臨檢血液概述、采血、抗凝劑

1、臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)是采用各種實(shí)驗(yàn)室檢查方法和技術(shù)，臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)是采用各種實(shí)驗(yàn)室檢查方法和技術(shù)，對來自機(jī)體的血液、尿液、糞便以及分泌物和排對來自機(jī)體的血液、尿液、糞便以及分泌物和排泄物等標(biāo)本進(jìn)行一般性狀觀察，理學(xué)、化學(xué)、免泄物等標(biāo)本進(jìn)行一般性狀觀察，理學(xué)、化學(xué)、免疫學(xué)、病原學(xué)和顯微鏡等檢查，為疾病篩查和診疫學(xué)、病原學(xué)和顯微鏡等檢查，為疾病篩查和診斷提供簡便、快速的檢測結(jié)果。斷提供簡便、快速的檢測結(jié)果。第一節(jié)概述第一節(jié)概述血液血液生理概要生理概要 標(biāo)本采集、送檢、保存與處理標(biāo)本采集、送檢、保存與處理 標(biāo)本抗凝標(biāo)本抗凝 血涂片的制備血涂片的制備血細(xì)胞染色方法血細(xì)胞染色方法血細(xì)胞顯微

2、鏡計(jì)數(shù)法血細(xì)胞顯微鏡計(jì)數(shù)法教學(xué)目標(biāo)教學(xué)目標(biāo)掌握：掌握：血液標(biāo)本采集的方法及評價(jià)，抗凝劑的選擇應(yīng)用，血液標(biāo)本采集的方法及評價(jià)，抗凝劑的選擇應(yīng)用，血涂片制備方法和染色原理血涂片制備方法和染色原理，血細(xì)胞顯微鏡計(jì)數(shù)，血細(xì)胞顯微鏡計(jì)數(shù)方法方法。 熟悉：熟悉：血液血液生理生理概述和概述和標(biāo)本保存標(biāo)本保存。一一 血液生理概要血液生理概要1.血液的組成血液的組成血漿：血液加抗凝劑后分離出來的液體部分。血漿：血液加抗凝劑后分離出來的液體部分。血清：血液離休后自然凝固分離出來的液體。血清：血液離休后自然凝固分離出來的液體。45%血塵55%89%9192%2.血液的理化性質(zhì)血液的理化性質(zhì)血量：正常人血液量血量：正

3、常人血液量7010ml/kg體重，成人體重，成人45L，占體重的占體重的6%8%。顏色：動(dòng)脈血鮮紅色顏色：動(dòng)脈血鮮紅色 HbO2 靜脈血暗紅色靜脈血暗紅色 Hbred 貧血病人貧血病人 紅色變淺紅色變淺 CO、氰化物中毒、氰化物中毒 櫻紅色櫻紅色紅細(xì)胞懸浮穩(wěn)定性紅細(xì)胞懸浮穩(wěn)定性 唾液酸根形成唾液酸根形成Zeta電位電位 黏滯性黏滯性 血細(xì)胞比容血細(xì)胞比容 （紅細(xì)胞數(shù)量）（紅細(xì)胞數(shù)量） 血漿粘度血漿粘度 （血漿蛋白濃度）（血漿蛋白濃度） 比密比密 血液比密與紅細(xì)胞相關(guān)血液比密與紅細(xì)胞相關(guān) 男男1.0551.063 女女1.0511.060 血漿比密與血漿蛋白相關(guān)血漿比密與血漿蛋白相關(guān) 1.025

4、1.030滲透壓滲透壓 血漿滲透壓血漿滲透壓 290310mOsm/（kgH2O）PH 7.357.45凝固性凝固性 凝血因子激活凝血因子激活 3.血液的功能血液的功能 運(yùn)輸功能運(yùn)輸功能 協(xié)調(diào)功能協(xié)調(diào)功能 維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定 防御功能防御功能二、血標(biāo)本的采集二、血標(biāo)本的采集、送檢、保存與處理送檢、保存與處理（一）血標(biāo)本的采集（一）血標(biāo)本的采集采血采血靜脈采血靜脈采血毛細(xì)血管采血毛細(xì)血管采血 普通采血法普通采血法真空采血法真空采血法 靜靜 脈脈 采采 血血 法法 (venipuncture for blood collection)凡需血量較多的檢查凡需血量較多的檢查0.5ml如：

