臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置、質(zhì)量演示教學(xué)

1、臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置、質(zhì)量管理題外話：題外話：n不參加實(shí)習(xí)課不參加實(shí)習(xí)課？n參加實(shí)習(xí)課參加實(shí)習(xí)課？污染的判斷：污染的判斷：n經(jīng)驗(yàn)：經(jīng)驗(yàn)： 全陽性，全陽性，CTCT值值3535；標(biāo)準(zhǔn)品的；標(biāo)準(zhǔn)品的CTCT值發(fā)生波動值發(fā)生波動 陰性質(zhì)控陽性陰性質(zhì)控陽性 陽性率異常增高陽性率異常增高n輕微污染和非特異性擴(kuò)增？輕微污染和非特異性擴(kuò)增？污染和非特異性擴(kuò)增污染和非特異性擴(kuò)增: :n目的基因目的基因n過程控制過程控制n反應(yīng)體系反應(yīng)體系（引物、模版、（引物、模版、酶、鎂離子、退火、循環(huán)）酶、鎂離子、退火、循環(huán)）n條件優(yōu)化條件優(yōu)化控制的手段：控制的手段：n工作區(qū)的嚴(yán)格劃分工作區(qū)的嚴(yán)格劃分nSOPSOP的

2、制訂和嚴(yán)格執(zhí)行的制訂和嚴(yán)格執(zhí)行n去污染措施的常規(guī)采用去污染措施的常規(guī)采用污染的監(jiān)測：污染的監(jiān)測：n陰性質(zhì)控的設(shè)置：陰性質(zhì)控的設(shè)置： 陰性血清樣本陰性血清樣本 以水為模擬標(biāo)本以水為模擬標(biāo)本 僅含擴(kuò)增反應(yīng)液僅含擴(kuò)增反應(yīng)液 （加鑒別實(shí)驗(yàn)室是否污染的空白管（加鑒別實(shí)驗(yàn)室是否污染的空白管) )質(zhì)控品的位置質(zhì)控品的位置標(biāo)準(zhǔn)品空白標(biāo)準(zhǔn)品空白陽性質(zhì)控陰性質(zhì)控陽性質(zhì)控陰性質(zhì)控臨床樣本臨床樣本標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品空白空白陽性質(zhì)控臨床樣本陰性質(zhì)控陽性質(zhì)控臨床樣本陰性質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置n管理要求：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)和工作規(guī)范管理要求：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)和工作規(guī)范n具體落實(shí)：實(shí)事求是、因地制宜具體落實(shí)：實(shí)事求是、因地制宜設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)和工作規(guī)

3、范設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)和工作規(guī)范 “原則上分為四個分隔的工作區(qū)；原則上分為四個分隔的工作區(qū)； 各區(qū)必須各區(qū)必須有明確的標(biāo)記有明確的標(biāo)記” “ “每一區(qū)域都須有專用的儀器每一區(qū)域都須有專用的儀器；不同的工作；不同的工作區(qū)應(yīng)使用不同顏色或有明顯區(qū)別標(biāo)志的工作服區(qū)應(yīng)使用不同顏色或有明顯區(qū)別標(biāo)志的工作服；離開工作區(qū)時，不得將各區(qū)特定的工作服帶出離開工作區(qū)時，不得將各區(qū)特定的工作服帶出” “ “，可在開展臨床標(biāo)本檢測前對提取方法進(jìn)，可在開展臨床標(biāo)本檢測前對提取方法進(jìn)行評價行評價” “ “，本區(qū)如采用副壓條件或減壓情況下可減，本區(qū)如采用副壓條件或減壓情況下可減少擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至前區(qū)的可能性。少擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)擴(kuò)散至

4、前區(qū)的可能性。理想的設(shè)置理想的設(shè)置緩沖間緩沖間擴(kuò)增區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)樣本制備區(qū)產(chǎn)物分析區(qū)空氣流向空氣流向空氣流向緩沖間專用走廊工作流向磁性連鎖裝置磁性連鎖裝置現(xiàn)實(shí)的問題是：現(xiàn)實(shí)的問題是：n建筑結(jié)構(gòu)建筑結(jié)構(gòu)n通道、門通道、門n水電供應(yīng)水電供應(yīng)n采光、通風(fēng)采光、通風(fēng)基本的要求基本的要求: :n四個區(qū)域必須是相互獨(dú)立的四個區(qū)域必須是相互獨(dú)立的n各區(qū)的儀器設(shè)備及各種物品必須是專用的各區(qū)的儀器設(shè)備及各種物品必須是專用的n各區(qū)間不能直通，應(yīng)有緩沖間，供換工作各區(qū)間不能直通，應(yīng)有緩沖間，供換工作服及鞋子用服及鞋子用n產(chǎn)物分析區(qū)應(yīng)安裝排風(fēng)扇或其它抽風(fēng)裝置。產(chǎn)物分析區(qū)應(yīng)安裝排風(fēng)扇或其它抽風(fēng)裝置。擴(kuò)增區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)樣本制

