臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)

1、1 臨床微生物學(xué)的概念是什么？臨床微生物學(xué)是研究微生物的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、分類、生命活動(dòng)規(guī)律的一門科學(xué)，包括細(xì)菌學(xué)、病毒學(xué)、真菌學(xué)等。是臨床醫(yī)學(xué)的基礎(chǔ)之一，指導(dǎo)感染性疾病的診斷、治療和預(yù)防。2臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)檢查大概分幾步驟？從患者標(biāo)本分離培養(yǎng)微生物。對(duì)標(biāo)本中分離到的微生物進(jìn)行培養(yǎng)、鑒定。進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)，解釋和預(yù)報(bào)結(jié)果。階段性分析藥物敏感性實(shí)驗(yàn)，預(yù)測(cè)耐藥趨勢(shì)，監(jiān)控和指導(dǎo)臨床合理用藥。3 什么是感染性疾病及影響因素？凡是由病原微生物引起的疾病統(tǒng)稱為感染性疾病，而感染性疾病的發(fā)生主要與病原體的侵襲力及宿主的抵抗力密切相關(guān)。別外，臨床上抗生素的大量濫用，引起了正常菌群失調(diào)和大量耐藥菌株的出現(xiàn)，從而加重

2、了機(jī)體的內(nèi)源性感染機(jī)率，這一定程度又加重了感染性疾病的發(fā)生。4 臨床醫(yī)師主要需要從臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室得到什么？能為臨床提供醫(yī)學(xué)決策的相關(guān)信息。指導(dǎo)臨床正確收集標(biāo)本的原則。安全及時(shí)的送檢標(biāo)本。微生物的正確鑒定和藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果。能快速地報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并做出相關(guān)的結(jié)果解釋。能及時(shí)反饋醫(yī)院內(nèi)細(xì)菌感染分布、耐藥狀況和流行趨勢(shì)等。 5 臨床醫(yī)師應(yīng)如何避免感染性疾病的爆發(fā)流行？遵循病原學(xué)診斷，避免無(wú)指癥用藥。正確及時(shí)的采集標(biāo)本，按要求及時(shí)送檢微生物實(shí)驗(yàn)室檢查。重視實(shí)驗(yàn)室的鑒定及藥敏結(jié)果，結(jié)合臨床患者病情合理使用抗生素。注意經(jīng)驗(yàn)性治療與靶向治療相結(jié)合，依據(jù)病原學(xué)診斷及時(shí)調(diào)整治療方案，改為針對(duì)性治療。加強(qiáng)同

3、臨床微生物實(shí)驗(yàn)室交流溝通，積極配合實(shí)驗(yàn)室做好院內(nèi)感染監(jiān)測(cè)、預(yù)防和控制工作。6 臨床標(biāo)本采集的一般原則是什么？在最適宜的時(shí)間收集標(biāo)本，最好在使用抗生素之前或感染急性期采集。采集標(biāo)本要有代表性和針對(duì)性，不同情況應(yīng)區(qū)別對(duì)待，適宜地采取相應(yīng)的方法收集標(biāo)本，如尿液標(biāo)本疑為厭氧菌感染時(shí)，應(yīng)行恥骨上緣穿刺術(shù)取膀胱尿培養(yǎng)。采集標(biāo)本必須來(lái)自實(shí)際感染的部位，嚴(yán)格無(wú)菌操作盡可能避免外源性污染。收集標(biāo)本應(yīng)當(dāng)使用合適的收集器材、容器和培養(yǎng)基，以保證最大限度的發(fā)現(xiàn)微生物。標(biāo)本采集、運(yùn)送過程中要有專人負(fù)責(zé)，避免人為操作失誤。采集標(biāo)本不僅要防止被污染，同時(shí)也要注意安全，防止傳播和自身感染。7采集過程中需要加抗凝劑的標(biāo)本應(yīng)注意

4、什么？對(duì)任何容易形成凝塊的標(biāo)本都應(yīng)使用抗凝劑，因?yàn)槿缥⑸锉灰涯痰奈镔|(zhì)包圍，生長(zhǎng)較困難。另外，像胸水、腹水等液體標(biāo)本一旦凝固，很難接種培養(yǎng)，直接影響微生物的培養(yǎng)鑒定。目前，微生物學(xué)標(biāo)本最常用的抗凝劑是多聚茴香腦磺酸鈉SPS（Sodium polyanethol sulfonate），但其濃度不得超過0.025%(W/V)，否則會(huì)抑制一些奈瑟菌和厭氧性鏈球菌的生長(zhǎng)。肝素也是常用抗凝劑之一，主要用于病毒培養(yǎng)，因?yàn)樗芤种聘锾m氏陽(yáng)性菌和酵母菌的生長(zhǎng)。檸檬酸鹽和乙二胺四乙酸通常不用于微生物學(xué)標(biāo)本。8 標(biāo)本運(yùn)送過程中應(yīng)注意些什么？標(biāo)本采集后，除了要及時(shí)送檢外，另外在運(yùn)送過程中要注意盡量保持標(biāo)本的原有性

5、狀。對(duì)于不能及時(shí)送檢的要用專用運(yùn)送培養(yǎng)基運(yùn)送，而對(duì)一些含有脆弱細(xì)菌的標(biāo)本，需加入特別的保存劑。例如，尿液中加入硼酸能有效地抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，較好的保持尿液中菌落的數(shù)量；糞便中加入磷酸鹽緩沖液有助于保持糞便中像志賀菌、沙門菌等的脆弱細(xì)菌。此外，甲醛溶液、紹丁溶液有助于保存寄生蟲的滋養(yǎng)體和包囊，使其維持便于識(shí)別的形態(tài)。9 如何采集血液標(biāo)本及注意事項(xiàng)？疑為菌血癥或敗血癥時(shí)，一般情況下應(yīng)在病人發(fā)熱初期或發(fā)熱高峰時(shí)采集，原則上應(yīng)在抗菌治療前盡早取血做細(xì)菌培養(yǎng)。若已用抗菌藥物或療效不佳時(shí)，在可能條件下停藥24小時(shí)后再做血培養(yǎng)。連續(xù)做血培養(yǎng)3次，各次采血應(yīng)在不同部位的血管穿刺，禁從靜脈插管內(nèi)抽血。當(dāng)骨髓炎時(shí)或長(zhǎng)

6、期使用抗菌藥物患者，抽取骨髓培養(yǎng)陽(yáng)性率會(huì)遠(yuǎn)高于血液培養(yǎng)。對(duì)成人每瓶血培養(yǎng)應(yīng)采血810ml，嬰兒為12ml，兒童35 ml，骨髓為12 ml。如不能及時(shí)送檢，應(yīng)將已注血的培養(yǎng)瓶在室溫存放，并不得超過12小時(shí)。 注意事項(xiàng)：不能用碘酒消毒瓶蓋，只需70酒精消毒瓶蓋。嚴(yán)格作好患者抽血部位的無(wú)菌操作。同時(shí)作厭氧和需氧培養(yǎng)時(shí)應(yīng)先將標(biāo)本接種到厭氧瓶中，然后再注入需氧瓶，嚴(yán)格防止將空氣注入?yún)捬跗恐小Ｈ绮荒芗皶r(shí)送檢應(yīng)于室溫存放，切勿放冰箱存放。 10采集痰標(biāo)本時(shí)應(yīng)注意些什么？當(dāng)疑為呼吸道感染性疾病時(shí)，應(yīng)讓患者取晨痰送檢。取痰前用清水反復(fù)漱口后用力自氣管咳出第一口痰于滅菌容器內(nèi)，立即送檢。對(duì)于痰量少或無(wú)痰的患者可

7、采用支氣管鏡或氣管穿刺法取得。為了避免污染菌的干擾，最好連查3次。注意事項(xiàng)：采集標(biāo)本以清晨為佳，為減少口腔正常菌群污染標(biāo)本，采集前應(yīng)充分漱口。取痰標(biāo)本應(yīng)是深部的痰液而不是唾液，否則會(huì)影響檢查結(jié)果。作結(jié)核分枝桿菌檢查，痰量要多或留取24小時(shí)痰液，嬰兒肺結(jié)核要用胃管取痰。約有1412肺部感染患者可能發(fā)生菌血癥，應(yīng)同時(shí)作血培養(yǎng)。 對(duì)一些特殊患者可采用支氣管鏡采集法及氣管穿刺法取痰。11如何采集尿液標(biāo)本及注意事項(xiàng)？臨床上有泌尿系統(tǒng)感染、腎結(jié)核、結(jié)石和無(wú)癥狀性菌尿等疾病指征時(shí)，通常應(yīng)采集晨起第一次尿液（中段尿）送檢。原則上應(yīng)選擇在抗菌治療前采集，若已用藥應(yīng)停藥一周后采集尿液送檢。采集標(biāo)本前，女性先以肥皂

