臨床免疫學檢驗知識點

1、臨床免疫學檢驗1、免疫：是機體識別和排斥抗原性異物的一種生理功能2、免疫防御（對外）；免疫自穩(wěn)（防自身免疫?。幻庖弑O(jiān)視（防腫瘤）。3、中樞免疫器官：骨髓、胸腺；外周免疫器官：淋巴結(jié)、脾臟（最大）、黏膜相關淋巴組織4、B細胞：通過識別膜免疫球蛋白來結(jié)合抗原，介導體液免疫；B細胞受體=BCR=mIg表面標志：膜免疫球蛋白（SmIg）、Fc受體、補體受體、EB病毒受體和小鼠紅細胞受體。成熟B細胞：CD19、CD20、CD21、CD22 （成熟B細胞的mIg主要為mIgM和mIgD）同時檢測CD5分子，可分為B1細胞和B2細胞。B細胞功能檢測方法：溶血空斑形成試驗（體液免疫功能）。5、T細胞：介導細

2、胞免疫。共同表面標志是CD3（多鏈糖蛋白）；輔助T細胞的標志是CD4；殺傷T細胞的標志是CD8；T細胞受體=TCR。T細胞和NK細胞的共同表面標志是CD2（綿羊紅細胞受體）；CD3CD4CD8 = 輔助性T細胞（Th）CD3CD4CD8 = 細胞毒性T細胞（Tc或CTL）（T細胞介導的細胞毒試驗）CD4CD25 = 調(diào)節(jié)性T細胞（Tr或Treg）T細胞功能檢測：植物血凝素（PHA）刀豆素（CONA）刺激T細胞增殖。增殖試驗有：形態(tài)法、核素法。T細胞亞群的分離：親和板結(jié)合分離法，磁性微球分離法，熒光激活細胞分離儀分離法*E花環(huán)試驗是通過檢測SRBC受體而對T細胞進行計數(shù)的一種試驗；6、NK細胞：

3、具有細胞介導的細胞毒作用。直接殺傷靶細胞（腫瘤細胞和病毒感染的細胞）表面標志：CD16（ADCC）、CD56。測定人NK細胞活性的靶細胞多用K562細胞株，而測定小鼠NK細胞活性則常采用YAC-1細胞株。7、吞噬細胞包括：單核-吞噬細胞系統(tǒng)（MPS，表面標志CD14，包括骨髓內(nèi)的前單核細胞、外周血中的單核細胞和組織內(nèi)的巨噬細胞）和中性粒細胞。（表達MHC類分子）8、人成熟樹突狀細胞（DC）（專職抗原呈遞功能）：表面標志為CD1a、CD11c和CD83。9、免疫球蛋白可分為分泌型（sIg，主要存在于體液中，具有抗體功能）及膜型（mIg，作為抗原受體表達于B細胞表面，稱為膜表面免疫球蛋白）10、免

4、疫球蛋白按含量多少排序：IgGIgAIgMIgDIgE五類（按重鏈恒定區(qū)抗原性（CH）排序）免疫球蛋白含量測定：單向環(huán)狀免疫擴散法、免疫比濁法。11、免疫球蛋白的同種型抗原決定簇位于恒定區(qū)（CH、CL）12、抗體由漿細胞產(chǎn)生。抗體分子上VH和VL（高變區(qū)）是抗原結(jié)合部位。13、IgG：血清中含量最高的免疫球蛋白（IgG1最高），血液和細胞外液中的主要抗體。也是再次免疫應答的主要抗體，是唯一能通過胎盤的抗體，大多數(shù)抗菌抗體、抗病毒抗體是IgG，某些自身抗體及超敏型抗體是IgG，免疫學檢測中第二抗體也以IgG為主。14、IgA：分血清型（單體存在）及分泌型；分泌型IgA（sIgA）為二聚體，性能穩(wěn)