5、備區(qū)產(chǎn)物檢測區(qū)其它實(shí)驗(yàn)室走 廊實(shí)例：實(shí)例：其它實(shí)驗(yàn)室樣本制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)產(chǎn)品檢測區(qū)走廊實(shí)例：實(shí)例：實(shí)例：實(shí)例：產(chǎn)物檢測區(qū)擴(kuò)增區(qū)樣本制備區(qū)其它實(shí)驗(yàn)室休息區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)擴(kuò) 增區(qū)產(chǎn)物檢測區(qū)走廊模板加樣區(qū)實(shí)例：實(shí)例：樣本處理區(qū)實(shí)例：實(shí)例：小結(jié)：小結(jié)：n處理原則的核心是通過合理的設(shè)置處理原則的核心是通過合理的設(shè)置解決好臨床解決好臨床PCRPCR檢測實(shí)際運(yùn)作檢測實(shí)際運(yùn)作動態(tài)過動態(tài)過程程中可能發(fā)生的污染的預(yù)防問題中可能發(fā)生的污染的預(yù)防問題n因此，實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計必須充分考慮因此，實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計必須充分考慮到對污染來源和污染途徑的預(yù)防和到對污染來源和污染途徑的預(yù)防和控制控制實(shí)驗(yàn)室各區(qū)的功能和配置：實(shí)驗(yàn)室各區(qū)的功

6、能和配置：試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)n儲存試劑的制備儲存試劑的制備n試劑的分裝試劑的分裝n主反應(yīng)混合液的制備主反應(yīng)混合液的制備n冰箱冰箱n混勻器混勻器n微量加樣器微量加樣器n可移動紫外燈可移動紫外燈n專用工作服和工作鞋專用工作服和工作鞋n消耗品（帶濾心吸頭、離消耗品（帶濾心吸頭、離心管、一次性手套等）心管、一次性手套等）n專用辦公用品等。專用辦公用品等。標(biāo)本制備區(qū)：標(biāo)本制備區(qū)：n臨床標(biāo)本的保存臨床標(biāo)本的保存 n核酸提取、儲存核酸提取、儲存及其及其加入至擴(kuò)增加入至擴(kuò)增反應(yīng)管反應(yīng)管n測定測定RNARNA時時cDNAcDNA的的合成合成n不得在本區(qū)對樣不得在本區(qū)對樣本進(jìn)行本進(jìn)行PCRPCR擴(kuò)增

7、擴(kuò)增n冰箱冰箱 (28(28和和-20-20或或-80)-80)n高速臺式冷凍離心機(jī)高速臺式冷凍離心機(jī)n水浴箱和水浴箱和/ /或加熱模塊或加熱模塊n生物安全柜生物安全柜n混勻器混勻器n微量加樣器微量加樣器n可移動紫外燈可移動紫外燈n專用工作服和工作鞋專用工作服和工作鞋n專用專用消耗品消耗品n專用辦公用品等專用辦公用品等擴(kuò)增區(qū)：擴(kuò)增區(qū)：nDNA DNA 或或cDNAcDNA擴(kuò)增擴(kuò)增n已制備的已制備的DNADNA模板和合模板和合成的成的cDNAcDNA的加入的加入n主反應(yīng)混合液制備成反主反應(yīng)混合液制備成反應(yīng)混合液應(yīng)混合液n如果空間允許的話，模如果空間允許的話，模板的加入也可以在一個板的加入也可以在

8、一個獨(dú)立的空間內(nèi)完成獨(dú)立的空間內(nèi)完成n核酸擴(kuò)增儀核酸擴(kuò)增儀n微量加樣器微量加樣器( (視情況視情況定定) )n可移動紫外燈可移動紫外燈n專用工作服和工作鞋專用工作服和工作鞋n專用消耗品專用消耗品n專用辦公用品等專用辦公用品等產(chǎn)物分析區(qū)：產(chǎn)物分析區(qū)：n擴(kuò)增片段的測定擴(kuò)增片段的測定n最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源染來源n有可能使用致突變和有可能使用致突變和有毒物質(zhì)有毒物質(zhì)n微量加樣器微量加樣器n可移動紫外燈可移動紫外燈n專用工作服和工作鞋專用工作服和工作鞋n專用消耗品專用消耗品n專用辦公用品等專用辦公用品等輔助用房：輔助用房：n清潔區(qū)清潔區(qū)n標(biāo)本接受區(qū)：標(biāo)本接受區(qū)：靈活設(shè)置靈活設(shè)置 不

9、干擾四區(qū)不干擾四區(qū) 規(guī)范的保存和傳遞規(guī)范的保存和傳遞實(shí)驗(yàn)室使用和管理：實(shí)驗(yàn)室使用和管理：標(biāo)本接受區(qū)標(biāo)本接受區(qū)樣本制備區(qū)樣本制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增區(qū)產(chǎn)物分析區(qū)產(chǎn)物分析區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)區(qū)域的適當(dāng)合并：區(qū)域的適當(dāng)合并： “由于測定技術(shù)總是在發(fā)展之中，由于測定技術(shù)總是在發(fā)展之中，區(qū)域的合并應(yīng)根據(jù)儀器的特點(diǎn)而定區(qū)域的合并應(yīng)根據(jù)儀器的特點(diǎn)而定”小結(jié)：小結(jié)：n從核心儀器特點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)室的現(xiàn)狀出發(fā)，從核心儀器特點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)室的現(xiàn)狀出發(fā)，綜合考慮管理要求綜合考慮管理要求n盡可能在現(xiàn)有條件下滿足管理要求盡可能在現(xiàn)有條件下滿足管理要求n以管理措施彌補(bǔ)硬件的不足以管理措施彌補(bǔ)硬件的不足n有條件，留有余地有條件，留有余地n再好

