第九章+化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)

1、化學(xué)發(fā)光免疫化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)技術(shù)第九章第九章教學(xué)目的要求教學(xué)目的要求： 1、掌握化學(xué)發(fā)光、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析及、掌握化學(xué)發(fā)光、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析及化學(xué)發(fā)光的臨床應(yīng)用化學(xué)發(fā)光的臨床應(yīng)用 2、熟練掌握電化學(xué)發(fā)光免疫分析、熟練掌握電化學(xué)發(fā)光免疫分析 3、了解化學(xué)發(fā)光效率、化學(xué)發(fā)光劑、發(fā)光、了解化學(xué)發(fā)光效率、化學(xué)發(fā)光劑、發(fā)光劑的標(biāo)記技術(shù)（自學(xué)）、直接化學(xué)發(fā)光免劑的標(biāo)記技術(shù)（自學(xué)）、直接化學(xué)發(fā)光免疫分析疫分析發(fā)光免疫分析發(fā)光免疫分析:是將是將發(fā)光分析發(fā)光分析和和免疫反應(yīng)免疫反應(yīng)相結(jié)合相結(jié)合而建立起來的一而建立起來的一種新的檢測微量種新的檢測微量抗原或抗體的新抗原或抗體的新型標(biāo)記免疫分析型標(biāo)記免疫分析技術(shù)

2、。技術(shù)。全自動化學(xué)發(fā)光分析儀全自動化學(xué)發(fā)光分析儀第一節(jié)概述第一節(jié)概述一、發(fā)光的分類一、發(fā)光的分類 是指一種物質(zhì)由電子激發(fā)態(tài)回復(fù)到基態(tài)時，釋放出的能量表現(xiàn)為光的發(fā)射，稱為發(fā)光。 根據(jù)形成激發(fā)態(tài)分子的能量來源不同，可將發(fā)光分為三種：光照發(fā)光、生物發(fā)光和化學(xué)發(fā)光。（一）光照發(fā)光（一）光照發(fā)光 是指發(fā)光劑經(jīng)是指發(fā)光劑經(jīng)短波長入射光照短波長入射光照后進入激發(fā)態(tài)，回至基態(tài)時發(fā)后進入激發(fā)態(tài)，回至基態(tài)時發(fā)出較長的可見光。出較長的可見光。（二）生物發(fā)光（二）生物發(fā)光 典型例子為熒火蟲發(fā)光。典型例子為熒火蟲發(fā)光。 熒火蟲發(fā)光素?zé)苫鹣x發(fā)光素 光光ATP、O2、M2+熒光素酶（三）化學(xué)發(fā)光（三）化學(xué)發(fā)光 是指常溫下經(jīng)

3、化學(xué)反應(yīng)所產(chǎn)生是指常溫下經(jīng)化學(xué)反應(yīng)所產(chǎn)生的發(fā)射光。的發(fā)射光。 化學(xué)發(fā)光是一個多步驟的過程?；瘜W(xué)發(fā)光是一個多步驟的過程。二、化學(xué)發(fā)光產(chǎn)生的條件二、化學(xué)發(fā)光產(chǎn)生的條件1、反應(yīng)必須提供足夠的能量（170-300KJ/mol）2、這些化學(xué)能必須能被某種物質(zhì)分子吸收而產(chǎn)生電子激發(fā)，并且有足夠的光量子產(chǎn)生。直接化學(xué)發(fā)光：間接化學(xué)發(fā)光：三、化學(xué)發(fā)光效率三、化學(xué)發(fā)光效率fclr參加反應(yīng)的分子數(shù)發(fā)射光子的分子數(shù)四、化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的分類四、化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的分類 1、直接化學(xué)發(fā)光免疫分析 2、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析 3、電化學(xué)發(fā)光免疫分析 4、魯米諾氧途徑免疫分析常用化學(xué)發(fā)光劑：常用化學(xué)發(fā)光劑：（1）吖啶酯類）吖啶

4、酯類 直接標(biāo)記發(fā)光劑直接標(biāo)記發(fā)光劑（2）三聯(lián)吡啶釕）三聯(lián)吡啶釕 電化學(xué)發(fā)光劑電化學(xué)發(fā)光劑（3）酶促反應(yīng)發(fā)光劑：魯米諾）酶促反應(yīng)發(fā)光劑：魯米諾 AMPPD(金剛烷金剛烷)（一）固相分離（一）固相分離板式或管式板式或管式（二）過濾分離（二）過濾分離過濾杯（膜）過濾杯（膜）（三）珠式分離（三）珠式分離與丙烯酰胺小珠子與丙烯酰胺小珠子（四）順磁珠性顆粒分離（四）順磁珠性顆粒分離順磁性顆粒順磁性顆粒五、化學(xué)發(fā)光免疫的非均相分離方式五、化學(xué)發(fā)光免疫的非均相分離方式一、化學(xué)發(fā)光劑一、化學(xué)發(fā)光劑 在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中參與能量轉(zhuǎn)移并最終在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中參與能量轉(zhuǎn)移并最終以發(fā)射光子的形式釋放能量的化合物，以發(fā)射光子的

