藥物分析 11第十一章抗生素類藥物

1、第十一章第十一章 抗生素類藥物的分析抗生素類藥物的分析 （Analysis of Antibiotics Drugs）第一節(jié)第一節(jié) 概概 述述第二節(jié)第二節(jié) -內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生素第三節(jié)第三節(jié) 氨基糖苷類抗生素氨基糖苷類抗生素第四節(jié)第四節(jié) 四環(huán)素類抗生素四環(huán)素類抗生素第一節(jié)第一節(jié) 概概 述述一、抗生素藥物的特點(diǎn)：一、抗生素藥物的特點(diǎn)： 抗生素（抗生素（antibiotics）是指是指“在低微濃度下即可對某些在低微濃度下即可對某些生物的生命活動有特異性抑制作用的化學(xué)物質(zhì)的總稱生物的生命活動有特異性抑制作用的化學(xué)物質(zhì)的總稱”。 1低化學(xué)純度低化學(xué)純度同系物多、異構(gòu)體多、降解物多；同系物多、異

2、構(gòu)體多、降解物多；2活性組分易發(fā)生變異活性組分易發(fā)生變異;活性組分的變異性活性組分的變異性生產(chǎn)過程中條生產(chǎn)過程中條件的變化；件的變化；3穩(wěn)定性差穩(wěn)定性差不穩(wěn)定性結(jié)構(gòu)。不穩(wěn)定性結(jié)構(gòu)。二、抗生素類藥物的質(zhì)量分析二、抗生素類藥物的質(zhì)量分析Quality Analysis/Quality Control-QA/QC鑒別試驗(yàn)鑒別試驗(yàn)Identification1 顯色反應(yīng)顯色反應(yīng)特殊基團(tuán)的反應(yīng)（特殊基團(tuán)的反應(yīng)（-內(nèi)酰胺類的羥肟酸鐵反內(nèi)酰胺類的羥肟酸鐵反應(yīng)、麥牙酚反應(yīng)、坂口反應(yīng)）應(yīng)、麥牙酚反應(yīng)、坂口反應(yīng)）2 光譜法光譜法特征吸收（特征吸收（IRIR、UVUV）3 色譜法色譜法保留行為（標(biāo)準(zhǔn)對照法）保留行為

3、（標(biāo)準(zhǔn)對照法）4 生物學(xué)方法生物學(xué)方法抗菌能力（抗生素滅活前后的抑制菌能力）抗菌能力（抗生素滅活前后的抑制菌能力）檢查（檢查（Investigation）1 1、影響產(chǎn)品穩(wěn)定性的指標(biāo)、影響產(chǎn)品穩(wěn)定性的指標(biāo) 結(jié)晶性、水份、酸堿度等結(jié)晶性、水份、酸堿度等2 2、有機(jī)和無機(jī)雜質(zhì)檢查、有機(jī)和無機(jī)雜質(zhì)檢查澄清度與顏色、有關(guān)物質(zhì)、重金澄清度與顏色、有關(guān)物質(zhì)、重金屬等屬等3 3、與臨床安全性密切相關(guān)的指標(biāo)、與臨床安全性密切相關(guān)的指標(biāo) 異常毒性、熱原、降壓異常毒性、熱原、降壓物質(zhì)等物質(zhì)等4 4、其他檢查、其他檢查“懸浮時間與抽針試驗(yàn)懸浮時間與抽針試驗(yàn)”、其他共存組分、其他共存組分含量測定或效價測定含量測定或效

4、價測定(Potency) DeterminationPotency:是指每是指每mlml或每或每mgmg中含有某種抗生素有效成分的多少，中含有某種抗生素有效成分的多少，以以u或或g表示。表示。以抗生素對微生物的殺傷或抑制程度為指標(biāo)來以抗生素對微生物的殺傷或抑制程度為指標(biāo)來判斷效價的一種方法。判斷效價的一種方法。如：如：1mg的青霉素鈉為的青霉素鈉為1670單位；單位；1mg的慶大霉素定為的慶大霉素定為590單單位。（位。（以上僅為理論效價，實(shí)驗(yàn)樣品低于該理論效價以上僅為理論效價，實(shí)驗(yàn)樣品低于該理論效價）1、微生物檢定法、微生物檢定法稀釋法稀釋法配制配制含不同濃度藥物含不同濃度藥物平板，使用多頭

5、接種器接種細(xì)平板，使用多頭接種器接種細(xì)菌，經(jīng)孵育后觀察細(xì)菌生長情況，以抑制細(xì)菌生長的瓊脂平菌，經(jīng)孵育后觀察細(xì)菌生長情況，以抑制細(xì)菌生長的瓊脂平板所含藥物濃度測得板所含藥物濃度測得最低抑菌濃度最低抑菌濃度(MIC)。比濁法比濁法標(biāo)準(zhǔn)曲線法。標(biāo)準(zhǔn)曲線法。管碟瓊脂擴(kuò)散法管碟瓊脂擴(kuò)散法抑菌圈。標(biāo)準(zhǔn)曲線法或者標(biāo)準(zhǔn)對照法，以抑菌圈。標(biāo)準(zhǔn)曲線法或者標(biāo)準(zhǔn)對照法，以抑菌圈直徑為橫坐標(biāo)，含藥濃度為縱坐標(biāo)。抑菌圈直徑為橫坐標(biāo)，含藥濃度為縱坐標(biāo)。方方法法種種類類靈敏度高、需用量少靈敏度高、需用量少適用范圍廣適用范圍廣純品、不純品、已知的和新的純品、不純品、已知的和新的可一次測定同類型抗生素的總效價可一次測定同類型抗生

6、素的總效價無需分離純化，無需分離純化，與臨床與臨床的應(yīng)用要求一致的應(yīng)用要求一致操作繁瑣、費(fèi)時費(fèi)力操作繁瑣、費(fèi)時費(fèi)力誤差較大誤差較大培養(yǎng)時間長培養(yǎng)時間長是結(jié)構(gòu)復(fù)雜和多組分抗生素效價測是結(jié)構(gòu)復(fù)雜和多組分抗生素效價測定的定的首先方法首先方法特特點(diǎn)點(diǎn)缺缺點(diǎn)點(diǎn)2、物理化學(xué)法、物理化學(xué)法High-performance liquid chromatography（HPLC）Liquid chromatography-Mass spectrometry（LC-MS）UV容量法容量法準(zhǔn)確可靠、專屬性高、操作簡單、省時、樣品用量少準(zhǔn)確可靠、專屬性高、操作簡單、省時、樣品用量少1、對結(jié)構(gòu)已知或提純的抗生素、對結(jié)構(gòu)