10、的分區(qū)設(shè)置，如果不輔之與認(rèn)真執(zhí)再好的分區(qū)設(shè)置，如果不輔之與認(rèn)真執(zhí)行的相應(yīng)的管理制度，等同于無。行的相應(yīng)的管理制度，等同于無。實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量體系的建立實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量體系的建立：n管理要求管理要求n體系建立體系建立管理要求：管理要求：1 1 實(shí)驗(yàn)室設(shè)置和設(shè)備實(shí)驗(yàn)室設(shè)置和設(shè)備1.1 1.1 實(shí)驗(yàn)室原則上應(yīng)分為四個區(qū)，但如使實(shí)驗(yàn)室原則上應(yīng)分為四個區(qū)，但如使 用全自動擴(kuò)增檢測儀，區(qū)域可適當(dāng)合用全自動擴(kuò)增檢測儀，區(qū)域可適當(dāng)合 并。并。1.2 1.2 各工作區(qū)的明確標(biāo)記各工作區(qū)的明確標(biāo)記1.3 1.3 實(shí)驗(yàn)室設(shè)置應(yīng)能有效地防止實(shí)驗(yàn)室設(shè)置應(yīng)能有效地防止PCRPCR后區(qū)產(chǎn)后區(qū)產(chǎn) 物的污染。物的污染。 管理要求：管理要求

11、：2 2 設(shè)施和環(huán)境設(shè)施和環(huán)境2.1 2.1 實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施、工作區(qū)域、能源、照明、實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施、工作區(qū)域、能源、照明、 溫控、通風(fēng)等。應(yīng)便于檢測工作的正常進(jìn)行。溫控、通風(fēng)等。應(yīng)便于檢測工作的正常進(jìn)行。2.2 2.2 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備溫度濕度計、穩(wěn)壓電源等。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備溫度濕度計、穩(wěn)壓電源等。2.3 2.3 進(jìn)入和使用實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域應(yīng)有明確的限制和進(jìn)入和使用實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域應(yīng)有明確的限制和 控制?？刂啤?.4 2.4 應(yīng)有實(shí)驗(yàn)室清潔、消毒制度及相應(yīng)用具；應(yīng)有實(shí)驗(yàn)室清潔、消毒制度及相應(yīng)用具；2.5 2.5 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有有關(guān)生物污染物處理、生物防護(hù)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有有關(guān)生物污染物處理、生物防護(hù) 等措施及相應(yīng)用具；等措施

12、及相應(yīng)用具；管理要求：管理要求：3 3 人員人員3.1 3.1 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備足夠數(shù)量的人員；實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備足夠數(shù)量的人員； 這些人這些人 員必須經(jīng)過培訓(xùn)，并取得上崗證；員必須經(jīng)過培訓(xùn)，并取得上崗證；3.2 3.2 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有培訓(xùn)計劃和措施，保證其技術(shù)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有培訓(xùn)計劃和措施，保證其技術(shù) 人員得到及時培訓(xùn)。人員得到及時培訓(xùn)。3.3 3.3 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保存其技術(shù)人員有關(guān)資格證書實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保存其技術(shù)人員有關(guān)資格證書 （如上崗證）、培訓(xùn)、技能和經(jīng)歷等技術(shù)檔案。（如上崗證）、培訓(xùn)、技能和經(jīng)歷等技術(shù)檔案。管理要求：管理要求：4 4 設(shè)備管理設(shè)備管理4.1 4.1 主要設(shè)備應(yīng)有維護(hù)程序文件及維護(hù)記錄；主要設(shè)備應(yīng)有

13、維護(hù)程序文件及維護(hù)記錄；4.2 (a)4.2 (a)有問題的設(shè)備應(yīng)立即停止使用，并加上明顯標(biāo)識，如可有問題的設(shè)備應(yīng)立即停止使用，并加上明顯標(biāo)識，如可 能應(yīng)將其貯存在規(guī)定的地方直至修復(fù)；能應(yīng)將其貯存在規(guī)定的地方直至修復(fù)；(b)(b)修復(fù)的設(shè)備必須修復(fù)的設(shè)備必須 經(jīng)校準(zhǔn)、檢定（驗(yàn)證）或檢測滿足要求后方能再次投入使經(jīng)校準(zhǔn)、檢定（驗(yàn)證）或檢測滿足要求后方能再次投入使 用；用；(c)(c)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)檢查由于上述缺陷對以前所進(jìn)行的檢測工實(shí)驗(yàn)室應(yīng)檢查由于上述缺陷對以前所進(jìn)行的檢測工 作的影響。作的影響。4.3 4.3 加樣器、溫度計、擴(kuò)增儀和酶標(biāo)儀等應(yīng)有校準(zhǔn)程序并進(jìn)行加樣器、溫度計、擴(kuò)增儀和酶標(biāo)儀等應(yīng)有校準(zhǔn)程

