環(huán)境衛(wèi)生學(xué)及管理監(jiān)測

1、醫(yī)院環(huán)境衛(wèi)生學(xué)及消毒效能監(jiān)測 聊城市婦幼保健院 婦產(chǎn)科 周迎迎 1 課堂目標(biāo)一、空氣消毒效果監(jiān)測 二、手消毒效果監(jiān)測 三、物品和環(huán)境表面消毒效果監(jiān)測 四、使用中消毒液染菌量測定五、內(nèi)鏡消毒滅菌效果監(jiān)測 六、血液透析液監(jiān)測 七、滅菌質(zhì)量監(jiān)測 2 一、空氣消毒效果監(jiān)測 非潔凈區(qū)域空氣消毒效果監(jiān)測 （一）采樣時(shí)間：在消毒處理后，操作前進(jìn)行采 樣。采樣前關(guān)閉門窗，在無人走動(dòng)的情況下靜止10分鐘 。（二）采樣方法：根據(jù)其采樣原理分：平板暴露 法和微生物采樣器法。 3 1、平板暴露法：布點(diǎn)方法 （1）室內(nèi)面積30 m2，設(shè)置內(nèi)、中、外對角線3 個(gè)點(diǎn)，內(nèi)、外布點(diǎn)部位距墻壁1m處； 4 （2）室內(nèi)面積 30

2、m2，設(shè)4角及中央5 點(diǎn)，4角布點(diǎn)部位距離墻壁1m處。 5 （3）采樣方法：將普通營養(yǎng)瓊脂血平皿 （直徑9cm)放在室內(nèi)各采樣點(diǎn)處，采樣高度為 距離地面0.81.5m，采樣時(shí)將平板蓋打開，扣放于 平板旁，暴露時(shí)間（類環(huán)境暴露15min，、環(huán)境暴露5min）,蓋好立即送檢。 （4）檢測方法：將采樣后平皿置37 溫箱培 養(yǎng)48h,計(jì)數(shù)并鑒定。 6 7 （5）結(jié)果判斷 標(biāo)準(zhǔn)值 環(huán)境類別 范圍 菌落總數(shù)cfu/m3 致病菌 類 潔凈手術(shù)室和其他潔凈場所 10cfu/m3(或0.2cfu/平板） 不得檢出 非潔凈手術(shù)部（室）、新生兒室、產(chǎn)房、燒傷病房、重癥監(jiān)護(hù)病房、 血液病病區(qū)等 類 200cfu/m3

3、(或4cfu/平板） 不得檢出 兒科病房、母嬰同室、婦產(chǎn)科檢查室、人流室、輸血科、消毒供應(yīng)中心（室）其他普通住院病區(qū) 普通門（急）診、化驗(yàn)室、注射室、 換藥室、治療室、感染性疾病科門診和病區(qū)類 500cfu/m3(或10cfu/平板） 不得檢出 注：致病菌指溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌 9 類衛(wèi)生部醫(yī)院潔凈手術(shù)部建筑技術(shù)規(guī)范 （GB50333-2002）中潔凈手術(shù)室等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（空態(tài)或靜態(tài)） 手術(shù)室 等級(jí) 名稱 手術(shù)區(qū) 周邊區(qū) 特別潔凈 100級(jí) 1000級(jí) 手術(shù)室 標(biāo)準(zhǔn)潔凈 1000級(jí) 10000級(jí) 手術(shù)室 一般潔凈 100000 10000級(jí) 手術(shù)室 級(jí) 準(zhǔn)潔凈 300000級(jí) 手術(shù)室 注：1