5、定，主要存在于胃腸道、支氣管分泌液、初乳、唾液、淚液中，局部濃度高，是參與黏膜局部免疫的主要抗體。15、IgM：為五聚體，主要存在于血液中，是Ig中分子量最大的（又稱巨球蛋白）。個體發(fā)育最早合成和分泌的抗體?？乖碳ず篌w液免疫應答中最先產(chǎn)生的抗體，感染過程中血清IgM水平升高，說明近期感染。新生兒臍血中若IgM增高，提示有宮內(nèi)感染。16、IgE：為單體結(jié)構(gòu)，正常人血清中含量最低。IgE為親細胞抗體，介導型超敏反應。特異性過敏反應和寄生蟲早期感染患者血清中可升高。17、補體：具有酶樣活性的球蛋白（肝細胞、巨噬細胞產(chǎn)生）；激活途徑主要有三種：經(jīng)典途徑（以結(jié)合抗原后的IgG或IgM類抗體為主要激活劑

6、（雙鏈DNA），C1C9全部參與）、替代途徑（病原微生物細胞壁成分（脂多糖）直接激活補體C3，然后完成C5C9的激活過程）、MBL途徑（由急性炎癥期產(chǎn)生的甘露糖結(jié)合凝集素（MBL）與病原體結(jié)合后啟動激活）。18、補體系統(tǒng)中C3含量最多，C2含量最少。19、滅活：加熱5630分鐘，補體喪失活性20、補體清除免疫復合物的方式：吞噬調(diào)理；免疫粘附；免疫復合物抑制。21、完全抗原=反應原性+免疫原性。半抗原=反應原性（無免疫原性）22、抗原抗體結(jié)合力（分子間引力）：靜電吸引、范德華力、氫鍵、疏水作用力（最強）23、抗原抗體反應的四大特點：特異性、可逆性、比例性、階段性；受反應條件（如溫度、pH、電解質(zhì)

7、、抗原抗體比例等）的影響。24、抗體過量前帶；抗原過量后帶（鉤狀效應）25、抗原抗體反應可分為兩個階段：第一階段為抗原與抗體發(fā)生特異性結(jié)合的階段，此階段反應快，僅需幾秒至幾分鐘，但不出現(xiàn)可見反應；第二階段為可見反應階段，此階段反應慢，往往需要數(shù)分鐘至數(shù)小時。26、顆粒性抗原出現(xiàn)凝集反應?？扇苄钥乖霈F(xiàn)沉淀反應。單價抗原與相應抗體結(jié)合不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象。27、木瓜酶水解IgG為2Fab+Fc；胃蛋白酶水解IgG為F(ab)2+nFc。28、最常用于免疫動物的佐劑是弗氏佐劑，弗氏佐劑分為弗氏完全佐劑（弗氏不完全佐劑加卡介苗）和弗氏不完全佐劑兩種。29、R（兔子）型抗血清是用家兔及其他動物免疫產(chǎn)生的抗體

8、，抗原抗體反應比例合適范圍較寬，適于作診斷試劑。H（馬）型抗血清是用馬等大動物免疫獲得的抗體，抗原抗體反應比例合適范圍較窄，一般用作免疫治療。30、抗血清常見保存條件：2-8保存；冷凍保存（最常用）；真空干燥保存（5-10年）。31、雜交瘤細胞放入液氮（-196）前，需要逐步降溫。復蘇細胞時，從液氮罐內(nèi)取出凍存管，立即浸入37水浴。32、凝集反應分為兩個階段：抗原抗體的特異性結(jié)合；出現(xiàn)可見的顆粒凝聚。33、直接凝集反應：細菌、螺旋體和紅細胞等顆粒性抗原，在適當?shù)碾娊赓|(zhì)（0.85%氯化鈉）參與下可直接與相應抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集?？乖?凝集原，抗體=凝集素。34、玻片凝集試驗：主要用于抗原的定性分析，

9、AB0血型的測定。 試管凝集試驗：肥達氏試驗、外斐試驗、輸血交叉配血試驗；35、正向間接血凝反應（PHA）：紅細胞包被抗原，用以檢測抗體。（凝集） 反向間接血凝反應（RPHA）：紅細胞包被抗體，用以檢測抗原。（凝集）36、間接血凝抑制試驗：可用于檢測抗體、自身抗體、變態(tài)反應性抗體，也可測定抗原。（不凝集）37、金黃色葡萄球菌A蛋白（SPA）-協(xié)同凝集反應(反向間接凝集)38、血凝試驗（載體為綿羊、家兔、雞的紅細胞及O型人紅細胞）可在微量滴定板或試管中進行，將標本倍比稀釋，一般為1:64，同時設不含標本的稀釋液為對照孔。凡紅細胞沉積于孔底，集中呈一圓點的為不凝集。如紅細胞凝集，則分布于孔底周圍。

