chaper6 the analysis of content of protein and amino acid in farm product

1、Chapter6 the analysis of the content of protein and amino acid in farm product Protein and amino acid characteristic and role for people The analysis methods of impure protein The analysis of pure protein Determine of AA6.1 conspectus 6.1.1 蛋白質(zhì)：蛋白質(zhì)： 植物的重要組成部分，農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)中最重要的成植物的重要組成部分，農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)中最重要的成分。分。 它的含

2、量依作物種類，部位，生育時期，品種特性而變化；它的含量依作物種類，部位，生育時期，品種特性而變化； 植物各部位器官中，籽粒中的含量最高，如豆類可達植物各部位器官中，籽粒中的含量最高，如豆類可達45-55%，其次是花、葉、莖、根；，其次是花、葉、莖、根； 在苗期，新生組織（生長中心）含量高，成熟期，種子中在苗期，新生組織（生長中心）含量高，成熟期，種子中含量高含量高6.1 conspectus蛋白的功能分析：1、身體的構(gòu)成：蛋白質(zhì)是一切生命的物質(zhì)基礎，是肌體細胞的重要組成部分；人體的每個組織：毛發(fā)、皮膚、肌肉、骨骼、內(nèi)臟、大腦、血液、神經(jīng)、內(nèi)分泌等都是由蛋白質(zhì)組成蛋白質(zhì)對人的生長發(fā)育非常重要。6

3、.1 conspectus 蛋白的功能分析： 2、是人體組織更新和修補的主要原料： 身體由百兆億個細胞組成，它們處于永不停息的衰老、死亡、新生的新陳代謝過程中。 例如年輕人的表皮28天更新一次，而胃黏膜兩三天就要全部更新。 所以蛋白質(zhì)的攝入、吸收、利用與皮膚的健康有之間的關(guān)系，同時與肌體的衰老有關(guān)；6.1 conspectus 蛋白的功能分析： 3、維持肌體正常的新陳代謝和各類物質(zhì)在體內(nèi)的輸送。 維持人體的正常生命活動載體蛋白發(fā)揮了重要作用。 比如血紅蛋白輸送氧（紅血球更新速率250萬/秒）、脂蛋白輸送脂肪、細胞膜上的受體還有轉(zhuǎn)運蛋白等。6.1 conspectus 蛋白的功能分析： 4、維持

4、機體內(nèi)的滲透壓的平衡及體液平衡。5、維持體液的酸堿平衡。6.1 conspectus 蛋白的功能分析： 6、提高肌體免疫能力有重要作用： 是免疫細胞：白細胞、淋巴細胞、巨噬細胞、免疫蛋白：抗體（免疫球蛋白）、干擾素等成分。 當?shù)鞍踪|(zhì)充足時，這個部隊就很強，在需要時，數(shù)小時內(nèi)可以增加100倍。6.1 conspectus 蛋白的功能分析： 7、構(gòu)成人體必需的催化和調(diào)節(jié)功能的各種酶。 我們身體有數(shù)千種酶，每一種只能參與一種生化反應。 酶有促進食物的消化、吸收、利用的作用。 相應的酶充足，反應就會順利、快捷的進行，我們就會精力充沛，不易生病。 缺少任何一種或幾種，甚至其功能不正常反應就變慢或者被阻斷

5、。6.1 conspectus 蛋白的功能分析： 8、激素的主要原料，具有調(diào)節(jié)體內(nèi)各器官的生理活性作用； 胰島素是由51個氨基酸分子合成。 生長素是由191個氨基酸分子合成。6.1 conspectus 8、構(gòu)成神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿、五羥色氨等。維持神經(jīng)系統(tǒng)的正常功能：味覺、視覺和記憶。9、膠原蛋白：占身體蛋白質(zhì)的1/3，生成結(jié)締組織，構(gòu)成身體骨架。 如骨骼、血管、韌帶等，決定了皮膚的彈性，保護大腦（在大腦腦細胞中，很大一部分是膠原細胞，并且形成血腦屏障保護大腦）10、提供熱能。6.1 conspectus 6.1.1 因此，蛋白質(zhì)：因此，蛋白質(zhì)： 生命的物質(zhì)基礎，其含量是衡量農(nóng)畜水產(chǎn)品品質(zhì)生命的

