奧昔布寧滲透泵控釋片在狗體內(nèi)的單劑量和多劑量藥代動力學(xué)與生物等

1、奧昔布寧滲透泵控釋片在狗體內(nèi)的單劑量和多劑量藥代動力學(xué)與生物等效性研究丁雪鷹1，劉罡一2,余琛2，馬建國3，張仰眉1，劉善奎1，高申1*（1.第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院藥劑學(xué)教研室，上海200433；2.上海市徐匯區(qū)中心醫(yī)院，上海200031；3.北京中惠藥業(yè)有限公司，北京100085）摘要: 目的 研究自制奧昔布寧滲透泵控釋片與市售普通片以及進口控釋片在狗體內(nèi)的單劑量和多劑量的藥代動力學(xué)與生物等效性。方法 利用液相-質(zhì)譜檢測血藥濃度，采用隨機、交叉實驗設(shè)計對自制控釋片、進口控釋片和市售普通片進行對照研究。結(jié)果 單劑量給藥后奧昔布寧自制控釋片、進口控釋片和市售普通片的峰濃度 (Cmax)、達峰時間 (

2、tmax) 、血藥濃度曲線下面積AUC分別為：1.77±0.51ng/ml、1.67±0.27 ng/ml和5.89±2.04ng/ml、10±2.14h、10.50±2.07 h和0.84±0.23h、50.69±11.83ng×h/ml、48.63±6.33 ng×h/ml和22.74±7.06ng×h/ml。多劑量給藥后分別為：2.39±0.55ng/ml、2.07±0.41 ng/ml和 7.80±1.56ng/ml、6.12±

3、1.55h、8.12±1.88 h和0.62±0.19h、44.92±10.63ng×h/ml、41.50±9.05 ng×h/ml和21.92±4.37ng×h/ml，達穩(wěn)態(tài)時血藥濃度波動系數(shù)DF分別為0.76±0.17、0.52±0.17和2.55±0.39。結(jié)論 經(jīng)方差分析和雙單側(cè)t檢驗，自制片與進口片和普通片生物等效。關(guān)鍵詞: 奧昔布寧；滲透泵片；藥代動力學(xué)；生物等效性；狗SYUDY ON THE PHARMACOKINETICS AND BIOEQUIVALENCE OF O

4、XYBUTYNIN IN 8 DOGS AFTER A SINGLE AND MULTIPLE ORAL ADMINISTRATION OF OSMOTIC PUMP TABLETSDING Xue-ying1,GAO Shen1,LIU Gang-yi2,YU Chen2,MA Jian-guo3,ZHANG Yang-mei1,LIU Shan-kui1(1.Department of Pharmaceutics,School of Pharmacy,Second Military Medical University,Shanghai 200433,China;2.Xuhui Centr

5、al Hospotial, Shanghai 200031,China;Zhonghui Pharmaceutical Limited Company,Beijing,100085,China)作者簡介：丁雪鷹,女，博士, E-mail：dingxueying*通訊作者：高申，男，教授，博士生導(dǎo)師Tel：（021）25070392，F(xiàn)ax：（021）65491664ABSTRACT:AIM To study the pharmacokinetics and bioequivalence of self-prepared osmotic pump tablets(OPT) 、imported O

6、PT and immediate-release（IR） tablets of oxybutynin in dogs.METHODS LC-MS method was developed to detect the plasma drug concentration in 9 dogs. Two one-sided T-test and analysis of variance were performed to evaluate the bioequivalence of the formulations.RESULTS The pharmacokinetic parametersof se

7、lf-prepared OPT 、imported OPT and IR were listed below:for single-dose study: Cmax were 1.77±0.51ng/ml、1.67±0.27 ng/ml and5.89±2.04ng/ml, tmax were10±2.14h、10.50±2.07 h and 0.84±0.23h, AUC were 50.69±11.83ng×h/ml、48.63±6.33 ng×h/ml and 22.74±7.0