4、、浮游法的細(xì)菌最大平均濃度采用括號(hào)內(nèi)數(shù)值。細(xì)菌最大平均濃度是直接所測的結(jié)果，不 是沉降法和浮游法互相換算結(jié)果。 2、1級(jí)眼科專用手術(shù)室周邊區(qū)按10000級(jí)要求。 3、90皿為采樣直徑90mm的培養(yǎng)皿。 23 空氣潔凈度級(jí)別 潔凈手術(shù)室靜態(tài)空氣凈化效果的監(jiān)測 手術(shù)區(qū): 級(jí) 手術(shù)臺(tái)兩側(cè)邊至少各外推0.9m,兩端至少各外推0.4m后 （包括手術(shù)臺(tái)）的區(qū)域；級(jí) 眼科專用手術(shù)室手術(shù)區(qū)每邊不 小于1.2m; 級(jí) 手術(shù)臺(tái)兩側(cè)邊至少各外推0.6m,兩端至少各外推0.4m后 （包括手術(shù)臺(tái)）的區(qū)域； 級(jí) 手術(shù)臺(tái)四邊至少各外推0.4m后（包括手術(shù)臺(tái)）的區(qū)域； 級(jí) 不分手術(shù)區(qū)和周邊區(qū)。 周邊區(qū)：潔凈手術(shù)室內(nèi)除去手術(shù)區(qū)

5、以外的其他區(qū)域。 12 （一）采樣時(shí)間：潔凈手術(shù)室房間清潔并擦試消 毒后，使凈化空調(diào)系統(tǒng)達(dá)到自凈時(shí)間并處于開 啟狀態(tài)，然后進(jìn)行測試，室內(nèi)應(yīng)無工作人員。 （二）監(jiān)測人員要求：穿潔凈服，戴口罩，手衛(wèi) 生。動(dòng)作要輕，避免產(chǎn)生二次污染。 13 （三）布點(diǎn)順序：放置培養(yǎng)皿從總平面中最靠里 的房間開始布置，依次向外，最后人員撤出。 每間房間也是從房間最靠里的點(diǎn)開始布置，最 后布置門附近的點(diǎn)，然后人員撤出。收取培養(yǎng) 皿的順序相反，從最外邊的房間開始收，每間 房間從門附近的培養(yǎng)皿開始收，最先布置的皿 最后收，沉降時(shí)間略有差別。 14 （四）檢測方法：將血平板或普通營養(yǎng)瓊脂平板（直徑 9cm)放在室內(nèi)各采樣點(diǎn)處

6、，采樣點(diǎn)可布置在地面上或 不高于地面0.8m的任意高度上；在手術(shù)區(qū)檢測時(shí)應(yīng)無 手術(shù)臺(tái)，當(dāng)手術(shù)臺(tái)已固定時(shí)，檢測高度應(yīng)在臺(tái)面之上 0.25m；在100級(jí)區(qū)域檢測時(shí)，采樣口應(yīng)對著氣流方 向；在其他區(qū)域檢測時(shí)，采樣口均向上。采樣時(shí)將平 板蓋打開，扣放于平板旁，暴露30min,蓋好立即送檢. 15 （五）空白對照：第1次對照為培養(yǎng)皿對照，每監(jiān)測批次 中取1個(gè)培養(yǎng)皿做對比試驗(yàn)，培養(yǎng)皿不打開直接培養(yǎng)， 用于檢測培養(yǎng)皿是否合格。第2次對照為微生物室操作 對照，每室或每區(qū)取1個(gè)對照皿，對操作過程對照試 驗(yàn)，方法是模擬微生物檢測操作過程，但培養(yǎng)皿打開 后應(yīng)立即封蓋。兩次對照結(jié)果必須為陰性。整個(gè)操作 應(yīng)符合無菌操作