6、物質(zhì)基礎，其含量是衡量農(nóng)畜水產(chǎn)品品質(zhì)和營養(yǎng)價值的重要指標。和營養(yǎng)價值的重要指標。 蛋白質(zhì)含量是品種選育，品質(zhì)鑒定的重要依據(jù)；蛋白質(zhì)含量是品種選育，品質(zhì)鑒定的重要依據(jù)； 蛋白質(zhì)含量是了解作物生育環(huán)境和體內(nèi)代謝水平的重要手蛋白質(zhì)含量是了解作物生育環(huán)境和體內(nèi)代謝水平的重要手段；段； 蛋白質(zhì)含量是評價產(chǎn)品加工方式的是否合理的標準蛋白質(zhì)含量是評價產(chǎn)品加工方式的是否合理的標準6.1 conspectus 6.1.2 氨基酸：氨基酸： 必需氨基酸：必須從食物中直接吸收，而不能由人或動物必需氨基酸：必須從食物中直接吸收，而不能由人或動物利用食物中的其它成分自身合成，又對人和動物的生長發(fā)利用食物中的其它成分自身

7、合成，又對人和動物的生長發(fā)育起著重要作用；若缺少這些氨基酸，人和動物不僅不能育起著重要作用；若缺少這些氨基酸，人和動物不僅不能正常發(fā)育，還會引起某些疾??；同時這些氨基酸在貯存和正常發(fā)育，還會引起某些疾?。煌瑫r這些氨基酸在貯存和加工過程中極易損失破壞，成為衡量農(nóng)產(chǎn)品中蛋白質(zhì)利用加工過程中極易損失破壞，成為衡量農(nóng)產(chǎn)品中蛋白質(zhì)利用價值的重要指標之一。價值的重要指標之一。6.1 conspectus 6.1.2 氨基酸：氨基酸： 氨基酸在動植物產(chǎn)品中以多種形式存在：氨基酸在動植物產(chǎn)品中以多種形式存在： 游離的：是評價氮營養(yǎng)水平的重要指標游離的：是評價氮營養(yǎng)水平的重要指標 構(gòu)成蛋白質(zhì)的：是氨基酸的主要成

8、分構(gòu)成蛋白質(zhì)的：是氨基酸的主要成分 少數(shù)幾個結(jié)合的：包括由肽鍵連接的幾個氨基酸；少數(shù)幾個結(jié)合的：包括由肽鍵連接的幾個氨基酸； 和糖或脂結(jié)合的氨基酸和糖或脂結(jié)合的氨基酸6.1 conspectus 6.1.2 氨基酸：氨基酸： 是組成蛋白質(zhì)的基本單位，是蛋白質(zhì)的分解產(chǎn)物。是組成蛋白質(zhì)的基本單位，是蛋白質(zhì)的分解產(chǎn)物。人吸收利用蛋白質(zhì)實際上是吸收利用蛋白質(zhì)的分人吸收利用蛋白質(zhì)實際上是吸收利用蛋白質(zhì)的分解產(chǎn)物氨基酸；解產(chǎn)物氨基酸； 蛋白質(zhì)全氨基酸和個別氨基酸的分析測定是研究蛋白質(zhì)全氨基酸和個別氨基酸的分析測定是研究蛋白質(zhì)，酶的化學組成及性質(zhì)的重要手段；蛋白質(zhì)，酶的化學組成及性質(zhì)的重要手段； 生物化學和

9、農(nóng)業(yè)科學的許多領域分析氨基酸成為生物化學和農(nóng)業(yè)科學的許多領域分析氨基酸成為其它工作的基礎；其它工作的基礎； 分析蛋白質(zhì)和游離氨基酸組成是評價蛋白質(zhì)營養(yǎng)分析蛋白質(zhì)和游離氨基酸組成是評價蛋白質(zhì)營養(yǎng)價值的重要指標價值的重要指標6.1 conspectus 分析蛋白質(zhì)和氨基酸的意義：分析蛋白質(zhì)和氨基酸的意義： 農(nóng)產(chǎn)品重要品質(zhì)的鑒定；農(nóng)產(chǎn)品重要品質(zhì)的鑒定； 選擇合適的農(nóng)產(chǎn)品加工方法和工藝所必需的；選擇合適的農(nóng)產(chǎn)品加工方法和工藝所必需的； 新品種的選育、鑒定所必需的；新品種的選育、鑒定所必需的； 研究蛋白質(zhì)功能的重要條件之一；研究蛋白質(zhì)功能的重要條件之一； 人與動物的健康所必需的。人與動物的健康所必需的。

