBcAg感染的肝細(xì)胞是細(xì)胞免疫效應(yīng)攻擊的靶細(xì)胞，肝感染的肝細(xì)胞是細(xì)胞免疫效應(yīng)攻擊的靶細(xì)胞，肝細(xì)胞溶解后細(xì)胞溶解后HBcAg可直接釋放入血，故能直接反映肝細(xì)可直接釋放入血，故能直接反映肝細(xì)胞損害和病情進(jìn)展的程度。在急性乙型肝炎早期胞損害和病情進(jìn)展的程度。在急性乙型肝炎早期HBcAg亦達(dá)高峰值，而且病情嚴(yán)重者的亦達(dá)高峰值，而且病情嚴(yán)重者的HBcAg水平也水平也

7、相應(yīng)相應(yīng)(xingyng)(xingyng)提高。慢性乙型肝炎患者，血提高。慢性乙型肝炎患者，血HBcAg陰性者陰性者比陽性者有明顯的臨床及生化指標(biāo)的改善。比陽性者有明顯的臨床及生化指標(biāo)的改善。HBcAg含含量與肝臟損害的情況有關(guān)，有助于抗病毒藥物及免疫量與肝臟損害的情況有關(guān)，有助于抗病毒藥物及免疫治療的療效評價(jià)。治療的療效評價(jià)。 第十九頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用 （3）從理論上講，聚合酶鏈反應(yīng)（）從理論上講，聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測法）檢測法比固相放射免疫法靈敏度高，但實(shí)際上可出現(xiàn)比固相放射免疫法靈敏度高，但實(shí)際上可出現(xiàn)HBcAg陽性而陽性而HBV DNA陰性的結(jié)果。因此，兩

8、種檢測方法可陰性的結(jié)果。因此，兩種檢測方法可以互補(bǔ)使用，以減少漏檢。在不具備以互補(bǔ)使用，以減少漏檢。在不具備(jbi)(jbi)PCR檢測條件檢測條件的單位，以酶聯(lián)（的單位，以酶聯(lián)（ELISA）法試劑盒在檢測血清）法試劑盒在檢測血清HBV五五項(xiàng)標(biāo)志的同時(shí)，檢測項(xiàng)標(biāo)志的同時(shí)，檢測HBcAg不僅能進(jìn)一步了解病毒的不僅能進(jìn)一步了解病毒的復(fù)制情況，還可了解肝細(xì)胞損害和病情進(jìn)展的程度，且復(fù)制情況，還可了解肝細(xì)胞損害和病情進(jìn)展的程度，且檢測費(fèi)用低廉，有臨床實(shí)用價(jià)值。檢測費(fèi)用低廉，有臨床實(shí)用價(jià)值。 第二十頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用 （4）在對獻(xiàn)血員的篩選中，單憑）在對獻(xiàn)血員的篩選中，單憑HBs

9、Ag的測的測定來判斷是否受定來判斷是否受HBV感染也是不夠的，會漏診感染也是不夠的，會漏診HBsAg陰性而陰性而HBcAg和抗和抗-HBc陽性的乙型肝炎陽性的乙型肝炎患者，只有患者，只有(zhyu)三者同時(shí)檢測，才能更好地診斷三者同時(shí)檢測，才能更好地診斷乙型肝炎并防止在輸血中傳播，降低輸血后肝炎乙型肝炎并防止在輸血中傳播，降低輸血后肝炎的發(fā)生率。的發(fā)生率。第二十一頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用 HBcAg主要存在主要存在(cnzi)(cnzi)于于HBV顆粒和受染顆粒和受染的肝細(xì)胞中，的肝細(xì)胞中，HBV復(fù)制時(shí)復(fù)制時(shí)HBcAg表達(dá)于肝表達(dá)于肝細(xì)胞內(nèi)，分胞核型、胞質(zhì)型和胞膜型。細(xì)胞內(nèi)，分

10、胞核型、胞質(zhì)型和胞膜型。Delladetsima et al發(fā)現(xiàn)膽管上皮細(xì)胞也是發(fā)現(xiàn)膽管上皮細(xì)胞也是HBV的適合宿主，的適合宿主，HBV能夠在其中復(fù)制并能夠在其中復(fù)制并表達(dá)表達(dá)HBcAg和和HBsAg抗原。抗原。 第二十二頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用 肝內(nèi)肝內(nèi)HBcAg與與HBV DNA的分布區(qū)域常較一致，有的分布區(qū)域常較一致，有的肝細(xì)胞可同時(shí)檢出的肝細(xì)胞可同時(shí)檢出HBcAg和和HBV DNA，但多數(shù)，但多數(shù)HBV DNA（）肝細(xì)胞并不同時(shí)含有（）肝細(xì)胞并不同時(shí)含有HBcAg。HBV高復(fù)制高復(fù)制期期HBcAg以胞核表達(dá)為主，無或很少在胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)；而以胞核表達(dá)為主，無或很少在胞質(zhì)內(nèi)表

