黃芩莖葉總黃酮對AD大鼠模型海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的影響及抗氧化

1、黃苓莖葉總黃酮對AD大鼠模型海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的影響及抗氧化作用10-09-0711:19:00編輯：studa20ITTV1作者：王瑞婷張建新董雅潔【摘要】目的探討黃苓莖葉總黃酮（SSTF）對AD大鼠模型學(xué)習(xí)記憶功能、海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)變化的影響及抗氧化作用。方法采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)觀察大鼠學(xué)習(xí)記憶能力，電鏡觀察海馬神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)；檢測血清中超氧化物歧化酶（SOD卜過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPx）含量。結(jié)果模型組大鼠2min內(nèi)穿越平臺區(qū)域的次數(shù)較對照組明顯減少（P<0.01）,在平臺象限停留的時(shí)間明顯減少（P<0.01）,給藥組大鼠穿越平臺區(qū)域的次數(shù)

2、較模型組明顯增多（P<0.05）,在平臺象限停留的時(shí)間較模型組明顯延長（P<0.05）。對照組海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)正常，模型組損傷嚴(yán)重，給藥組較模型組損傷減輕。模型組SODCATGSHPx含量較對照組明顯降低（P<0.05）,給藥組較模型組明顯升高（P<0.05）。結(jié)論SSTF對海馬注射AB25-35引起大鼠學(xué)習(xí)記憶能力降低及海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)損傷具有保護(hù)作用。其機(jī)制可能是增強(qiáng)大鼠體內(nèi)抗氧化酶活性，從而減少活性氧對神經(jīng)元的損傷?！娟P(guān)鍵詞】淀粉樣蛋白；黃苓莖葉總黃酮；超氧化物歧化酶；過氧化氫酶；谷胱甘肽過氧化AbstractObjectiveToinvestigatethe

3、protectionofscutellariabaicalensisstemleaftotalflavonoid（SSTF）onmemorydeficits,neuronultrastructuredamageinducedbybilateralinjectionA025-35onrathippocampusanditsantioxidativemechanism.Methods30maleWistarratswererandomlydividedintothreegroups,10ratsforeachgroup.ThedistilledwaterorSSTF（50mgkg-1d-1）was

4、administered（ig,oncefor20d）tothecontrolandmodelgroupsorSSTFgroup.Onthe8thday,salineorA0wasinjectedtobilateralhippocampusofthecontrolorthemodelandSSTFgroups.Morriswatermazetestwasusedtoevaluatethememoryonthe15thday,oncefor5d.Onthe20thday,theplatformwasremovedtoobservethetimesofratpassingthroughthepla

5、tformareaandthetimestayingintheplatformquadrantin2m.H7500electronmicroscopewasusedtoobservetheultrastructureofhippocampusneuron.BloodwascollectedtodetectthelevelsofSOD,CAT,GSHPx.ResultsThetimespassingthroughtheplatrormareaofmodelgroupwassignificantlydecreased（P<0.01）andthestayingtimeintheplatform

6、quadrantwasdecreasedthanthatofcontrolgroup（P<0.01）whilethetimeweresignificantlyincreasedofSSTFgroupthanthoseofmodelgroup（P<0.05,0.01）.Inthemodelgroup,cellularmembranewasirregular,discontinuation,nuclearmembranewascloudiness.Endolysis,alargeareaofboundless,wasobviouslydecreasedcellularorganelle

7、,degeneratedmitochondriaandapoptosisneuronwasalsoappearedinmodelgroup.IntheSSTFgroup,thediscontinuationcellularmembranewasnotobvious,nuclearmembranewasregular.Lessendolysis,moremitochondria,stimulatedlysosomeandlessapoptosisneuronwereappearedinSSTFgroup.SOD,CATandGSHPXinmodelgroupweresignificantlyde

8、creasedcomparedwiththoseofcontrolgroupwhilethoseinSSTFgroupweresignificantlyincreasedcomparedwiththoseofmodelgroup.ConclusionsSSTFisbeneficialforimprovingtheabilitiesoflearningandmemory,attenuatingtheneurodamageinducedbybilateralinjectionA02535.ThemechanismofSSTFmightbetoincreasetheactivityofantioxi

9、dase,therebydecreasethedamageofROStoneuron.【KeywordsAmyloidbetaprotein;Scutellariabaicalensisstemleaftotalflavonoid(SSTF);Superoxidedismutase(SOD);Catalase(CAT);Glutathioneperoxidase(GSHPx)阿爾茨海默病(Alzheimer'sdisease,AD),是一種以進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙和記憶力損害為主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，與增齡密切相關(guān)。AB在AD發(fā)病過程中起重要作用，AB可能通過誘導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)、產(chǎn)生氧自