7、已知或提純的抗生素2、需要標(biāo)準(zhǔn)品對照、需要標(biāo)準(zhǔn)品對照儀器分析方法儀器分析方法1、不一定代表生物效價、不一定代表生物效價2、易受雜質(zhì)干擾、易受雜質(zhì)干擾缺缺點(diǎn)點(diǎn)適用適用范圍范圍優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生素青霉素、頭孢菌素類青霉素、頭孢菌素類氨基糖苷類抗生素氨基糖苷類抗生素鏈霉素、慶大霉素、卡那霉素等鏈霉素、慶大霉素、卡那霉素等四環(huán)素類抗生素四環(huán)素類抗生素四環(huán)素、金霉素、土霉素等四環(huán)素、金霉素、土霉素等大環(huán)內(nèi)酯類抗生素大環(huán)內(nèi)酯類抗生素紅霉素、麥迪霉素、螺旋霉素等紅霉素、麥迪霉素、螺旋霉素等多烯大環(huán)類抗生素多烯大環(huán)類抗生素制菌霉素、兩性霉素制菌霉素、兩性霉素B B多肽類抗生素多肽類抗生素放線菌

8、素、多黏菌素放線菌素、多黏菌素苯烴胺類抗生素苯烴胺類抗生素氯霉素氯霉素 蒽環(huán)類蒽環(huán)類阿霉素、紫紅霉素等阿霉素、紫紅霉素等三、抗生素類藥物的分類三、抗生素類藥物的分類(Classification）n四、抗生素的生產(chǎn)與雜質(zhì)來源四、抗生素的生產(chǎn)與雜質(zhì)來源n（一）抗生素的生產(chǎn)主要采用兩種方法：（一）抗生素的生產(chǎn)主要采用兩種方法： （1）生物合成（發(fā)酵）：生物合成（發(fā)酵）：生物包括微生物（真菌、放線生物包括微生物（真菌、放線菌、細(xì)菌等）、植物、動物。菌、細(xì)菌等）、植物、動物。 （主要生產(chǎn)方法）（主要生產(chǎn)方法） （2）化學(xué)合成或半合成方法制取化學(xué)合成或半合成方法制?。ㄉ贁?shù)生產(chǎn)方法）（少數(shù)生產(chǎn)方法）n（二

9、）抗生素雜質(zhì)的主要來源：（二）抗生素雜質(zhì)的主要來源： （1）生產(chǎn)過程生產(chǎn)過程中帶入中帶入 （2）貯藏過程貯藏過程中產(chǎn)生中產(chǎn)生第二節(jié)第二節(jié) -內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生素 （ -Lactam Antibiotics） * 1. 青霉素類（青霉素類（PC） * 2. 頭孢菌素類（頭孢菌素類（CEP） 3. 頭霉素頭霉素 4. -內(nèi)酰胺酶抑制劑內(nèi)酰胺酶抑制劑 5. 其他其他n一、化學(xué)結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)：一、化學(xué)結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)：n1、分子結(jié)構(gòu)的母核由、分子結(jié)構(gòu)的母核由A環(huán)（環(huán)（ -內(nèi)酰胺環(huán)）與內(nèi)酰胺環(huán)）與B環(huán)（氫化噻唑環(huán)（氫化噻唑環(huán)式氫化噻嗪環(huán)）駢合而成：環(huán)式氫化噻嗪環(huán)）駢合而成： 青 霉 素 族 （青 霉 素

10、族 （ P C ） 的 母 核 ：的 母 核 ： 6 - 氨 基 青 霉 烷 酸 （氨 基 青 霉 烷 酸 （ 6 -aminopenicillanic acid，簡稱簡稱6-APA）；）； 頭孢菌素（頭孢菌素（CEP）族的母核：族的母核：7-氨基頭孢菌烷酸（氨基頭孢菌烷酸（7-aminocephalosporanic acid，簡稱簡稱7-ACA）。）。NSOCOOHROCHNCH3CH3(Z)COOHNSCH3CH3COOHONHRO1234567HHH青霉素族（青霉素族（PC）頭孢菌素族（頭孢菌素族（CEP）NONHRO567SCOOHCH2R181234HH-內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生

11、素結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)6-APA7-ACA-內(nèi)酰胺類抗生素結(jié)構(gòu)示例：內(nèi)酰胺類抗生素結(jié)構(gòu)示例： NSO1234567CH3CH3COOHHHRCOHNNO1234567COOHHHRCOHNSRPenicillinsCarbapenemsNSO12345678CephalosporinsHHRCOHNCH2A青霉素類青霉素類 頭孢菌素類頭孢菌素類 碳青霉烯類碳青霉烯類NSO12345678OxacephemsHH3CORCOHNCH2ANO1234MonobactamR3R2R1COHN頭霉素類頭霉素類 單環(huán)單環(huán)-內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類n理化性質(zhì)理化性質(zhì) （1）酸性與溶解度；）酸性與溶解度； （2）旋光性；）旋光

12、性； （3）紫外吸收光譜；）紫外吸收光譜； （4） -內(nèi)酰胺環(huán)的不穩(wěn)定性內(nèi)酰胺環(huán)的不穩(wěn)定性 NONHRO567SCOOHCH2R181234NSOHNCOOKCH3CH3OCCH2酸性酸性結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與性質(zhì)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與性質(zhì)與堿金屬與堿金屬(Na(Na+ +、K K+ +) )成鹽成鹽 （一）羧基（一）羧基 易溶于水易溶于水 NaNSO1234567（二）手性（二）手性C C 頭孢菌素類頭孢菌素類 C6 C7青霉素類青霉素類 C3 C5 C6 旋光性旋光性 （三）共軛體系（三）共軛體系 NSO頭孢菌素類頭孢菌素類 母核有共軛體系母核有共軛體系 青霉素類青霉素類 母核無明顯母核無明顯UVUV 多數(shù)有苯環(huán)

13、取代基多數(shù)有苯環(huán)取代基 NOS UVUV（四）（四）內(nèi)酰胺環(huán)內(nèi)酰胺環(huán) 水溶液水溶液 不穩(wěn)定不穩(wěn)定 干燥純凈干燥純凈 穩(wěn)定穩(wěn)定 不穩(wěn)定性因素不穩(wěn)定性因素四元環(huán)張力大四元環(huán)張力大 酰胺鍵易水解酰胺鍵易水解 放置環(huán)境放置環(huán)境青霉素類青霉素類 某些氧化劑某些氧化劑酸、堿、青霉素酶酸、堿、青霉素酶（某些金屬離子）（某些金屬離子） （溫度）（溫度）降解降解失效失效二、鑒別反應(yīng)二、鑒別反應(yīng)1 1、TLCTLC法法2 2、HPLCHPLC法法比較比較R Rf f和斑點(diǎn)顏色和斑點(diǎn)顏色供試品供試品對照品對照品相同條件相同條件Rt比較比較供試品供試品對照品對照品相同條件相同條件（一）色譜法（一）色譜法n（二）光譜法