8、水清洗外陰部，再以滅菌水或1：1000高錳酸鉀水溶液沖洗尿道口，然后排尿棄去前段尿，留取中段尿10ml左右于無(wú)菌容器內(nèi)，立即加蓋送檢。男性先用肥皂水清洗尿道口，后用清水沖洗，就可采集中段尿。包皮過長(zhǎng)者，為防止污染，可將包皮翻開沖洗，再取中段尿。疑為尿道炎時(shí)，可將最初34ml尿收集在滅菌容器中。如反復(fù)檢查為同一細(xì)菌，也應(yīng)考慮為病原菌。必要時(shí)可采用膀胱穿刺術(shù)取尿。注意事項(xiàng)：尿液標(biāo)本的采集和培養(yǎng)中最大的問題是污染雜菌，故應(yīng)嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作。尿液標(biāo)本采集后應(yīng)盡快送檢（12小時(shí)內(nèi)），否則會(huì)影響細(xì)菌檢查的正確性。多數(shù)藥物均通過尿液排泄，因此，無(wú)論用何種方法采集尿液均宜在用藥之前進(jìn)行。尿液中不得含有防腐劑或

9、消毒劑。疑為結(jié)核分枝桿菌時(shí)，可用清潔容器，留24小時(shí)尿取其沉渣1015 ml送檢。12穿刺液包括哪些？采集中應(yīng)注意些什么？穿刺液主要包括腦脊液、膽汁、胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液及鞘膜液等。在正常人體中，上述體液均是無(wú)菌的，有感染的情況下檢出的細(xì)菌，應(yīng)視為病原菌，應(yīng)給予及時(shí)正確的治療。懷疑為腦膜炎的病人，用腰穿方法采集腦脊液2 ml左右，在常溫下15分鐘內(nèi)送檢。標(biāo)本不可置冰箱內(nèi)保存，否則會(huì)使病原菌死亡。膽汁及其它穿刺液采集到無(wú)菌針管或無(wú)菌試管內(nèi)立即送檢。注意事項(xiàng)：標(biāo)本采集應(yīng)在用藥之前。嚴(yán)格無(wú)菌操作，避免污染。作腦脊液培養(yǎng)時(shí)，建議同時(shí)作血培養(yǎng)。為防止穿刺液的凝固，最好在無(wú)菌試管中先加入滅菌肝素。1

10、3創(chuàng)傷和化膿性標(biāo)本采集方法是什么？軟組織的急性化膿性炎癥、化膿性疾病、膿腫和創(chuàng)傷感染等疾病可根據(jù)臨床要求取標(biāo)本送檢。對(duì)開放性感染和已潰破的化膿灶，標(biāo)本采集前先用滅菌生理鹽水沖洗表面污染菌，再用滅菌拭子采取膿液及病灶深部的分泌物。如為慢性感染，污染嚴(yán)重，很難分離到致病菌，可取感染部位下的組織，研磨成組織勻漿后送檢。閉鎖性膿腫可行手術(shù)引流或穿刺法取標(biāo)本于滅菌容器或滅菌注射器內(nèi)送檢。注意事項(xiàng)：盡可能在用藥前采集標(biāo)本，采集前一定要作好清洗、消毒工作。不能立即送檢的標(biāo)本，應(yīng)放4保存；培養(yǎng)淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌的標(biāo)本除外。深部膿腫常由包括厭氧菌在內(nèi)的混合細(xì)菌感染所致, 若有條件應(yīng)作厭氧菌培養(yǎng)，采集標(biāo)本應(yīng)

11、遵守厭氧菌感染標(biāo)本的采集原則。14糞便標(biāo)本培養(yǎng)應(yīng)如何采集？腹瀉為大便送檢的重要指征，嬰幼兒和小兒可見高熱驚厥。當(dāng)疑為細(xì)菌性痢疾、腸炎、腸結(jié)核和頑固性腹瀉時(shí)，應(yīng)在急性期采集，亦最好在用藥之前，以提高檢出率。腸熱癥患者應(yīng)在兩周以后采集。采用自然排便法或直腸拭子法，挑取有膿血，粘液部位的糞便23置于無(wú)菌容器中送檢。注意事項(xiàng)：為提高檢出率，要采集新鮮糞便作培養(yǎng)。腹瀉病人應(yīng)盡量在急性期采集標(biāo)本（3天以內(nèi)），以提高陽(yáng)性率。雖糞便含有多種雜菌，但應(yīng)盡量采用無(wú)菌容器。15生殖道標(biāo)本的采集原則和注意事項(xiàng)是什么？ 當(dāng)疑為生殖道感染性疾病時(shí)，首先排除是否有不潔性交史，然后根據(jù)癥狀確定檢查方向。對(duì)于男性患者來(lái)講，先檢

12、查尿道是否有膿性分泌物，再依次是前列腺液、精液。采集標(biāo)本時(shí)應(yīng)清洗尿道口，再用無(wú)菌拭子擦取尿道口膿性分泌物或深入尿道內(nèi)2-4厘米取分泌物，檢查精液患者應(yīng)禁欲5天以上，采用體外排精法射精于滅菌容器送檢。對(duì)于女性患者，先用窺器擴(kuò)張陰道，然后用滅菌棉拭子取陰道后穹隆處或?qū)m頸分泌物作培養(yǎng)或涂片鏡檢。注意事項(xiàng)：生殖器是開放性器官，標(biāo)本采集過程中應(yīng)遵循無(wú)菌操作以減少雜菌污染。陰道內(nèi)有大量正常菌群存在，采取宮頸標(biāo)本應(yīng)避免觸及陰道壁。疑產(chǎn)婦有宮腔感染，待胎兒娩出后取宮腔分泌物，并同時(shí)取嬰兒耳拭子一同送檢。沙眼衣原體在宿主細(xì)胞內(nèi)繁殖，采集時(shí)盡可能多的取上皮細(xì)胞。16哪些標(biāo)本不能作厭氧菌培養(yǎng)及如何運(yùn)送標(biāo)本？痰、支氣

13、管鏡采樣(無(wú)特殊保護(hù)套)、咽拭子、排出的尿及陰道拭子不能做厭氧菌培養(yǎng)，糞便標(biāo)本厭氧菌培養(yǎng)，只能做難辨梭菌的培養(yǎng)。在運(yùn)送中最常用的是注射器運(yùn)送法，此外還有無(wú)氧小瓶運(yùn)送法、棉拭運(yùn)送法、組織塊運(yùn)送法、大量標(biāo)本運(yùn)送法。標(biāo)本采集后應(yīng)盡快送到實(shí)驗(yàn)室，最遲不超過半小時(shí)。標(biāo)本不應(yīng)放在冰箱里，因?yàn)榈蜏貙?duì)一些厭氧菌有害。17細(xì)菌的超微形態(tài)及革蘭氏陽(yáng)性和陰性菌的區(qū)別如何？細(xì)菌是一類原核細(xì)胞型微生物，體積微小，基本形態(tài)有球形、桿形和螺形三種。之所以稱原核是指其核則不是一個(gè)具體的結(jié)構(gòu)，沒有核膜。細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)包括細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞漿、核質(zhì)和胞漿顆粒等。除動(dòng)物細(xì)胞無(wú)細(xì)胞壁外，各類生物的細(xì)胞具有不同的細(xì)胞壁。例如，植物的

14、細(xì)胞壁由纖維素構(gòu)成，霉菌的細(xì)胞壁則為幾丁質(zhì)，細(xì)菌細(xì)胞壁的成分為肽聚糖、垣酸和脂多糖。革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁厚，肽聚糖骨架通過四肽側(cè)鏈和五肽橋連接成為三維空間。不含有芳香氨基酸和含硫氨基酸。革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁薄，除少量肽聚糖構(gòu)成細(xì)胞壁的內(nèi)層外，由大量脂多糖構(gòu)成其外層，并有脂蛋白形成鑲嵌結(jié)構(gòu)，其中含有芳香氨基酸和含硫基酸。18細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)都有哪些？其功能是什么？細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)主要有鞭毛、菌毛、莢膜和芽胞。鞭毛是細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)器官，由簡(jiǎn)單的角蛋白肌蛋白組成。菌毛分為普通菌毛及性菌毛兩種，普通菌毛能與宿主細(xì)胞表面的菌毛受體相結(jié)，發(fā)揮粘附作用，而性菌毛中空呈管狀，能在細(xì)菌之間通過接合傳遞遺傳物質(zhì)，故性菌毛

