土壤微生物分離純化ppt課件

1、學(xué)習(xí) 教程 教材 多媒體課件【友誼分享】GOOD GOOD STUDAY, DAY DAY UP 1 Exercise seven土壤微生物的分別純化土壤微生物的分別純化制黃海嬋制黃海嬋or學(xué)習(xí) 教程 教材 多媒體課件【友誼分享】GOOD GOOD STUDAY, DAY DAY UP 2 微生物的分別、培育和菌種保微生物的分別、培育和菌種保藏藏v目的要求目的要求v實(shí)驗(yàn)資料實(shí)驗(yàn)資料v實(shí)驗(yàn)程序?qū)嶒?yàn)程序v思索題思索題學(xué)習(xí) 教程 教材 多媒體課件【友誼分享】GOOD GOOD STUDAY, DAY DAY UP 3目

2、的要求目的要求v掌握倒平板的方法和幾種常用的分別純化掌握倒平板的方法和幾種常用的分別純化微生物的根本操作計(jì)數(shù)。微生物的根本操作計(jì)數(shù)。v練習(xí)微生物接種、移植和培育的根本技術(shù)，練習(xí)微生物接種、移植和培育的根本技術(shù)，掌握無菌操作技術(shù)。掌握無菌操作技術(shù)。學(xué)習(xí) 教程 教材 多媒體課件【友誼分享】GOOD GOOD STUDAY, DAY DAY UP 4實(shí)驗(yàn)資料實(shí)驗(yàn)資料v樣品：新穎土壤。樣品：新穎土壤。v培育基：牛肉膏蛋白胨瓊脂培育基培育基：牛肉膏蛋白胨瓊脂培育基v 淀粉瓊脂培育基淀粉瓊脂培育基v 馬鈴薯蔗糖培育基馬鈴薯蔗糖培育基v無菌水：帶有玻璃珠裝有無菌水：帶有玻璃珠裝有99mL無菌水三角瓶無菌水三

3、角瓶v 裝有裝有9mL無菌水的試管。無菌水的試管。v其它：無菌培育皿、無菌吸管、無菌三角玻棒、臺(tái)天平、其它：無菌培育皿、無菌吸管、無菌三角玻棒、臺(tái)天平、記號(hào)筆、記號(hào)筆、 v 接種環(huán)、酒精燈、火柴、標(biāo)簽紙。接種環(huán)、酒精燈、火柴、標(biāo)簽紙。v試劑：試劑：5000U/mL鏈霉素液鏈霉素液 v 0.5重鉻酸鉀液重鉻酸鉀液學(xué)習(xí) 教程 教材 多媒體課件【友誼分享】GOOD GOOD STUDAY, DAY DAY UP 5實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 總總 流流 程程圖圖71 從土壤分別微生物操作過程從土壤分別微生物操作過程學(xué)習(xí) 教程 教材 多媒體課件【友誼分享】GOOD GOOD STUDAY, DAY DAY UP 6實(shí)

4、驗(yàn)程序?qū)嶒?yàn)程序 倒平板倒平板的方法的方法 將培育基加熱融化，待冷卻至將培育基加熱融化，待冷卻至5560 0C時(shí)，倒平板。時(shí)，倒平板。點(diǎn)擊錄像點(diǎn)擊錄像學(xué)習(xí) 教程 教材 多媒體課件【友誼分享】GOOD GOOD STUDAY, DAY DAY UP 7實(shí)驗(yàn)程序?qū)嶒?yàn)程序制備土壤稀釋液制備土壤稀釋液v制備土壤稀釋液：制備土壤稀釋液：(無菌操作過程見教師示范無菌操作過程見教師示范 1. 稱取土壤稱取土壤1g，放入，放入99mL無菌水的三角瓶中，振蕩無菌水的三角瓶中，振蕩10min，即為稀釋，即為稀釋102的土壤懸液。的土壤懸液。 v 2. 另取裝有無菌試管另取裝有無菌試管5支，用記號(hào)筆編上支，用記號(hào)筆編

