hiv感染的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)生化ppt課件

1、生化生化PBL組員： .HIV感染的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)感染的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù) 1.HIV分別及培育2.HIV抗體檢測 3. HIV抗原檢測4.HIV核酸檢測 5.流式細(xì)胞檢測.1.HIV分別及培育分別及培育優(yōu)點(diǎn)：病毒培育是檢測HIV感染最準(zhǔn)確的方法，特異性強(qiáng)，不會(huì)出現(xiàn)假陽性。經(jīng)過培育外周血單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)展HIV診斷，對(duì)于確認(rèn)抗原/抗體檢測不確定的個(gè)體和陽性母親的新生兒能否感染HIV有重要意義。缺陷：敏感性差，很少用于窗口期檢測。.2.HIV抗體檢測抗體檢測酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)ELISA顆粒凝集實(shí)驗(yàn)(PA快速試劑(rapid test，RT).酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)ELISA固相固相血清標(biāo)本血清標(biāo)

2、本酶標(biāo)志酶標(biāo)志物物固相固相血清標(biāo)本血清標(biāo)本YYYYYYYYYYYYYYYY第一、二第一、二代代第三代第三代第四代第四代.顆粒凝集實(shí)驗(yàn)顆粒凝集實(shí)驗(yàn)(PA原理為將純化的HIV抗原銜接到紅色明膠顆粒上制成致敏顆粒，當(dāng)參與的檢測標(biāo)本中含有HIV抗體時(shí)，即可發(fā)生肉眼可見的凝集反響。優(yōu)點(diǎn)操作簡便，適宜于小型實(shí)驗(yàn)室的HIV日常篩查任務(wù)，也可與ELISA方法配合用于篩查陽性標(biāo)本的復(fù)檢實(shí)驗(yàn)。.3. HIV抗原檢測抗原檢測用ELISA檢測P24抗原，在HIV感染早期尚未出現(xiàn)抗體時(shí)，血中就有該抗原存在。由于P24量太少，陽性率通常較低?，F(xiàn)有用解離免疫復(fù)合物法或濃縮P24抗原，來提高敏感性。 HIV-lp24抗原的陽

3、性結(jié)果只能作為感染的輔助診斷，必需經(jīng)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)確診，p24抗原陰性也不能排除HIV感染的能夠性。.4.HIV核酸檢測核酸檢測 HIV核酸的定性檢測核酸的定性檢測 HIV核酸的定量檢測核酸的定量檢測 生物芯片檢測生物芯片檢測.HIV核酸的定性檢測核酸的定性檢測方法原位雜交、RNA印跡、DNA印跡、多聚酶鏈反響(PCR)、逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反響(RT-PCR)等，以PCR和RT-PCR最為常用。.HIV核酸的定量檢測核酸的定量檢測1.RT-PCR2核酸序列擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)(NASBA)3.分枝DNA信號(hào)擴(kuò)展系統(tǒng)(bDNA)為4熒光實(shí)時(shí)PCR.多聚酶鏈?zhǔn)椒错懚嗑勖告準(zhǔn)椒错?PCR)(PCR)主要用于檢測血漿中主要

4、用于檢測血漿中HIVHIV的的RNARNA含量，目前主要用于預(yù)測母親將含量，目前主要用于預(yù)測母親將HIVHIV傳染給胎兒的能傳染給胎兒的能夠性以及新生兒的夠性以及新生兒的HIVHIV感染情況。此外，尚可用于判感染情況。此外，尚可用于判別病人的預(yù)后及監(jiān)測抗病毒治療的效果。別病人的預(yù)后及監(jiān)測抗病毒治療的效果。RT-PCR.這種實(shí)驗(yàn)過程是在溫度控制下進(jìn)展的，一個(gè)變性這種實(shí)驗(yàn)過程是在溫度控制下進(jìn)展的，一個(gè)變性-復(fù)性復(fù)性-延伸的過程就是一個(gè)延伸的過程就是一個(gè)PCRPCR循環(huán)。循環(huán)。PCRPCR就是在適就是在適宜條件下的這種循環(huán)的不斷反復(fù)；延伸的產(chǎn)物經(jīng)第宜條件下的這種循環(huán)的不斷反復(fù)；延伸的產(chǎn)物經(jīng)第二循環(huán)變