15、與細(xì)菌的遺傳變異有關(guān)。莢膜是細(xì)胞壁外的一層多糖物質(zhì)具有抗原性，能抵抗機(jī)體吞噬細(xì)胞的吞噬作用。芽胞是某些細(xì)菌的繁殖體，在一定環(huán)境條件下，由于胞漿脫水濃縮而成一個(gè)圓形或卵圓形小體，具有多層膜結(jié)構(gòu)，對(duì)外界理化因素抵抗力強(qiáng)，可潛伏數(shù)年或幾十后重新繁殖生長(zhǎng)。19什么是L型細(xì)菌？其形成原因？L型細(xì)菌是一類細(xì)胞壁缺陷的細(xì)菌，形態(tài)各異大小不一，染色時(shí)不易著色，且著色不均勻，革蘭陽(yáng)性菌和革蘭陰性菌均可形成，又稱為“原生質(zhì)體和原生質(zhì)球”，凡能破壞肽聚糖結(jié)構(gòu)都可誘導(dǎo)細(xì)菌形成L型，其表現(xiàn)為具有明顯的多形性，革蘭染色陰性，能通過細(xì)菌濾器，對(duì)滲透壓敏感。L型細(xì)菌的主要意義在于仍有致病性，能引起間質(zhì)性炎癥。而且是臨床上感染

16、漏診的主要原因之一。20脂多糖由哪幾部分組成？其功能是什么？脂多糖是由類脂和多糖組成，是革蘭陰性菌的內(nèi)毒素，包括類脂A、核心多糖和特異多糖等三部分。類脂A是內(nèi)毒素的毒性分子，與細(xì)菌的致病性有關(guān)，無(wú)種屬特異性，故不同的革蘭陰性菌感染時(shí)，其毒性大致相同。核心多糖具有細(xì)菌屬和組的特異性，同一屬和組的細(xì)菌，其核心多糖均相同。特異性多糖是脂多糖的最外層，構(gòu)成重要的菌體表面抗原，從而決定了種或型的特異性。21如何才能更好的發(fā)現(xiàn)和鑒定微生物？首先，選擇適合特定標(biāo)本類型的初次培養(yǎng)基，為了發(fā)現(xiàn)所有潛在的重要致病菌，還應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)姆跤郎囟群蜌怏w。其次，對(duì)初次培養(yǎng)基上所發(fā)現(xiàn)的分離物應(yīng)確定它們進(jìn)一步鑒定的內(nèi)容。最后，

17、在已鑒定的細(xì)菌中確定哪種要進(jìn)行抗微生物敏感性試驗(yàn)。22正常菌群的含義是什么？人自出生后，外界的微生物就逐漸進(jìn)入人體。在正常人體皮膚、粘膜及外界相通的各種通道（如口腔、鼻咽腔、腸道和泌尿道）等部位，存在著對(duì)人體無(wú)害的微生物群，包括細(xì)菌、真菌、螺旋體、支原體等。它們?cè)谂c宿主的長(zhǎng)期進(jìn)化過程中，微生物群的內(nèi)部及其與宿主之間互相依存、互相制約，形成一個(gè)能進(jìn)行物質(zhì)、能量及基因交流的動(dòng)態(tài)平衡的生態(tài)系統(tǒng)習(xí)慣稱之為正常菌群（Normal flora）。正常菌群大部分是長(zhǎng)期居留于人體的又稱為常居菌，也有少數(shù)微生物是暫時(shí)寄居的，稱為過路菌。23正常菌群的生理作用是什么？生物拮抗作用：正常菌群通過粘附和繁殖能形成一層

18、自然菌膜,是一種非特異性的保護(hù)膜,可促機(jī)體抵抗致病微生物的侵襲及定植,從而對(duì)宿主起到一定程度的保護(hù)作用。正常菌群除與病原菌爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和空間位置外，還可以通過其代謝產(chǎn)物以及產(chǎn)生抗生素、細(xì)菌素等起作用?？梢哉f(shuō)正常菌群是人體防止外襲菌侵入的生物屏障。刺激免疫應(yīng)答：正常菌群釋放的內(nèi)毒素等物質(zhì)可刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)保持活躍狀態(tài)，是非特異免疫功能的一個(gè)不可缺少的組成部分。合成維生素：有些微生物能合成維生素，如核黃素、生物素、葉酸、吡哆醇及維生素K等，供人體吸收利用。降解食物殘?jiān)耗c道中正常菌群可互相配合，降解末被人體消化食物殘?jiān)?，便于機(jī)體進(jìn)一步吸收。24什么是條件致病菌和菌群失調(diào)？在一定條件下，正常菌群中的

19、細(xì)菌也能使人患?。河捎跈C(jī)體的防衛(wèi)功能減弱,引起自身感染。例如皮膚粘膜受傷（特別是大面積燒傷）、身體受涼、過度疲勞、長(zhǎng)期消耗性疾病等，可導(dǎo)致正常菌群的自身感染；由于正常菌群寄居部位的改變，發(fā)生了定位轉(zhuǎn)移，也可引起疾病。例如大腸桿菌進(jìn)入腹腔或泌尿道，可引起腹膜炎、泌尿道感染。因此，這些細(xì)菌稱為條件致病菌。在正常情況下，人體和正常菌群之間以及正常菌群中各細(xì)菌之間，保持一定的生態(tài)平衡。如果生態(tài)平衡失調(diào)，以至機(jī)體某一部位的正常菌群中各細(xì)菌的比例關(guān)系發(fā)生數(shù)量和質(zhì)量上的變化，稱為菌群失調(diào)。25引起菌群失調(diào)的原因有哪些？ 菌群失調(diào)的常見誘因主要是抗生素、同位素、激素的不合理使用，另外患有慢性消耗性疾病時(shí)腸道、

20、呼吸道、泌尿生殖道的功能失常也是重要原因。去除誘因后一般可使菌群復(fù)常，也有長(zhǎng)期失調(diào)難于逆轉(zhuǎn)的情況。26臨床上常見菌群失調(diào)癥有哪些？臨床上常見的菌群失調(diào)癥有：耐藥性葡萄球菌繁殖成優(yōu)勢(shì)菌而發(fā)生腹瀉，偶爾發(fā)生致死性葡萄球菌膿毒血癥；變形桿菌和假單胞菌生長(zhǎng)旺盛并侵入組織發(fā)生腎炎或膀胱炎；白色念珠菌大量繁殖，引起腸道、肛門或陰道感染，也可發(fā)展成全身感染；艱難梭菌在結(jié)腸內(nèi)大量繁殖，并產(chǎn)生一種腸毒素及細(xì)菌毒素，導(dǎo)致假膜性腸炎。27常用培養(yǎng)基有哪幾種？其成分主要是什么？常用培養(yǎng)基有普通培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基和增菌培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的主要成分有氮源、碳源、無(wú)機(jī)鹽、水分及一些生長(zhǎng)因子，它們主要為細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖

21、提供營(yíng)養(yǎng)和生長(zhǎng)環(huán)境。28通常培養(yǎng)基中根據(jù)需要可加入哪些抑制劑和指示劑？依據(jù)細(xì)菌生長(zhǎng)代謝特性，可選擇性的加入某些抑制劑和指示劑。常用抑制劑有膽鹽、煌綠、玫瑰紅酸、亞硫酸鈉、亞硒酸鈉、某些染料以及多種抗生素物質(zhì)。常用指示劑有酚紅、溴甲酚紫、溴麝香草酚藍(lán)、溴酚紅、中性紅、中國(guó)藍(lán)、甲基紅、酸性復(fù)紅等。29標(biāo)本接種技術(shù)有幾種？平板接種法：初次接種成功后，連繼劃線或分四區(qū)劃線接種。液體接種法：將試管傾斜30度角，接種環(huán)觸到試管的內(nèi)壁研磨數(shù)次，然后讓試管回復(fù)到原來(lái)的直立位置淹沒接種部位，這樣可以避免氣泡的產(chǎn)生。 瓊脂斜面接種法：首先將接種針插入斜面正中，垂直刺入底部，抽出接種針令其在斜面瓊脂上作S形劃線。穿