5、上103、104、105、106 、107 。在每只試管中用無菌吸管參與。在每只試管中用無菌吸管參與4.5ml無菌水。無菌水。v 3.取已稀釋成取已稀釋成102的土壤液，振蕩后靜止的土壤液，振蕩后靜止0.5min，用無菌吸管汲取，用無菌吸管汲取0.5mL土壤懸液參與土壤懸液參與103的無菌水的試管中，并在試管內(nèi)悄然吹吸數(shù)的無菌水的試管中，并在試管內(nèi)悄然吹吸數(shù)次，使之充分混勻，即成次，使之充分混勻，即成103土壤稀釋液。同法依次延續(xù)稀釋至土壤稀釋液。同法依次延續(xù)稀釋至104 10 5 106土壤稀釋液。土壤稀釋液。在土壤稀釋過程中，運(yùn)用一支在土壤稀釋過程中，運(yùn)用一支吸管由濃到稀，稀釋究竟，稀吸管

6、由濃到稀，稀釋究竟，稀釋方法見圖釋方法見圖73。四人成一組，每人選取一個(gè)稀四人成一組，每人選取一個(gè)稀釋度的土壤稀釋液做以下的三釋度的土壤稀釋液做以下的三個(gè)步驟。個(gè)步驟。學(xué)習(xí) 教程 教材 多媒體課件【友誼分享】GOOD GOOD STUDAY, DAY DAY UP 8實(shí)驗(yàn)程序?qū)嶒?yàn)程序 稀釋平板法稀釋平板法混合法混合法v涂平板：每人取培育皿涂平板：每人取培育皿1 1付，即每個(gè)同窗做一只。付，即每個(gè)同窗做一只。 v1.1.先在無菌培育皿底部貼上標(biāo)簽，注明分別菌名、稀釋度、組別、先在無菌培育皿底部貼上標(biāo)簽，注明分別菌名、稀釋度、組別、班級(jí)。班級(jí)。 v2.2.另取一吸管，以無菌操作法汲取相應(yīng)的土壤稀釋

7、液另取一吸管，以無菌操作法汲取相應(yīng)的土壤稀釋液0.1mL0.1mL，加在無菌培，加在無菌培育皿里。育皿里。 v3.3.取已熔化的在水浴鍋中保溫取已熔化的在水浴鍋中保溫500C500C左右的馬鈴薯培育基左右的馬鈴薯培育基PDAPDA培育基，培育基，分別倒約分別倒約151520ml20ml入上述培育皿中，悄然轉(zhuǎn)動(dòng)培育皿，使菌液、培育基入上述培育皿中，悄然轉(zhuǎn)動(dòng)培育皿，使菌液、培育基充分混勻鋪平，放在平坦的桌面上，凝固后，倒置于充分混勻鋪平，放在平坦的桌面上，凝固后，倒置于2828300C300C恒溫培育恒溫培育5 56d6d。察看真菌菌落形狀以及計(jì)數(shù)。察看真菌菌落形狀以及計(jì)數(shù) 菌落。并計(jì)算出每菌落。

8、并計(jì)算出每g g土壤中真菌的數(shù)土壤中真菌的數(shù)量。即用某一培育皿內(nèi)真菌的菌落數(shù)乘以該培育皿接種液的稀釋倍數(shù)即量。即用某一培育皿內(nèi)真菌的菌落數(shù)乘以該培育皿接種液的稀釋倍數(shù)即得。得。 見圖見圖7 74 4每毫升樣品中微生物細(xì)胞數(shù)每毫升樣品中微生物細(xì)胞數(shù)=每皿菌落平均數(shù)每皿菌落平均數(shù) 1/取樣體積數(shù)取樣體積數(shù)稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)學(xué)習(xí) 教程 教材 多媒體課件【友誼分享】GOOD GOOD STUDAY, DAY DAY UP 9混勻混勻凝固凝固2830培育培育圖圖74 混合法流程圖混合法流程圖學(xué)習(xí) 教程 教材 多媒體課件【友誼分享】GOOD GOOD STUDAY, DAY DAY UP 10實(shí)驗(yàn)程序?qū)嶒?yàn)程