14、（二）光譜法 1紅外光譜（紅外光譜（IR）吸收吸收波數(shù)波數(shù)cm-1歸屬歸屬波數(shù)波數(shù)cm-1歸屬歸屬3470，3180酚羥基和酰胺酚羥基和酰胺O-HO-H，N-HN-H1585，1400羧基離子羧基離子COOCOO- -31002600胺鹽胺鹽N N+ +-H-H1620苯環(huán)苯環(huán)C=CC=C1780- -內(nèi)酰胺內(nèi)酰胺C=OC=O1250酚羥基酚羥基C-OC-O1690仲酰胺仲酰胺C=OC=O- -內(nèi)酰胺環(huán)內(nèi)酰胺環(huán)酰胺酰胺115251680- -= =cm、VOC117501800- -= =cmVOCNHV= =13300- -cmCOOHV- -114101600- -cm、羧基羧基3180c

15、m-1 N-H內(nèi)酰胺內(nèi)酰胺 C=O1780cm-13470cm-1 O-H1690cm-1仲酰胺仲酰胺 C=O1250cm-1 C-O以阿莫西林以阿莫西林IR圖譜為例圖譜為例2、UV法法樣品、分解產(chǎn)物樣品、分解產(chǎn)物 利用最大吸收波長鑒定法；利用最大吸收波長鑒定法； 水解產(chǎn)物的最大吸收波長鑒定法。水解產(chǎn)物的最大吸收波長鑒定法。頭孢氨芐頭孢氨芐 max = 262nmmax = 262nm青霉素青霉素V V鈉鈉 A A280nm280nm/A/A264nm 264nm = 1.30= 1.301.501.50Cu2+苯唑青霉烯酸苯唑青霉烯酸苯唑西林鈉苯唑西林鈉+ +H HnmnmA A339339

16、A A, ,E Emin ,min ,max ,max , ,%cmcm1 11 1光譜圖光譜圖（三）呈色反應(yīng)（三）呈色反應(yīng)1 1、 羥肟酸鐵反應(yīng)羥肟酸鐵反應(yīng)-內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類NaOHNaOH呈色呈色FeFe3+3+/3/3H H+ +羥肟酸衍生物羥肟酸衍生物H H 2 NOH NOH HClHCl -內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類H2NOHHClNaOH，C2H5OHNSOCH2R1ROCHNCH3CH3(Z)COOHHNSCOCH2R1ROCHNCH3CH3(Z)COONaNHOHNH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH22. 類似肽鍵的反應(yīng)類似肽鍵的反應(yīng)茚三酮反應(yīng)茚三酮反應(yīng) -氨基氨基藍(lán)紫色藍(lán)紫色

17、 -氨基氨基茚三酮茚三酮 3. 雙縮脲反應(yīng)雙縮脲反應(yīng)- - -CONH（開環(huán)分解）（開環(huán)分解） - 內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類堿性酒石酸銅堿性酒石酸銅紫色紫色4. 與重氮苯磺酸反應(yīng)與重氮苯磺酸反應(yīng)頭孢哌酮頭孢哌酮酚羥基酚羥基橙黃色橙黃色重氮苯磺酸重氮苯磺酸- - -5 56 6OHHC（偶合）（偶合）5. 與變色酸與變色酸-硫酸反應(yīng)硫酸反應(yīng)活潑活潑“-CH2-”青霉素青霉素阿莫西林阿莫西林氨芐西林氨芐西林變色酸變色酸顯色顯色HCHOCHSOH -422”羰基側(cè)鏈含“（分解分解）1. K+、Na+的火焰反應(yīng)的火焰反應(yīng)（四）各種鹽的反應(yīng)（四）各種鹽的反應(yīng) 焰色焰色鮮黃色鮮黃色 + 醋酸氧鈾鋅醋酸氧鈾鋅黃黃

18、Na+ 焰色焰色紫色紫色 + 0.1%四苯硼鈉四苯硼鈉 + Ac白白 K+三、特殊雜質(zhì)的檢查三、特殊雜質(zhì)的檢查 本類抗生素的特殊雜質(zhì)主要有高分子聚合物、本類抗生素的特殊雜質(zhì)主要有高分子聚合物、有關(guān)物質(zhì)、異構(gòu)體等，一般采用有關(guān)物質(zhì)、異構(gòu)體等，一般采用HPLCHPLC法法控制其限控制其限量，也有采用測定量，也有采用測定雜質(zhì)的吸收度雜質(zhì)的吸收度來控制雜質(zhì)量的。來控制雜質(zhì)量的。 藥物藥物 檢查項(xiàng)目檢查項(xiàng)目 檢查方法檢查方法 頭孢他啶頭孢他啶 聚合物聚合物 HPLCHPLC法法 頭孢曲松鈉頭孢曲松鈉 頭孢哌酮鈉頭孢哌酮鈉 頭孢噻肟鈉頭孢噻肟鈉 頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯 有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體 HP

19、LCHPLC法法 頭孢氨芐頭孢氨芐 有關(guān)物質(zhì)有關(guān)物質(zhì) 反相反相TLCTLC法法 青霉素鉀（鈉）青霉素鉀（鈉） 吸收度吸收度 紫外分光光度法紫外分光光度法 （一）聚合物（一）聚合物 示例：以頭孢他啶中頭孢他啶聚合物的測定。示例：以頭孢他啶中頭孢他啶聚合物的測定。 固定相：固定相：葡聚糖凝膠葡聚糖凝膠G-10G-10（ 40-12040-120m m ） 流動相流動相A A：3.5%3.5%硫酸銨的硫酸銨的0.01mol/L0.01mol/L磷酸鹽緩沖液磷酸鹽緩沖液 流動相流動相B B：0.01%0.01%十二烷基硫酸鈉十二烷基硫酸鈉 對照品溶液：對照品溶液：頭孢他啶對照品頭孢他啶對照品 1001

20、00g/mlg/ml1）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：N N不低于不低于900900，拖尾因子，拖尾因子0.75-1.50.75-1.5，峰面，峰面積的積的RSDRSD應(yīng)小于應(yīng)小于5.0%5.0%。2）測定方法）測定方法 ：以外標(biāo)法計算，含頭孢他啶聚合物以頭孢他啶以外標(biāo)法計算，含頭孢他啶聚合物以頭孢他啶計不得超過計不得超過0.3%0.3% （二）有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體（二）有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體 示例示例1：頭孢呋辛酯中有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體的檢查頭孢呋辛酯中有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體的檢查 固定相：固定相：ODSODS 流動相：流動相：0.2mol/L0.2mol/L磷酸二氫銨磷酸二氫銨- -甲醇（甲醇（62:38