5、如：ESR、Hct、凝血因子的測定等、凝血因子的測定等。部位部位 淺表靜脈均可淺表靜脈均可,常用肘部靜脈，不明顯時(shí)可用常用肘部靜脈，不明顯時(shí)可用手背、踝部，手背、踝部， 幼兒可用頸外靜脈。幼兒可用頸外靜脈。體位體位 坐位或臥位坐位或臥位捆扎時(shí)間捆扎時(shí)間 1min二、靜脈采血法二、靜脈采血法 【采血方法】 準(zhǔn)備選擇靜脈消毒扎壓脈帶穿刺、松壓脈帶抽血拔針止血注入試管。 如以下視頻所示靜脈采血法靜脈采血法普通采血法普通采血法1.避免溶血避免溶血,器具干燥器具干燥,避免氣泡避免氣泡2.先拔針頭先拔針頭,再緩緩注入試管再緩緩注入試管3.與抗凝劑混勻時(shí)輕輕顛倒與抗凝劑混勻時(shí)輕輕顛倒4.嚴(yán)格消毒嚴(yán)格消毒5.

6、抽血時(shí)只能外抽不能內(nèi)推抽血時(shí)只能外抽不能內(nèi)推真空采血法（真空采血法（40年代，美國年代，美國BD公司）公司）套筒式和頭皮靜脈式兩種優(yōu)點(diǎn)： 血樣無需容器之間的轉(zhuǎn)移，減少溶血現(xiàn)象，保持 血液標(biāo)本的完整性，使檢驗(yàn)結(jié)果更加準(zhǔn)確，也有 利于防止醫(yī)院內(nèi)血源性傳染病的交叉感染和環(huán)境 保護(hù)。缺點(diǎn)： 真空采血管價(jià)格較高注意: 采血后,先拔下刺塞針端的采血試管,后拔穿刺針。 I.采血針采血針2008-10-21 II.持針器持針器2008-10-212008-10-21 III.真空采血管真空采血管2008-10-21 血量量0.1ml的檢驗(yàn)項(xiàng)目：的檢驗(yàn)項(xiàng)目：RBC計(jì)數(shù)、計(jì)數(shù)、WBC計(jì)數(shù)、計(jì)數(shù)、 BPC計(jì)數(shù)、計(jì)數(shù)

7、、Hb測定等測定等 毛細(xì)血管采血法毛細(xì)血管采血法Skin puncture for blood collection采血部位WHO推薦采取推薦采取毛細(xì)血管毛細(xì)血管血以左手中指或無名指指尖內(nèi)血以左手中指或無名指指尖內(nèi)側(cè)側(cè)為宜為宜1手指采血：手指采血： 優(yōu)點(diǎn)：方便優(yōu)點(diǎn)：方便獲較多血量獲較多血量檢查結(jié)果比較恒定檢查結(jié)果比較恒定 缺點(diǎn)：與靜脈血仍在某些差異。缺點(diǎn)：與靜脈血仍在某些差異。2耳垂采血：耳垂采血： 優(yōu)點(diǎn)：痛感輕優(yōu)點(diǎn)：痛感輕 方便方便 適用于反復(fù)采集適用于反復(fù)采集 缺點(diǎn)：血循環(huán)差缺點(diǎn)：血循環(huán)差受氣溫影響大檢查結(jié)果不恒定受氣溫影響大檢查結(jié)果不恒定 RBC、WBC、Hb、Hct結(jié)果均比靜脈血高，特