9、序 平板涂抹法涂布平板涂抹法涂布法法v每人取無菌培育皿每人取無菌培育皿1付每個(gè)同窗做一只。在皿底貼上標(biāo)簽，注明付每個(gè)同窗做一只。在皿底貼上標(biāo)簽，注明分別菌名、稀釋度、組別、班級(jí)。分別菌名、稀釋度、組別、班級(jí)。v取已熔化的高氏培育基，分別倒取已熔化的高氏培育基，分別倒1520ml入培育皿中，鋪平，制成平入培育皿中，鋪平，制成平板。板。v凝固后，另取一支吸管汲取相應(yīng)的土壤稀釋液凝固后，另取一支吸管汲取相應(yīng)的土壤稀釋液0.2mL放在平板上。放在平板上。v用無菌三角玻棒將稀釋液在平板外表涂抹均勻。倒置于用無菌三角玻棒將稀釋液在平板外表涂抹均勻。倒置于28300C條條件下培育件下培育34d，察看放線菌菌

10、落形狀及計(jì)數(shù)菌落，并計(jì)算出每，察看放線菌菌落形狀及計(jì)數(shù)菌落，并計(jì)算出每g土壤土壤中放線菌的數(shù)量方法同上。假設(shè)樣品稀釋適當(dāng)?shù)脑?，微生物能一中放線菌的數(shù)量方法同上。假設(shè)樣品稀釋適當(dāng)?shù)脑?，微生物能一一分散，?jīng)培育后，可在平板外表得到單菌落。一分散，經(jīng)培育后，可在平板外表得到單菌落。v挑取單個(gè)菌落，接種于相應(yīng)的斜面培育基上，假設(shè)不純，再移植純化，挑取單個(gè)菌落，接種于相應(yīng)的斜面培育基上，假設(shè)不純，再移植純化，至最后得到純培育為止。至最后得到純培育為止。每毫升樣品中微生物細(xì)胞數(shù)每毫升樣品中微生物細(xì)胞數(shù)=每皿菌落平均數(shù)每皿菌落平均數(shù) 1/取樣體積數(shù)取樣體積數(shù)稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)學(xué)習(xí) 教程 教材 多媒體課件【友誼

11、分享】GOOD GOOD STUDAY, DAY DAY UP 11凝凝固固后后2830培育培育圖圖75 涂布法流程圖涂布法流程圖學(xué)習(xí) 教程 教材 多媒體課件【友誼分享】GOOD GOOD STUDAY, DAY DAY UP 12實(shí)驗(yàn)程序?qū)嶒?yàn)程序 平板劃線法平板劃線法v每人取無菌培育皿每人取無菌培育皿1付，在皿底貼上標(biāo)簽，注明事項(xiàng)。付，在皿底貼上標(biāo)簽，注明事項(xiàng)。v取已熔化的牛肉膏蛋白胨培育基，倒入平皿，制成平板。取已熔化的牛肉膏蛋白胨培育基，倒入平皿，制成平板。v凝固后，用接種環(huán)取相應(yīng)的凝固后，用接種環(huán)取相應(yīng)的 菌液一環(huán)菌液一環(huán)102或或103在平板上劃線在平板上劃線教師作示范。教師作示范。