14、序并進(jìn)行 校準(zhǔn)，擴(kuò)增儀和酶標(biāo)儀應(yīng)有明顯的標(biāo)識表明其校準(zhǔn)狀態(tài)。校準(zhǔn)，擴(kuò)增儀和酶標(biāo)儀應(yīng)有明顯的標(biāo)識表明其校準(zhǔn)狀態(tài)。4.4 4.4 應(yīng)保存擴(kuò)增儀、酶標(biāo)儀、生物安全柜、加樣器等設(shè)備的檔應(yīng)保存擴(kuò)增儀、酶標(biāo)儀、生物安全柜、加樣器等設(shè)備的檔 案案管理要求：管理要求：5 5 檢測方法檢測方法5.1 5.1 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定：實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定：有關(guān)儀器設(shè)備操作程有關(guān)儀器設(shè)備操作程 序；序；有關(guān)擴(kuò)增檢測的工作程序。有關(guān)擴(kuò)增檢測的工作程序。5.2 5.2 所有上述標(biāo)準(zhǔn)操作程序都應(yīng)現(xiàn)行有效并便所有上述標(biāo)準(zhǔn)操作程序都應(yīng)現(xiàn)行有效并便 于工作人員使用。于工作人員使用。5.3 5.3 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有儀器、試劑、消耗品的選購、實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有儀

15、器、試劑、消耗品的選購、 驗(yàn)收、貯存和質(zhì)檢程序；驗(yàn)收、貯存和質(zhì)檢程序； 必須使用經(jīng)國必須使用經(jīng)國 家有關(guān)部門批準(zhǔn)的試劑和儀器。家有關(guān)部門批準(zhǔn)的試劑和儀器。管理要求：管理要求：6 6 標(biāo)本管理標(biāo)本管理6.1 6.1 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立對擬檢測標(biāo)本的唯一編號識別系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立對擬檢測標(biāo)本的唯一編號識別系統(tǒng)。6.2 6.2 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定有關(guān)標(biāo)本收集、處理、運(yùn)送、貯存實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定有關(guān)標(biāo)本收集、處理、運(yùn)送、貯存 程序。程序。6.3 6.3 在接收標(biāo)本時應(yīng)有其狀態(tài)的詳細(xì)記錄。在接收標(biāo)本時應(yīng)有其狀態(tài)的詳細(xì)記錄。6.4 6.4 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確定標(biāo)本是否符合檢測要求實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確定標(biāo)本是否符合檢測要求, , 拒收標(biāo)本拒收

16、標(biāo)本 原因要明確。原因要明確。6.5 6.5 如果標(biāo)本必須在特定的環(huán)境條件下（如如果標(biāo)本必須在特定的環(huán)境條件下（如2-82-8、 -20-20和和-70-70低溫）貯存，則應(yīng)對這些條件加以低溫）貯存，則應(yīng)對這些條件加以 維持、監(jiān)控和記錄；維持、監(jiān)控和記錄；管理要求：管理要求：7 7 記錄記錄7.1 7.1 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有適合自身實(shí)際情況又符合現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有適合自身實(shí)際情況又符合現(xiàn) 行規(guī)章制度的記錄管理制度；行規(guī)章制度的記錄管理制度；7.2 7.2 記錄應(yīng)有參與標(biāo)本收集、標(biāo)本準(zhǔn)備和處記錄應(yīng)有參與標(biāo)本收集、標(biāo)本準(zhǔn)備和處 理、檢測的人員簽字。理、檢測的人員簽字。7.3 7.3 所有記錄和報告都應(yīng)安全貯存、

17、妥善保所有記錄和報告都應(yīng)安全貯存、妥善保 管并保密。管并保密。管理要求：管理要求：8 8 報告報告8.1 8.1 檢測結(jié)果的報告應(yīng)準(zhǔn)確、清晰和客觀。定性測定報告檢測結(jié)果的報告應(yīng)準(zhǔn)確、清晰和客觀。定性測定報告“陰陰 性性”或或“陽性陽性”；定量測定則以拷貝數(shù)；定量測定則以拷貝數(shù)/ml/ml或或IU/mlIU/ml報告。報告。8.2 8.2 每份報告應(yīng)包括以下信息：（每份報告應(yīng)包括以下信息：（a a）標(biāo)題，例如）標(biāo)題，例如“檢測報告檢測報告” （b b）報告的唯一性標(biāo)識（如序號）；（）報告的唯一性標(biāo)識（如序號）；（c c）檢測標(biāo)本的特性）檢測標(biāo)本的特性 和狀態(tài)；（和狀態(tài)；（d d）檢測標(biāo)本的接收時