8、別是冬季。結(jié)果均比靜脈血高，特別是冬季。3、其他部位：、其他部位： 拇指、拇趾或足拇指、拇趾或足底外側(cè)緣底外側(cè)緣采血采血 半歲以下嬰幼兒半歲以下嬰幼兒 皮膚完整處皮膚完整處 嚴(yán)重?zé)齻邍?yán)重?zé)齻?采血針采血針 三棱針或?qū)Ｓ玫娜忉樆驅(qū)Ｓ玫摹安裳槻裳槨睘楹?，使用前者?yīng)高壓滅菌，為好，使用前者應(yīng)高壓滅菌， 一人一針一人一針。2008-10-21注意事項(xiàng)1、采血部位皮膚完整。、采血部位皮膚完整。2、無菌技術(shù)操作：防采血部位感染，、無菌技術(shù)操作：防采血部位感染， 一人一針防肝炎、艾滋病。一人一針防肝炎、艾滋病。3、采血針刺入皮膚應(yīng)深淺適中。、采血針刺入皮膚應(yīng)深淺適中。4、多項(xiàng)檢查時(shí)，采血次序?yàn)椋骸?/p>

9、多項(xiàng)檢查時(shí)，采血次序?yàn)椋築PC計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)RBC計(jì)數(shù)、計(jì)數(shù)、Hb測測 定定WBC計(jì)數(shù)與分類。計(jì)數(shù)與分類。5、取血用于自動(dòng)化血細(xì)胞分析儀，要防止棉球纖維混入、取血用于自動(dòng)化血細(xì)胞分析儀，要防止棉球纖維混入 堵塞儀器。堵塞儀器。兩種采血方法的優(yōu)缺點(diǎn)比較毛細(xì)血管毛細(xì)血管采采血血靜脈采血靜脈采血缺點(diǎn)缺點(diǎn)限制了重復(fù)實(shí)驗(yàn)和追限制了重復(fù)實(shí)驗(yàn)和追加實(shí)驗(yàn)，標(biāo)本量少，加實(shí)驗(yàn)，標(biāo)本量少，局部炎癥可得假結(jié)果局部炎癥可得假結(jié)果，組織液可混入，組織液可混入不同抗凝劑的使用，不同抗凝劑的使用，改變血液性質(zhì)，影響改變血液性質(zhì)，影響有形成分的形態(tài)有形成分的形態(tài)優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)價(jià)廉、快速、操作簡價(jià)廉、快速、操作簡便，標(biāo)本可直接測定便，標(biāo)本可

10、直接測定標(biāo)本代表性大，無組標(biāo)本代表性大，無組織液影響，適于臨床織液影響，適于臨床研究，可重復(fù)實(shí)驗(yàn)和研究，可重復(fù)實(shí)驗(yàn)和追加其他實(shí)驗(yàn)追加其他實(shí)驗(yàn) 1.血標(biāo)本運(yùn)輸2.血標(biāo)本保存3.檢驗(yàn)后標(biāo)本處理 （二）（二）血液標(biāo)本運(yùn)輸、保存與處理血液標(biāo)本運(yùn)輸、保存與處理 三、血標(biāo)本的抗凝 1、枸櫞酸鈉（檸檬酸鈉） a. 抗凝原理：螯合鈣離抗凝原理：螯合鈣離子子使用方法使用方法 配成配成 109 mmol/L的濃度和血液的濃度和血液1：9 配成配成 105 mmol/L的濃度和血液的濃度和血液1：4 化學(xué)名：3-羥基-3-羧基戊二酸（三鈉鹽）c. 適用范圍：止血學(xué)檢驗(yàn)、血沉、輸血保養(yǎng)液（毒性?。┻m用范圍：止血學(xué)檢驗(yàn)

11、、血沉、輸血保養(yǎng)液（毒性?。ヾ. 不適用于：血細(xì)胞計(jì)數(shù)不適用于：血細(xì)胞計(jì)數(shù) 2. 乙二胺四乙酸（乙二胺四乙酸（EDTA）鹽）鹽a. 抗凝原理：抗凝原理： 螯合鈣離子螯合鈣離子b. 使用方法：使用方法： 15g/L濃度濃度EDTA 和血液和血液 1：10適用范圍：適用范圍： 對血細(xì)胞形態(tài)影響小對血細(xì)胞形態(tài)影響小,適合血常規(guī)檢查、適合血常規(guī)檢查、 Hct不適用于：影響血小板聚集和不適用于：影響血小板聚集和凝血因子凝血因子功能功能, 不宜凝血不宜凝血因子因子檢查和血小板功能試驗(yàn)。檢查和血小板功能試驗(yàn)。 3. 肝素肝素 （含硫酸基團(tuán)的粘多糖）（含硫酸基團(tuán)的粘多糖）抗凝原理：低濃度時(shí)抑制因子抗凝原理：低