22、刺接種法：本法多用于雙糖、半固體或明膠等高層培養(yǎng)基的接種，由培養(yǎng)基中央刺到距管底約半厘米處，然后沿穿刺線退出接種針。傾注培養(yǎng)法：該法常用液體標(biāo)本的細(xì)菌定量計(jì)數(shù)。方法是用無(wú)菌吸管吸取原標(biāo)本或經(jīng)適當(dāng)稀釋的標(biāo)本各1 ml ，分別置于直徑為9cm 的無(wú)菌平皿內(nèi)，傾入已融化并冷至50 左右的培養(yǎng)基約15 ml ，立即混勻待凝固后倒置于35±1 培養(yǎng)18 24 小時(shí)，做菌落計(jì)數(shù)。30.細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的機(jī)制有哪些?細(xì)菌產(chǎn)生可破抗生素或使之失去抗菌作用的酶。如-內(nèi)酰胺酶、氨基糖苷類鈍化酶、拓?fù)洚悩?gòu)酶等。對(duì)抗菌藥物的滲透性降性。主要表現(xiàn)：外膜通透性降低及藥物泵出系統(tǒng)?？股刈饔冒形坏母淖?。如細(xì)菌的青霉

23、素結(jié)合蛋白改變，導(dǎo)致對(duì)-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥。代謝途徑的改變。如在腸球菌培養(yǎng)基中加入亞葉酸，腸球菌利用亞葉酸后可對(duì)磺胺-甲氧嘧啶由敏感轉(zhuǎn)為耐藥。31-內(nèi)酰胺酶的分類及作用機(jī)制是什么？-內(nèi)酰胺酶是一群酶，根據(jù)分子學(xué)結(jié)構(gòu)可將其分為四群。A群-內(nèi)酰胺酶為絲氨酸蛋白酶，主要作用于青霉素類藥物，編碼基因位于染色體或質(zhì)粒上，可從一個(gè)細(xì)菌轉(zhuǎn)移至另一個(gè)細(xì)菌。B群-內(nèi)酰胺酶為金屬酶，其活性部位為結(jié)合鋅離子的硫醇基。C群-內(nèi)酰胺酶主要是頭孢菌素酶，存在于革蘭氏陰性菌染色體上，可被誘導(dǎo)或重組。D群-內(nèi)酰胺酶為苯唑西林酶。大量試驗(yàn)證實(shí)，-內(nèi)酰胺類抗生素和細(xì)胞壁前體的存在都可以誘導(dǎo)-內(nèi)酰胺酶的合成，其作用機(jī)制為-內(nèi)酰胺

24、酶與催化細(xì)菌細(xì)胞壁肽聚糖合成的青霉素結(jié)合蛋白空間結(jié)構(gòu)相似，可競(jìng)爭(zhēng)性水解藥物-內(nèi)酰胺環(huán)使酰胺鍵斷裂而失去抗菌活性，其水解效率是細(xì)菌耐藥性的主要決定因子。32臨床上重要的-內(nèi)酰胺酶主要有哪幾種？ 超廣譜-內(nèi)酰胺酶，主要由克雷伯菌屬和大腸埃希菌產(chǎn)生，對(duì)第三代頭孢和氨曲南耐藥，而對(duì)碳青霉烯類和頭霉烯類敏感。對(duì)-內(nèi)酰胺抑制劑敏感性下降的-內(nèi)酰胺酶，主要原因之一是菌株-內(nèi)酰胺酶的過度表達(dá)，另一機(jī)制就是產(chǎn)生誘導(dǎo)耐酶抑制劑的-內(nèi)酰胺酶，常表現(xiàn)對(duì)酶抑制劑復(fù)合藥的敏感性下降，而對(duì)第一代頭孢菌素敏感。質(zhì)粒介導(dǎo)的AMPC酶，常見于克雷伯菌、弗勞地枸椽酸桿菌、陰溝桿菌、奇異變形和蜂房哈夫尼菌等，表現(xiàn)對(duì)一代至三代頭孢菌素

25、、頭霉素類、氨基糖苷類耐藥，但對(duì)碳青霉烯類、四代頭孢菌素和喹諾酮類敏感。水解碳青霉烯類的-內(nèi)酰胺酶，常見銅綠、鮑曼等非發(fā)酵菌屬，表現(xiàn)以碳青霉烯類和單環(huán)-內(nèi)酰胺類抗生素為代表的多重耐藥。33耐酶抑制的廣譜-內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)生機(jī)制是什么？如何篩選鑒別？ 大量含酶抑制復(fù)合藥的使用，可誘導(dǎo)原本對(duì)酶抑制劑敏感的酶大量產(chǎn)生，使細(xì)菌對(duì)酶抑制劑的敏感性下降；另一機(jī)制產(chǎn)生了源于TEM-1、TEM-2、SHV-1和OXY-2的耐酶抑制劑的-內(nèi)酰胺酶(IRT)，大腸埃希菌最易產(chǎn)生IRT。區(qū)分是TEM-1、TEM-2或SHV-1的大量表達(dá)還是IRT，可用頭孢菌素敏感試驗(yàn)鑒別，紙片法表型為阿莫西林和替卡西林耐藥，對(duì)阿莫西林

26、/克拉維酸和替卡西林/克拉維酸中介或耐藥，而對(duì)頭孢菌素敏感。34常用-內(nèi)酰胺酶抑制劑有哪些？又有何區(qū)別？-內(nèi)酰胺酶抑制劑與-內(nèi)酰胺酶有較高的親和性，以競(jìng)爭(zhēng)性和不可逆的抑制方式發(fā)揮作用，與-內(nèi)酰胺類抗生素聯(lián)用能增強(qiáng)后者的抗菌活性。常用-內(nèi)酰胺酶抑制劑有克拉維酸、舒巴坦和他唑巴坦。克拉維酸可由鏈霉菌培養(yǎng)液中分離得到，除了對(duì)-內(nèi)酰胺酶有抑制劑作用外，同時(shí)也可作用青霉素結(jié)合蛋白靶位，與-內(nèi)酰胺類抗生素共同影響細(xì)菌生長(zhǎng)。舒巴坦是半合成的酶抑制劑，其抑酶作用和克拉維酸相似，但穿透革蘭陰性菌外膜能力差，可抑制由質(zhì)粒或染色體介導(dǎo)的-內(nèi)酰胺酶(型染色體介導(dǎo)酶除外)。他唑巴坦也是半合成酶抑制劑，其抑酶作用范圍廣，

27、抑制作用優(yōu)于克拉維酸和舒巴坦。35-內(nèi)酰胺類抗生素的作用機(jī)制是什么？青霉素類乃至整個(gè)-內(nèi)酰胺類抗生素的作用機(jī)制是阻斷肽聚糖合成的最后階段即肽聚糖鏈的組裝和三維結(jié)構(gòu)的構(gòu)建。該階段反應(yīng)通常由幾種酶催化完成，如轉(zhuǎn)糖基酶(催化N-乙酰胞壁酸和N-乙酰葡糖胺之間形成-1,4糖苷鍵)、轉(zhuǎn)肽酶(催化四肽側(cè)鏈與五肽橋形成D-丙氨酰D-丙氨酸肽鏈)、羧肽酶、內(nèi)肽酶等。不同的-內(nèi)酰胺類抗生素在不同程度上抑制上述酶的作用，從而抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的完整性，使菌體形成絲狀體或球形體，最終溶解死亡。36.氨基糖苷類抗生素的作用機(jī)制是什么？氨基糖苷類由鏈霉菌屬和小單胞菌屬發(fā)酵濾液中提取，能與細(xì)菌核糖體30S亞基發(fā)生不可逆的結(jié)合

