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文檔簡介
1、現(xiàn)代酶工程蛋白質定向進化技術現(xiàn)代酶工程蛋白質定向進化技術(jsh)的的發(fā)展和應用發(fā)展和應用第一頁,共43頁。第1頁/共43頁第二頁,共43頁。第2頁/共43頁第三頁,共43頁。第3頁/共43頁第四頁,共43頁。第4頁/共43頁第五頁,共43頁。第5頁/共43頁第六頁,共43頁。第6頁/共43頁第七頁,共43頁。第7頁/共43頁第八頁,共43頁。第8頁/共43頁第九頁,共43頁。第9頁/共43頁第十頁,共43頁。第10頁/共43頁第十一頁,共43頁。第11頁/共43頁第十二頁,共43頁。第12頁/共43頁第十三頁,共43頁。第13頁/共43頁第十四頁,共43頁。第14頁/共43頁第十五頁,共43
2、頁。第15頁/共43頁第十六頁,共43頁。第16頁/共43頁第十七頁,共43頁。第17頁/共43頁第十八頁,共43頁。第18頁/共43頁第十九頁,共43頁。第19頁/共43頁第二十頁,共43頁。第20頁/共43頁第二十一頁,共43頁。第21頁/共43頁第二十二頁,共43頁。文庫(Libraries)定向的(Directed)隨機的(Random)重組的(Recombination)DNA重排(改組)(DNA shuffling)易錯PCR(Error-prone PCR)理性的(Rational)簡并的(Saturation)定點突變(Site-specificmutagenesis)第22頁
3、/共43頁第二十三頁,共43頁。第23頁/共43頁第二十四頁,共43頁。第24頁/共43頁第二十五頁,共43頁。第25頁/共43頁第二十六頁,共43頁。第26頁/共43頁第二十七頁,共43頁。第27頁/共43頁第二十八頁,共43頁。第28頁/共43頁第二十九頁,共43頁。第29頁/共43頁第三十頁,共43頁。酶蛋白質一級結構中相應位置的氨基酸殘基二硫鍵數(shù)目相對活性(%)Tm(C)39215497142164野生IleIleThrCysCysThrLeu010041.9假野生IleIleThrThrAlaThrLeu010041.9ACysIleThrThrCysThrLeu19646.7BIl
4、eCysThrThrAlaThrCys110648.3CIleIleCysThrAlaCysLeu1052.9DCysCysThrThrCysThrCys29557.6EIleCysCysThrAlaCysCys2058.9FCysCysCysThrCysCysCys3065.5注:Tm為蛋白質的總體結構(jigu)50%發(fā)生變性的溫度,用以表征蛋白質的熱穩(wěn)定性。第30頁/共43頁第三十一頁,共43頁。第31頁/共43頁第三十二頁,共43頁。第32頁/共43頁第三十三頁,共43頁。第33頁/共43頁第三十四頁,共43頁。第34頁/共43頁第三十五頁,共43頁。第35頁/共43頁第三十六頁,共43頁。第36頁/共43頁第三十七頁,共43頁。第37頁/共43頁第三十八頁,共43頁。組頻率;如果在片段重組前后采用錯誤傾向PCR還可引入額外點突變。第38頁/共43頁第三十九頁,共43頁。第39頁/共43頁第四十頁,共43頁。第40頁/共43頁第四十一頁,共43頁。Mox
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