酚試劑法測定蛋白質含量實驗報告

1、范文范例參考南方醫(yī)科大學生物化學實驗報告姓 名：學 號：專業(yè)年級：組 別：第七實驗室完美Word格式整理版范文范例參考生物化學與分子生物學實驗教學中心實驗名稱Folin-酚試劑法測定蛋白質含量實驗日期實驗地點第七實驗室合作者指導老師評分教師簽名批改日期格式要求：正文請統(tǒng)一用：小四號，宋體，1.5倍行距；數(shù)字、英文用Times New Roman； 標題用：四號，黑體，加粗。需強調的地方請用 藍顏色標出。不得出現(xiàn)多行、 多頁空白現(xiàn)象。一、實驗目的1、掌握Folin-酚試劑法測定蛋白質含量的原理及其實驗操作技術。2、熟悉分光光度計的用法。3、掌握制作標準曲線的要領和通過標準曲線求樣品溶液中待測定物

2、質含量的方法。二、實驗原理1、雙縮月尿反應：在堿性溶液中，雙縮月尿能與 Cu2+作用，形成紫紅色的絡合物,而蛋白質分子中含有與雙縮月尿結構相似的多個肽鍵，在與堿性銅試劑中的Cu2+作用生成紫紅色的蛋白質-Cu2+復合物。2、Folin-酚試劑在堿性條件下極不穩(wěn)定，蛋白質-Cu2+復合物中所含的酪氨酸或色氨酸 殘基還原酚試劑中的磷鋁酸和磷鴇酸，生成藍色的化合物。3、在一定濃度范圍內，藍色的深淺度與蛋白質濃度呈線性關系，故與同樣處理的蛋白質標準液比色即可求出蛋白質的含量。 即根據(jù)預先繪制的標準曲線求出未知樣品中蛋白質的含量。三、材料與方法：以流程圖示意完美Word格式整理版范文范例參考完美Word

3、格式整理版1、實驗材料(1)樣品健康人血清(300倍稀釋)；正常人血清蛋白質含量：6080 g/L(2)試劑牛血清白蛋白標準液(200Ng/m)；堿性硫酸銅溶液；Folin-酚試劑2、儀器與器材V-1100分光光度計；恒溫水浴箱；試管6支、試管架；加樣槍、加樣槍架3、實驗步驟(1)圖示1 .蛋白標準溶液2 .堿性硫酸銅溶液混合均勻靜置10min加酚試齊I2s內混合均勻40c水浴10min冷卻至室溫比色圖一：Folin-酚試劑法測定蛋白質含量流程圖(2)取6支試管做好標記，再按下表加樣：(1為空白對照，2-5作標準，6為待測樣品)試劑(ml)123456牛血清白蛋白標準液0.200.400.60

4、0.80樣品液(稀釋300倍)0.50蒸儲水1.00.800.600.400.200.50堿性硫酸銅2.02.02.02.02.02.0表一：反應體系設置(3)加樣時順序加樣，在1號試管加入堿性硫酸銅溶液 2ml后開始計時，等待1分鐘 再往下一支試管加入等量的堿性硫酸銅溶液，搖勻。以此類推。(4)在全部試管加完堿性硫酸銅試劑之后，待第一支試管加樣10分鐘后，于第1支試管立即加入0.20mL Folin-酚試劑，并于2s內搖勻。1分鐘后第2支試管加入0.20mL Folin- 酚試劑，以此類推。(5)加樣完畢后將各試管按順序每隔1min放一只試管進入水浴箱，40c水浴10min后 取出冷卻至室溫

5、。(6)用500nm波長比色，以1號管作空白對照，按順序依次測定每支試管內溶液吸光 度并重復測三次，記下讀數(shù)，求出平均值，記錄數(shù)據(jù)并計算結果。四、結果與討論： 結果：實驗數(shù)據(jù)、現(xiàn)象、圖譜；討論：以結果為基礎的邏輯 推論，并得出結論。1、實驗現(xiàn)象記錄(1)在向試管中加入2ml堿性硫酸銅溶液并搖勻后，溶液澄清，無明顯現(xiàn)象(2)在向試管中加入0.20mL Folin-酚試劑并立即搖勻時觀察到：溶液變淺藍，且藍色隨時間延長而有所加深，水浴后顏色更深，6號試管內溶液顏色介于3、4號試管之間。2、吸光度數(shù)據(jù)：500nm波長吸收度值記錄各管吸光度值A500測定次數(shù) 2345610.0410.0550.080

6、0.0890.06920.0410.0560.0800.0890.06730.0410.0550.0810.0890.068各管平均值0.0410.0550.0800.0890.068表二：500nm波長吸收度值記錄表0.0220406080100120140160C （聞/ml ）2 1O8 6 49 9 9 o o O>度光吸乂180根據(jù)吸光度數(shù)據(jù)繪制散點圖圖二：500nm波長吸收度值散點圖將測得6號試管吸光度 0.068代入標準曲線公式y(tǒng)=0.0006x中，得出樣品濃度為113.33 g/mL即：C (未稀釋蛋白含量)=C (稀釋后蛋白質含量)X2M00=113.33 g/ml -

7、M00=68000 g/ml = 68.00g/L正常人血清蛋白濃度參考范圍為：6080g/L以上依賴所得實驗數(shù)據(jù)分析得出的待測蛋白濃度落在正常范圍內，可認為本次實驗成功3、討論(1)實驗中操作嚴格按照實驗要求進行，所測樣品結果68.00g/L落在正常范圍內，可認為本次實驗成功。(2)誤差分析在使用加樣槍過程中可因試液有少許殘留于移液槍頭導致操作誤差，另外，多次加樣 也加大了誤差。因反應的顯色隨時間不斷加深，因此實驗中若未能及時將溶液轉移至比色皿而導致測 定2-6試管時，各組測定的時間間隔不一致，導致誤差。復習思考題：1、試述Folin-酚試劑法的優(yōu)點？2、應用本方法有哪些干擾作用？為什么？應如何注意？答：1、反應迅速靈敏，現(xiàn)象明顯，便于觀察與測定吸光度。不同蛋白質之間所得實驗結果差異不大，可選取的試劑種類更為豐富。操作簡單快速。操作更為簡便。2、經過課外查閱資料可得下面結論：(1)干擾物質：硫酸俊、蔗糖等琉基化合物；酚類及檸檬酸；濃度較高的尿素、月瓜、 乙醴、丙酮、三氯乙酸、硝酸鈉、硫酸鈉等。(2)原因：因為Folin-酚試劑法中應用了雙縮月尿反應，而上述物質均帶有干擾雙縮月尿試 劑的基團，因此也會干擾Folin-酚試劑