10、39、膠乳凝集試驗（間接凝集），所用載體為聚苯乙烯膠乳；明膠凝集試驗（間接）將病毒抗原或重組抗原吸附于粉紅色明膠顆粒：HIV-1抗體和抗精子抗體檢測40、抗球蛋白試驗，又稱Coombs試驗，是檢測抗紅細胞不完全抗體的一種很有用的方法。包括直接Coombs試驗（檢測紅細胞上的不完全抗體）和間接Coombs試驗（游離在血清中的不完全抗體）41、沉淀反應分兩個階段：第一階段為抗原抗體發(fā)生特異性結(jié)合，幾秒到幾十秒即可完成，出現(xiàn)可溶性小的復合物，肉眼不可見。第二階段為形成可見的免疫復合物，約需幾十分鐘到數(shù)小時才能完成，如沉淀線、沉淀環(huán)。絮狀沉淀試驗：抗原抗體溶液在電解質(zhì)的存在下結(jié)合，形成絮狀沉淀物，這種

11、絮狀沉淀受抗原和抗體比例的直接影響，因此常用來作為測定抗原抗體反應最適比例的方法。42、免疫比濁：最適pH為6.58.5，磷酸鹽緩沖液。（R型抗體，增濁劑如聚乙二醇（PEG）、吐溫-20）。適合于大批量標本的檢測。當反應液中抗體過量時，IC的形成隨著抗原遞增而增加，至抗原、抗體最適比例處達最高峰，這就是經(jīng)典的海德堡曲線理論。當抗原過量時，形成的IC（免疫復合物）分子小，而且會發(fā)生再解離，使?jié)岫确炊陆?，光散射亦減少，這就是高劑量鉤狀效應。43、單向擴散試驗是在瓊脂內(nèi)混入抗體，測抗原。Mancini曲線 適用大分子抗原和長時間擴散（48小時）的結(jié)果，沉淀環(huán)直徑的平方與抗原濃度呈線性關系。Fahe

12、y曲線 適用于小分子抗原和較短時間擴散的結(jié)果處理，用半對數(shù)值畫線，濃度對數(shù)與擴散環(huán)直徑呈線性關系。雙向擴散試驗是對抗原或抗體進行定性分析。沉淀線如果靠近抗原孔，則表示抗體含量較大沉淀線如果靠近抗體孔，則表示抗原含量較大。不出現(xiàn)沉淀線則表明無對應的抗體或抗原或者抗原過量。*分子量小者擴散快，反之則較慢。由于慢者擴散圈小，局部濃度則較大，形成的沉淀線彎向分子量大的一方。如果兩者分子量大致相等，則形成直線。*兩條沉淀線互相吻合相連，表明抗體與兩個抗原中的相同表位結(jié)合而沉淀，兩個抗原相同沉淀線呈部分相切，說明兩個抗原之間有部分相同。兩條沉淀線交叉而過，說明兩個抗原完全不同。*出現(xiàn)沉淀線最高的抗體稀釋度

13、為該抗體的效價。*出現(xiàn)一條沉淀線說明待測抗原或抗體純。出現(xiàn)多條沉淀線說明不純。44、對流免疫電泳（雙向免疫擴散與電泳相結(jié)合的定向加速的免疫擴散技術）：抗體流向負極，抗原流向正極；最適比例出現(xiàn)沉淀線?；鸺庖唠娪臼菍蜗蛎庖邤U散與電泳相結(jié)合的一項定量檢測技術，實質(zhì)上是加速的單向擴散試驗。（抗體混合于瓊脂中，樣品孔中的抗原置于負極端，電泳時抗體不移動，抗原向正極泳動，隨著抗原量的逐漸減少，抗原泳動的基底區(qū)越來越窄，抗原抗體分子復合物形成的沉淀線逐漸變窄，形成一個形狀如火箭的不溶性復合物沉淀峰。）頂部呈不清晰的云霧狀或圓形，則表示未達終點。免疫電泳技術：區(qū)帶電泳+免疫雙向擴散。用于純化抗原和抗體成分