10、6.2 蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定 6.2.1蛋白質(zhì)測定方法選擇蛋白質(zhì)測定方法選擇 測定的內(nèi)容分類：測定的內(nèi)容分類： 利用蛋白質(zhì)的共性，即含氮量，肽鍵和折射率等利用蛋白質(zhì)的共性，即含氮量，肽鍵和折射率等測定其含量：開法氏，雙縮脲法，考馬斯量蘭染測定其含量：開法氏，雙縮脲法，考馬斯量蘭染料法料法 利用蛋白質(zhì)中特定的氨基酸殘基、酸、堿性基團利用蛋白質(zhì)中特定的氨基酸殘基、酸、堿性基團和芳香基團測定其含量：酸性染料結(jié)合法，紫外和芳香基團測定其含量：酸性染料結(jié)合法，紫外吸收法吸收法6.2 蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定 6.2.2 粗蛋白質(zhì)測定粗蛋白質(zhì)測定-開氏法開氏法 原理：原理： 氮素是蛋白質(zhì)的主要成分，同

11、類植物籽粒中蛋白氮素是蛋白質(zhì)的主要成分，同類植物籽粒中蛋白質(zhì)的含氮量基本上固定不變。將樣品在催化劑的質(zhì)的含氮量基本上固定不變。將樣品在催化劑的參與下用濃硫酸消煮，將其中的有機氮轉(zhuǎn)化為無參與下用濃硫酸消煮，將其中的有機氮轉(zhuǎn)化為無機態(tài)氮，并和硫酸結(jié)合為硫酸銨，加堿蒸餾出氨機態(tài)氮，并和硫酸結(jié)合為硫酸銨，加堿蒸餾出氨并被硼酸吸收，用標準酸滴定，計算出氮的含量，并被硼酸吸收，用標準酸滴定，計算出氮的含量，再將氮值乘以蛋白質(zhì)的換算系數(shù)，得到粗蛋白的再將氮值乘以蛋白質(zhì)的換算系數(shù)，得到粗蛋白的含量。含量。6.2 蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定 6.2.2 粗蛋白質(zhì)測定粗蛋白質(zhì)測定-開氏法開氏法 原理：原理： 蛋白質(zhì)

12、中的氮平均含量蛋白質(zhì)中的氮平均含量16%，所以一般采用，所以一般采用6.25作為將賧換算成蛋白質(zhì)的系數(shù)。作為將賧換算成蛋白質(zhì)的系數(shù)。 不過，不同植物籽粒中蛋白質(zhì)的含氮量有不過，不同植物籽粒中蛋白質(zhì)的含氮量有 差差異，故由氮換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)也稍有不同。異，故由氮換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)也稍有不同。產(chǎn)品名稱系數(shù) 產(chǎn)品名稱系數(shù) 產(chǎn)品名稱系數(shù)蛋品6.25玉米，蕎麥6.25小豆6.25肉類6.25小麥整粒5.83大豆5.71牛乳6.38小麥糠6.31蓖麻,向日葵芝麻，亞麻仁5.30稻米5.95小麥胚芽5.83杏仁5.13velver5.46小麥胚乳5.70巴西果5.46大麥，黑麥，谷子，燕麥5.83刀豆，菜

13、豆，綠豆，豌豆6.25灰胡桃，雞腰果，椰子仁，山核桃，核桃甜瓜籽，棉籽，南瓜籽5.306.2 蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定 開氏法測定的對象和結(jié)果開氏法測定的對象和結(jié)果 開氏法測定的蛋白質(zhì)沒有經(jīng)過分離，其中含有氨開氏法測定的蛋白質(zhì)沒有經(jīng)過分離，其中含有氨基酸，酰胺等非蛋白質(zhì)，稱粗蛋白基酸，酰胺等非蛋白質(zhì)，稱粗蛋白。 粗蛋白的含量用于了解植物蛋白質(zhì)的含量和比較粗蛋白的含量用于了解植物蛋白質(zhì)的含量和比較同類作物含量的差異。同類作物含量的差異。6.2 蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定 應該知道的：應該知道的： 即使是同一類的植物，不同品種或同一品即使是同一類的植物，不同品種或同一品種在不同氣候條件下蛋白質(zhì)的含量