21、62:38） 1 1）頭孢呋辛酯）頭孢呋辛酯2 2- -異構(gòu)體的制備：異構(gòu)體的制備：頭孢呋辛酯對照品頭孢呋辛酯對照品+ +流動流動相相 頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯2 2- -異構(gòu)體。異構(gòu)體。2 2）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：各異構(gòu)體之間的各異構(gòu)體之間的R1.5R1.5，以頭孢呋辛酯，以頭孢呋辛酯A A異構(gòu)體計算異構(gòu)體計算n1500n1500。 3 3）異構(gòu)體：）異構(gòu)體： 相對保留時間相對保留時間 1-1-被測物被測物 2-2-標(biāo)準(zhǔn)物標(biāo)準(zhǔn)物異構(gòu)體異構(gòu)體 相對保留時間相對保留時間 判斷判斷B B異構(gòu)體異構(gòu)體 0.85 0.85 供試液譜圖中供試液譜圖中A A異構(gòu)體的峰面積異構(gòu)體的峰面積A A異構(gòu)

22、體異構(gòu)體 1.0 1.0 與與A A、B B異構(gòu)體峰面積和之比應(yīng)為異構(gòu)體峰面積和之比應(yīng)為0.480.480.550.55。 2112RRttr=異構(gòu)體異構(gòu)體A A異構(gòu)體異構(gòu)體B B頭孢呋辛頭孢呋辛示例示例2：頭孢氨芐中有關(guān)物質(zhì)的檢查頭孢氨芐中有關(guān)物質(zhì)的檢查- -反相反相TLCTLC法法 固定相：固定相：活化后的硅膠活化后的硅膠G G板置板置5%5%（V/VV/V）正十四烷的正己烷溶）正十四烷的正己烷溶液中，展至頂部，涼干液中，展至頂部，涼干 展開劑展開劑: :0.1M0.1M枸櫞酸枸櫞酸-0.2M-0.2M磷酸氫二鈉磷酸氫二鈉- -丙酮（丙酮（120120：8080：3 3） 供試液：供試液：

23、本品本品 50mg/ml 50mg/ml 對照液（對照液（1 1）: :本品本品 0.5 mg/ml0.5 mg/ml 對照液（對照液（2 2）: :-苯甘氨酸苯甘氨酸 0.5 mg/ml0.5 mg/ml 對照液（對照液（3 3）: :7-7-氨基去乙酰氧基頭孢烷酸氨基去乙酰氧基頭孢烷酸 0.5 mg/ml0.5 mg/ml 結(jié)果判斷：結(jié)果判斷：供試液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對照液（供試液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對照液（2 2）（）（3 3）位置）位置相同上所的斑點(diǎn)比較，其顏色不得更深；如顯其他雜質(zhì)斑相同上所的斑點(diǎn)比較，其顏色不得更深；如顯其他雜質(zhì)斑 點(diǎn)點(diǎn)，與對照液（，與對照液（1 1）所顯的主斑點(diǎn)比較，其

24、顏色不得更深。）所顯的主斑點(diǎn)比較，其顏色不得更深。（三）吸收度：（三）吸收度： ChP中常用來控制本類抗生素的雜質(zhì)含量。中常用來控制本類抗生素的雜質(zhì)含量。 示例：青霉素鈉（鉀）的吸收度檢查：示例：青霉素鈉（鉀）的吸收度檢查： 供供 試試 液液：1.80mg/ml1.80mg/ml， 結(jié)果判斷結(jié)果判斷：A A280280不得大于不得大于0.100.10（控制雜質(zhì)量）；（控制雜質(zhì)量）； A A264264應(yīng)在應(yīng)在0.80-0.880.80-0.88（檢查藥物量）。（檢查藥物量）。 本類藥物多采用理化測定方法進(jìn)行含量測定，本類藥物多采用理化測定方法進(jìn)行含量測定，Ch.PCh.P收載的主要方法有：收載

25、的主要方法有： HPLCHPLC法法、電位配位滴定法電位配位滴定法、可見可見 紫外分光光度法紫外分光光度法、碘量法碘量法等。等。 20052005年版年版Ch.PCh.P中收載的抗生素品種共有中收載的抗生素品種共有284284個，個，其中使用了其中使用了HPLCHPLC法的品種有法的品種有205205個，約占個，約占70%70%。用于。用于檢測的項(xiàng)目有：檢測的項(xiàng)目有：鑒別、有關(guān)物質(zhì)檢查、組分測定、鑒別、有關(guān)物質(zhì)檢查、組分測定、含量均勻度和含量測定含量均勻度和含量測定。四、含量測定四、含量測定- -儀器分析法儀器分析法（一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法原理：原理：利用青霉素類抗生素在一定條

26、件下在反相硅膠上的利用青霉素類抗生素在一定條件下在反相硅膠上的保留行為的不同而實(shí)現(xiàn)高效分離，并與標(biāo)準(zhǔn)品相對照，而保留行為的不同而實(shí)現(xiàn)高效分離，并與標(biāo)準(zhǔn)品相對照，而對其進(jìn)行定量的一種方法。對其進(jìn)行定量的一種方法。優(yōu)化色譜分析條件優(yōu)化色譜分析條件（1 1）Column Column -CN ODS C-CN ODS C1818 C C8 8 -Ben -Ben（2 2）mobile phase/flow ratemobile phase/flow rate（3 3）column temperature column temperature （4 4）detection wavelengthdete

27、ction wavelength（5 5）workstation sample preparationworkstation sample preparation實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)（1 1）色譜峰要達(dá)到較好的分離基線分離）色譜峰要達(dá)到較好的分離基線分離(base separation)(base separation)（2 2）需要標(biāo)準(zhǔn)品對照，用外標(biāo)法定量）需要標(biāo)準(zhǔn)品對照，用外標(biāo)法定量（3 3）可同時測定多個組分的含量）可同時測定多個組分的含量（4 4）需要排除制劑中輔料等雜質(zhì)對測定的干擾）需要排除制劑中輔料等雜質(zhì)對測定的干擾SelectivityLinearity-Calibratio