5、性，亦與引物互補(bǔ)，作為引物引導(dǎo)二循環(huán)變性，亦與引物互補(bǔ)，作為引物引導(dǎo)DNADNA合成合成的新模板；因此，第二循環(huán)后延伸的模板由第一循的新模板；因此，第二循環(huán)后延伸的模板由第一循環(huán)的環(huán)的4 4條增為條增為8 8條，依此類推，以后每一個(gè)循環(huán)后的條，依此類推，以后每一個(gè)循環(huán)后的模板均比前一個(gè)循環(huán)添加模板均比前一個(gè)循環(huán)添加1 1倍。倍。特點(diǎn)：特異性強(qiáng)、敏感性高、快速、簡便、對(duì)起始特點(diǎn)：特異性強(qiáng)、敏感性高、快速、簡便、對(duì)起始資料質(zhì)量要求低等特點(diǎn)。資料質(zhì)量要求低等特點(diǎn)。. 優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)1.與傳統(tǒng)檢測抗體的方法相比，其靈敏度和特異性更高，從而對(duì)HIV的定量檢測提供了有效的手段；2.不依賴于宿主的免疫反響，無須等

6、到免疫系統(tǒng)對(duì)HIV產(chǎn)生抗體后才干檢定宿主受HIV感染的形狀，這有利于對(duì)血清陽轉(zhuǎn)以前標(biāo)本的檢測和對(duì)陽性母親所生嬰兒的HIV感染的調(diào)查；3.對(duì)埋伏形狀的HIV的檢測不依賴于HIV在宿主細(xì)胞的生長活性。.核酸序列擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)核酸序列擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)(NASBA)(NASBA)也屬目的核酸擴(kuò)增法，是一種等溫?cái)U(kuò)增系統(tǒng)。原理是經(jīng)過系統(tǒng)內(nèi)的混合酶系統(tǒng)(包括逆轉(zhuǎn)錄酶、核糖核酸酶H和T7RNA聚合酶)體外模擬逆轉(zhuǎn)錄病毒在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制過程。優(yōu)點(diǎn)：該方法對(duì)AG各亞型均有較好反響性，能測定各種生物樣品，對(duì)各種抗凝劑均適用缺陷：樣品提取和測定反響時(shí)要進(jìn)展大量手工操作，實(shí)驗(yàn)內(nèi)、外誤差也相對(duì)較大。.為什么艾滋病不可治愈？為什么艾滋病不

7、可治愈？.1.艾滋病病毒進(jìn)入人體后，會(huì)攻擊一類免疫細(xì)胞T細(xì)胞，導(dǎo)致它們?cè)獾酵耆茐?，免疫系統(tǒng)出現(xiàn)了問題，自然就難以去除病毒了。2.假設(shè)艾滋病病毒進(jìn)入埋伏期，病毒埋伏在免疫細(xì)胞中， HIV前病毒整合入宿主細(xì)胞基因組中，不發(fā)生復(fù)制造用，免疫會(huì)把HIV忽略不被免疫系統(tǒng)識(shí)別，本身免疫無法去除。這也能夠?qū)е滤幬飳?duì)其無效。.而艾滋病病毒可以經(jīng)過被感染的供體細(xì)胞作為媒介在細(xì)胞間傳播。一旦發(fā)現(xiàn)未受感染的靶細(xì)胞，供體細(xì)胞便將病毒傳染給該細(xì)胞。. 雞尾酒療法雞尾酒療法原指原指“高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療HAART，是經(jīng)過三種或三種以，是經(jīng)過三種或三種以上的抗病毒藥物結(jié)合運(yùn)用來治療艾滋上的抗病毒藥物結(jié)

8、合運(yùn)用來治療艾滋病。病。該療法把蛋白質(zhì)抑制劑與多種抗病毒該療法把蛋白質(zhì)抑制劑與多種抗病毒的藥物混合運(yùn)用，從而使艾滋病得到的藥物混合運(yùn)用，從而使艾滋病得到有效的控制。有效的控制。 . 雞尾酒治療方案雞尾酒治療方案1.基于蛋白酶抑制劑的雞尾酒基于蛋白酶抑制劑的雞尾酒 療法：療法：1個(gè)蛋個(gè)蛋白酶抑制劑結(jié)合白酶抑制劑結(jié)合2個(gè)核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。個(gè)核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。 2.基于非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的雞尾酒基于非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的雞尾酒療法：療法：1個(gè)非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，個(gè)非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑， 結(jié)結(jié)合合2個(gè)核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。個(gè)核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑。 3.三個(gè)核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的雞三個(gè)核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的雞 尾酒療尾酒療法法 .雞尾酒的局限性主要表如今：雞尾酒的局限性主要表如今： 對(duì)早期艾滋病病人相當(dāng)有效，但對(duì)早期艾滋病病人相當(dāng)有效，但對(duì)中晚期患者的協(xié)助不大，由于對(duì)中晚期患者的協(xié)助不大，由于這些病人的免疫系統(tǒng)已被艾滋病這些病人的免疫