8、6ng×h/ml respectively; for multiple-dose study：Cmax were 2.39±0.55ng/ml、2.07±0.41 ng/ml and 7.80±1.56ng/ml, tmax were 6.12±1.55h、8.12±1.88 h and 0.62±0.19h, AUC were 44.92±10.63ng×h/ml、41.50±9.05 ng×h/ml and 21.92±4.37ng×h/ml，DF were 0

9、.76±0.17、0.52±0.17 and 2.55±0.39 respectively.CONCLUSIONS The results showed that two preparations were bioequivalent.KEY WORDS: oxybutynin; osmotic pump tablet; pharmacokinetics; bioequivalence; dog尿頻和尿失禁是常見的老年病，約有515%的老年人患有不同程度的尿失禁。鹽酸奧昔布寧（Oxb）為中度抗膽堿能藥物，是目前臨床治療膀胱過度活動癥首選藥物，對泌尿道平滑肌有很強的

10、松弛作用，使病人的癥狀得到控制1，1999年6月在我國上市。Oxb消除半衰期短（25h），普通片一天給藥四次，不良反應(yīng)有口干、少汗、視力模糊、心悸、嗜睡、頭暈、惡心、嘔吐等，很多患者因此中斷治療。作者設(shè)計了一種一天一次的Oxb口服滲透泵控釋片，能以零級速率釋放藥物，不受胃腸道pH、食物以及蠕動的影響，極大避免普通口服制劑引起的血藥濃度波動較大的現(xiàn)象，增加治療的順應(yīng)性，提高用藥的安全性和有效性。本文以美國Alza公司生產(chǎn)的進口控釋片和市售普通片為對照，研究了三種制劑在狗體內(nèi)的單劑量和多劑量的藥代動力學(xué)和生物等效性。材料與方法儀器、藥品與試劑 API3000質(zhì)譜儀（美國應(yīng)用生物系統(tǒng)有限公司），An

11、gilen 1100系列高效液相色譜儀，LL9901激光打孔機（北京來福來德科技發(fā)展有限公司），Oxb對照品(青島制藥股份有限公司，含量99.6%)，進口片（美國Alza公司，批號10/13/01，10mg/片），自制片（自制，批號：20020428，10mg/片），普通片（湘江藥業(yè)股份有限公司，批號：011201，5mg/片），維拉帕米（上海九福藥業(yè)有限公司，含量99.5），乙腈、甲酸為德國Merck公司生產(chǎn)的色譜純試劑，三醋酸甘油酯（上海恒信化學(xué)試劑有限公司）,聚氧乙烯(美國ACROS公司),羥丙基甲基纖維素(上海運宏化工有限公司)，氯化鈉（上海試四赫維化工有限公司），硬脂酸鎂（大連制藥廠

12、），醋酸纖維素（CA-398-10美國EASTMAN公司）。試驗對象 成年、健康比格狗9條，體重911.0kg，雄性，由第二軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供。1 Oxb滲透泵片的制備將處方中各組分分別過80目篩，置60烘干。將Oxb、聚氧乙烯、羥丙基甲基纖維素、氯化鈉、硬脂酸鎂（組分1）和聚氧乙烯、羥丙基甲基纖維素、氯化鈉、氧化鐵、硬脂酸鎂（組分2），分別混合均勻。將組分1填充于沖模內(nèi)，輕壓一下，再將組分2填充于沖模內(nèi)，壓制成片芯。三醋酸甘油酯、醋酸纖維素溶解于丙酮和異丙醇的混合溶劑中，得到包衣液。將片芯置糖衣鍋內(nèi)，40加熱15分鐘，噴入包衣液包衣，包衣結(jié)束后將片子置60放置24小時，去除溶劑。將包衣

