結(jié)核感染T細(xì)胞檢測

1、新檢驗項目結(jié)核感染特異性結(jié)核感染特異性T T細(xì)胞細(xì)胞（T-SPOT.TB）檢測技術(shù)檢測技術(shù)1、結(jié)核病的疫情結(jié)核病的疫情 結(jié)核病是一種慢性傳染病，可在身體各個器官發(fā)病，其中以肺結(jié)核最為常見，因此肺結(jié)核病是一種嚴(yán)重危害人類健康的傳染病，得了肺結(jié)核病如果不能徹底治療就會完全喪失勞動能力，而且還會傳染他人，對個人、家庭和社會都是極大的危害。 我國是全球22個結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家之一，活動性肺結(jié)核病人數(shù)僅次于印度，居世界第二位。結(jié)核病仍是目前嚴(yán)重影響我國人民健康的公共衛(wèi)生問題，而且影響到社會和經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，是我國重點控制的疾病之一。1.3 1.3 結(jié)核診斷結(jié)核診斷 2 2 結(jié)核診斷結(jié)核診斷 細(xì)菌培養(yǎng)細(xì)菌培養(yǎng)l

2、不能區(qū)分非結(jié)核分 枝桿菌l敏感度低，近半肺結(jié)核陰性l肺外結(jié)核取材難結(jié)核桿菌生長緩慢，培養(yǎng)周期長，不利于早期診斷3.TSPOT3.TSPOT檢測原理檢測原理v結(jié)核感染的免疫應(yīng)答反應(yīng)以結(jié)核感染的免疫應(yīng)答反應(yīng)以細(xì)胞免疫細(xì)胞免疫為主，結(jié)核為主，結(jié)核感染后體內(nèi)長期存在抗原特異性的記憶性感染后體內(nèi)長期存在抗原特異性的記憶性T細(xì)胞。細(xì)胞。v當(dāng)再次遇到抗原刺激時，能迅速活化增殖，釋放當(dāng)再次遇到抗原刺激時，能迅速活化增殖，釋放干擾素干擾素v干擾素干擾素是結(jié)核分枝桿菌感染后機(jī)體免疫應(yīng)答中是結(jié)核分枝桿菌感染后機(jī)體免疫應(yīng)答中最重要的細(xì)胞因子。最重要的細(xì)胞因子。T-SPOT.TB技術(shù)：技術(shù)：v 利用結(jié)核桿菌感染者外周血

3、單個核細(xì)胞（利用結(jié)核桿菌感染者外周血單個核細(xì)胞（PBMC）中存在）中存在結(jié)核特異性結(jié)核特異性T T細(xì)胞細(xì)胞，這些淋巴細(xì)胞在受到結(jié)核特異這些淋巴細(xì)胞在受到結(jié)核特異 抗原刺激后分泌抗原刺激后分泌干擾素干擾素而設(shè)計的而設(shè)計的T T細(xì)胞免疫斑點試驗。細(xì)胞免疫斑點試驗。v 檢測外周血中受結(jié)核特異抗原刺激釋放檢測外周血中受結(jié)核特異抗原刺激釋放干擾素干擾素的的T T淋巴細(xì)淋巴細(xì)胞，經(jīng)酶聯(lián)免疫顯色后，通過胞，經(jīng)酶聯(lián)免疫顯色后，通過ELISPOTELISPOT分析系統(tǒng)分析系統(tǒng) 對斑點進(jìn)行計數(shù)，對斑點進(jìn)行計數(shù)，1 1個斑點代表一個分泌細(xì)胞，計算出抗原個斑點代表一個分泌細(xì)胞，計算出抗原特異性細(xì)胞的頻率。特異性細(xì)胞的

4、頻率。v空白對照孔內(nèi)斑點數(shù)小于空白對照孔內(nèi)斑點數(shù)小于10且陽性對照孔內(nèi)斑點且陽性對照孔內(nèi)斑點數(shù)大于數(shù)大于20時視為試驗有效時視為試驗有效vT-SPOT.TB試驗結(jié)果用每試驗結(jié)果用每106 PBMCs中斑點形成細(xì)中斑點形成細(xì)胞（胞（SFCs）的數(shù)目來描述，即）的數(shù)目來描述，即SFCs/106 PBMCs5. T-SPOT.TB的臨床意義的臨床意義vT-SPOT.TB高靈敏度高靈敏度種類種類內(nèi)容摘要內(nèi)容摘要受試者數(shù)受試者數(shù)量量文獻(xiàn)發(fā)表文獻(xiàn)發(fā)表活動性結(jié)核活動性結(jié)核/ /靈敏度靈敏度將將T-SPOT.TB的檢測結(jié)果與最后通過涂片和培養(yǎng)確診的結(jié)的檢測結(jié)果與最后通過涂片和培養(yǎng)確診的結(jié)果進(jìn)行比較。包括牛型結(jié)

5、核桿菌和非洲型結(jié)核桿菌感染的果進(jìn)行比較。包括牛型結(jié)核桿菌和非洲型結(jié)核桿菌感染的患者。患者。T-SPOT.TB的靈敏度為的靈敏度為97.2%。（。（CI 90.3-99.7%）72Meier et al Eur J Microbiol Infect Dis(2005)；24: 529-536在經(jīng)培養(yǎng)確診的活動性結(jié)核受試者中，在經(jīng)培養(yǎng)確診的活動性結(jié)核受試者中，T-SPOT.TB的靈敏的靈敏度為度為96.6%。其中。其中29例免疫力低下患者，例免疫力低下患者，T-SPOT.TB的靈的靈敏度為敏度為100%87Lee et al. ERJ 2006; 28:2430在確診病例（涂片或培養(yǎng)陽性）和臨床診