14、有較大種在不同氣候條件下蛋白質(zhì)的含量有較大的差異，而且蛋白質(zhì)的換算系數(shù)也不盡相的差異，而且蛋白質(zhì)的換算系數(shù)也不盡相同，有時甚至有較大的差異。同，有時甚至有較大的差異。6.2 蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定 6.2.2 粗蛋白質(zhì)測定粗蛋白質(zhì)測定-開氏法開氏法 說明：說明： 注意事項基本同土壤全氮的消化、蒸餾滴定過程；注意事項基本同土壤全氮的消化、蒸餾滴定過程； 硼酸的濃度可根據(jù)樣品中的氮的含量來調(diào)節(jié)，一硼酸的濃度可根據(jù)樣品中的氮的含量來調(diào)節(jié)，一般般2% 或或 5%； 指示劑的加入量仍為指示劑的加入量仍為2%（v/v）6.2 蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定 6.2.2 粗蛋白質(zhì)測定粗蛋白質(zhì)測定-開氏法開氏法

15、說明：說明： 催化劑的配比同土壤全氮，用量可減少；催化劑的配比同土壤全氮，用量可減少； 濃硫酸的用量為濃硫酸的用量為5-8ml； 更注意控制消化時溫度，特別是樣品中淀粉含量更注意控制消化時溫度，特別是樣品中淀粉含量比較高時。比較高時。 測定蛋白質(zhì)的平行結(jié)果要求：蛋白含量測定蛋白質(zhì)的平行結(jié)果要求：蛋白含量15%以下以下時，相對相差不大于時，相對相差不大于3%；15-30%，則，則2%；大于；大于30%，則，則1%6.2 蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定 6.2.3 純蛋白質(zhì)測定純蛋白質(zhì)測定 6.2.3.1沉淀后開氏法沉淀后開氏法 原理：原理： 利用蛋白質(zhì)能被重金屬鹽等沉淀的特性，用沉淀利用蛋白質(zhì)能被重金

16、屬鹽等沉淀的特性，用沉淀劑如氫氧化銅、堿性醋酸鉛、劑如氫氧化銅、堿性醋酸鉛、20-25%單寧或單寧或10-12%三氯乙酸等，將蛋白質(zhì)從水溶液中沉淀出來，三氯乙酸等，將蛋白質(zhì)從水溶液中沉淀出來，在測定次沉淀物的全氮含量，乘以蛋白質(zhì)換算系在測定次沉淀物的全氮含量，乘以蛋白質(zhì)換算系數(shù)即可得到純蛋白的量。數(shù)即可得到純蛋白的量。6.2 蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定6.2.3.1沉淀后開氏法沉淀后開氏法 說明：說明： 蛋白質(zhì)的沉淀劑通常采用堿性硫酸銅，它有迅速蛋白質(zhì)的沉淀劑通常采用堿性硫酸銅，它有迅速得到澄清溶液的特點。得到澄清溶液的特點。 在分析牧草、塊根、塊莖作物是，堿性醋酸鉛也在分析牧草、塊根、塊莖作物

17、是，堿性醋酸鉛也可獲得良好的效果。但對谷類及油脂含量高的油可獲得良好的效果。但對谷類及油脂含量高的油料作物則堿性醋酸鉛易形成不易沉淀的混濁物料作物則堿性醋酸鉛易形成不易沉淀的混濁物（淀粉，脂肪酸的形成物），影響沉淀終點的判（淀粉，脂肪酸的形成物），影響沉淀終點的判定。定。6.2 蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定6.2.3.1沉淀后開氏法沉淀后開氏法 說明：說明： 堿性醋酸鉛的配方有兩種：堿性醋酸鉛的配方有兩種： 不加水研磨：不加水研磨：200gPbO+ 300g Pb(oAC)2, 沸水沸水浴融化混合，浴融化混合，+ 1 LH2O， 放過夜，過濾，密封放過夜，過濾，密封保存；保存； 加水研磨：加水研磨