5、形式釋放能量的化合物，稱為稱為化學(xué)發(fā)光劑或發(fā)光底物?；瘜W(xué)發(fā)光劑或發(fā)光底物。第二節(jié)第二節(jié) 化學(xué)發(fā)光劑和標(biāo)記技術(shù)化學(xué)發(fā)光劑和標(biāo)記技術(shù) 魯米諾魯米諾早在1853年就被合成出來了。1928年，化學(xué)家首次發(fā)現(xiàn)這種化合物有一個奇妙的特性，它被氧化時能發(fā)出藍光。 化學(xué)名稱為3-氨基鄰苯二甲酰肼。 刑偵學(xué)應(yīng)用：刑偵學(xué)應(yīng)用： 在檢驗血痕時，魯米諾與血紅蛋白發(fā)生反應(yīng)，顯出藍綠色的熒光。這種檢測方法極為靈敏，能檢測只有百萬分之一含量的血。二、發(fā)光劑的標(biāo)記技術(shù)（自學(xué)）第三節(jié)第三節(jié) 化學(xué)發(fā)光免疫分析的類型化學(xué)發(fā)光免疫分析的類型一、直接化學(xué)發(fā)光免疫分析一、直接化學(xué)發(fā)光免疫分析二、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析二、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析發(fā)

6、光酶免疫分析發(fā)光酶免疫分析(LEIA):是用參與催化某是用參與催化某一發(fā)光反應(yīng)的酶來標(biāo)記抗原或抗體，在一發(fā)光反應(yīng)的酶來標(biāo)記抗原或抗體，在抗原抗體反應(yīng)結(jié)束后，加入底物，通過抗原抗體反應(yīng)結(jié)束后，加入底物，通過酶催化底物發(fā)光反應(yīng)，發(fā)出的光在特定酶催化底物發(fā)光反應(yīng)，發(fā)出的光在特定儀器上進行測定。儀器上進行測定。HRP標(biāo)記的標(biāo)記的LEIA（一）辣根過氧化酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析（一）辣根過氧化酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析（二）堿性磷酸酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析（二）堿性磷酸酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析ALP標(biāo)記的標(biāo)記的LEIA三、電化學(xué)發(fā)光免疫分析三、電化學(xué)發(fā)光免疫分析 電化學(xué)發(fā)光免疫分析（電化學(xué)發(fā)光免疫分析（E

7、CLIA）：）：是電化學(xué)發(fā)光和免疫測定相結(jié)合的是電化學(xué)發(fā)光和免疫測定相結(jié)合的產(chǎn)物。產(chǎn)物。第四節(jié)化學(xué)發(fā)光免疫測定的臨第四節(jié)化學(xué)發(fā)光免疫測定的臨床應(yīng)用床應(yīng)用 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)因標(biāo)記物為非化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)因標(biāo)記物為非放射性物質(zhì)，且易于實現(xiàn)自動化，放射性物質(zhì)，且易于實現(xiàn)自動化，具有快速、簡便、靈敏、特異等具有快速、簡便、靈敏、特異等特點，已廣泛應(yīng)用于各種激素、特點，已廣泛應(yīng)用于各種激素、腫瘤標(biāo)志物、藥物及其化微量生腫瘤標(biāo)志物、藥物及其化微量生物活性物質(zhì)測定。物活性物質(zhì)測定。臨床應(yīng)用特點：1、靈敏度高，特異性強、靈敏度高，特異性強 可實現(xiàn)ng甚至pg級微量待測物的定量檢測，保證了各種激素、病毒抗原抗體等

8、微量物質(zhì)的準(zhǔn)確定量測定。2、線性范圍寬、線性范圍寬 可滿足103-106數(shù)量級的絕對定量檢測需要。保證了臨床應(yīng)用中的簡便性，避免了試驗中的稀釋誤差。3、標(biāo)記物穩(wěn)定，試劑有效期長、標(biāo)記物穩(wěn)定，試劑有效期長 有效期可長達一年4、自動化程度高，檢測菜單齊全、自動化程度高，檢測菜單齊全 Thyroid 甲狀腺 T3 三碘甲狀腺原氨酸 T4 四碘甲狀腺原氨酸 FT3 游離三碘甲狀腺原氨酸 FT4 游離四碘甲狀腺原氨酸 RT3 反三碘甲狀腺原氨酸 TRAB 促甲狀腺受體抗體 TGA 甲狀腺球蛋白抗體 TMA 甲狀腺微粒體抗體 TG 甲狀腺球蛋白 TSH (3rd Gen) 促甲狀腺激素(第三代超敏) Fe

9、rtility 生育 FSH 促卵泡激素 LH 黃體生成素 PRL 催乳素 E2，Estradiol 雌二醇 PRG 孕酮 TEST 睪酮 F-TEST 游離睪酮 HCG/-HCG 絨毛膜促性腺激素 B-HCG 絨毛膜促性腺激素B亞單位 FE3 游離雌三醇 PAPP-A 妊娠相關(guān)血漿蛋白 DHEA-S 脫氫表雄酮 Cardiac 心血管及心肌標(biāo)志物類 TroponinI 肌鈣蛋白I MyoglobinI 肌紅蛋白 CK-MB 肌酸激酶同工酶 A I 血管緊張素I A II 血管緊張素II Aldosterone 醛固酮 腦自然肽N端前體蛋白 Tumor Makers 腫瘤標(biāo)志物 AFP 甲胎蛋白 CEA 癌胚抗原 Ferritin 鐵蛋白 TPA 組織多肽抗原 PAP 前列腺酸性磷酸酶 PSA 前列腺特異性抗原 F-PSA 游離前列腺特異性抗原 CA125 糖類抗原125 Prenatal Screening 產(chǎn)前篩查 AFP 甲胎蛋白 Free-B-HCG 游離絨毛膜促性腺激素B亞單位 PAPP-A 妊娠相關(guān)蛋白 Kidney Function腎功能 2-MG 2微球蛋白 H-ALB 人尿微量白蛋白 Glycometabolism 糖代謝 C-