12、濃度時(shí)抑制因子a、和和PF3之之 間的作用，加強(qiáng)抗凝血酶間的作用，加強(qiáng)抗凝血酶滅活絲滅活絲 氨酸蛋白酶，從而阻止凝血酶形成，氨酸蛋白酶，從而阻止凝血酶形成， 還能抑制凝血酶的自我催化及抑制還能抑制凝血酶的自我催化及抑制 因子因子的作用；高濃度時(shí)阻斷凝血的作用；高濃度時(shí)阻斷凝血 酶和纖維蛋白的反應(yīng)。酶和纖維蛋白的反應(yīng)。 b. 適用方法：適用方法： 1g/L濃度的肝素鈉與血液濃度的肝素鈉與血液 1：10優(yōu)點(diǎn)：抗凝能力強(qiáng)、不影響血細(xì)胞體積、不易優(yōu)點(diǎn)：抗凝能力強(qiáng)、不影響血細(xì)胞體積、不易 溶血、能耐高溫。溶血、能耐高溫。適用范圍：紅細(xì)胞檢驗(yàn)（紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白適用范圍：紅細(xì)胞檢驗(yàn)（紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白

13、 測定、紅細(xì)胞比積）和多種生化分析測定、紅細(xì)胞比積）和多種生化分析 e. 不適用于：不適用于： WBC和和BPC計(jì)數(shù)、血涂片檢查、計(jì)數(shù)、血涂片檢查、 凝血凝血功能功能檢驗(yàn)。檢驗(yàn)。4. 草酸鈉（乙二酸的鈉鹽）草酸鈉（乙二酸的鈉鹽）a. 抗凝原理：草酸鈣沉淀抗凝原理：草酸鈣沉淀b. 使用方法：使用方法： 草酸鈉草酸鈉 0.1mol/L 和血液和血液1：9c. 適用范圍：適用范圍： 止血學(xué)檢驗(yàn)止血學(xué)檢驗(yàn) 。d. 不適用于：對凝血因子不適用于：對凝血因子V保護(hù)功能差，保護(hù)功能差， 影響影響PT測定；沉淀物影響測定；沉淀物影響 自動(dòng)凝血儀的使用自動(dòng)凝血儀的使用。5. 雙草酸鹽抗凝劑雙草酸鹽抗凝劑 a.

14、抗凝原理：抗凝原理： 草酸鈣沉淀草酸鈣沉淀使用方法：使用方法： 草酸鉀草酸鉀0.8g , 草酸銨草酸銨1.2g（100ml） 與血液與血液 1：10 （80C以下烘干）以下烘干）適用范圍：適用范圍： 紅細(xì)胞檢驗(yàn)（紅細(xì)胞比積、計(jì)數(shù)）紅細(xì)胞檢驗(yàn)（紅細(xì)胞比積、計(jì)數(shù)） d. 不適于不適于: 血小板計(jì)數(shù)和白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)血小板計(jì)數(shù)和白細(xì)胞分類計(jì)數(shù), 電解質(zhì)測定電解質(zhì)測定 物理方法抗凝物理方法抗凝 脫纖維蛋白：脫纖維蛋白： 將血液注入有玻璃珠的器皿中，轉(zhuǎn)動(dòng)，將血液注入有玻璃珠的器皿中，轉(zhuǎn)動(dòng)， 纖維蛋白纏繞凝固于玻璃球，纖維蛋白纏繞凝固于玻璃球，使血液使血液 不能凝固不能凝固。適用于免疫學(xué)檢驗(yàn)和紅斑。適用于免