28、，抑制MRNA的轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)合成，導(dǎo)致細(xì)菌死亡，同時(shí)該類抗生素還能依靠其離子的吸附作用，吸附在菌體的表面，造成細(xì)胞膜的損傷，導(dǎo)致膜的滲漏使胞內(nèi)的K+ 、嘌呤等重要生命物質(zhì)外漏，為殺菌類抗生素。與細(xì)胞壁合成抑制藥物聯(lián)合使用時(shí)可產(chǎn)生協(xié)同作用，破壞細(xì)胞壁完整性，使藥物易于進(jìn)入菌體而達(dá)到核糖體作用靶位。37.喹諾酮抗生素的作用機(jī)制？喹諾酮類抗生素作用于DNA旋轉(zhuǎn)酶，DNA旋轉(zhuǎn)酶在原核細(xì)胞DNA復(fù)制過程中引入負(fù)超螺旋結(jié)構(gòu)，使復(fù)制叉移動(dòng)時(shí)不因張力太大而不能前進(jìn)。由于藥物拮抗了該酶干擾了細(xì)菌DNA復(fù)制、修復(fù)和重組，藥物還能通過革蘭陰性菌的外膜微孔和借助磷脂滲透作用進(jìn)入細(xì)菌細(xì)胞，對(duì)繁殖期的細(xì)菌均有殺菌作用。3

29、8糖肽類抗生素的作用機(jī)制？肽類抗生素是由氨基酸通過肽鍵連接而成化合物，結(jié)構(gòu)上具有較大異源性，抗菌譜窄，但抗菌作用強(qiáng)，具有腎毒性不良反應(yīng)。作用機(jī)制是與肽聚糖合成中間產(chǎn)物D-丙氨酰-D丙氨酸末端形成復(fù)合物，可阻斷肽聚糖合成過程中轉(zhuǎn)糖基酶、轉(zhuǎn)肽酶及羧肽酶的作用，從而阻止了細(xì)胞壁的合成。39大環(huán)內(nèi)酯類抗生素作用機(jī)制是什么？該類抗生素的分子結(jié)構(gòu)中具有14-16原子的大脂肪內(nèi)酯環(huán)，可逆的結(jié)合在細(xì)菌核糖體50S大亞基的23S單位上抑制肽酰基轉(zhuǎn)移酶，影響核蛋白位移，抑制細(xì)菌蛋白合成和肽鏈的延伸?，F(xiàn)常用有克拉霉素、阿齊霉素等抗菌活性強(qiáng)、抗菌譜廣的藥物。40抗菌藥物敏感性試驗(yàn)(AST)意義方法有哪些?AST的意義

30、：可預(yù)測(cè)抗菌治療效果，即AST試驗(yàn)結(jié)果為敏感時(shí)，治療可能有效；試驗(yàn)結(jié)果為耐藥時(shí)，治療一定失??；而中介意味著高于常規(guī)治療劑量或藥物濃度集中的生理部位可能有效。指導(dǎo)臨床醫(yī)生合理選擇抗生素，可依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果調(diào)整經(jīng)驗(yàn)性治療于靶向治療。AST的方法：測(cè)量藥物最小抑菌濃度的瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法。測(cè)量含藥紙片周圍直徑大小的K-B紙片瓊脂擴(kuò)散法。結(jié)合擴(kuò)散法和稀釋法原理特點(diǎn)的E試驗(yàn)。最低殺菌濃度的測(cè)定。聯(lián)合藥物敏感性試驗(yàn)，可為臨床選用最有效的抗菌藥物組合提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。41耐藥性的產(chǎn)生機(jī)理是什么？抗微生物藥物對(duì)微生物群體有很強(qiáng)的選擇壓力，使天然能耐受它們的微生物或經(jīng)誘導(dǎo)變異產(chǎn)生抗藥抗性的微生物存活下來(lái)。微生物的變

31、異是其進(jìn)化基礎(chǔ)，變異有多種機(jī)制，小的變異包括堿基對(duì)的點(diǎn)突變，可以改變抗微生物藥物的作用靶點(diǎn)和干擾它們的活性。大的變異是一大段DNA作為一個(gè)整體重新排列，這種變化常由在染色體中可以獨(dú)立移動(dòng)的特殊基因單位，即轉(zhuǎn)座子或插入序列產(chǎn)生。細(xì)菌基因的變異還可通過質(zhì)粒，噬菌體或可轉(zhuǎn)移的基因單位獲取外源性DNA而產(chǎn)生。耐藥性可通水平或垂直傳插在不同種或同種間擴(kuò)散。這種現(xiàn)象發(fā)生的例子如葡萄球菌盒式染色體SCCmec在獲得性耐藥中發(fā)揮了很重要的作用。其中SCCmec可稱為抗生素耐藥島：它包含對(duì)甲氧西林產(chǎn)生耐藥的mecA基因，有的SCCmec還包含對(duì)非-內(nèi)酰胺抗生素和重金屬產(chǎn)生耐藥的質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座子。還有四環(huán)素抗性轉(zhuǎn)座子

32、在淋球菌、人支原體之間的傳播。這些機(jī)制使細(xì)菌具有能產(chǎn)生抗任何微生物藥物抗性的能力。42.常用的生化鑒定培養(yǎng)基有哪些？（一） 糖發(fā)酵培養(yǎng)基（1）成分蛋白胨水或肉膏液（p H7.4）100 ml所需糖、醇或糖苷類物質(zhì)0.5 1.0g16gL 溴甲粉紫乙醇溶液0.1 ml（2）制法 將上述各物質(zhì)加熱溶解后，分裝試管。 高壓（55.161kPa） 滅菌15 分鐘，備用。 如需觀察產(chǎn)氣反應(yīng)，應(yīng)于分裝前在試管中加一倒置的小玻管。 亦可制成半固體發(fā)酵管，即于上述成分中加入4 6gL 的瓊脂，加熱溶化后分試管。（3）用途 觀察細(xì)菌對(duì)糖、醇或苷發(fā)酵能力，用于鑒定細(xì)菌。（二） 氧化發(fā)酵（O F） 培養(yǎng)基（1）成分

33、蛋白胨 2g氯化鈉 5gK2HPO4 0.3g葡萄糖 10g2gL 溴麝香草酚藍(lán)溶液12 ml水1000 ml（2）制法 將蛋白胨、鹽類加水溶解后，校正pH 至7.2 。 加入葡萄糖、瓊脂，加熱溶解后，加入指示劑，分裝試管。 高壓（68.95kPa） 滅菌15 分鐘，使成高層瓊脂，備用。（3）用途 測(cè)定細(xì)菌分解葡萄糖的代謝類型用。（三） 克氏鐵瓊脂（1）成分蛋白胨或多胨20g牛肉膏 3g酵母浸膏 3g乳糖 10g葡萄糖 1g氯化鈉 5g拘櫞酸鐵銨 0.5g硫代硫酸鈉 0.5g瓊脂 14g酚紅 0.025g水1000 ml（2）制法 將上述各成分（酚紅除外） 混合，加熱溶解，校正p H 至7.4

34、 ，加入酚紅。 分裝試管，每管約3 ml 。 高壓（68.95kPa） 滅菌15 分鐘，趁熱取出，立即置成深底層斜面（斜面及底層約各占一半），凝固后備用。（3）用途 鑒別腸桿菌科細(xì)菌（四） 三糖鐵瓊脂（1）成分多胨或胨 10g牛肉膏 3g氯化鈉 5g乳糖 10g蔗糖 10g葡萄糖 1g硫代硫酸鈉 0.3g硫酸亞鐵 0.2g瓊脂 15g水1000 ml4gL 酚紅溶液6 ml（2）制法 除酚紅外，將上述各成分混合。加熱溶解，校正p H 至7.4 ，加入酚紅。 分裝試管，每管3 4 ml ，高壓（68.95kPa） 滅菌15 分鐘。 趁熱取出，置成底層較深的斜面，凝固后備用。（3）用途 鑒別腸桿菌

35、科細(xì)菌。（五） 胰蛋白胨水（1）成分胰胨或其他含色氨酸豐富的胨 1g氯化鈉 0.5g水100 ml（2）制法 將胰胨、氯化鈉加入水后，加熱溶解，校正pH 至7.2 7.4 ，分裝試管。 高壓（68.95kPa） 滅菌15 分鐘即成。（3）用途 細(xì)菌靛基質(zhì)試驗(yàn)用。（六） 葡萄糖蛋白胨水（1）成分蛋白胨 0.5g葡萄糖 0.5g磷酸氫二鉀 0.5g水100 ml（2）制法 將上述成分混合于水中，加熱溶解后校正pH 至6.8 7.2 ，分裝試管。 高壓（68.95kPa） 滅菌15 分鐘即成。（3）用途 細(xì)菌甲基紅，V P 試驗(yàn)用。（七） 構(gòu)櫞酸鹽培養(yǎng)基（1）成分枸櫞酸鈉（含2 H2O） 0.2g硫