28、n curvePrecision and accuracyRecoveryStability%100百分含量（）WArVCrAr內(nèi)標(biāo)法校正因子內(nèi)標(biāo)法校正因子外標(biāo)法外標(biāo)法方法方法 快速、高效、靈敏快速、高效、靈敏 專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好 一法多用（鑒別、檢查、含測）一法多用（鑒別、檢查、含測）特點(diǎn)特點(diǎn)HPLCHPLC法的定量方法和特點(diǎn)法的定量方法和特點(diǎn)第三節(jié)第三節(jié) 氨基糖苷類抗生素氨基糖苷類抗生素（aminoglycosides antibiotics）【藥理作用藥理作用】 氨基糖苷類抗生素可起到殺菌作用，屬靜止期殺菌藥。氨基糖苷類抗生素可起到殺菌作用，屬靜止期殺菌藥。 其殺菌作用

29、具有如下特點(diǎn)：其殺菌作用具有如下特點(diǎn)： 1.殺菌作用呈濃度依賴性。殺菌作用呈濃度依賴性。 2.僅對需氧菌有效，尤其對需氧革蘭氏陰性桿菌的抗菌作用強(qiáng)。僅對需氧菌有效，尤其對需氧革蘭氏陰性桿菌的抗菌作用強(qiáng)。 3.具有明顯的抗生素后效應(yīng)。具有明顯的抗生素后效應(yīng)。 4.具有初次接觸效應(yīng)。具有初次接觸效應(yīng)。 5.在堿性環(huán)境中抗菌活性增強(qiáng)。在堿性環(huán)境中抗菌活性增強(qiáng)。 一、共性一、共性 1.抗菌譜相似抗菌譜相似 主要抗主要抗G-桿菌，某些對桿菌，某些對銅綠假單胞菌、銅綠假單胞菌、結(jié)核結(jié)核桿菌有效桿菌有效 2.抗菌機(jī)制相似抗菌機(jī)制相似 殺菌藥殺菌藥 多環(huán)節(jié)阻礙細(xì)菌蛋白質(zhì)合成多環(huán)節(jié)阻礙細(xì)菌蛋白質(zhì)合成 始動復(fù)合物

30、形成始動復(fù)合物形成 肽鏈延伸肽鏈延伸 肽鏈終止肽鏈終止 通過離子吸附作用，通過離子吸附作用， 增加膜通透性增加膜通透性3. 3. 理化性質(zhì)相似理化性質(zhì)相似 呈堿性（極性大），其鹽易溶于呈堿性（極性大），其鹽易溶于水（脂溶性差），性質(zhì)穩(wěn)定。水（脂溶性差），性質(zhì)穩(wěn)定。4. 4. 體內(nèi)過程相似體內(nèi)過程相似 口服難吸收，可作胃腸消毒口服難吸收，可作胃腸消毒; 肌肉或靜脈注射用于全身感染；肌肉或靜脈注射用于全身感染； 蛋白結(jié)合率低，主要分布于細(xì)胞外液（胸、腹腔蛋白結(jié)合率低，主要分布于細(xì)胞外液（胸、腹腔液及心包液濃度較高）液及心包液濃度較高） 原形經(jīng)腎排泄（但腎功損害者原形經(jīng)腎排泄（但腎功損害者,多次口服

31、仍可中毒）多次口服仍可中毒） 化學(xué)結(jié)構(gòu)都是以堿性環(huán)已多元醇為化學(xué)結(jié)構(gòu)都是以堿性環(huán)已多元醇為苷元苷元，與氨基，與氨基縮 合 而 成 的縮 合 而 成 的 苷苷 ， 故 稱 為 氨 基 糖 苷 類 抗 生 素， 故 稱 為 氨 基 糖 苷 類 抗 生 素（aminoglycosides antibiotics）。）。 這類抗生素主要有：鏈霉素、慶大霉素、新霉素這類抗生素主要有：鏈霉素、慶大霉素、新霉素及巴龍霉素、硫酸奈替米星、硫酸西索米星、硫酸依及巴龍霉素、硫酸奈替米星、硫酸西索米星、硫酸依替米星等，它們的抗菌譜和化學(xué)性質(zhì)都有共同之處。替米星等，它們的抗菌譜和化學(xué)性質(zhì)都有共同之處。n一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與

32、性質(zhì)一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)天然類天然類 鏈霉素鏈霉素(streptomycin) 慶大霉素慶大霉素(gentamicin) 卡那霉素卡那霉素(kanamycin) 妥布霉素妥布霉素(tobramycin) 西索米星西索米星(sisomicin) 新霉素新霉素(neomycin) 小諾米星小諾米星(micronomicin) 大觀霉素大觀霉素(spectinomycin)半合成類半合成類 阿米卡星阿米卡星(amikacin) 奈替米星奈替米星(netilmicin)n1.鏈霉素（鏈霉素（strepotomycin即鏈霉素即鏈霉素A）的結(jié)構(gòu)為一分子的結(jié)構(gòu)為一分子鏈霉胍和一分子鏈霉雙糖結(jié)合而成的堿性苷。

33、結(jié)構(gòu)如下：鏈霉胍和一分子鏈霉雙糖結(jié)合而成的堿性苷。結(jié)構(gòu)如下：苷元苷元糖糖鏈霉雙糖胺鏈霉雙糖胺鏈霉胍鏈霉胍 + 鏈霉糖鏈霉糖 + N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺 n（一）化學(xué)結(jié)構(gòu)（一）化學(xué)結(jié)構(gòu)臨床應(yīng)用臨床應(yīng)用 鼠疫、兔熱病鼠疫、兔熱病 布氏桿菌病布氏桿菌病 感染性心內(nèi)膜炎感染性心內(nèi)膜炎 抗結(jié)核抗結(jié)核不良反應(yīng)不良反應(yīng) 第八對腦神經(jīng)損害第八對腦神經(jīng)損害 過敏性休克過敏性休克 神經(jīng)肌肉阻滯神經(jīng)肌肉阻滯 口周、面部、四肢麻木口周、面部、四肢麻木巴龍霉素巴龍霉素D-D-葡萄糖胺葡萄糖胺+ +脫氧鏈霉胺脫氧鏈霉胺+D-+D-核糖核糖+ +巴龍霉糖巴龍霉糖巴龍胺巴龍胺苷元苷元巴龍二糖胺巴龍二糖胺 糖糖 n

34、2.慶大霉素（慶大霉素（gentamycin）是由是由絳紅糖胺、脫氧鏈霉絳紅糖胺、脫氧鏈霉胺和加洛糖胺縮合而成的苷胺和加洛糖胺縮合而成的苷。它是慶大霉素。它是慶大霉素C復(fù)合物，復(fù)合物，尚有少量次要成分（如慶大霉素尚有少量次要成分（如慶大霉素A1、A2、A3、A4、B、B1、X）。）。主要成分主要成分C1、C2、C1a及及C2a的結(jié)的結(jié)構(gòu)如下：構(gòu)如下： 慶大霉素慶大霉素C復(fù)合物復(fù)合物 慶大霉素慶大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 慶大霉素慶大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 慶大霉素慶大霉素C1a R、R1、R2=H 慶大霉素慶大霉素C2a R=CH3 R1= R2=H 慶大霉素慶大霉素