11、達(dá)；而低復(fù)制期時(shí)相反，低復(fù)制期時(shí)相反，HBcAg在肝細(xì)胞核內(nèi)而不是細(xì)胞質(zhì)內(nèi)在肝細(xì)胞核內(nèi)而不是細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的表達(dá)程度的表達(dá)程度(chngd)能夠精確地反映慢性乙型肝炎患者的病能夠精確地反映慢性乙型肝炎患者的病毒復(fù)制水平。肝毒復(fù)制水平。肝HBcAg與血清與血清HBV DNA水平呈正相關(guān)水平呈正相關(guān)。經(jīng)干擾素。經(jīng)干擾素治療后的慢性活動(dòng)性乙型肝炎患者，治療后的慢性活動(dòng)性乙型肝炎患者，HBcAg發(fā)生從核內(nèi)向胞質(zhì)的轉(zhuǎn)換。發(fā)生從核內(nèi)向胞質(zhì)的轉(zhuǎn)換。第二十三頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用 HBcAg與與HBeAg常同時(shí)表達(dá)在肝細(xì)胞內(nèi)，常同時(shí)表達(dá)在肝細(xì)胞內(nèi)，但在亞細(xì)胞水平有重要差異。在病毒活躍復(fù)制的但在亞細(xì)

12、胞水平有重要差異。在病毒活躍復(fù)制的ASC，常有較強(qiáng)的，常有較強(qiáng)的HBcAg胞核表達(dá)和胞核表達(dá)和HBeAg胞胞質(zhì)表達(dá)；活動(dòng)性慢性乙型肝炎時(shí)常有質(zhì)表達(dá)；活動(dòng)性慢性乙型肝炎時(shí)常有HBcAg的的胞質(zhì)表達(dá)，因免疫清除而病毒減少胞質(zhì)表達(dá)，因免疫清除而病毒減少(jinsho)(jinsho)，難以，難以檢出檢出HBeAg。作為免疫攻擊的靶抗原，。作為免疫攻擊的靶抗原，HBeAg不不及及HBcAg重要。重要。 第二十四頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用第二十五頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用第二十六頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用 乙型肝炎引起的肝硬化肝組織中乙型肝炎引起的肝硬化肝組織中

13、HBcAg、HBV DNA的陽性率較高。的陽性率較高。HBcAg顆粒在肝組織中主要顆粒在肝組織中主要(zhyo)(zhyo)呈彌漫呈彌漫的漿膜型分布，的漿膜型分布，HBcAg和和HBV DNA呈漿、膜型分布者呈漿、膜型分布者，其肝組織中，其肝組織中HBV DNA表達(dá)程度、炎癥活動(dòng)度和纖維表達(dá)程度、炎癥活動(dòng)度和纖維組織增生程度，明顯較呈核型分布者高。組織增生程度，明顯較呈核型分布者高。HBcAg及及HBV DNA陽性的肝組織，炎癥活動(dòng)明顯，界面呈碎陽性的肝組織，炎癥活動(dòng)明顯，界面呈碎屑壞死，灶性壞死。屑壞死，灶性壞死。 第二十七頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用第二十八頁，共四十二頁。乙肝

14、核心抗原的檢測與應(yīng)用 HBV合并合并HDV感染者的肝組織中，感染者的肝組織中，HBcAg和和HDAg陽性細(xì)胞分布關(guān)系不密切，陽性細(xì)胞分布關(guān)系不密切，HBcAg陽陽性細(xì)胞明顯少于性細(xì)胞明顯少于HDAg陽性細(xì)胞，陽性細(xì)胞，HBcAg主要主要呈核型表達(dá)，胞質(zhì)中陽性顆粒較少見到，表達(dá)呈核型表達(dá)，胞質(zhì)中陽性顆粒較少見到，表達(dá)強(qiáng)度也較弱，表明強(qiáng)度也較弱，表明HDV感染者感染者HBV是低水平復(fù)是低水平復(fù)制，制，HDV可能有抑制可能有抑制HBV基因復(fù)制或病毒抗原表基因復(fù)制或病毒抗原表達(dá)的作用，特別達(dá)的作用，特別(tbi)(tbi)是在是在HDV復(fù)制活躍的階段，復(fù)制活躍的階段，即即HDAg大量表達(dá)時(shí)，大量表達(dá)時(shí)