14、的分析免疫固定電泳：電泳+沉淀反應技術，可用于各種蛋白質(zhì)的鑒定（M蛋白的鑒定與分型，也用予尿液中本-周蛋白的檢測及、分型，腦脊液中寡克隆蛋白的檢測及分型。）。45、RIA（放免）核素（125）標記抗原，競爭抑制（標記抗原和非標記抗原競爭限量抗體），反比關系；IRMA（免疫放射）核素標記抗體，非競爭結(jié)合（過量標記抗體，反應速率比RIA快，靈敏度明顯高于RIA），正比關系。*RIA可以測定大分子和小分子抗原，但IRMA則只能測定至少有兩個抗原決定簇的抗原。46、常用的熒光素有：異硫氰酸（FITC，最大吸收光波長490495nm）黃綠色，最常用；四乙基羅丹明（RB200，最大吸收光波長為570nm）

15、橘紅色；四甲基異硫氰酸羅丹明（TRITC，最大吸引光波長為550nm）橙紅色；藻紅蛋白（R-RE）橙色。其他：銪（Eu3）47、熒光標記蛋白的常用方法：攪拌法和透析法。熒光抗體效價鑒定：抗原含量為1gL時，抗體效價1：1648、時間分辨熒光免疫測定（TRFIA）以鑭系元素（如：銪）化合物為熒光標記物。49、偏振免疫測定的偏振波長是485nm（藍光）。不適宜測定大分子物質(zhì)。50、熒光酶免疫：由于使用酶和熒光底物的化學反應作為放大系統(tǒng)，故靈敏度大大提高。51、均相法：不分離，直接測（用于小分子激素和半抗原（如藥物）的測定）；酶放大免疫測定技術（EMIT）最早用于臨床。酶標半抗原。EIA：異相法：先

16、分離，后測定。固相酶免疫測定（如ELISA）52、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）：辣根過氧化物酶（HRP）：底物（1）鄰苯二胺（OPD），（2）四甲基聯(lián)苯胺（TMB）ELISA中應用最廣泛的底物。（HRP標記抗體或抗原的最常用方法改良過碘酸鈉法）堿性磷酸酶（ALP）：底物：對-硝基苯磷酸脂（p-NPP）-半乳糖苷酶（-Gal）：底物：4-甲基傘酮基-R-D半乳糖苷（4-MUU）必要的試劑：固相的抗原或抗體；酶標記的抗原或抗體；酶反應的底物。抗原測定：蛋白大分子抗原用得最多的是雙抗體夾心法（HBsAg）。只有單個抗原決定簇的小分子，則使用競爭抑制法?？贵w測定：通常使用間接法(HCV、HIV)、雙

17、抗原夾心法（HBsAb）、競爭法（HBcAb、HBeAb）和捕獲法（IgM）等*待測孔最后顯示的顏色深淺與標本中的待測抗原或抗體呈正相關的是：雙抗體夾心法、雙位點一步法、間接法測抗體；*封閉：1%5%的牛血清白蛋白或5%20%小牛血清。53、化學發(fā)光底物有：直接化學發(fā)光劑：吖啶酯和三聯(lián)吡啶釕；酶促反應發(fā)光劑：（標記酶HRP）魯米諾及其衍生物、（標記酶為堿性磷酸酶）AMPPD；54、免疫印跡實驗中常選用多克隆抗體。55、外周血單個核細胞的分離的分層液常用：Ficoll（由上到下為血漿，單個核細胞，粒，紅）和Percoll（由上至下：死細胞，單個核細胞，淋，紅，粒）。56、純淋巴細胞群的采集有：黏