18、間和進(jìn)行檢測的時間；）檢測標(biāo)本的接收時間和進(jìn)行檢測的時間； （f f）采用的檢測方法；（）采用的檢測方法；（g g）實(shí)驗(yàn)操作及校核人員的簽字，）實(shí)驗(yàn)操作及校核人員的簽字， 以及簽發(fā)日期；（以及簽發(fā)日期；（h h）檢測報告中應(yīng)給出參考結(jié)果或范圍；）檢測報告中應(yīng)給出參考結(jié)果或范圍；8.3 8.3 當(dāng)報告的有效性發(fā)生疑問時，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)立即通知臨床相關(guān)當(dāng)報告的有效性發(fā)生疑問時，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)立即通知臨床相關(guān) 科室予以改正?？剖矣枰愿恼?.4 8.4 當(dāng)臨床科室或患者要求用電話、圖文傳真或其它電子和電當(dāng)臨床科室或患者要求用電話、圖文傳真或其它電子和電 磁設(shè)備傳送結(jié)果時，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保證工作人員遵循文件化的磁設(shè)備傳

19、送結(jié)果時，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保證工作人員遵循文件化的 程序，并為對方保密。程序，并為對方保密。管理要求：管理要求：9 9 質(zhì)量控制質(zhì)量控制9.1 9.1 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有室內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)操作程序?qū)嶒?yàn)室應(yīng)有室內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)操作程序 文件：（文件：（a a）質(zhì)控物的合理性；）質(zhì)控物的合理性； （b b）質(zhì)控方法（圖）的有效性；）質(zhì)控方法（圖）的有效性； （c c）失控的判斷；）失控的判斷； （d d）失控的措施。）失控的措施。9.2 9.2 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)參加室間質(zhì)量評價實(shí)驗(yàn)室應(yīng)參加室間質(zhì)量評價管理要求：管理要求：10 10 抱怨抱怨10.1 10.1 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定抱怨及其處理的標(biāo)準(zhǔn)操作程序；應(yīng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定抱怨及其處理

20、的標(biāo)準(zhǔn)操作程序；應(yīng) 將抱怨資料及處理抱怨所采取的措施及結(jié)果記錄將抱怨資料及處理抱怨所采取的措施及結(jié)果記錄 歸檔保存。歸檔保存。10.2 10.2 當(dāng)抱怨或其它任何事項(xiàng)是對實(shí)驗(yàn)室是否符合其現(xiàn)當(dāng)抱怨或其它任何事項(xiàng)是對實(shí)驗(yàn)室是否符合其現(xiàn) 行程序、或者是否符合行程序、或者是否符合臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管 理暫行辦法理暫行辦法和和臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室工作規(guī) 范范、或是對其它有關(guān)實(shí)驗(yàn)室校準(zhǔn)或檢測質(zhì)量提、或是對其它有關(guān)實(shí)驗(yàn)室校準(zhǔn)或檢測質(zhì)量提 出疑問時，則實(shí)驗(yàn)室應(yīng)立即對這些范圍的工作和出疑問時，則實(shí)驗(yàn)室應(yīng)立即對這些范圍的工作和 有關(guān)職責(zé)進(jìn)行審核。有關(guān)職責(zé)進(jìn)行審核。管理要求

21、（現(xiàn)場考核）：管理要求（現(xiàn)場考核）：n送審的文件描述與實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況的一送審的文件描述與實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況的一致性致性n實(shí)際運(yùn)行與文件規(guī)定的一致性實(shí)際運(yùn)行與文件規(guī)定的一致性n人員素質(zhì)：對文件的認(rèn)知、熟悉、靈活人員素質(zhì)：對文件的認(rèn)知、熟悉、靈活運(yùn)用程度運(yùn)用程度現(xiàn)場考核的實(shí)際內(nèi)涵：現(xiàn)場考核的實(shí)際內(nèi)涵：n認(rèn)識到不到位認(rèn)識到不到位n落實(shí)到不到位落實(shí)到不到位n符合性檢查加指導(dǎo)性檢查符合性檢查加指導(dǎo)性檢查n有重點(diǎn)的全面檢查有重點(diǎn)的全面檢查建立質(zhì)量管理體系首先要解決的問題：建立質(zhì)量管理體系首先要解決的問題：n第一個問題：質(zhì)量體系建立的核心問題第一個問題：質(zhì)量體系建立的核心問題是什么？是什么？n第二個問題：質(zhì)量體

22、系模式要達(dá)到的管第二個問題：質(zhì)量體系模式要達(dá)到的管理目的是什么？理目的是什么？n第三個問題：達(dá)到目的的方法（途徑、第三個問題：達(dá)到目的的方法（途徑、手段）是什么？手段）是什么？質(zhì)量體系的定義質(zhì)量體系的定義 為實(shí)施質(zhì)量管理所需的組織結(jié)為實(shí)施質(zhì)量管理所需的組織結(jié)構(gòu)、程序、過程和資源。構(gòu)、程序、過程和資源。n要點(diǎn)：定義涵蓋了實(shí)驗(yàn)室管理的每一個要點(diǎn)：定義涵蓋了實(shí)驗(yàn)室管理的每一個 方面。方面。 n組織結(jié)構(gòu)：一個組織為行使其職能，按某組織結(jié)構(gòu)：一個組織為行使其職能，按某種方式建立的職責(zé)、權(quán)限及其相互關(guān)系。種方式建立的職責(zé)、權(quán)限及其相互關(guān)系。n程序：為進(jìn)行某項(xiàng)活動所規(guī)定的途徑。程序：為進(jìn)行某項(xiàng)活動所規(guī)定的途