15、疫學(xué)檢驗(yàn)和紅斑 性狼瘡細(xì)胞檢查。性狼瘡細(xì)胞檢查。小結(jié)小結(jié) 血液是由血細(xì)胞和血漿組成的紅色、粘稠、不透明、帶腥味的混懸液。凡需血液量較少的檢驗(yàn)項(xiàng)目，常用皮膚采血法，通常采手指血。采血時(shí)要注意采血部位要無病變，要擦去第一滴血，不能用力擠壓。凡需血液量較多的檢驗(yàn)項(xiàng)目，要用靜脈采血法，其采血部位常用肘前靜脈。如需要抗凝抗凝血標(biāo)本時(shí)，則需要根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目的要求，采用枸櫞酸鈉、乙二胺四乙酸鹽和肝素等抗凝劑來阻止血液凝固。請您練習(xí)請您練習(xí)答案答案: :皮膚采血法用注意什么問題皮膚采血法用注意什么問題? ?所選擇采血部位的皮膚應(yīng)完好。嚴(yán)格消毒所選擇采血部位的皮膚應(yīng)完好。嚴(yán)格消毒皮膚，防止采血部位感染。皮膚消毒后

16、，待乙皮膚，防止采血部位感染。皮膚消毒后，待乙醇揮發(fā)干后再刺針。如血流不暢，切不可用力醇揮發(fā)干后再刺針。如血流不暢，切不可用力擠壓勉強(qiáng)采血，而應(yīng)重新針刺。出血不止時(shí)，擠壓勉強(qiáng)采血，而應(yīng)重新針刺。出血不止時(shí)，可用消毒干棉球壓迫至血不再流出為止，必要時(shí)可用消毒干棉球壓迫至血不再流出為止，必要時(shí)應(yīng)在報(bào)告單上注明，提醒臨床醫(yī)生注意。進(jìn)行應(yīng)在報(bào)告單上注明，提醒臨床醫(yī)生注意。進(jìn)行多項(xiàng)細(xì)胞檢查要分項(xiàng)采血時(shí)，采血的次序?yàn)椋貉囗?xiàng)細(xì)胞檢查要分項(xiàng)采血時(shí)，采血的次序?yàn)椋貉“逵?jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)。小板計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)。請您練習(xí)請您練習(xí)請說出靜脈采血的步驟？請說出靜脈采血的步驟？答案答案: : 準(zhǔn)

17、備準(zhǔn)備選擇靜脈選擇靜脈消毒消毒扎壓脈帶扎壓脈帶穿刺、松壓脈帶穿刺、松壓脈帶 抽血抽血 拔針止血拔針止血注入試管。請您練習(xí)請您練習(xí)答案答案: :請說出枸櫞酸鈉的抗凝原理、用途及其用量？請說出枸櫞酸鈉的抗凝原理、用途及其用量？枸櫞酸鈉能與血液中的鈣離子形成可溶性的螯合枸櫞酸鈉能與血液中的鈣離子形成可溶性的螯合物，使物，使CaCa2+2+失去凝血作用，從而阻止血液凝固。失去凝血作用，從而阻止血液凝固。主主要用于血沉、凝血象和血小板功能檢查。凝血象要用于血沉、凝血象和血小板功能檢查。凝血象檢查常用檢查常用0.109mol/L0.109mol/L的水溶液，與血液之比通常的水溶液，與血液之比通常為為1 1

18、：9 9。魏氏法血沉測定用濃度為。魏氏法血沉測定用濃度為0.105mol/L0.105mol/L，與血液比例為與血液比例為1:41:4（V V：V V）。）。請您練習(xí)請您練習(xí)請將下列抗凝方法和適宜的項(xiàng)目用線連接起來。 枸櫞酸鈉 血細(xì)胞比容測定乙二胺四乙酸鹽 紅斑狼瘡細(xì)胞的檢驗(yàn) 肝素 凝血象 脫纖維法 一般血液學(xué)檢查教學(xué)教學(xué)目標(biāo)目標(biāo)1.敘述載玻片的清潔方法、血涂片的制備方法及合敘述載玻片的清潔方法、血涂片的制備方法及合格血片的標(biāo)準(zhǔn)。格血片的標(biāo)準(zhǔn)。2.闡述瑞氏染色的原理、染液成分、染色方法、注闡述瑞氏染色的原理、染液成分、染色方法、注意事項(xiàng)和染色結(jié)果的判斷。意事項(xiàng)和染色結(jié)果的判斷。3.知道吉姆薩染