18、附貼壁法，吸附柱過濾法，磁鐵吸引法，Percoll分離液法。57、T細胞和B細胞的分離：E花環(huán)沉降法，尼龍毛柱分離法58、淋巴細胞活力測定：臺盼藍染色法，死細胞為藍色。59、CD4是HIV受體，HIV感染時CD4CD8比值明顯降低。60、CD4CD8升高常見于自身免疫性疾??；而CD4CD8降低常見于病毒感染、惡性腫瘤和再生障礙性貧血等。61、（ELISA）雙抗體夾心法是用于細胞因子測定的最常用方法。62、流式細胞儀：前向散射光（FS）反映顆粒的大小。側(cè)向散射光（SS）反映顆粒內(nèi)部結(jié)構(gòu)復雜程度、表面的光滑程度。熒光（FL）反映顆粒被染上熒光部分數(shù)量的多少。63、免疫熒光標記最常用的熒光染料：異硫

19、氰酸熒光素（FITC）亮綠色熒光。德州紅紅色熒光。藻膽蛋白類橙色至紅色熒光。64、臨床上常用三色熒光抗體標記將CD3-CD16+CD56+淋巴細胞確定為NK細胞。65、AIDS患者的一個特征性免疫診斷指標表現(xiàn)為：T淋巴細胞總數(shù)減少，T細胞亞群CD4ThCD8Tc比例倒置，ThTc1.0，Th細胞數(shù)量顯著下降甚至測不出，而Tc細胞數(shù)量可正?；蛟黾?，NK細胞減少或活力下降，B淋巴細胞群則處于正常范圍。65、強直性脊柱炎HLA-B2766、SLE患者以IgG、IgA升高較多見。類風濕關節(jié)炎患者以IgM增高為主。67、M蛋白（MP）是B淋巴細胞或漿細胞單克隆異常增殖（30gL）所產(chǎn)生的一種在氨基酸組成

20、及順序上十分均一的異常單克隆免疫球蛋白。多無免疫活性，故又稱副蛋白。臨床上多見于多發(fā)性骨髓瘤、高丙種球蛋白血癥、惡性淋巴瘤、重鏈病、輕鏈病等68、M蛋白-最基本方法：血清蛋白區(qū)帶電泳技術M蛋白-粗篩試驗：血清免疫球蛋白定量（單向瓊脂免疫擴散法和免疫比濁法）M蛋白-鑒定，首選方法：免疫固定電泳（IFE）技術（區(qū)帶電泳技術與特異性抗血清的免疫沉淀反應相結(jié)合）是臨床最常用的方法。69、IgD降低見于原發(fā)性無丙種球蛋白血癥、矽肺70、CSF中的濃度：IgGIgAIgM。神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤時，以IgA和IgM升高為主。（感染、血管病變、系統(tǒng)性疾病=IgG升高）71、本-周蛋白即尿中游離的免疫球蛋白輕鏈。尿中可

21、測得，血中呈陰性（原因是本-周蛋白分子量小，極易迅速自腎臟排出，血中含量并不升高）72、冷球蛋白又稱冷免疫球蛋白，在-4時發(fā)生沉淀，于37時又復溶解。采血是冷球蛋白檢測的關鍵，宜在體溫條件下采集和保存靜脈血。73、補體結(jié)合試驗（CFT），梅毒的診斷，華氏反應。74、非均相熒光免疫測定：時間分辨熒光免疫測定法。均相熒光免疫測定：熒光偏振免疫測定法。75、鏈球菌感染：ASO（膠乳凝集試驗、免疫散射比濁法）76、傷寒沙門菌有菌體（O）抗原、鞭毛（H）抗原和表面（Vi）抗原。肥達反應，效價1:80為陽性77、卡氏肺孢菌，又稱卡氏肺孢子蟲，為類真菌。78、型超敏反應：由特異性IgE抗體介導產(chǎn)生，其發(fā)生速

22、度最快。（青霉素、支氣管哮喘）提高Th1細胞活性，減少IL-4的分泌，可降低IgE的產(chǎn)生，阻斷IgE介導的型超敏反應。參與型超敏反應：肥大細胞、嗜堿性粒細胞、嗜酸性粒細胞。79、型超敏反應：又稱細胞毒型或細胞溶解型超敏反應，它是由靶細胞表面的抗原與相應IgG或IgM類抗體結(jié)合后，在補體（細胞溶解）、巨噬細胞（吞噬）和NK細胞（ADCC作用）參與下，引起的以細胞溶解或組織損傷為主的病理性免疫反應。（輸血反應、新生兒溶血癥、自身免疫性溶血性貧血、藥物過敏性血細胞減少癥、肺出血腎炎綜合征、甲狀腺功能亢進）80、型超敏反應：由可溶性免疫復合物沉積于局部或全身多處毛細血管基底膜，通過激活補體，并在血小板