18、： 200gPbO+ 600g Pb(oAC)2 +100ml H2O研磨，沸水浴上至淺黃、淺紫為止，過濾，研磨，沸水浴上至淺黃、淺紫為止，過濾，密封存放密封存放6.2 蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定6.2.3.1沉淀后開氏法沉淀后開氏法 說明：說明： 對含淀粉多的作物也可用堿性硫酸銅：對含淀粉多的作物也可用堿性硫酸銅：Cu2SO4(OH)2。也可用一般樣品的處理。加入。也可用一般樣品的處理。加入50ml沸水，沸水，40-50 水浴保溫水浴保溫10min，然后乘熱，然后乘熱緩慢加入緩慢加入6% CuSO45H2O 25ml，邊加邊攪拌，邊加邊攪拌，然后乘熱緩慢加入然后乘熱緩慢加入1.25% NaOH

19、 25ml，邊加邊攪，邊加邊攪拌，以形成拌，以形成Cu2SO4(OH)2 ，放置，放置0.5-1h（或過夜）（或過夜）使沉淀完全。使沉淀完全。6.2 蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定6.2.3.1沉淀后開氏法沉淀后開氏法 說明：說明： 沉淀用傾泄法過濾，用沸水洗滌沉淀至無沉淀用傾泄法過濾，用沸水洗滌沉淀至無SO42-； 殘渣烘干的溫度為殘渣烘干的溫度為50-60，烘干不是絕對的干，烘干不是絕對的干燥，至擠不出水為止。一般燥，至擠不出水為止。一般1-2小時；小時； 如有大量氣泡產(chǎn)生可加少量的石蠟。如有大量氣泡產(chǎn)生可加少量的石蠟。6.2 蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定 6.2.3 純蛋白質(zhì)測定純蛋白質(zhì)測定 6.

20、2.3.2酸性染料結(jié)合法酸性染料結(jié)合法-桔黃桔黃G染料法染料法 原理：蛋白質(zhì)中的堿性氨基酸以及蛋白質(zhì)末端自原理：蛋白質(zhì)中的堿性氨基酸以及蛋白質(zhì)末端自由氨基在由氨基在pH=2-3的酸性緩沖液體系中可以和偶氮的酸性緩沖液體系中可以和偶氮磺酸染料物質(zhì)結(jié)合形成不溶于水的蛋白質(zhì)磺酸染料物質(zhì)結(jié)合形成不溶于水的蛋白質(zhì)-染料絡染料絡合物而沉淀出來；通過測定一定量樣品與一定體合物而沉淀出來；通過測定一定量樣品與一定體積已知濃度的染料溶液反應前后染料濃度的變化，積已知濃度的染料溶液反應前后染料濃度的變化，來計算樣品蛋白質(zhì)含量。來計算樣品蛋白質(zhì)含量。6.2 蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定 6.2.3.2酸性染料結(jié)合法酸性

21、染料結(jié)合法-桔黃桔黃G染料法染料法 說明：說明： 蛋白質(zhì)中的堿性氨基酸包括：賴氨酸的蛋白質(zhì)中的堿性氨基酸包括：賴氨酸的-NH2，精，精氨酸的咪唑基，組氨酸的胍基，以及蛋白質(zhì)末端氨酸的咪唑基，組氨酸的胍基，以及蛋白質(zhì)末端自由氨基，在自由氨基，在pH=2-3的酸性緩沖液體系中呈陽離的酸性緩沖液體系中呈陽離子狀態(tài)存在，可以和偶氮磺酸染料物質(zhì)，桔黃子狀態(tài)存在，可以和偶氮磺酸染料物質(zhì)，桔黃G、酸性橙紅等陰離子結(jié)合，形成不溶于水的蛋白質(zhì)酸性橙紅等陰離子結(jié)合，形成不溶于水的蛋白質(zhì)-染料絡合物而沉淀出來；染料絡合物而沉淀出來；6.2 蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定 6.2.3.2酸性染料結(jié)合法酸性染料結(jié)合法-桔黃桔