13、的片子在含藥層打一小孔，孔徑0.4mm。2 血漿樣品測定方法22.1血漿樣品預(yù)處理靜脈血樣置于3.0ml 塑料離心管中(加肝素抗凝)，2500r/min離心5min分離血漿。取血漿50l 置于1.5ml塑料離心管中，加入5l內(nèi)標(biāo)液（含維拉帕米20ng/ml），旋渦混合10秒，加入100l乙腈，旋渦混合30秒，高速離心，取上清液50l，加入20l水，旋渦混合10秒，取20l進樣分析。2.2 色譜分離條件質(zhì)譜條件：離子選擇通道分別為：Oxb m/z 358.4142.2、維拉帕米（內(nèi)標(biāo)）m/z 455.6165.4；離子源溫度：400，電壓：4000V；液相條件：色譜柱：Aquasil C18 5

14、m 50×2.1mm ，流動相：乙腈-水-甲酸（40:60:0.02），流速0.2ml/min，室溫（25±1）。測得空白血漿、空白血漿添加標(biāo)準(zhǔn)品及實測血漿樣品的典型譜圖見圖1。ABC圖1 oxb血漿樣品色譜圖A.空白血漿樣品；B.空白血漿中加入oxb（1ng/ml）；C.給藥后血漿樣品色譜圖（0.754ng/ml）Fig1 Chromatogram of oxb of plasma sample A. blank plasma samples；B. plasma added oxb(1ng/ml)；C. plasma after administration of oxb

15、（0.754ng/ml）以O(shè)xb對照品與內(nèi)標(biāo)(維拉帕米)峰面積比(A s/Ai)對相應(yīng)的濃度(C，ng/ml)進行線性回歸，得血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：As/Ai=0.106C-0.00483 (r= 0.9963，1/x2 權(quán)重，n=5)，線性范圍0.2564.00ng/ml。本法相對回收率99.41%，日間和日內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)差分別為2.58和4.92%，最低檢測濃度為0.25ng/ml（S/N=4:1）。3試驗設(shè)計 受試狗隨機分成三組，采用自身對照、交叉實驗設(shè)計，每次試驗間隔一周，試驗前禁食12小時。單劑量試驗于早上7:00口服自制片、進口片或普通片各1片，服普通片組分別于給藥前及給藥后0.25、0

16、.50、0.75、1.0、1.5、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0和12.0小時于狗一側(cè)后肢靜脈取血1ml，服控釋片組分別于給藥前及給藥后2.5、5.0、8.0、12.0、16.0、24.0、27.0、30.0、36.0、48.0小時取血。血樣置肝素化試管中，離心，分取0.4ml血漿，冰箱冷凍保存。多劑量試驗服用控釋片每日1次，每次1片，服用普通片每日3次，每次1片，連續(xù)六天。從服藥后第五天開始取血，控釋片于第五天給藥后0、5、12.0、16.0小時以及第六天給藥后0、2.5、5.0、8.0、12.0、16.0、24.0、27.0、30.0、36.0、48.0小時取血，普通片于第五天給

17、藥后0、0.5、0.75、1.0小時以及第六天給藥后0、0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0小時取血，取血方法與取血量同單劑量試驗研究。4 數(shù)據(jù)處理 4.1單劑量 由藥-時曲線尾部4個點的血藥濃度對數(shù)對時間t進行回歸，由直線斜率求算消除速度常數(shù)，并由此計算T1/2，藥-時曲線下面積AUC0t以梯形法計算，AUC0¥由AUC0t加上殘余部分C/得到，AUC0¥/D式中D為給藥劑量。峰濃度Cmax和達峰時間tmax從藥-時曲線直接讀出。應(yīng)用統(tǒng)計軟件SPSS對Cmax、AUC0/D對數(shù)轉(zhuǎn)換后進行三因素方差分析（藥間、序間、

18、人間）和雙單側(cè)t檢驗（=0.05），對兩種制劑的生物等效性作出評價。4.2 多劑量 同單劑量類似，波動系數(shù)FD由下式計算：FD=（Cmax-Cmin）/AUCav；AUCav=AUCss/結(jié)果1 單劑量試驗結(jié)果9條受試狗口服自制片、進口片和普通片的血藥濃度時間曲線見圖1和圖2，藥動學(xué)參數(shù)見表1，以進口片和普通片為參比，自制片的相對生物利用度F分別為104.23±17.30和111.46%±31.35%。三因素方差分析結(jié)果顯示，自制片和普通片的Cmax制劑間存在顯著性差異(F>F0.05)，其余無顯著性差異（=0.05）。雙單側(cè)t檢驗結(jié)果見表2,自制片的lnCmax低于