23、、嗜堿性粒細胞、中性粒細胞等的參與下，引起的以充血水腫、局部壞死和中性粒細胞浸潤為主要特征的炎癥反應和組織損傷。（Arthus反應、類Arthus反應、血清病、鏈球菌感染后腎小球腎炎、類風濕關節(jié)炎、SLE）/81、型超敏反應：又稱遲發(fā)型超敏反應（DTH），是效應T細胞與特異性抗原結(jié)合后，引起的以單個核細胞浸潤和組織損傷為主要特征的炎癥反應。（細胞免疫）效應性CD4+Th1細胞識別抗原后活化，可釋放IFN-、TNF、淋巴毒素（LT）、IL-3、GM-CSF、單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1）等多種細胞因子。常見型超敏反應性疾?。焊腥拘赃t發(fā)型超敏反應（結(jié)核分枝桿菌、病毒、原蟲）、接觸性皮炎、移植排

24、斥反應。（結(jié)核菌素皮試、斑貼試驗）82、變性的IgG可刺激機體產(chǎn)生抗變性IgG抗體（類風濕因子）83、ITP患者血清中存在有抗血小板抗體，該抗體可以縮短血小板的壽命。84、抗乙酰膽堿受體抗體：對重癥肌無力（MG）具有診斷意義。85、毒性彌漫性甲狀腺腫患者血清中有抗促甲狀腺激素受體（TSHR）的IgG型自身抗體。（甲狀腺功能的亢進）86、多發(fā)性肌炎是以損害肌肉為主要表現(xiàn)的自身免疫性疾病，如果同時有皮膚損害，則稱為皮肌炎。87、75%的PSS患者有抗核抗體陽性，抗Scl-70抗體是PSS的特異性抗體，80%95%的局限性硬皮病患者抗著絲點抗體陽性。88、自身免疫?。ˋID）的特征：高滴度自身抗體，

25、病理特點為免疫炎癥損傷與抗原分布一致，能建動物模型。89、抗DNP抗體（抗核蛋白抗體）通常完全被DNA和組蛋白吸收，是形成狼瘡細胞的因子。90、ANA陽性的熒光現(xiàn)象分：核膜型、均質(zhì)型、斑點型、核仁型。ANA常為自身免疫病的初篩試驗。91、ENA是可提取核抗原的總稱，分子中不含DNA。92、抗dsDNA抗體對SLE有較高的特異性?？筍m抗體也是SLE的特異性標志之一。此兩項常為SLE確診指標。（對疑為SLE的患者，應先進行ANA和抗dsDNA抗體的檢測，當ANA和（或）抗dsDNA抗體陽性時，再作抗ENA抗體譜的檢測。如有抗Sm抗體和（或）抗RNP抗體陽性，可實驗室診斷為SLE）93、抗核RNP

26、抗體：為MCTD（混合性結(jié)締組織?。┑脑\斷指標。94、抗SSA/抗SSB抗體：為干燥綜合征（SS）的診斷指標。（當ANA陽性而抗dsDNA抗體陰性，抗ENA抗體譜中抗SsA抗體和（或）抗ssB抗體陽性，可實驗室診斷為干燥綜合征。）95、抗Jo-1抗體：多發(fā)性肌炎（PM）患者常為陽性。96、抗Scl-70抗體：進行性系統(tǒng)性硬皮癥（PSS）的診斷指標。97、NCA：原發(fā)性小血管炎的特異性血清標志物98、內(nèi)風濕性關節(jié)炎（RA）：自身抗體有RF、抗角蛋白抗體（AKA）、抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（anti-CCP）。99、Farr法測定dsDNA抗體的特異性高，為公認標準法，當抗dsDNA抗體結(jié)合率大于20%時對SLE有意義。100、抗線粒體抗體（AMA）：原發(fā)性膽汁性肝硬化101、巨球蛋白血