22、黃G染料法染料法 說明：說明： 測定一定量樣品與一定體積已知濃度的染測定一定量樣品與一定體積已知濃度的染料溶液反應前后染料濃度的變化，計算樣料溶液反應前后染料濃度的變化，計算樣品的染料結(jié)合量，即每克樣品所結(jié)合的染品的染料結(jié)合量，即每克樣品所結(jié)合的染料的毫克數(shù)；料的毫克數(shù)；6.2 蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定 6.2.3.2酸性染料結(jié)合法酸性染料結(jié)合法-桔黃桔黃G染料法染料法 說明：說明： 樣品所結(jié)合的染料量的大小反映的是樣品中堿性樣品所結(jié)合的染料量的大小反映的是樣品中堿性氨基酸的多少；氨基酸的多少； 小麥，大麥，水稻，大豆，小麥，大麥，水稻，大豆， 花生等種子中的蛋白花生等種子中的蛋白質(zhì)的含量與其

23、堿性氨基酸的含量有很好的相關(guān)性；質(zhì)的含量與其堿性氨基酸的含量有很好的相關(guān)性； 根據(jù)堿性氨基酸的含量來計算樣品蛋白質(zhì)含量。根據(jù)堿性氨基酸的含量來計算樣品蛋白質(zhì)含量。6.2 蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定 6.2.3.2酸性染料結(jié)合法酸性染料結(jié)合法-桔黃桔黃G染料法染料法 說明：說明： 是間接測定蛋白質(zhì)含量的方法，簡單快速，與開是間接測定蛋白質(zhì)含量的方法，簡單快速，與開氏相關(guān)性好；氏相關(guān)性好； 不同種類的蛋白質(zhì)中堿性氨基酸的含量不盡相同，不同種類的蛋白質(zhì)中堿性氨基酸的含量不盡相同，同一種植物中不同的蛋白質(zhì)的堿性氨基酸的含量同一種植物中不同的蛋白質(zhì)的堿性氨基酸的含量差異不一致，使該測定方法準確性較差；差異

24、不一致，使該測定方法準確性較差； 適用于不需要知道蛋白質(zhì)的絕對含量，同種植物適用于不需要知道蛋白質(zhì)的絕對含量，同種植物大量種子蛋白含量高低的篩選工作；大量種子蛋白含量高低的篩選工作；6.2 蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定 6.2.3.2酸性染料結(jié)合法酸性染料結(jié)合法-桔黃桔黃G染料法染料法 說明：說明： 需要從染料結(jié)合量來計算樣品的粗蛋白的含量，需要從染料結(jié)合量來計算樣品的粗蛋白的含量，則需用開氏法測定一批種子樣品的粗蛋白含量對則需用開氏法測定一批種子樣品的粗蛋白含量對酸性染料結(jié)合法測定同類種子的一批樣品染料結(jié)酸性染料結(jié)合法測定同類種子的一批樣品染料結(jié)合量進行回歸，得到回歸方程；這樣測定同類樣合量進行

25、回歸，得到回歸方程；這樣測定同類樣品的染料結(jié)合量就可以通過回歸方程得到樣品的品的染料結(jié)合量就可以通過回歸方程得到樣品的粗蛋白含量；粗蛋白含量；6.2 蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定 6.2.3.2酸性染料結(jié)合法酸性染料結(jié)合法-桔黃桔黃G染料法染料法 說明：說明： 本法不適合用于隨意混合的樣品的蛋白質(zhì)的含量本法不適合用于隨意混合的樣品的蛋白質(zhì)的含量的測定；的測定； 樣品的稱樣量按蛋白質(zhì)的含量高低而定：水稻，樣品的稱樣量按蛋白質(zhì)的含量高低而定：水稻，小麥，大麥，可稱取小麥，大麥，可稱取500mg，玉米稱取，玉米稱取700mg，大豆稱取大豆稱取200mg，花生和魚粉則還要少；，花生和魚粉則還要少；6.2

26、蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定 6.2.3.2酸性染料結(jié)合法酸性染料結(jié)合法-桔黃桔黃G染料法染料法 說明：說明： 染料結(jié)合反應的條件，如染料的染料結(jié)合反應的條件，如染料的pH，樣品的粒度，樣品的粒度，振蕩反應的時間和溫度等影響結(jié)果，所以為使結(jié)振蕩反應的時間和溫度等影響結(jié)果，所以為使結(jié)果有好的可比性，要求每次測定的反應條件盡量果有好的可比性，要求每次測定的反應條件盡量一致，特別是測定樣品和測定回歸方程的條件要一致，特別是測定樣品和測定回歸方程的條件要一致；一致； 比色波長比色波長482nm6.2 蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定 6.2.3 純蛋白質(zhì)測定純蛋白質(zhì)測定 6.2.3.3雙縮脲法雙縮脲法 原理：原理

