酚試劑法測(cè)定蛋白質(zhì)含量實(shí)驗(yàn)報(bào)告

1、范文范例參考南方醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告姓 名：學(xué) 號(hào)：專業(yè)年級(jí)：組 別：第七實(shí)驗(yàn)室完美Word格式整理版范文范例參考生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心實(shí)驗(yàn)名稱Folin-酚試劑法測(cè)定蛋白質(zhì)含量實(shí)驗(yàn)日期實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)第七實(shí)驗(yàn)室合作者指導(dǎo)老師評(píng)分教師簽名批改日期格式要求：正文請(qǐng)統(tǒng)一用：小四號(hào)，宋體，1.5倍行距；數(shù)字、英文用Times New Roman； 標(biāo)題用：四號(hào)，黑體，加粗。需強(qiáng)調(diào)的地方請(qǐng)用 藍(lán)顏色標(biāo)出。不得出現(xiàn)多行、 多頁空白現(xiàn)象。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握Folin-酚試劑法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理及其實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)。2、熟悉分光光度計(jì)的用法。3、掌握制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的要領(lǐng)和通過標(biāo)準(zhǔn)曲線求樣品溶液中待測(cè)定物

2、質(zhì)含量的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理1、雙縮月尿反應(yīng)：在堿性溶液中，雙縮月尿能與 Cu2+作用，形成紫紅色的絡(luò)合物,而蛋白質(zhì)分子中含有與雙縮月尿結(jié)構(gòu)相似的多個(gè)肽鍵，在與堿性銅試劑中的Cu2+作用生成紫紅色的蛋白質(zhì)-Cu2+復(fù)合物。2、Folin-酚試劑在堿性條件下極不穩(wěn)定，蛋白質(zhì)-Cu2+復(fù)合物中所含的酪氨酸或色氨酸 殘基還原酚試劑中的磷鋁酸和磷鴇酸，生成藍(lán)色的化合物。3、在一定濃度范圍內(nèi)，藍(lán)色的深淺度與蛋白質(zhì)濃度呈線性關(guān)系，故與同樣處理的蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液比色即可求出蛋白質(zhì)的含量。 即根據(jù)預(yù)先繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線求出未知樣品中蛋白質(zhì)的含量。三、材料與方法：以流程圖示意完美Word格式整理版范文范例參考完美Word

3、格式整理版1、實(shí)驗(yàn)材料(1)樣品健康人血清(300倍稀釋)；正常人血清蛋白質(zhì)含量：6080 g/L(2)試劑牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液(200Ng/m)；堿性硫酸銅溶液；Folin-酚試劑2、儀器與器材V-1100分光光度計(jì)；恒溫水浴箱；試管6支、試管架；加樣槍、加樣槍架3、實(shí)驗(yàn)步驟(1)圖示1 .蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液2 .堿性硫酸銅溶液混合均勻靜置10min加酚試齊I2s內(nèi)混合均勻40c水浴10min冷卻至室溫比色圖一：Folin-酚試劑法測(cè)定蛋白質(zhì)含量流程圖(2)取6支試管做好標(biāo)記，再按下表加樣：(1為空白對(duì)照，2-5作標(biāo)準(zhǔn)，6為待測(cè)樣品)試劑(ml)123456牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液0.200.400.60

4、0.80樣品液(稀釋300倍)0.50蒸儲(chǔ)水1.00.800.600.400.200.50堿性硫酸銅2.02.02.02.02.02.0表一：反應(yīng)體系設(shè)置(3)加樣時(shí)順序加樣，在1號(hào)試管加入堿性硫酸銅溶液 2ml后開始計(jì)時(shí)，等待1分鐘 再往下一支試管加入等量的堿性硫酸銅溶液，搖勻。以此類推。(4)在全部試管加完堿性硫酸銅試劑之后，待第一支試管加樣10分鐘后，于第1支試管立即加入0.20mL Folin-酚試劑，并于2s內(nèi)搖勻。1分鐘后第2支試管加入0.20mL Folin- 酚試劑，以此類推。(5)加樣完畢后將各試管按順序每隔1min放一只試管進(jìn)入水浴箱，40c水浴10min后 取出冷卻至室溫