35、C2b R=R1=H R2=CH3 抗菌作用抗菌作用臨床應(yīng)用臨床應(yīng)用可與羧芐西林合用可與羧芐西林合用 嚴(yán)重嚴(yán)重G- G- 桿菌感染桿菌感染 銅綠假單胞菌感染如心內(nèi)膜炎銅綠假單胞菌感染如心內(nèi)膜炎 原因未明的原因未明的G-G-菌混合感染菌混合感染 口服用于腸道感染或術(shù)前準(zhǔn)備口服用于腸道感染或術(shù)前準(zhǔn)備不良反應(yīng)不良反應(yīng) 腎毒性腎毒性 前庭功能損害前庭功能損害多與硫酸成鹽多與硫酸成鹽鏈霉素鏈霉素 3 3個個慶大霉素慶大霉素 5 5個個堿性中心堿性中心堿性堿性（一）（一）水溶性水溶性溶解性溶解性（二）（二）n（二）性質(zhì)（二）性質(zhì)鏈霉素鏈霉素 pH57.5慶大霉素慶大霉素 pH212 穩(wěn)定穩(wěn)定穩(wěn)定性穩(wěn)定性（

36、四四）UV（三三）二、二、 鑒別鑒別 茚三酮反應(yīng)茚三酮反應(yīng)（一一）藍(lán)紫色慶大霉素鏈霉素茚三酮 羥基胺結(jié)構(gòu)羥基胺結(jié)構(gòu)CNH2H+OOHOHO加熱C(Z)OHOHCOON+ CO2 + 3 H2O（二）（二）MolischMolisch反應(yīng)（糖類反應(yīng)）反應(yīng)（糖類反應(yīng)） 藍(lán)紫色藍(lán)紫色慶大霉素（慶大霉素（六碳糖）六碳糖）鏈霉素（鏈霉素（五碳糖）五碳糖）- -萘酚萘酚H H + +糠糠 醛醛羥甲基糠醛羥甲基糠醛蒽蒽 酮酮紅紫色紅紫色N-N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)甲基葡萄糖胺反應(yīng)（三）（三）（Elson-MorganElson-Morgan反應(yīng)）反應(yīng)）乙酰丙酮乙酰丙酮OHOH- -吡咯衍生物吡咯衍生物對二甲氨基

37、苯甲醛對二甲氨基苯甲醛H H+ +紅色紅色甲基葡萄糖胺甲基葡萄糖胺慶大霉素慶大霉素鏈霉素鏈霉素水解水解- -NN 鏈霉糖特有反應(yīng)鏈霉糖特有反應(yīng) 麥芽酚反應(yīng)麥芽酚反應(yīng)（四）（四） H H+ +分子重排分子重排鏈霉糖鏈霉糖鏈霉素鏈霉素- -OHOH麥芽酚麥芽酚紫紅色紫紅色 + +3 3FeFeNOH8-8-羥基喹啉羥基喹啉- - 萘酚萘酚OH（或（或-萘酚）萘酚）橙紅橙紅羥基喹啉羥基喹啉鏈霉胍鏈霉胍鏈霉素鏈霉素次溴酸鈉次溴酸鈉- - -8 8OHOH鏈霉胍特有反應(yīng)鏈霉胍特有反應(yīng)坂口反應(yīng)坂口反應(yīng)（五）（五）n（六）硫酸鹽反應(yīng)（六）硫酸鹽反應(yīng)n（七）色譜法（七）色譜法n1薄層色譜法：薄層色譜法：ChP

38、、USP（25）、）、BP（2000）采用該法對硫酸采用該法對硫酸慶大霉素、硫酸奈替米星、硫酸巴龍霉素、鏈霉素等進(jìn)行鑒別。多以慶大霉素、硫酸奈替米星、硫酸巴龍霉素、鏈霉素等進(jìn)行鑒別。多以硅膠為薄層板，氯仿硅膠為薄層板，氯仿-甲醇甲醇-濃氨水為展開劑，茚三酮或碘蒸氣為顯色濃氨水為展開劑，茚三酮或碘蒸氣為顯色劑。劑。H+白白 4 4- -2 24 4+ +2 2BaSOSOBa（八）（八） UV UV法法慶大霉素?zé)o慶大霉素?zé)oUVUV吸收吸收nmnmmamax x230230=鏈霉素鏈霉素n（八）（八） HPLC HPLC法法nBPBP（20002000）采用采用HPLCHPLC法鑒別慶大霉素，根據(jù)

39、組法鑒別慶大霉素，根據(jù)組分檢查項(xiàng)下色譜圖，比較供試液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液分檢查項(xiàng)下色譜圖，比較供試液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液的色譜圖，慶大霉素的色譜圖，慶大霉素C C1 1、C C2 2、C C1a1a、C C2a2a四組分的四組分的保留時間應(yīng)一致。保留時間應(yīng)一致。三、特殊雜質(zhì)檢查及組分分析三、特殊雜質(zhì)檢查及組分分析n（一）鏈霉素中鏈霉素（一）鏈霉素中鏈霉素B的檢查的檢查薄層板：硅膠薄層板：硅膠G薄層。薄層。展開劑：甲苯展開劑：甲苯-冰醋酸冰醋酸-甲醇（甲醇（50：25：25）方法：以方法：以D-甘露醇為對照品進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)對照法比較斑點(diǎn)的顏色。甘露醇為對照品進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)對照法比較斑點(diǎn)的顏色。n（二）奈替米星中有關(guān)物質(zhì)檢查

40、（二）奈替米星中有關(guān)物質(zhì)檢查各國藥典已對該類部分抗生素采用色譜法（各國藥典已對該類部分抗生素采用色譜法（HPLC或或TLC法）進(jìn)行有法）進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)的檢查。如硫酸奈替米星中有關(guān)物質(zhì)檢查采用標(biāo)準(zhǔn)品對照法，關(guān)物質(zhì)的檢查。如硫酸奈替米星中有關(guān)物質(zhì)檢查采用標(biāo)準(zhǔn)品對照法，比較斑點(diǎn)顏色的深淺。比較斑點(diǎn)顏色的深淺。n（三）慶大霉素（三）慶大霉素C組分測定組分測定n中、英、美、日等國藥典均規(guī)定控制慶大霉素中中、英、美、日等國藥典均規(guī)定控制慶大霉素中C1、C2、C1a、C2a各組分的相對百分含量。均采用各組分的相對百分含量。均采用HPLC法測定慶大霉素法測定慶大霉素C各組分的含各組分的含量。量。n色譜條件與系統(tǒng)