19、色法和混合染色法。知道吉姆薩染色法和混合染色法。良好血涂片的標(biāo)準(zhǔn)厚薄適宜, 頭體尾分明， 細(xì)胞分布均勻,血膜邊緣整齊兩側(cè)兩端留有空隙 良好血涂片尾體頭四四 血涂片的制備血涂片的制備血涂片染色顯微鏡檢查用途：細(xì)胞形態(tài)檢查，細(xì)胞血涂片染色顯微鏡檢查用途：細(xì)胞形態(tài)檢查，細(xì)胞 數(shù)量評估，數(shù)量評估，網(wǎng)織紅、異常細(xì)胞、寄生蟲檢驗(yàn)。血膜過厚：細(xì)胞重疊縮小血膜過厚：細(xì)胞重疊縮小血膜過?。杭?xì)胞分布不勻，白細(xì)胞多集中于邊緣血膜過?。杭?xì)胞分布不勻，白細(xì)胞多集中于邊緣1.玻片清潔：玻片清潔： a 新玻片處理：新玻片處理：用鹽酸浸泡用鹽酸浸泡24小時(shí)小時(shí)。 b 用過玻片處理：用過玻片處理：用洗滌劑清洗。用洗滌劑清洗。

20、c 使用中玻片處理：只能持玻片邊緣，使用中玻片處理：只能持玻片邊緣， 保持清潔、干燥、保持清潔、干燥、 中性、無油膩。中性、無油膩。操 作推片載玻片 25-30 30-45 推玻片載玻片制備過程：角度大角度大 角度大 速度快 血膜厚血滴過大,血膜過厚造成血膜厚的原因示意圖造成血膜薄的原因示意圖造成血膜薄的原因示意圖角度小角度小血滴小 血膜薄角度小 速度慢 血膜薄 25 血膜分布不均：主要由于以下原因所致血膜分布不均：主要由于以下原因所致: : 推片用力不均,血膜成厚薄相間的梯形玻片不清潔 有油跡 血膜出現(xiàn)空泡區(qū)推片邊緣不齊血膜出現(xiàn)線條樣缺損堿性染料：為陽離子染料，能接受質(zhì)子，染細(xì)胞核堿性染料：

21、為陽離子染料，能接受質(zhì)子，染細(xì)胞核 的染料。如亞甲藍(lán)、天青。的染料。如亞甲藍(lán)、天青。酸性染料：為陰離子染料，能釋放質(zhì)子。主要有熒酸性染料：為陰離子染料，能釋放質(zhì)子。主要有熒 烷烷-氧雜蒽染料和偶氮染料兩類，能結(jié)合氧雜蒽染料和偶氮染料兩類，能結(jié)合 細(xì)胞的堿性成分并染色，如血紅蛋白、細(xì)胞的堿性成分并染色，如血紅蛋白、 嗜酸性顆粒成分等。嗜酸性顆粒成分等。3. 復(fù)合染料：復(fù)合染料： 同時(shí)具有陰、陽離子型的染料如瑞氏染料同時(shí)具有陰、陽離子型的染料如瑞氏染料（一）染料（一）染料 （天然染料和人工染料）（天然染料和人工染料） 發(fā)色基團(tuán)和助色基團(tuán)使生物學(xué)染色劑產(chǎn)生顏色和被染發(fā)色基團(tuán)和助色基團(tuán)使生物學(xué)染色劑產(chǎn)