36、酸鎂（含7 H2O） 0.02g磷酸二氫銨 0.1g磷酸氫二鉀 0.1g氯化鈉 0.5g瓊脂 2g水100 ml2gL 溴麝香草酚藍(lán)乙醇溶液4 ml（2）制法 將上述各成分（溴麝香草酚藍(lán)除外） 混合加熱溶解， 校正p H 至6.8 ，再加入指示劑混勻，分裝試管。 高壓（103.43kPa） 滅菌15 分鐘后，趁熱取出置成斜面，備用。（3）用途 細(xì)菌構(gòu)櫞酸鹽及無(wú)機(jī)銨利用試驗(yàn)用。（八） 氨基酸脫羧酶培養(yǎng)基（1）成分氨基酸 1.0g蛋白胨 0.5g酵母浸膏 0.3g葡萄糖 0.1g吡多醛鹽酸鹽 0.5 mg水100 ml16gL 溴甲酚紫乙醇溶液0.1 ml（2）制法 將上述各成分（溴甲酚紫除外）

37、混合加熱溶解后，校正pH 至6.8 ， 加入指示劑，混勻。 分裝小試管，每管約0.5 1.0 ml ，于每管內(nèi)加入液體石蠟一層（約5 m m）。 高壓（103.43kPa） 滅菌15 分鐘后，備用。（3）用途 鑒別腸桿菌科及弧菌科細(xì)菌用。（九） 尿素培養(yǎng)基（1）成分蛋白胨 1g氯化鈉 5g磷酸二氫鉀 2g葡萄糖 0.1g尿素 2g水1000 ml4gL 酚紅溶液3 ml（2）制法 將上述各成分（酚紅除外） 混合，加熱溶解，校正pH 至68 ， 再加入酚紅混勻，分裝試管。 高壓（6895kPa） 滅菌15 分鐘，備用。（3）用途鑒定細(xì)菌能否產(chǎn)生尿素酶。（十）Thornley 精氨酸培養(yǎng)基（1）成

38、分L 精氨酸1.0g蛋白胨 0.1g氯化鈉 0.5gK2HPO4 0.03g瓊脂0.3g水100 ml酚紅0.001g（2）制法 將上述成分（酚紅除外） 混合加熱溶解后，校正pH 至7.0 7.2 ，加入酚紅混勻，分裝小試管。 高壓（103.43kPa） 滅菌15 分鐘后，備用。 同時(shí)配制不含精氨酸的培養(yǎng)基作為對(duì)照。（3）用途 用于檢測(cè)細(xì)菌能否產(chǎn)生精氨酸雙水解酶，主要用于腸桿菌科，假單胞菌屬及非發(fā)酵菌的鑒定。（十一） 甘油品紅培養(yǎng)基（1）成分牛肉膏10g蛋白胨20g水1000 ml甘油1 ml100gL 堿性品紅乙醇溶液0.2 ml100gL 無(wú)水亞硫酸鈉水溶液（新鮮配制） 1.66 ml（2

39、）制法 將牛肉膏、蛋白胨、水加熱溶解后，校正pH 至8.0 ，加入甘油混勻。 高壓（103.43kPa） 滅菌15 分鐘后，備用。 臨用時(shí)，加入堿性品紅及亞硫酸鈉液，分裝試管。（3）用途 鑒定沙門菌屬細(xì)菌用。（十二） 馬尿酸鈉培養(yǎng)基（1）成分馬尿酸鈉1g肉浸液（pH7.4）100 ml（2）制法 將馬尿酸鈉溶于肉浸液內(nèi)，分裝于小試管內(nèi)。 高壓（103.43kPa） 滅菌15 分鐘后備用。（3）用途 鑒定B 群鏈球菌用。43.常用的生化鑒定試驗(yàn)有哪些?一 、碳水化合物的代謝試驗(yàn)（一） 糖類發(fā)酵試驗(yàn)（1）原理各種細(xì)菌含有不同的分解糖（醇、苷） 類的酶，分解糖類的能力各有不同，且不同細(xì)菌分解同一種糖

40、的代謝產(chǎn)物也不一定相同。細(xì)菌分解糖類后形成的代謝產(chǎn)物隨細(xì)菌種類而異，有的產(chǎn)酸，有的產(chǎn)酸產(chǎn)氣。可根據(jù)糖分解的特性鑒別細(xì)菌。（2）種類種類很多。常用的單糖類有：阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖等。雙糖類有乳糖、麥芽糖、蕈糖等。多糖類有菊糖、淀粉、糊精。醇類包括甘露醇、甘油、側(cè)金盞花醇、衛(wèi)矛醇、山梨醇、肌醇等。（3）方法 細(xì)菌經(jīng)分離純化后， 根據(jù)待檢菌的分解特性選擇合適的含糖培養(yǎng)基，將純種細(xì)菌接種該培養(yǎng)基中， 置溫箱內(nèi)培養(yǎng)數(shù)18-24小時(shí)，取出觀察結(jié)果。（4）結(jié)果能分解糖產(chǎn)酸的細(xì)菌，培養(yǎng)基中指示劑是否呈現(xiàn)酸性反應(yīng)。不能分解該糖則無(wú)顏色變化。產(chǎn)氣可使半固體培養(yǎng)基內(nèi)或液體培養(yǎng)基中的倒

41、置小管內(nèi)出現(xiàn)氣泡，固體培養(yǎng)基則出現(xiàn)裂痕。（5）應(yīng)用糖分解試驗(yàn)是細(xì)菌生化試驗(yàn)中最常用的生化反應(yīng)。可依據(jù)細(xì)菌分解糖的能力各異而區(qū)分和識(shí)別不同的細(xì)菌。如沙門菌能發(fā)酵葡萄糖，但不發(fā)酵乳糖，大腸桿菌能發(fā)酵葡萄糖和乳糖。腦膜炎球菌能分解葡萄糖和麥芽糖，而淋球菌只能分解葡萄糖，不分解麥芽糖。（二） 氧化發(fā)酵試驗(yàn)（OF 試驗(yàn)）（1）原理細(xì)菌在分解糖的過程中，根據(jù)有無(wú)分子氧參加，分為氧化型和發(fā)酵型。能在無(wú)氧環(huán)境中不能分解葡萄糖，稱為氧化型?？蛇M(jìn)行無(wú)氧降解的，稱發(fā)酵型。發(fā)酵型細(xì)菌在有氧和無(wú)氧的環(huán)境中都能分解葡萄糖。兼性厭氧菌為發(fā)酵型細(xì)菌。不分解葡萄糖的細(xì)菌稱產(chǎn)堿型。（2）方法取2支HL(Hugh-Leifson)

42、培養(yǎng)管,用接種針挑取少許純培養(yǎng)細(xì)菌，穿刺接種至兩支培養(yǎng)基的管底，將其中1 支在接種后加無(wú)菌液體石蠟或者凡士林在培養(yǎng)基表面，高度約1cm 。然后將兩支培養(yǎng)管置35 孵育48 小時(shí)后觀察結(jié)果。（3）結(jié)果培養(yǎng)基由綠色變黃表示細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)酸，顏色不變表示不分解葡萄糖。兩管培養(yǎng)基均變黃色為發(fā)酵型，若加液體石蠟的一管顏色不變而另一管變黃色為氧化型，兩管均不變色為產(chǎn)堿型。（4）應(yīng)用O F 試驗(yàn)可區(qū)分細(xì)菌的代謝類型， 有助于鑒別區(qū)分細(xì)菌。如腸桿菌科細(xì)菌都是發(fā)酵型細(xì)菌，絕大多數(shù)的非發(fā)酵菌為氧化型或產(chǎn)堿型細(xì)菌。葡萄球菌為發(fā)酵型而微球菌為氧化型。（三） 七葉苷水解試驗(yàn)（1）原理七葉苷經(jīng)細(xì)菌水解生成七葉素，七葉素