23、徑。n過程：將輸入轉(zhuǎn)化為輸出的一組彼此相關(guān)過程：將輸入轉(zhuǎn)化為輸出的一組彼此相關(guān)的資源和活動。的資源和活動。四個組成部分的關(guān)系：四個組成部分的關(guān)系：n關(guān)鍵：核心關(guān)鍵：核心過程（活動）過程（活動） 紐帶紐帶程序程序 組織結(jié)構(gòu)組織結(jié)構(gòu) 程序程序 資源資源 過程過程理解理解n“過程過程”的重要性的重要性 1 1、工作是通過過程來完成的。、工作是通過過程來完成的。 2 2、質(zhì)量管理是通過對各種過程的控制、質(zhì)量管理是通過對各種過程的控制 來實(shí)現(xiàn)的。來實(shí)現(xiàn)的。 3 3、質(zhì)量管理本身也是一系列的過程、質(zhì)量管理本身也是一系列的過程n過程的分解、控制過程的分解、控制n過程的有機(jī)組合過程的有機(jī)組合過程過程前處理前處

24、理檢測檢測樣本采集樣本采集和接受和接受編制報告編制報告審核審核報告發(fā)放報告發(fā)放記錄保存記錄保存登記登記編號編號質(zhì)控質(zhì)控咨詢咨詢質(zhì)量體系運(yùn)行的目的質(zhì)量體系運(yùn)行的目的方針方針目標(biāo)目標(biāo)質(zhì)量環(huán)質(zhì)量環(huán)及要素及要素QS結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)QS文件文件QS運(yùn)行運(yùn)行QS審核審核QS評審評審質(zhì)量改進(jìn)質(zhì)量改進(jìn)報告報告 證書證書主要手段：質(zhì)量體系文件主要手段：質(zhì)量體系文件n質(zhì)量方針：質(zhì)量方針：n質(zhì)量手冊：闡明實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量方針，各質(zhì)量手冊：闡明實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量方針，各方面質(zhì)量管理的一般性描述方面質(zhì)量管理的一般性描述n程序性文件：程序性文件：對通用于整個實(shí)驗(yàn)室的某對通用于整個實(shí)驗(yàn)室的某些方面工作的文件化描述些方面工作的文件化描述n標(biāo)準(zhǔn)

25、操作程序（標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOPSOP文件）：文件）：是實(shí)驗(yàn)室最是實(shí)驗(yàn)室最為具體、最具有可操作性、也是使用頻為具體、最具有可操作性、也是使用頻率最高的文件率最高的文件PCRPCR實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收對文件的要求實(shí)驗(yàn)室技術(shù)驗(yàn)收對文件的要求：n儀器設(shè)備的維護(hù)保養(yǎng)程序；儀器設(shè)備的維護(hù)保養(yǎng)程序；n儀器設(shè)備的校準(zhǔn)程序；儀器設(shè)備的校準(zhǔn)程序；n儀器設(shè)備的操作程序；儀器設(shè)備的操作程序；n臨床標(biāo)本的收集程序；臨床標(biāo)本的收集程序；n臨床標(biāo)本的處理（核酸純化）程序；臨床標(biāo)本的處理（核酸純化）程序；n臨床標(biāo)本的保存程序；臨床標(biāo)本的保存程序；n核酸擴(kuò)增及產(chǎn)物分析檢測的操作程序；核酸擴(kuò)增及產(chǎn)物分析檢測的操作程序；n試劑的質(zhì)檢操作

26、程序；試劑的質(zhì)檢操作程序；n實(shí)驗(yàn)室消耗品購買、驗(yàn)收和貯存程序；實(shí)驗(yàn)室消耗品購買、驗(yàn)收和貯存程序；n實(shí)驗(yàn)室廢棄物的處理程序；實(shí)驗(yàn)室廢棄物的處理程序；n實(shí)驗(yàn)室的清潔程序；實(shí)驗(yàn)室的清潔程序；n室內(nèi)質(zhì)量控制程序；室內(nèi)質(zhì)量控制程序；n抱怨處理程序。抱怨處理程序。n申請表的附錄申請表的附錄5“5“需準(zhǔn)備的標(biāo)準(zhǔn)操作程序需準(zhǔn)備的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（最低要求）（最低要求）”n對實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量手冊和程序文件沒作要求對實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量手冊和程序文件沒作要求n對必須具備的對必須具備的SOPSOP文件的編撰格式?jīng)]作具體文件的編撰格式?jīng)]作具體要求要求SOPSOP：實(shí)驗(yàn)室最具個性的文件：實(shí)驗(yàn)室最具個性的文件n不夠嚴(yán)謹(jǐn)準(zhǔn)確不夠嚴(yán)謹(jǐn)準(zhǔn)確n