22、生顏色和被染 組織親合。組織親合。五五 細(xì)胞常用的染色方法細(xì)胞常用的染色方法（二）細(xì)胞染色原理：（二）細(xì)胞染色原理：1. 物理作用：物理作用：毛細(xì)管現(xiàn)象、滲透、吸收、吸附作用等毛細(xì)管現(xiàn)象、滲透、吸收、吸附作用等化學(xué)作用：化學(xué)作用： a. 染料的化學(xué)成分：染料的化學(xué)成分： 助色基團(tuán)的存在，堿性染料在溶媒中為陽離子型，易與助色基團(tuán)的存在，堿性染料在溶媒中為陽離子型，易與組織和細(xì)胞內(nèi)帶負(fù)電荷的酸性物質(zhì)結(jié)合；而酸性染料在組織和細(xì)胞內(nèi)帶負(fù)電荷的酸性物質(zhì)結(jié)合；而酸性染料在溶媒中為陰離子型，與帶正電荷的堿性物質(zhì)結(jié)合。溶媒中為陰離子型，與帶正電荷的堿性物質(zhì)結(jié)合。 瑞氏染色法（一）染色原理 分兩相進(jìn)行，第一相是

23、酸性伊紅與細(xì)胞中的堿性物質(zhì)如血紅蛋白、嗜酸性顆粒結(jié)合；堿性亞甲藍(lán)與細(xì)胞中的酸性物質(zhì)如核染色質(zhì)、嗜堿性顆粒、血小板結(jié)合。第二相是亞甲藍(lán)和伊紅結(jié)合在適宜條件下形成紫色的亞甲藍(lán)-伊紅復(fù)合物，結(jié)果使白細(xì)胞核染色質(zhì)成紫色（瘧原蟲的染色質(zhì)成紅色），中性粒細(xì)胞的顆粒及血小板顆粒區(qū)成紫色。 b. 蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)：蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)： 蛋白質(zhì)中的氨基酸含有不同蛋白質(zhì)中的氨基酸含有不同 數(shù)量的氨基（數(shù)量的氨基（-NH2）和）和 羧基（羧基（-COOH），同時(shí)還有其他活性基團(tuán)。在游離狀態(tài)時(shí)，），同時(shí)還有其他活性基團(tuán)。在游離狀態(tài)時(shí)， -NH2獲得一個(gè)獲得一個(gè)H+變成帶正電的變成帶正電的-NH3+，而，而-COOH失去

24、一個(gè)失去一個(gè)H+變成帶負(fù)電的變成帶負(fù)電的-COO-。分別與不同染料結(jié)合。分別與不同染料結(jié)合。 c. 周圍環(huán)境的酸堿度：周圍環(huán)境的酸堿度： 如環(huán)境如環(huán)境pHpI（ pI 為等電點(diǎn)），則蛋白質(zhì)帶正電，結(jié)合酸性為等電點(diǎn)），則蛋白質(zhì)帶正電，結(jié)合酸性 染料；反之，染料；反之， pH pI，則結(jié)合堿性染料。，則結(jié)合堿性染料。 PHH增多增多易與伊紅結(jié)合易與伊紅結(jié)合染色偏紅染色偏紅 PHH減少減少易與美藍(lán)結(jié)合易與美藍(lán)結(jié)合偏藍(lán)偏藍(lán) （二）試劑（二）試劑 1. Wright染液染液 瑞氏染粉瑞氏染粉0.1g,甲醇甲醇60.0ml 磷酸鹽緩沖液（磷酸鹽緩沖液（PBS）：）： （PH6.46.8） 磷酸二氫鉀（無水

25、）磷酸二氫鉀（無水）0.3g，磷酸氫二鈉（無水），磷酸氫二鈉（無水）0.2g, 蒸餾水加到蒸餾水加到1000ml。 配好后用磷酸鹽溶液校正配好后用磷酸鹽溶液校正pH，塞緊瓶口備用。，塞緊瓶口備用。123 3. 染色方法：染色方法： a. 用蠟筆在血膜兩頭劃線，平放于染色架上。用蠟筆在血膜兩頭劃線，平放于染色架上。 b. 加瑞氏染液覆蓋血膜，固定加瑞氏染液覆蓋血膜，固定1min。 c. 滴加等量或稍多的緩沖液，混勻，染色滴加等量或稍多的緩沖液，混勻，染色5-10 分鐘。分鐘。 d. 用清水沖洗，待干后鏡檢。用清水沖洗，待干后鏡檢。注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)： a. 血膜要干透后才能染色，否則染色時(shí)易脫落血膜要干透后才能染色，否則染色時(shí)易脫落 b. 染色時(shí)間與染液濃度、室