41、適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以水以水-冰醋酸冰醋酸-甲醇（甲醇（25：5：70）配制的）配制的0.02mol/L庚烷磺酸鈉溶液庚烷磺酸鈉溶液為流動相；檢測波長為為流動相；檢測波長為330nm；理論塔板數(shù)按理論塔板數(shù)按C2組分計算應(yīng)不低于組分計算應(yīng)不低于2000。C2a和和C2峰的分離度應(yīng)符合要求。重復(fù)進(jìn)樣，其相對標(biāo)準(zhǔn)差峰的分離度應(yīng)符合要求。重復(fù)進(jìn)樣，其相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）應(yīng)小于應(yīng)小于2.0%。以內(nèi)標(biāo)。以內(nèi)標(biāo)-峰面積歸一化法計算各組分的相對含峰面積歸一化法計算各組分的相對含量量 。圖譜圖譜n討論：討論：（1）柱效：以）柱效

42、：以C2峰計算，理論塔板數(shù)不得低于峰計算，理論塔板數(shù)不得低于2000。（。（2）流動相：）流動相：流動相極性應(yīng)適當(dāng)控制（適當(dāng)調(diào)節(jié)甲醇比例）：極性過強(qiáng)，出峰快，流動相極性應(yīng)適當(dāng)控制（適當(dāng)調(diào)節(jié)甲醇比例）：極性過強(qiáng)，出峰快，分離不佳；流動相極性過弱，出峰太慢。分離不佳；流動相極性過弱，出峰太慢。（3）衍生化試劑與衍生物的穩(wěn)定性；）衍生化試劑與衍生物的穩(wěn)定性；（4）離子對試劑濃度影響；）離子對試劑濃度影響；n(四四)硫酸鹽測定硫酸鹽測定 本類抗生素臨床應(yīng)用的主要為硫酸鹽，各國藥典規(guī)定本類抗生素臨床應(yīng)用的主要為硫酸鹽，各國藥典規(guī)定EDTA絡(luò)合絡(luò)合滴定法測定硫酸鹽，作為組分分析。滴定法測定硫酸鹽，作為組分

43、分析。 n四、含量測定四、含量測定本類抗生素的效價測定目前各國藥典主要采用微生物檢定法。近年本類抗生素的效價測定目前各國藥典主要采用微生物檢定法。近年來國內(nèi)外又有各種免疫法、色譜法等定量分析方法。來國內(nèi)外又有各種免疫法、色譜法等定量分析方法。由于本類抗生素多數(shù)無紫外吸收，不能直接用紫外或熒光檢測器，由于本類抗生素多數(shù)無紫外吸收，不能直接用紫外或熒光檢測器，需進(jìn)行柱前或柱后衍生化，采用的衍生化試劑有鄰苯二醛、需進(jìn)行柱前或柱后衍生化，采用的衍生化試劑有鄰苯二醛、1、2-萘萘醌醌-4-磺酸、磺酸、2、4、6-三硝基磺酸、三硝基磺酸、1-氟氟-2、4-二硝基苯、二硝基苯、9-芴甲基氯芴甲基氯甲酸酯、茚

44、三酮等。甲酸酯、茚三酮等。n示例示例 豬組織中慶大霉素和新霉素的豬組織中慶大霉素和新霉素的HPLC法法色譜條件：色譜條件：Hypersil BDS C18分析柱；乙腈分析柱；乙腈-水（水（85：15）為流動相；）為流動相；流速流速1.0ml/min；熒光檢測器，熒光檢測器，ex=260nm，em=315nm。樣品處理：取樣品（肝、腎、肌肉）適量，加磷酸鹽緩沖液樣品處理：取樣品（肝、腎、肌肉）適量，加磷酸鹽緩沖液（Ph=7.4），），室溫孵育室溫孵育1h，然后加然后加 三氯乙酸，勻漿三氯乙酸，勻漿30s，于于4下離下離心（心（3500r/min）15min，將上清液移置另一試管中，加離子對試劑將

45、上清液移置另一試管中，加離子對試劑（已烷磺酸鈉溶液（已烷磺酸鈉溶液）。）。再經(jīng)固相柱提取純化，用乙腈再經(jīng)固相柱提取純化，用乙腈-0.02mol/L已已烷磺酸鈉（烷磺酸鈉（55：45）洗脫。洗脫液與）洗脫。洗脫液與9-芴甲基氯甲酸酯（芴甲基氯甲酸酯（FMOC-Cl）混合，進(jìn)行衍生化反應(yīng)，混合，進(jìn)行衍生化反應(yīng)，15min后加甘氨酸中止反應(yīng)，取適量進(jìn)樣測后加甘氨酸中止反應(yīng)，取適量進(jìn)樣測定。定。圖譜圖譜結(jié)果與討論：結(jié)果與討論：用用FMOC-Cl衍生化可獲得強(qiáng)熒光的衍生物，在衍生化可獲得強(qiáng)熒光的衍生物，在pH8.0的條件下的條件下反應(yīng)，衍生物可穩(wěn)定在反應(yīng)，衍生物可穩(wěn)定在12h。見圖見圖11-7。測得慶大

46、霉素各組分和新霉素的提取回收率在測得慶大霉素各組分和新霉素的提取回收率在75%-86%之間；之間；日內(nèi)、日間日內(nèi)、日間RSD小于小于10%；檢測限分別為；檢測限分別為0.05g/g和和0.1g/g（S/N=5）；）；定量限為檢測限定量限為檢測限2倍。在倍。在0.1g/g-1.0g/g范圍內(nèi)，范圍內(nèi)，被測組分濃度與響應(yīng)值之間呈良好的線性關(guān)系，被測組分濃度與響應(yīng)值之間呈良好的線性關(guān)系，r0.999。第四節(jié)第四節(jié) 四環(huán)素類抗生素四環(huán)素類抗生素（tetracyclines antibiotics ）n這類抗生素有四個環(huán)構(gòu)成，故統(tǒng)稱為四環(huán)素類抗生素。這類抗生素有四個環(huán)構(gòu)成，故統(tǒng)稱為四環(huán)素類抗生素。n一、