5、。(6)用500nm波長比色，以1號(hào)管作空白對(duì)照，按順序依次測(cè)定每支試管內(nèi)溶液吸光 度并重復(fù)測(cè)三次，記下讀數(shù)，求出平均值，記錄數(shù)據(jù)并計(jì)算結(jié)果。四、結(jié)果與討論： 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、現(xiàn)象、圖譜；討論：以結(jié)果為基礎(chǔ)的邏輯 推論，并得出結(jié)論。1、實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象記錄(1)在向試管中加入2ml堿性硫酸銅溶液并搖勻后，溶液澄清，無明顯現(xiàn)象(2)在向試管中加入0.20mL Folin-酚試劑并立即搖勻時(shí)觀察到：溶液變淺藍(lán)，且藍(lán)色隨時(shí)間延長而有所加深，水浴后顏色更深，6號(hào)試管內(nèi)溶液顏色介于3、4號(hào)試管之間。2、吸光度數(shù)據(jù)：500nm波長吸收度值記錄各管吸光度值A(chǔ)500測(cè)定次數(shù) 2345610.0410.0550.080

6、0.0890.06920.0410.0560.0800.0890.06730.0410.0550.0810.0890.068各管平均值0.0410.0550.0800.0890.068表二：500nm波長吸收度值記錄表0.0220406080100120140160C （聞/ml ）2 1O8 6 49 9 9 o o O>度光吸乂180根據(jù)吸光度數(shù)據(jù)繪制散點(diǎn)圖圖二：500nm波長吸收度值散點(diǎn)圖將測(cè)得6號(hào)試管吸光度 0.068代入標(biāo)準(zhǔn)曲線公式y(tǒng)=0.0006x中，得出樣品濃度為113.33 g/mL即：C (未稀釋蛋白含量)=C (稀釋后蛋白質(zhì)含量)X2M00=113.33 g/ml -

7、M00=68000 g/ml = 68.00g/L正常人血清蛋白濃度參考范圍為：6080g/L以上依賴所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析得出的待測(cè)蛋白濃度落在正常范圍內(nèi)，可認(rèn)為本次實(shí)驗(yàn)成功3、討論(1)實(shí)驗(yàn)中操作嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行，所測(cè)樣品結(jié)果68.00g/L落在正常范圍內(nèi)，可認(rèn)為本次實(shí)驗(yàn)成功。(2)誤差分析在使用加樣槍過程中可因試液有少許殘留于移液槍頭導(dǎo)致操作誤差，另外，多次加樣 也加大了誤差。因反應(yīng)的顯色隨時(shí)間不斷加深，因此實(shí)驗(yàn)中若未能及時(shí)將溶液轉(zhuǎn)移至比色皿而導(dǎo)致測(cè) 定2-6試管時(shí)，各組測(cè)定的時(shí)間間隔不一致，導(dǎo)致誤差。復(fù)習(xí)思考題：1、試述Folin-酚試劑法的優(yōu)點(diǎn)？2、應(yīng)用本方法有哪些干擾作用？為什么？應(yīng)如何注意？答：1、反應(yīng)迅速靈敏，現(xiàn)象明顯，便于觀察與測(cè)定吸光度。不同蛋白質(zhì)之間所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果差異不大，可選取的試劑種類更為豐富。操作簡單快速。操作更為簡便。2、經(jīng)過課外查閱資料可得下面結(jié)論：(1)干擾物質(zhì)：硫酸俊、蔗糖等琉基化合物；酚類及檸檬酸；濃度較高的尿素、月瓜、 乙醴、丙酮、三氯乙酸、硝酸鈉、硫酸鈉等。(2)原因：因?yàn)镕olin-酚試劑法中應(yīng)用了雙縮月尿反應(yīng)，而上述物質(zhì)均帶有干擾雙縮月尿試 劑的基團(tuán)，因此也會(huì)干擾Folin-酚試劑