43、能與培養(yǎng)基中構(gòu)櫞酸鐵的二價(jià)鐵離子結(jié)合生成黑色的化合物，使培養(yǎng)基變黑。（2）方法 將細(xì)菌接種于七葉苷培養(yǎng)基上，在35 孵育過夜。（3）結(jié)果 細(xì)菌生長(zhǎng)并使培養(yǎng)基變黑為陽(yáng)性。（4）應(yīng)用 主要用于區(qū)分腸球菌、D群鏈球菌和其他鏈球菌，前兩者陽(yáng)性。也可用于革蘭氏陰性桿菌和厭氧菌的鑒別試驗(yàn)。（四） 淀粉水解試驗(yàn)（1）原理細(xì)菌產(chǎn)生淀粉酶可將培養(yǎng)基周圍瓊脂中的淀粉水解。加碘液后，菌落周圍形成無(wú)色透明區(qū)。而瓊脂中沒分解的淀粉與碘作用產(chǎn)生藍(lán)色。試劑可用盧戈碘液或革蘭染液中的碘液。（2）方法將細(xì)菌劃線接種或點(diǎn)種在淀粉血清瓊脂平板或水解酪蛋白瓊脂（M H 瓊脂）平板，經(jīng)35 培養(yǎng)過夜，在菌落上滴加碘液。（3）結(jié)果菌落周

44、圍出現(xiàn)透明區(qū)，而其他部位培養(yǎng)基呈藍(lán)色為陽(yáng)性。（4）應(yīng)用某些細(xì)菌如白喉?xiàng)U菌具有淀粉酶，本試驗(yàn)呈陽(yáng)性，可用此試驗(yàn)鑒別細(xì)菌。（五）半乳糖苷酶試驗(yàn)（1）原理某些細(xì)菌具有半乳糖苷酶，該酶可分解鄰 硝基苯D 半乳糖苷(ONPG)，生成黃色的鄰硝基酚。（2）方法用接種環(huán)在三糖鐵培養(yǎng)基上刮取一環(huán)新鮮菌齡的菌苔，加于無(wú)菌鹽水0.25 ml 中制成濃菌懸液，加入甲苯1滴，充分振搖， 將試管置于37 水浴中5分鐘， 加入ONPG 溶液0.25 ml ，在37 水浴中保溫，于20分鐘、4小時(shí)、18小時(shí)和24小時(shí)觀察結(jié)果。（3）結(jié)果出現(xiàn)黃色為陽(yáng)性反應(yīng)，不變色為陰性反應(yīng)。通常在20 30 分鐘內(nèi)顯色。（4）應(yīng)用此試驗(yàn)是測(cè)

45、定不發(fā)酵或遲發(fā)酵乳糖的細(xì)菌是否產(chǎn)生半乳糖苷酶。由于細(xì)菌分解乳糖要有兩種酶，一是半乳糖昔滲透酶，另一是半乳糖苷酶。當(dāng)缺乏滲透酶時(shí)，乳糖不能進(jìn)入細(xì)胞，乳糖分解就不能進(jìn)行。這兩種酶都是在乳糖存在的條件下誘導(dǎo)細(xì)菌產(chǎn)生。迅速及遲緩分解乳糖的細(xì)菌ONPG 為陽(yáng)性，如埃希菌屬、枸櫞酸桿菌屬。不發(fā)酵乳糖的細(xì)菌為陰性，如沙門菌屬、變形桿菌屬?？捎帽驹囼?yàn)作為遲緩發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定方法。（六） 甲基紅試驗(yàn)（1）原理細(xì)菌在糖代謝過程中,能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，并進(jìn)一步將丙酮酸代謝為乳酸、乙酸、甲酸等,使培養(yǎng)基的p H 值下降到4.5以下，加入甲基紅指示劑即顯紅色。某些細(xì)菌雖能分解葡萄糖，但產(chǎn)酸量少，培養(yǎng)基酸堿度在

46、pH 值5.4 以上，加入甲基紅指示劑呈黃色。甲基紅變色范圍為pH 值4.0 6.0。（2）方法將細(xì)菌接種于葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，置35 培養(yǎng)24天。2天后取出部分菌液滴加2滴試劑，若為陰性結(jié)果，繼續(xù)培養(yǎng)至4天再試。（3）結(jié)果紅色為陽(yáng)性，橘紅色為弱陽(yáng)性,黃色為陰性。（4）應(yīng)用可鑒別腸桿菌科內(nèi)各菌屬。沙門菌屬、志賀菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬、埃希菌屬為陽(yáng)性，腸桿菌屬、哈夫尼亞菌屬為陰性。較常用于大腸埃希菌和產(chǎn)氣腸桿菌的區(qū)別，前者陽(yáng)性，后者陰性。（七） VP 試驗(yàn)（4）原理某些細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，并進(jìn)一步脫羧成為乙酰甲基甲醇。后者在堿性環(huán)境中被空氣中的氧氧化為二乙酰，二乙?？膳c培養(yǎng)基中

47、精氨酸的胍基起作用，生成紅色化合物。若培養(yǎng)基內(nèi)含胍基太少，可加入少量肌酸、肌酐等含胍基的化合物，可加速此反應(yīng)。（2）培養(yǎng)基 葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。（3）試劑 a.奧梅拉試劑：氫氧化鉀40g 溶于水10 ml ，加肌酸03g 。b.貝立脫試劑：甲液：6 萘酚乙醇溶液。乙液：40 氫氧化鉀。（4）方法a. 奧梅拉法：將細(xì)菌接種在上述培養(yǎng)基內(nèi)，置35 培養(yǎng)48小時(shí)。在培養(yǎng)液2 ml中加入奧梅拉試劑0.2 ml ，置50水浴中2小時(shí)或37 4小時(shí)，充分振搖，觀察結(jié)果。b. 貝立脫法：接種及溫育同上。在培養(yǎng)液2 ml 中加入貝立脫試劑甲液1 ml 及乙液0.4 ml ，混合后置37中30分鐘觀察結(jié)果。如

48、為陰性應(yīng)繼續(xù)置374小時(shí)再觀察。（5）結(jié)果 呈紅色為陽(yáng)性。（6）應(yīng)用常與甲基紅試驗(yàn)一起使用?？蓞^(qū)別腸桿菌科細(xì)菌。本試驗(yàn)陽(yáng)性， 甲基紅試驗(yàn)陰性，反之亦然。大腸埃希菌VP陰性而產(chǎn)氣腸桿菌陽(yáng)性。注：試劑甲液在室溫陰暗處可保存1 個(gè)月，乙液可長(zhǎng)期保存。（八） 甘油復(fù)紅試驗(yàn)（1）原理細(xì)菌分解甘油產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸脫羧而為乙醛，乙醛與無(wú)色的復(fù)紅生成醌式化合物，顯紫紅色。（2）方法將細(xì)菌接種于甘油復(fù)紅肉湯培養(yǎng)基，在35 培養(yǎng)8天， 每天觀察結(jié)果。將未接種的培養(yǎng)基在35培養(yǎng)，作為對(duì)照。（3）結(jié)果紫色為陽(yáng)性（），紫紅色為陽(yáng)性（），與對(duì)照管顏色相同為陰性。（4）應(yīng)用 主要用于沙門菌屬菌種間的鑒別。二 、蛋白質(zhì)和氨

49、基酸的代謝試驗(yàn)（一） 吲哚（靛基質(zhì)） 試驗(yàn)（1）原理有些具有色氨酸酶,能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚，吲哚可與對(duì)二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈紅色。（2）試劑柯凡克（Kovac）試劑：對(duì)二甲基氨基苯甲醛5g ，戊醇75 ml ，濃鹽酸50 ml 。將對(duì)二甲基氨基苯甲醛加入乙醇內(nèi)， 振搖使溶， 徐徐加入濃鹽酸， 邊加邊搖即成。歐氏（Ehrlich） 試劑：對(duì)二甲基氨基苯甲醛4g ，95 乙醇380 ml ，濃鹽酸80 ml 。配法與柯凡克試劑相同。（3）方法將細(xì)菌接種于蛋白陳水培養(yǎng)基中，置35培養(yǎng)1 2 天，沿管壁徐徐加入柯凡克試劑或歐氏試劑0.5 ml ，試劑浮于培養(yǎng)基之上，使成兩層