47、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)n結(jié)構(gòu)中各取代基結(jié)構(gòu)中各取代基R、R、R及及R的不同構(gòu)成各種四環(huán)素類抗生素。常見結(jié)的不同構(gòu)成各種四環(huán)素類抗生素。常見結(jié)構(gòu)如下：構(gòu)如下：(Z)(Z)RRRRN（CH3）2HOHCONH2OOHOHOOHABCn2性質(zhì)性質(zhì)（1）酸堿性與溶解度：顯弱堿性和顯弱酸性，是兩性化合物。）酸堿性與溶解度：顯弱堿性和顯弱酸性，是兩性化合物。 （2）旋光性：具有不對稱碳原子，因此有旋光性；）旋光性：具有不對稱碳原子，因此有旋光性；（3）紫外吸收和熒光性質(zhì)：）紫外吸收和熒光性質(zhì)：（4）與金屬離子形成配位化合物：）與金屬離子形成配位化合物：（5）穩(wěn)定性：四環(huán)素類抗生素對各種氧化劑（包

48、括空氣中氧在內(nèi)）、酸、）穩(wěn)定性：四環(huán)素類抗生素對各種氧化劑（包括空氣中氧在內(nèi)）、酸、堿都是不穩(wěn)定的。堿都是不穩(wěn)定的。本類抗生素具有氫化駢四苯的共同基本母核，均是化學(xué)兩性物質(zhì)，本類抗生素具有氫化駢四苯的共同基本母核，均是化學(xué)兩性物質(zhì)，可與酸、堿成鹽，但在堿性水溶液易降解，在酸性水溶液穩(wěn)定，可與酸、堿成鹽，但在堿性水溶液易降解，在酸性水溶液穩(wěn)定，一般以鹽酸鹽應(yīng)用于臨床。一般以鹽酸鹽應(yīng)用于臨床。nA差向異構(gòu)化性質(zhì)：四環(huán)素類抗生素在弱酸性（差向異構(gòu)化性質(zhì)：四環(huán)素類抗生素在弱酸性（pH2.0-6.0）溶溶液中會發(fā)生差向異構(gòu)化。液中會發(fā)生差向異構(gòu)化。(R)(S)(R)(Z)N（CH3）2HOCONH2OH

49、OHA(R)(S)(R)(Z)N（CH3）2HOHCONH2OOHHH(R)(S)(S)(Z)+NH（CH3）2HOHCONH2OOH(R)(S)(Z)(E)+NH（CH3）2OHCONH2OHOHHH差向四環(huán)素差向四環(huán)素四環(huán)素四環(huán)素nB降解性質(zhì)：降解性質(zhì)：酸 性 降 解 ， 在 酸 性 條 件 下 （酸 性 降 解 ， 在 酸 性 條 件 下 （ p H 2 ） 生 成 脫 水 四 環(huán) 素生 成 脫 水 四 環(huán) 素（anhydrotetracycline，ATC）。）。反應(yīng)式如下：反應(yīng)式如下：(Z)(S)(S)(Z)OHCH3OHOBCH+H(Z)(S)(Z)+OH2CH3OHOBCH-H2

50、O-H+(Z)(Z)H3COOBCH(Z)(R)(Z)H3COHOBCH四環(huán)素四環(huán)素脫水四環(huán)素脫水四環(huán)素n堿性降解：在堿性溶液中生成無活性的異構(gòu)體。反應(yīng)如下：堿性降解：在堿性溶液中生成無活性的異構(gòu)體。反應(yīng)如下：(Z)(S)(Z)OHCH3OHOBCOH-R(R)(S)(Z)RRN（CH3）2HOHCONH2OOHOHOOHABCDOCH3異四環(huán)素類抗生素異四環(huán)素類抗生素四環(huán)素類抗生素四環(huán)素類抗生素二、鑒別試驗(yàn)二、鑒別試驗(yàn)n1濃硫酸反應(yīng)；濃硫酸反應(yīng)；n2三氯化鐵反應(yīng)；三氯化鐵反應(yīng)；n3薄層色譜法：薄層色譜法： n應(yīng)用示例應(yīng)用示例 鹽酸土霉素的鑒別鹽酸土霉素的鑒別n薄層板的制備：硅藻土薄層板的制備

51、：硅藻土EDTA-2Na溶液溶液-甘油（甘油（95：5）為粘合劑；展）為粘合劑；展開劑：取開劑：取4%EDTA-2Na溶液（溶液（pH7.0）5ml，加至醋酸乙酯加至醋酸乙酯-氯仿氯仿-丙丙酮（酮（2：2：1）200ml中為展開劑，展開后，氨薰后，置紫外光燈下中為展開劑，展開后，氨薰后，置紫外光燈下（365nm）下檢視。下檢視。 n4HPLC法：法：ChP和和USP（25）采用采用HPLC法鑒別鹽酸土霉素、鹽法鑒別鹽酸土霉素、鹽酸四環(huán)素、鹽酸多西霉素、鹽酸金霉素等。在含量測定項(xiàng)下記錄的酸四環(huán)素、鹽酸多西霉素、鹽酸金霉素等。在含量測定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品主峰的保留時間應(yīng)與對照品主峰的保留時

52、間一致。色譜圖中，供試品主峰的保留時間應(yīng)與對照品主峰的保留時間一致。三、特殊雜質(zhì)檢查三、特殊雜質(zhì)檢查n1有關(guān)物質(zhì)：四環(huán)素類中的有關(guān)物質(zhì)主要是異構(gòu)體雜質(zhì)、降解雜質(zhì)有關(guān)物質(zhì)：四環(huán)素類中的有關(guān)物質(zhì)主要是異構(gòu)體雜質(zhì)、降解雜質(zhì)（ETC、ATC、EATC）等。等。 n2雜質(zhì)吸收度：如雜質(zhì)吸收度：如ChP規(guī)定的鹽酸四環(huán)素的雜質(zhì)吸收度測定方法如規(guī)定的鹽酸四環(huán)素的雜質(zhì)吸收度測定方法如下：下：取本品加取本品加0.8%氫氧化鈉溶液制成每氫氧化鈉溶液制成每1ml中含中含10mg的溶液，照分光光的溶液，照分光光度法，置度法，置4cm的吸收池中，在的吸收池中，在530nm的波長下測定，自加的波長下測定，自加0.8%氫氧氫氧化鈉溶液起化鈉溶液起5min，其吸收度不得過其吸收度不得過0.12（供注射用）。（供注射用）。n四、含量測定四、含量測定n四環(huán)素類抗生素的含量測定，目前各國藥典多采用四環(huán)素類抗生素的含量測定，目前各國藥典多采用HPLC法。法。n示例：鹽酸四環(huán)素的含量測定方法：示例：鹽酸四環(huán)素的含量測定方法：n色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基鍵合硅膠為填充柱（色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基鍵合硅膠為填充柱（pH值值適應(yīng)范圍大于適應(yīng)范圍大于8.0）；）；0.1mol/L草酸銨溶液草酸銨溶液-二甲