27、不夠連貫不夠連貫n不夠嚴(yán)密不夠嚴(yán)密例：例：n用加樣槍取用加樣槍取100l100l樣品加入提取液樣品加入提取液n用加樣器（移液器）以前進(jìn)式移液法吸用加樣器（移液器）以前進(jìn)式移液法吸取取100l100l樣品加入提取液樣品加入提取液例：例： 向一新的經(jīng)高壓滅菌處理過的向一新的經(jīng)高壓滅菌處理過的0.5ml0.5ml離心管中加入離心管中加入10l10l充分混勻的充分混勻的RNARNA提取液提取液A A（RNARNA提取液提取液A A易沉淀，取易沉淀，取樣前需用移液器反復(fù)吸打混勻后吸?。忧靶栌靡埔浩鞣磸?fù)吸打混勻后吸取）。加人。加人50l50l血血清標(biāo)本或陰陽性標(biāo)準(zhǔn)品，再加人清標(biāo)本或陰陽性標(biāo)準(zhǔn)品，再加人2

28、00l200l的的RNARNA提取液提取液B B充分混勻。室溫放置充分混勻。室溫放置5 5分鐘。分鐘。6000rpm6000rpm離心離心1 1分鐘，小心分鐘，小心吸去上清，用吸去上清，用7575的預(yù)冷乙醇（的預(yù)冷乙醇（DEPCDEPC水配制）洗沉淀水配制）洗沉淀兩次。（取兩次。（取7575乙醇乙醇450l450l洗沉淀，充分震蕩混勻，洗沉淀，充分震蕩混勻，6000rpm6000rpm，離心，離心1 1分鐘，然后去上清，再用分鐘，然后去上清，再用7575的乙醇的乙醇450l450l洗一次），洗一次），6565干燥沉淀干燥沉淀1010分鐘。（注：分鐘。（注： 75%75%乙醇配制時須用試劑盒中提

29、供的乙醇配制時須用試劑盒中提供的DEPC H2ODEPC H2O）。）。 機(jī)械地抄書、說明書、其它實(shí)驗(yàn)機(jī)械地抄書、說明書、其它實(shí)驗(yàn)室的文件。室的文件。撰寫撰寫SOPSOP文件要做到：文件要做到：n具有專業(yè)知識的人，按文件就能順利完具有專業(yè)知識的人，按文件就能順利完成實(shí)驗(yàn)成實(shí)驗(yàn)n忠實(shí)而且連貫地反映實(shí)驗(yàn)過程忠實(shí)而且連貫地反映實(shí)驗(yàn)過程n對文件表述的理解無歧義對文件表述的理解無歧義n嚴(yán)謹(jǐn)、嚴(yán)密嚴(yán)謹(jǐn)、嚴(yán)密n準(zhǔn)確和簡練準(zhǔn)確和簡練文件的文字組織：簡練明確文件的文字組織：簡練明確n向一新的經(jīng)高壓滅菌處理過的向一新的經(jīng)高壓滅菌處理過的0.5ml0.5ml離心管中加入離心管中加入10l10l充分混勻的充分混勻的R

30、NARNA提取液提取液A A（RNARNA提取液提取液A A易沉淀，取易沉淀，取樣前需用移液器反復(fù)吸打混勻后吸取樣前需用移液器反復(fù)吸打混勻后吸?。＃?。加人加人50l50l血血清標(biāo)本或陰陽性標(biāo)準(zhǔn)品，再加人清標(biāo)本或陰陽性標(biāo)準(zhǔn)品，再加人200l200l的的RNARNA提取液提取液B B充分混勻。室溫放置充分混勻。室溫放置5 5分鐘。分鐘。6000rpm6000rpm離心離心1 1分鐘，小心分鐘，小心吸去上清，用吸去上清，用7575的預(yù)冷乙醇（的預(yù)冷乙醇（DEPCDEPC水配制水配制）洗沉淀洗沉淀兩次。（取兩次。（取7575乙醇乙醇450l450l洗沉淀，充分震蕩混勻，洗沉淀，充分震蕩混勻，6000

31、rpm6000rpm，離心，離心1 1分鐘，然后去上清，再用分鐘，然后去上清，再用7575的乙醇的乙醇450l450l洗一次），洗一次），6565干燥沉淀干燥沉淀1010分鐘。分鐘。（注：（注： 75%75%乙醇配制時須用試劑盒中提供的乙醇配制時須用試劑盒中提供的DEPC H2ODEPC H2O）。質(zhì)量體系文件的構(gòu)成：質(zhì)量體系文件的構(gòu)成： 質(zhì)量質(zhì)量 手冊手冊 程序性程序性 文文 件件質(zhì)量文件質(zhì)量文件 質(zhì)量文件（作業(yè)指質(zhì)量文件（作業(yè)指 導(dǎo)書、表格、報告等）導(dǎo)書、表格、報告等）程序文件和程序文件和SOPSOP的關(guān)系的關(guān)系n對通用于整個實(shí)驗(yàn)對通用于整個實(shí)驗(yàn)室的某些方面工作室的某些方面工作的文件化描述