6、斷病例（有臨床在確診病例（涂片或培養(yǎng)陽性）和臨床診斷病例（有臨床癥狀和抗癆治療有效）中，癥狀和抗癆治療有效）中，T-SPOT.TB的靈敏度為的靈敏度為90.3%，并且不受，并且不受CD4細(xì)胞數(shù)量影響。細(xì)胞數(shù)量影響。30Clark et al. Clin. Exp. Imm.2007; 150(2):238-44在經(jīng)痰培養(yǎng)或肺部病變組織病理活檢確診的結(jié)核患者中，在經(jīng)痰培養(yǎng)或肺部病變組織病理活檢確診的結(jié)核患者中，T-SPOT.TB的靈敏度為的靈敏度為92%。140Kang et al Chest. 2007 Sep;132(3):959-65在確診的肺結(jié)核患者和疑似肺外結(jié)核患者中，在確診的肺結(jié)核患

7、者和疑似肺外結(jié)核患者中，T-SPOT.TB的陽性率的陽性率94%。32Kim et al. Arch Intern Med.2007; 167;20:2255-2259在免疫力正常和免疫力低下的受試人群中，在免疫力正常和免疫力低下的受試人群中，T-SPOT.TB的的靈敏度分別為靈敏度分別為94%和和95%。所有受試者中，所有受試者中，42%為肺外結(jié)為肺外結(jié)核患者。核患者。186Kim et al. Am J Med 2009；122, 189-195經(jīng)培養(yǎng)確診、抗癆治療不超過經(jīng)培養(yǎng)確診、抗癆治療不超過2 2周的結(jié)核患者用周的結(jié)核患者用T-SPOT.TB檢測，陽性率檢測，陽性率98%（57/58

8、）。）。58Janssens et al ERJ 2007；30(4):722-8在經(jīng)培養(yǎng)確診的活動性結(jié)核患者中，在經(jīng)培養(yǎng)確診的活動性結(jié)核患者中，T-SPOT.TB的靈敏度的靈敏度為為94%。32Dominguez et al Clin VaccImmunol 2008; 15;168-71vT-SPOT.TB高特異性高特異性 檢測所用的檢測所用的ESAT-6CFP 10抗原抗原均來自結(jié)核均來自結(jié)核分枝桿菌基因組分枝桿菌基因組RD1區(qū)區(qū)域，域，RD1區(qū)區(qū)基因僅存在于結(jié)基因僅存在于結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群（人型、牛型、非洲型）。核分枝桿菌復(fù)合群（人型、牛型、非洲型）?？ń槊绾痛蠖鄶?shù)環(huán)境分枝桿菌缺失卡介

9、苗和大多數(shù)環(huán)境分枝桿菌缺失RD1區(qū)區(qū)基因基因 因此因此 T-SPOT.TB不會受卡介苗或者非結(jié)核分枝桿不會受卡介苗或者非結(jié)核分枝桿菌影響。菌影響。種類種類內(nèi)容摘要內(nèi)容摘要受試者數(shù)受試者數(shù)量量文獻(xiàn)發(fā)表文獻(xiàn)發(fā)表特異性特異性用用T-SPOT.TB檢測檢測14例鳥分枝桿菌感染者，例鳥分枝桿菌感染者，13例陰性，例陰性，1例為例為臨界值，復(fù)查也為陰性。臨界值，復(fù)查也為陰性。14Adams et al Sc. J Inf. Dis.2008;40(3):196-203.經(jīng)過結(jié)核篩查的無癥狀的受試者，經(jīng)過結(jié)核篩查的無癥狀的受試者，T-SPOT.TB檢測結(jié)果全部檢測結(jié)果全部為陰性，特異性為陰性，特異性100%

10、。47Clark et al. Clin. Exp. Imm.2007; 150(2):238-44在德國用在德國用T-SPOT.TB對健康的衛(wèi)生保健工作者進(jìn)行篩查。僅對健康的衛(wèi)生保健工作者進(jìn)行篩查。僅1例陽性例陽性（1/95） ，為影像學(xué)工作者，接觸病人超過，為影像學(xué)工作者，接觸病人超過35年。年。 TST檢測假陽性結(jié)果檢測假陽性結(jié)果34% （32/95）。）。 95Barsegian et al. J of Hospital Inf 2008；69(1):69-76在接觸結(jié)核的健康醫(yī)務(wù)工作者和健康對照受試者中用在接觸結(jié)核的健康醫(yī)務(wù)工作者和健康對照受試者中用TST和和T-SPOT.TB檢測。檢測。155健康醫(yī)務(wù)工作者中，健康醫(yī)務(wù)工作者中，TST陽性的陽性的27例，而例，而T-SPOT.TB僅僅3例陽性。健康對照組例陽性。健康對照組T-SPOT.TB全部陰性而全部陰性而TST有有3例陽性。例陽性。 218 Storla et al. BMC Infectious Diseases 2009,9:60 6.結(jié)論vT-SPOT.TB在診斷結(jié)核感染方面具有良好的敏感在診斷結(jié)核感染方面具有良好的敏感性和特異性，在現(xiàn)有結(jié)核診斷方法存在缺陷的今性和特異性，在現(xiàn)有結(jié)核診斷方法存在缺陷的今天，天， T-SPOT.TB 可以給臨床診