27、： 蛋白質(zhì)中的肽鍵結(jié)構(gòu)，具有類似于雙縮脲的反應蛋白質(zhì)中的肽鍵結(jié)構(gòu)，具有類似于雙縮脲的反應基團，在堿性條件下能與基團，在堿性條件下能與Cu2+生成紫紅色可溶性生成紫紅色可溶性絡合物，蛋白質(zhì)的濃度在絡合物，蛋白質(zhì)的濃度在1-15mg/10ml（40ml）之間，其含量與溶液的吸收值成正比例關(guān)系，與之間，其含量與溶液的吸收值成正比例關(guān)系，與蛋白質(zhì)的分子量，氨基酸的組成沒有關(guān)系。蛋白質(zhì)的分子量，氨基酸的組成沒有關(guān)系。550nm（580nm）6.2 蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定 6.2.3.3雙縮脲法雙縮脲法 本法設備簡單，快速，與開氏法測得的含量相關(guān)本法設備簡單，快速，與開氏法測得的含量相關(guān)性好性好 本法測

28、定的是肽鍵的含量，肽鍵含量高呈紫色，本法測定的是肽鍵的含量，肽鍵含量高呈紫色，含量低呈紅色；含量低呈紅色； 適用于小麥，大麥，玉米，水稻，高粱等蛋白質(zhì)適用于小麥，大麥，玉米，水稻，高粱等蛋白質(zhì)的測定，尤其適用于大批品種的篩選用；的測定，尤其適用于大批品種的篩選用； 獲得蛋白的絕對含量也需要測定本法測定的含量獲得蛋白的絕對含量也需要測定本法測定的含量與開氏法測得的含量做回歸方程計算與開氏法測得的含量做回歸方程計算6.2 蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定 6.2.3.3雙縮脲法雙縮脲法 說明：說明： 雙縮脲試劑由硫酸銅，酒石酸鉀鈉，氫氧化鉀，雙縮脲試劑由硫酸銅，酒石酸鉀鈉，氫氧化鉀，異丙醇組成。異丙醇可減

29、少有色物質(zhì)，脂肪及一異丙醇組成。異丙醇可減少有色物質(zhì)，脂肪及一些淀粉物質(zhì)的溶解，減少比色的干擾；些淀粉物質(zhì)的溶解，減少比色的干擾； 有用有用CuCO3（OH）2代替代替Cu2SO4(OH)2同樣獲同樣獲得好的結(jié)果；得好的結(jié)果； 對顏色深的樣品，先用對顏色深的樣品，先用CCl4處理已經(jīng)稱好的樣品處理已經(jīng)稱好的樣品并用并用1%H2O2降解有色物質(zhì)；降解有色物質(zhì)；6.2 蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)的測定 6.2.3.3雙縮脲法雙縮脲法 說明：說明： 本法對顯色的溫度及時間的要求嚴格：室內(nèi)溫度本法對顯色的溫度及時間的要求嚴格：室內(nèi)溫度20-25，120-190min之間比色；之間比色；40 ，則，則15-70

30、min之間比色之間比色 離心須用離心須用5000-6000rpm，10min 本法與染料結(jié)合法稱為同類種子中蛋白質(zhì)的測定本法與染料結(jié)合法稱為同類種子中蛋白質(zhì)的測定方法方法6.3 氨基酸的測定氨基酸的測定 測定氨基酸的方法選擇：測定氨基酸的方法選擇： 氨基酸的測定包括測定氨基酸的總的含量的測定氨基酸的測定包括測定氨基酸的總的含量的測定以及測定氨基酸組分的測定兩個方面；以及測定氨基酸組分的測定兩個方面； 總量：測定蛋白質(zhì)總氮量，開氏法，水合茚三酮總量：測定蛋白質(zhì)總氮量，開氏法，水合茚三酮比色法，甲醛滴定法比色法，甲醛滴定法 組分測定：薄層層析，氣相色譜，液相色譜，氨組分測定：薄層層析，氣相色譜，液