19、普通片，高于進口片，lnAUC0/D的t1、t2均大于t界值，具有顯著差異（P0.05），說明自制滲透泵控釋片與兩種對照制劑生物等效。圖2 9條受試狗單劑量口服普通片（5mg）的血藥濃度時間曲線Fig2 Plasma concentration of oxb in 9dogs after a single oral adminstration of conventional tablets(5mg)圖3 9條受試狗單劑量口服自制片和進口片（10mg）的血藥濃度時間曲線Fig3 Plasma concentration of oxb in 9dogs after a single oral ad

20、minstration of osmotic pump tablets(10mg)表1 單劑量口服給藥10mg自制片、進口片和5mg普通片的藥代動力學(xué)參數(shù)（n=9）Tab1 Pharmacokinetics parameters of oxb in 9 dogs after a single oral adminstration（n=9）參數(shù)自制片進口片普通片/ h-10.0749±0.0130.0766±0.01820.1767±0.0958T1/2/ h9.57±2.109.48±2.115.09±2.56Tmax/ h10

21、77;2.1410.50±2.070.84±0.23Cmax/ ng×ml-11.77±0.511.67±0.275.89±2.04AUC0t/ ng×h×ml-146.59±11.8844.52±6.8719.64±8.03AUC0¥ /ng×h×ml-150.69±11.8348.63±6.3322.74±7.06表2單劑量口服給藥的生物等效性評價Table2 Results of bioequivalence analy

22、sis of oxb in dogs after a single oral administration普通片進口片t1t2t1t2lnCmax0.0127.5442.4690.551lnAUC0/D5.0422.0875.5694.8T0.05=1.8922 多劑量試驗結(jié)果9條受試狗口服自制片、進口片和普通片的血藥濃度時間曲線見圖4和圖5，藥動學(xué)參數(shù)見表3，以進口片和普通片為參比，自制片的相對生物利用度F分別為108.25±15.30和102.48%±15.15%。自制片與普通片的DF 和Tmax經(jīng)t檢驗有顯著性差異（=0.05）。三因素方差分析結(jié)果顯示，自制片和普通片

23、的Cmax制劑間存在顯著性差異，其余無顯著性差異（=0.05）。雙單側(cè)t檢驗結(jié)果見表4，自制片的lnCmax低于普通片，高于進口片；lnAUC0/D具有顯著差異（P0.05），說明自制滲透泵控釋片與兩種對照制劑生物等效。圖4 9條受試狗多劑量口服普通片的血藥濃度時間曲線Fig4 Plasma concentration of oxb in 9dogs after multiple voral adminstration of conventional tablets(5mg)圖5 9條受試狗多劑量口服自制片和進口片的血藥濃度時間曲線Fig5 Plasma concentration of ox

24、b in 9dogs after multiple oral adminstration of osmotic pump tablets(10mg)表3 多劑量口服給藥10mg自制片、進口片和5mg普通片的藥代動力學(xué)參數(shù)Tab3 Pharmacokinetics parameters of oxb in 9 dogs after multiple oral adminstration參數(shù)自制片進口片普通片/ h-10.0604±0.01360.0546±0.01330.096±0.0524T1/2/ h11.94±2.4213.31±2.949

25、.94±6.71Tmax/ h6.12±1.558.12±1.880.62±0.19Cmax/ ng×ml-12.39±0.552.07±0.417.80±1.56Cmin/ ng×ml-11.00±0.491.26±0.341.19±0.46AUCss /ng×h×ml-144.92±10.6341.50±9.0521.92±4.37DF0.76±0.170.52±0.172.55±0.39表4多劑量口服給藥的生物等效性評價Table4 Results of bioavailability analysis of oxb in dogs after mul