15、，HBV復(fù)制受到的抑制最為復(fù)制受到的抑制最為明顯。明顯。 第二十九頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用 兒童肝內(nèi)兒童肝內(nèi)HBcAg主要表達(dá)于核內(nèi)。肝內(nèi)主要表達(dá)于核內(nèi)。肝內(nèi)HBcAg呈彌漫性分布者，多見于呈彌漫性分布者，多見于10歲以內(nèi)的較小歲以內(nèi)的較小兒童；而呈局灶性分布者，多見于兒童；而呈局灶性分布者，多見于10歲以上的較歲以上的較大兒童，大兒童，HBcAg呈局灶性分布比彌漫性分布者，呈局灶性分布比彌漫性分布者，ALT水平水平(shupng)(shupng)較高并伴有較明顯的肝臟炎癥活動(dòng)較高并伴有較明顯的肝臟炎癥活動(dòng)。在兒童慢性乙型肝炎患者中，肝內(nèi)。在兒童慢性乙型肝炎患者中，肝內(nèi)HBcA

16、g呈彌呈彌漫性分布者為病毒感染早期，漫性分布者為病毒感染早期，HBcAg呈局灶性分呈局灶性分布并伴隨布并伴隨HBeAg陽性者為疾病短期內(nèi)進(jìn)展的標(biāo)志陽性者為疾病短期內(nèi)進(jìn)展的標(biāo)志。 第三十頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用 （1）檢測肝組織）檢測肝組織HBcAg有助于確有助于確定乙型肝炎病原學(xué)診斷，尤其是對于血定乙型肝炎病原學(xué)診斷，尤其是對于血清乙型肝炎病毒清乙型肝炎病毒(bngd)(bngd)標(biāo)志物陰性病例，標(biāo)志物陰性病例，在病原學(xué)診斷中彌補(bǔ)血清學(xué)診斷乙型肝在病原學(xué)診斷中彌補(bǔ)血清學(xué)診斷乙型肝炎的不足。炎的不足。 第三十一頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用 （2）有助于評估肝細(xì)胞壞死炎

17、性活動(dòng)）有助于評估肝細(xì)胞壞死炎性活動(dòng)的程度及病變發(fā)展的趨向，推測慢性的程度及病變發(fā)展的趨向，推測慢性(mn xng)(mn xng)乙乙型肝炎的預(yù)后。肝細(xì)胞內(nèi)型肝炎的預(yù)后。肝細(xì)胞內(nèi)HBcAg轉(zhuǎn)陰和肝細(xì)轉(zhuǎn)陰和肝細(xì)胞壞死病變減輕具有一致性。胞壞死病變減輕具有一致性。HBcAg漿膜型漿膜型者顯示此種一致性，而核型則否，可能由于者顯示此種一致性，而核型則否，可能由于肝細(xì)胞質(zhì)、膜上的肝細(xì)胞質(zhì)、膜上的HBcAg作為靶抗原易受到作為靶抗原易受到殺傷性了淋巴細(xì)胞的攻擊，導(dǎo)致肝細(xì)胞損殺傷性了淋巴細(xì)胞的攻擊，導(dǎo)致肝細(xì)胞損害，而核型害，而核型HBcAg則不具有此種作用。則不具有此種作用。 第三十二頁，共四十二頁。乙

18、肝核心抗原的檢測與應(yīng)用 （3）HBcAg檢測檢測(jin c)(jin c)也是判斷也是判斷HBV復(fù)制狀態(tài)的一項(xiàng)重要指標(biāo)，肝組織復(fù)制狀態(tài)的一項(xiàng)重要指標(biāo)，肝組織HBcAg與與HBV DNA兩種病毒復(fù)制標(biāo)志物兩種病毒復(fù)制標(biāo)志物相關(guān)。研究結(jié)果證實(shí)肝組織相關(guān)。研究結(jié)果證實(shí)肝組織HBcAg檢測檢測具有多種實(shí)用價(jià)值，值得推薦。具有多種實(shí)用價(jià)值，值得推薦。 第三十三頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用 國內(nèi)學(xué)者對乙型肝炎孕婦所分娩的死國內(nèi)學(xué)者對乙型肝炎孕婦所分娩的死胎進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)胎進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)HBcAg在多種臟器內(nèi)均在多種臟器內(nèi)均可表達(dá)，其中以肺、肝、腎臟、臍帶為最可表達(dá)，其中以肺、肝、腎臟、臍帶為最高，胸腺、心臟、脾、胎盤次之，大腦最高，胸腺、心臟、脾、胎盤次之，大腦最低。說明低。說明HBV有可能在多種組織內(nèi)復(fù)制并表有可能在多種組織內(nèi)復(fù)制并表達(dá)抗原。這可能是達(dá)抗原。這可能是HBV通過產(chǎn)婦傳播，導(dǎo)致通過產(chǎn)婦傳播，導(dǎo)致(dozh)(dozh)新生兒乙型肝炎的高發(fā)病率、新生兒發(fā)育新生兒乙型肝炎的高發(fā)病率、新生兒發(fā)育不良和死亡的重要因素。不良和死亡的重要因素。 第三十四頁，共四十二頁。乙肝核心抗原的檢測與應(yīng)用 總之，充分認(rèn)識總之，充分認(rèn)識HBcAg的生物學(xué)特點(diǎn)和其在的生物學(xué)特點(diǎn)和其在血液、肝組