31、相色譜，氨基酸分析儀基酸分析儀6.3 氨基酸的測定氨基酸的測定 6.3.1 全氨基酸與動植物游離氨基酸的分全氨基酸與動植物游離氨基酸的分析析氨基酸分析儀氨基酸分析儀 原理：原理： 因洗脫緩沖液的因洗脫緩沖液的pH不同與氨基酸的等電點不同與氨基酸的等電點的不同，吸附在交換柱上氨基酸被分離洗的不同，吸附在交換柱上氨基酸被分離洗脫；氨基酸與水合茚三酮反應生成特征顏脫；氨基酸與水合茚三酮反應生成特征顏色，顏色的深淺與含量正相關(guān)。色，顏色的深淺與含量正相關(guān)。6.3 氨基酸的測定氨基酸的測定 氨基酸分析儀氨基酸分析儀 原理：原理： 氨基酸分析儀的核心部件是離子交換層析柱。氨基酸分析儀的核心部件是離子交換層

32、析柱。 在流動相緩沖液的推動下，氨基酸與陽離子交換在流動相緩沖液的推動下，氨基酸與陽離子交換樹脂的色譜柱中的交換基團進行交換，而被吸附樹脂的色譜柱中的交換基團進行交換，而被吸附在色譜柱的表面；在色譜柱的表面； 不同氨基酸的等電點的不同，其電中性的不同氨基酸的等電點的不同，其電中性的pH不同，不同， 因分子基團的不同而將氨基酸進行分離；因分子基團的不同而將氨基酸進行分離；6.3 氨基酸的測定氨基酸的測定 氨基酸分析儀氨基酸分析儀 原理：原理： 氨基酸與水合茚三酮在氨基酸與水合茚三酮在100反應生成特征顏色：反應生成特征顏色：多數(shù)氨基酸生成紫色物質(zhì)多數(shù)氨基酸生成紫色物質(zhì)-茚二酮炔茚二酮氨茚二酮炔茚

33、二酮氨（DYDA），），570nm有吸收峰；有吸收峰； 脯氨酸和羥脯氨酸與水合茚三酮在脯氨酸和羥脯氨酸與水合茚三酮在100反應生反應生成黃色物質(zhì)，吸收峰，成黃色物質(zhì)，吸收峰，440nm6.3 氨基酸的測定氨基酸的測定 氨基酸分析儀氨基酸分析儀 氨基酸組分的制備須在真空條件下水解：氨基酸組分的制備須在真空條件下水解： 1 大部分氨基酸大部分氨基酸6molL-1HCl，真空后密封，真空后密封，110 ，22小時，除小時，除HCl， pH=3.3的檸檬酸鈉緩沖液的檸檬酸鈉緩沖液溶解；溶解； 2 胱氨酸：須先氧化為半胱氨酸（胱氨酸：須先氧化為半胱氨酸（30%H2O2 + 80%甲酸，甲酸，1：9混合，

34、室溫混合，室溫1小時），除甲酸，小時），除甲酸，0.2-0.4mol L-1- -巰基乙醇的巰基乙醇的6molL-1HCl溶液溶液水解（真空后密封），后同水解（真空后密封），后同1；6.3 氨基酸的測定氨基酸的測定 氨基酸分析儀氨基酸分析儀 氨基酸組分的制備氨基酸組分的制備 3 色氨酸：須用色氨酸：須用4.2mol L-1 NaOH + 硫代二硫代二甘醇甘醇0.3ml，真空密封，真空密封， 真空后密封，真空后密封，110 ，22小時，用小時，用6molL-1HCl中和（中和（7ml），），pH=4.3的檸檬酸鈉緩沖液調(diào)整的檸檬酸鈉緩沖液調(diào)整pH=4.5，定容；，定容；6.3 氨基酸的測定氨基酸的測定 氨基酸分析儀氨基酸分析儀 氨基酸組分的制備：氨基酸組分的制備： 植物產(chǎn)品中游離氨基酸用植物產(chǎn)品中游離氨基酸用75%乙醇提?。阂掖继崛。?0放放數(shù)小時，數(shù)小時，6000rpm離心，或者離心，或者80回流，回流，提取提取2-3次，每次次，每次15min，蒸發(fā)除乙醇，蒸發(fā)除乙醇，pH=3.3的檸檬酸鈉緩沖液溶解的檸檬酸鈉緩