12、 1.延續(xù)劃線法：將挑取有樣品的接種延續(xù)劃線法：將挑取有樣品的接種環(huán)在平板培育基外表作延續(xù)劃線。環(huán)在平板培育基外表作延續(xù)劃線。終了后，倒置于終了后，倒置于2830溫室培育。溫室培育。 圖圖76 延續(xù)劃線法圖延續(xù)劃線法圖學(xué)習(xí) 教程 教材 多媒體課件【友誼分享】GOOD GOOD STUDAY, DAY DAY UP 132.分區(qū)劃線法：用接種環(huán)以無分區(qū)劃線法：用接種環(huán)以無菌操作挑取土壤稀釋液菌操作挑取土壤稀釋液1環(huán)，環(huán)，先在培育基的一邊作第一次平先在培育基的一邊作第一次平行劃線行劃線34條，再轉(zhuǎn)動(dòng)培育皿條，再轉(zhuǎn)動(dòng)培育皿約約600角，并將接種環(huán)上剩余角，并將接種環(huán)上剩余物燒掉，待冷卻后經(jīng)過第一次物

13、燒掉，待冷卻后經(jīng)過第一次劃線部分作第二次劃線會(huì)，同劃線部分作第二次劃線會(huì)，同法依次作第三次和第四次劃線。法依次作第三次和第四次劃線。劃線終了，蓋上皿蓋，倒置于劃線終了，蓋上皿蓋，倒置于2830溫室培育。溫室培育。挑取單個(gè)菌落接種于斜面培育基挑取單個(gè)菌落接種于斜面培育基上，假設(shè)不純，再移植純化，最上，假設(shè)不純，再移植純化，最后得到純培育。后得到純培育。學(xué)習(xí) 教程 教材 多媒體課件【友誼分享】GOOD GOOD STUDAY, DAY DAY UP 14實(shí)驗(yàn)程序?qū)嶒?yàn)程序四大類微生物菌落形四大類微生物菌落形狀的比較和識(shí)別狀的比較和識(shí)別v區(qū)分和識(shí)別各大類微生物通常包括菌落形狀群體形狀區(qū)分和識(shí)別各大類微

14、生物通常包括菌落形狀群體形狀和細(xì)胞形狀個(gè)體形狀兩方面的察看。和細(xì)胞形狀個(gè)體形狀兩方面的察看。v菌落形狀：菌落形狀： 菌落外表潮濕：細(xì)菌菌落外表潮濕：細(xì)菌薄而小，酵母菌薄而小，酵母菌厚而大。厚而大。 v 菌落外表枯燥：放線菌菌落外表枯燥：放線菌密而小，霉菌密而小，霉菌松而大。松而大。v細(xì)胞形狀：細(xì)胞形狀： 細(xì)菌細(xì)菌小而分散小而分散 酵母菌酵母菌大而分散大而分散 放線菌放線菌絲狀細(xì)絲狀細(xì) 霉菌霉菌絲狀粗絲狀粗學(xué)習(xí) 教程 教材 多媒體課件【友誼分享】GOOD GOOD STUDAY, DAY DAY UP 15表表 7-1 細(xì)菌、放線菌、霉菌和酵母菌的菌落形狀比較細(xì)菌、放線菌、霉菌和酵母菌的菌落形狀

15、比較學(xué)習(xí) 教程 教材 多媒體課件【友誼分享】GOOD GOOD STUDAY, DAY DAY UP 16結(jié)結(jié) 果果 記記 錄錄v1.他所做的涂布平板法和劃線法能否較好地他所做的涂布平板法和劃線法能否較好地得到了單菌落？假設(shè)不是，請(qǐng)分析緣由。得到了單菌落？假設(shè)不是，請(qǐng)分析緣由。v2.在三種不同平板上他分別得到哪些類群的在三種不同平板上他分別得到哪些類群的微生物？簡(jiǎn)述它們的菌落特征。微生物？簡(jiǎn)述它們的菌落特征。學(xué)習(xí) 教程 教材 多媒體課件【友誼分享】GOOD GOOD STUDAY, DAY DAY UP 17思思 考考 題題v什么叫無菌操作？分別放線菌和真菌為什么什么叫無菌操作？分別放線菌和真菌為什么需求分別加重鉻酸鉀和鏈霉素？需求分別加重鉻酸鉀和鏈霉素？v平板培育時(shí)為什么要把培