50、，即刻觀察結(jié)果。（4）結(jié)果兩液面交界處呈現(xiàn)紅色為陽(yáng)性，無(wú)紅色為陰性。（5）應(yīng)用主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。注：有些細(xì)菌產(chǎn)生吲哚量少，需用乙醚或二甲苯提取后才能與試劑起反應(yīng)。如黃桿菌。（二） 硫化氫試驗(yàn)（1）原理某些細(xì)菌分解培養(yǎng)基中含硫氨基酸（如胱氨酸、半胱氨酸） 生成硫化氫，硫化氫遇鉛或鐵離子形成黑色的硫化鉛或硫化鐵沉淀物。（2）方法將細(xì)菌接種于醋酸鉛培養(yǎng)基或克氏鐵、三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基中，置35培養(yǎng)2448小時(shí)，但惟赫夫尼亞菌需培養(yǎng)7天。每天觀察顏色變化。（3）結(jié)果醋酸鉛培養(yǎng)基變黑色為陽(yáng)性，不變色為陰性。KI 或TSI 瓊脂在底層和斜面交界處出現(xiàn)黑色沉淀為陽(yáng)性。（3）應(yīng)用主要用于腸桿菌鑒別。沙門

51、菌屬、愛德華菌屬、亞利桑那菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬硫化氫試驗(yàn)陽(yáng)性，但沙門菌屬中也有部分菌為陰性。此外，腐敗謝爾瓦菌是非發(fā)酵菌中唯一能產(chǎn)生硫化氫的細(xì)菌。（三） 尿素酶試驗(yàn)（1）原理某些菌能產(chǎn)生尿素酶，此酶能分解尿素形成氨，使培養(yǎng)基變堿，酚紅指示劑隨之變紅色。（2）方法將細(xì)菌接種于尿素培養(yǎng)基，置35過夜培養(yǎng)觀察結(jié)果，陰性反應(yīng)者應(yīng)觀察4 天。（3）應(yīng)用主要用于腸桿菌科的鑒定。其中變形桿菌、克雷伯菌、摩氏摩根菌、和結(jié)腸耶爾森菌、雷極普羅菲登斯菌為陽(yáng)性。（四） 明膠液化試驗(yàn)（1）原理細(xì)菌分泌的胞外蛋白水解酶，能分解明膠為氨基酸，使之失去原有的凝固力而液化。（2）方法將細(xì)菌接種于明膠培養(yǎng)基，在20

52、培養(yǎng)7天，每天觀察結(jié)果。若室溫較高， 培養(yǎng)基自行融化時(shí)，可在冰箱內(nèi)放置30 分鐘后取出觀察結(jié)果。明膠平板法：在營(yíng)養(yǎng)瓊脂中加入1 明膠傾注平板，可分成4 個(gè)區(qū)，每區(qū)劃線接種1種細(xì)菌，經(jīng)1 2 天培養(yǎng)，在培養(yǎng)基表面加氯化汞溶液（氫化汞12g ， 水80ml ，濃鹽酸16ml），在菌落周圍出現(xiàn)透明帶，表示細(xì)菌液化明膠。（3）結(jié)果明膠培養(yǎng)基半固體變成液體為陽(yáng)性。明膠平板法菌落周圍出現(xiàn)透明帶為陽(yáng)性。（4）應(yīng)用根據(jù)細(xì)菌能否液化明膠，可有助于細(xì)菌的種、屬的鑒定。如陰溝腸桿菌、奇異變形桿菌、沙雷菌、銅綠假單胞菌等為陽(yáng)性。（五） 苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)（1）原理細(xì)菌產(chǎn)生的苯丙氨酸脫氨酶，使苯丙氨酸脫去氨基生成苯丙酮

53、酸，與氯化鐵作用形成綠色化合物。（2）方法將待檢細(xì)菌大量接種于苯丙氨酸瓊脂培養(yǎng)基斜面,在35培養(yǎng)過夜。滴加10 三氯化鐵4 5滴，由斜面培養(yǎng)物上方流下。立即觀察結(jié)果,延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間會(huì)引起退色。（3）結(jié)果 斜面顯示綠色為陽(yáng)性。（4）應(yīng)用本試驗(yàn)特異性較高。變形桿菌屬、摩根菌屬及普羅菲登斯菌為強(qiáng)陽(yáng)性，其他腸桿菌科細(xì)菌大多為陰性?？捎糜谀c桿菌科細(xì)菌的鑒定。（六） 氨基酸脫羧酶試驗(yàn)（1）原理細(xì)菌如具有某種氨基酸脫羧酶，能使氨基酸脫羧、產(chǎn)生胺和CO2，使培養(yǎng)基變堿，指示劑變色。（2）培養(yǎng)基最常用的有3 種：賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基、鳥氨酸脫羧酶培養(yǎng)基、精氨酸脫羧酶培養(yǎng)基及對(duì)照培養(yǎng)基。（3）方法將細(xì)菌接種在上述含氨

54、基酸的培養(yǎng)基及不含氨基酸的對(duì)照培養(yǎng)基中，接種后用無(wú)菌石蠟油覆蓋，高度至少5m m 。在35培養(yǎng)4日觀察結(jié)果。（4）結(jié)果開始階段培養(yǎng)基由于葡萄糖分解呈酸性而呈黃色，以后變?yōu)樽仙珵殛?yáng)性結(jié)果，若僅發(fā)酵莆萄糖顯黃色為陰性。對(duì)照管應(yīng)為黃色。（5）應(yīng)用本實(shí)驗(yàn)可以作為腸桿菌科細(xì)菌鑒定的重要方法，對(duì)鏈球菌和弧菌科細(xì)菌鑒定也有重要作用。（七） 精氨酸雙水解試驗(yàn)（1）原理某些細(xì)菌可降解精氨酸為瓜氨酸和胺，瓜氨酸可降解為鳥氨酸、氨和二氧化碳。鳥氨酸又可受脫羧酶的作用，生成腐胺和二氧化碳。氨和腐胺可使培養(yǎng)基變堿，酚紅指示劑隨之變紅色。（2）方法將細(xì)菌穿刺接種在索恩利（Thornley）培養(yǎng)基，并封以滅菌石蠟油，在35

55、培養(yǎng)1 4 天， 每天觀察培養(yǎng)基顏色變化。（3）結(jié)果培養(yǎng)基轉(zhuǎn)為紅色為陽(yáng)性。三、碳源和氮源利用試驗(yàn)（一） 枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)（1）原理當(dāng)細(xì)菌利用銨鹽作為惟一氮源，并利用枸櫞酸作為惟一碳源時(shí)，便可在枸櫞酸鹽培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，分解枸櫞酸鈉，生成碳酸鈉，使培養(yǎng)基呈堿性。（2）方法將細(xì)菌接種于枸櫞酸鹽培養(yǎng)基的斜面上，在35培養(yǎng)14天，每天觀察培養(yǎng)基顏色變化。（3）結(jié)果西蒙氏枸櫞酸鹽培養(yǎng)基斜面上有細(xì)菌生長(zhǎng)，且培養(yǎng)基變藍(lán)色為陽(yáng)性；培養(yǎng)7天無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，培養(yǎng)基顏色不變保持綠色為陰性。柯氏枸櫞酸培養(yǎng)基斜面變紅色為陽(yáng)性，保持淡黃色不變色為陰性。（4）應(yīng)用常用于腸桿菌科細(xì)菌各菌屬之間鑒別。埃希菌屬、志賀菌屬、愛德華菌屬、耶爾森菌屬為陰性，枸櫞酸桿菌、沙門菌、克雷伯菌屬、沙雷菌為陽(yáng)性。此外，也有助于假單胞菌、氣單胞菌的鑒定。（二） 丙二酸鹽利用試驗(yàn)（1）原理細(xì)菌能利用丙二酸鹽作為惟一碳源時(shí)，則能分解丙二酸鈉生成碳酸鈉，使培養(yǎng)基變堿性。（2）方法將細(xì)菌接種于丙二酸鹽培養(yǎng)基培養(yǎng)基，置35培養(yǎng)過夜后觀察結(jié)果。（3）結(jié)果培養(yǎng)基由綠色變成藍(lán)色為陽(yáng)性，無(wú)顏色改變是陰性。（4）應(yīng)用本試驗(yàn)有助于鑒別腸桿菌科細(xì)菌。克雷伯菌屬和亞利桑那菌為陽(yáng)性，腸桿菌屬、枸櫞酸桿菌屬和哈夫尼亞菌屬有不同生物型反應(yīng)，其他菌屬為陰性。（三） 馬尿酸鈉水解試驗(yàn)（三氯化鐵法）（1）原理某些細(xì)菌具有馬尿酸水解酶，可使馬尿酸鈉水解，產(chǎn)生苯甲酸和甘氨酸