10、由基、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等機(jī)制使中樞神經(jīng)元受損。目前開發(fā)抗癡呆藥物主要圍繞其發(fā)病機(jī)制尋找分子治療靶點(diǎn)及抗氧化中藥1,2。黃苓莖葉總黃酮(SSTF)由我校中藥研究所提取，大量研究顯示其具有抗氧化、抗免疫、保護(hù)心肌缺血再灌注損傷、改善腦缺血等作用3。本實(shí)驗(yàn)采用大鼠雙側(cè)海馬注射AB致大鼠癡呆模型，觀察SSTFM大鼠學(xué)習(xí)記憶、海馬神經(jīng)元損傷的影響及可能的作用機(jī)制，為抗氧化植物藥用于AD等中樞神經(jīng)退行性疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料與方法1.1 試劑和儀器AB25-35由Sigma公司提供，超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶苗5H八試劑盒由南京建成生物工程研究所提供，SSTF由承德醫(yī)

11、學(xué)院中藥研究所提供(純度61.88%);其他試劑為分析純。水迷宮儀器購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所，日立H7500透射電鏡。1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性Wistar大鼠30只，1012w,體質(zhì)量(280±20)g,動(dòng)物證號803142,由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境下飼養(yǎng)；自然光線，自由進(jìn)食水。1.3 方法1.3.1 實(shí)驗(yàn)分組及處理將Wistar大鼠隨機(jī)分為3組，每組10只，3組均灌胃20d,1次/d;對照組、模型組灌胃蒸儲水，給藥組灌SSTF(50mg-kg-1-d-1);第8天對照組雙側(cè)海馬各注射5口的無菌生理鹽水，模型組及給藥組注射凝膠態(tài)AB25-355口（含10Ng）。3組大

12、鼠于第15天進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)。1.3.2 動(dòng)物模型制作大鼠灌胃第8天，用4%K合氯醛月g腔麻醉（1ml/100g）,固定于腦立體定位儀（江灣1號C型腦立體定向儀），于AP3.5run,MLi2mmDV2.7mm定位海馬，10min內(nèi)緩慢注入A0。1.3.3 Morris水迷宮行為學(xué)實(shí)驗(yàn)圓形不銹鋼水池，直徑120cm,高60cm,目標(biāo)象限的中央放置一直徑為10cm、高23.5cm的圓形隱藏平臺，水池中水面高于平臺1.5cm,水溫（21±1）C;連續(xù)測5d,第6天撤去平臺，觀察大鼠2min內(nèi)穿越平臺區(qū)域的次數(shù)及在平臺象限停留的時(shí)間。1.3.4 血清SODCAT、GSUP工檢測大鼠麻醉后，經(jīng)

13、心臟取血，于4,4000r/min,離心10min,取上清，具體操作方法按照試劑盒說明書。1.3.5 電鏡標(biāo)本制作動(dòng)物麻醉后，經(jīng)左心室快速灌注250ml生理鹽水，然后灌注4聚甲醛、2%X二醛250ml（先快后慢）進(jìn)行固定，取腦，震蕩切片機(jī)切片，200pm/片，光鏡下選取有陽性結(jié)果的切片，硅化玻璃包片，刻下陽性區(qū)域，帖在樹脂塊上，超薄切片，鈾、鉛雙染，日立H7500電鏡觀察并拍片。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)用x±s表示，采用SSPS12.0軟件進(jìn)行單因素方差分析。2結(jié)果2.1 SSTF對AB致大鼠癡呆模型學(xué)習(xí)記憶下降的影響水迷宮第6天撤去平臺，2min內(nèi)模型組大鼠穿越平臺區(qū)域的次數(shù)較正常對照組明顯減少（P<0.01）,在平臺象限停留的時(shí)間明顯少于對照組（P<0.01）;SSTF組與模型組相比穿越平臺區(qū)域次數(shù)明顯增多（P<0.05）,在平臺象限停留時(shí)間明顯延長（P<0.05）。見表1。2.2 SSTF對海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)改變的影響見圖1。正常對照組海馬神經(jīng)元核膜清晰、連續(xù)，常染色質(zhì)豐富，核仁大、呈網(wǎng)狀，核質(zhì)均勻，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體豐富，線粒體膜光滑，崎板狀或管泡狀，可見一組高爾基體；模型組細(xì)胞