32、的文件化描述n具體操作的標(biāo)準(zhǔn)化具體操作的標(biāo)準(zhǔn)化文件文件程序文件等同于以往的管理制度程序文件等同于以往的管理制度SOPSOP等同于以往的操作卡或操作說明書等同于以往的操作卡或操作說明書nWhatWhatnWhoWhonWhereWherenWhenWhennWhyWhynHowHow寫合乎管理要求的寫合乎管理要求的 ，寫你做得到的，寫你做得到的難點(diǎn)難點(diǎn)：n寫你所做的寫你所做的n做你所寫的做你所寫的n記錄你所做的記錄你所做的關(guān)鍵：關(guān)鍵：SOPSOP和記錄的必要性和重要性和記錄的必要性和重要性儀器設(shè)備的校準(zhǔn)程序儀器設(shè)備的校準(zhǔn)程序目的：保證檢驗(yàn)的有效性，準(zhǔn)確性。目的：保證檢驗(yàn)的有效性，準(zhǔn)確性。范圍：本

33、程序適用于滿足范圍：本程序適用于滿足PCR實(shí)驗(yàn)室檢測需要并可能對檢驗(yàn)結(jié)果造成誤差的儀器設(shè)備。主要有：實(shí)驗(yàn)室檢測需要并可能對檢驗(yàn)結(jié)果造成誤差的儀器設(shè)備。主要有：職責(zé)：校準(zhǔn)由職責(zé)：校準(zhǔn)由PCR實(shí)驗(yàn)室主任負(fù)責(zé)組織執(zhí)行。實(shí)驗(yàn)室主任負(fù)責(zé)組織執(zhí)行。工作流程：工作流程：4.1 校準(zhǔn)方法：校準(zhǔn)方法： Finpipette可調(diào)式移液器校準(zhǔn)采用廠家推薦方法。校準(zhǔn)主要使用設(shè)備為可調(diào)式移液器校準(zhǔn)采用廠家推薦方法。校準(zhǔn)主要使用設(shè)備為BS110S電子電子天平（天平（Max 110g, d=0.1mg）。）。4.2 校準(zhǔn)計劃：校準(zhǔn)計劃：4.2.1 啟用校準(zhǔn)：設(shè)備在投入使用時實(shí)施啟用校準(zhǔn)。啟用校準(zhǔn)：設(shè)備在投入使用時實(shí)施啟用校

34、準(zhǔn)。4.2.2 周期校準(zhǔn)：設(shè)備在投入使用后，每半年實(shí)施一次校準(zhǔn)。周期校準(zhǔn)：設(shè)備在投入使用后，每半年實(shí)施一次校準(zhǔn)。4.2.3 維修后校準(zhǔn)：設(shè)備在維修后須經(jīng)校準(zhǔn)方可重新投入使用。維修后校準(zhǔn)：設(shè)備在維修后須經(jīng)校準(zhǔn)方可重新投入使用。4.2.4 校準(zhǔn)計劃外的校準(zhǔn)：如在檢測及校準(zhǔn)計劃外的校準(zhǔn)：如在檢測及EQA，IQC活動中發(fā)現(xiàn)存在結(jié)果漂移或偏差及其它可疑情況時，通活動中發(fā)現(xiàn)存在結(jié)果漂移或偏差及其它可疑情況時，通 過分析對可疑設(shè)備實(shí)施校準(zhǔn)。過分析對可疑設(shè)備實(shí)施校準(zhǔn)。4.2.5 Finpipette可調(diào)式移液器的校準(zhǔn)順序：按照單一流向規(guī)定，對可調(diào)式移液器的校準(zhǔn)順序：按照單一流向規(guī)定，對Finpipette可調(diào)

35、式移液器的校準(zhǔn)首先可調(diào)式移液器的校準(zhǔn)首先 校準(zhǔn)試劑準(zhǔn)備區(qū)，然后依次為樣本處理區(qū)和校準(zhǔn)試劑準(zhǔn)備區(qū)，然后依次為樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)。每校準(zhǔn)完一個區(qū)的移擴(kuò)增區(qū)。每校準(zhǔn)完一個區(qū)的移 液器，將其放回原處后，再取下一個區(qū)的移液器進(jìn)行校準(zhǔn)。液器，將其放回原處后，再取下一個區(qū)的移液器進(jìn)行校準(zhǔn)。4.2.6 校準(zhǔn)安排在不進(jìn)行樣本檢測的日期完成。校準(zhǔn)安排在不進(jìn)行樣本檢測的日期完成。4.3 校準(zhǔn)的有效標(biāo)識：經(jīng)校準(zhǔn)的設(shè)備加貼綠色標(biāo)簽，標(biāo)簽上應(yīng)標(biāo)明本次校準(zhǔn)的日期和結(jié)果及下次校準(zhǔn)的計校準(zhǔn)的有效標(biāo)識：經(jīng)校準(zhǔn)的設(shè)備加貼綠色標(biāo)簽，標(biāo)簽上應(yīng)標(biāo)明本次校準(zhǔn)的日期和結(jié)果及下次校準(zhǔn)的計劃劃 預(yù)定日期。預(yù)定日期。4.4 校準(zhǔn)結(jié)果的審批及記錄保存：每次校準(zhǔn)的結(jié)果須