7、的要求。 16 （六）布點(diǎn)方法 注意：亂流潔凈室應(yīng)盡量避開高效送風(fēng)口正下方，同時(shí) 布點(diǎn)位置應(yīng)避開障礙物。 1、潔凈度局部百級(jí)周圍千級(jí)設(shè)置13個(gè)點(diǎn) 17 2、潔凈度局部千級(jí)周圍萬級(jí)設(shè)置9個(gè)點(diǎn) 18 3、潔凈度局部萬級(jí)周圍十萬級(jí)設(shè)置7個(gè)點(diǎn) 19 4、潔凈度局部十萬級(jí)周圍三十萬級(jí)設(shè)置5個(gè)點(diǎn) 20 5、潔凈度三十萬級(jí)設(shè)置5個(gè)點(diǎn) 21 計(jì)算方法：采樣后的培養(yǎng)皿應(yīng)37條件下 培養(yǎng)24h，并計(jì)算菌落數(shù)。菌落數(shù)的平均 值均四舍五入選位到小數(shù)點(diǎn)后1位。注意 手術(shù)區(qū)與周邊區(qū)分別計(jì)算。 22 衛(wèi)生部醫(yī)院潔凈手術(shù)部建筑技術(shù)規(guī)范 （GB50333-2002）中潔凈手術(shù)室等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（空態(tài)或靜態(tài)） 沉降法（浮游法）細(xì)菌最大平

8、均濃度 表面最大 空氣潔凈度級(jí)別 手術(shù)室 等級(jí) 染菌濃度 名稱 手術(shù)區(qū) 周邊區(qū) 手術(shù)區(qū) 周邊區(qū) 特別潔凈 0.2個(gè)/30min90皿 0.4個(gè)/30min90皿 5個(gè)/cm2 100級(jí) 1000級(jí) 手術(shù)室 （5個(gè)/m3） （10個(gè)/m3） 標(biāo)準(zhǔn)潔凈 0.75個(gè)/30min90皿 1.5個(gè)/30min90皿 5個(gè)/cm2 1000級(jí) 10000級(jí) 手術(shù)室 （25個(gè)/m3） （50個(gè)/m3） 一般潔凈 2個(gè)/30min90皿 4個(gè)/30min90皿 100000 5個(gè)/cm2 10000級(jí) 手術(shù)室 （75個(gè)/m3） （150個(gè)/m3） 級(jí) 準(zhǔn)潔凈 5個(gè)/30min90皿 5個(gè)/cm2 300000

9、級(jí) 手術(shù)室 （175個(gè)/m3） 注：1、浮游法的細(xì)菌最大平均濃度采用括號(hào)內(nèi)數(shù)值。細(xì)菌最大平均濃度是直接所測的結(jié)果，不 是沉降法和浮游法互相換算結(jié)果。 2、1級(jí)眼科專用手術(shù)室周邊區(qū)按10000級(jí)要求。 3、90皿為采樣直徑90mm的培養(yǎng)皿。 23 潔凈輔助用房等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（空態(tài)或靜態(tài)） 沉降法（浮游法）細(xì)菌最大平 等級(jí) 表面最大染菌濃度 空氣潔凈度級(jí)別 均濃度 0.4個(gè)/30min90皿（10個(gè)/m3） 5個(gè)/cm2 1000級(jí)（局部100級(jí)） 1.5個(gè)/30min90皿（50個(gè)/m3） 5個(gè)/cm2 10000級(jí) 4個(gè)/30min90皿（150個(gè)/m3） 5個(gè)/cm2 100000級(jí) 5個(gè)/30m

10、in90皿（175個(gè)/m3） 5個(gè)/cm2 300000級(jí) 24 25 主要潔凈輔助用房分級(jí) 等級(jí) 用房名稱 需要無菌操作的特殊實(shí)驗(yàn)室 體外循環(huán)灌注準(zhǔn)備室 刷手間、消毒準(zhǔn)備室、預(yù)麻室、一次性物品、無菌敷 料及器械與精密儀器的存放室、護(hù)士站、潔凈走廊、 重癥護(hù)理單元（ICU) 恢復(fù)（麻醉蘇醒）室與更衣室（二更）、清潔走廊 二、手衛(wèi)生效果的監(jiān)測方法 （一）采樣時(shí)間：接觸患者、進(jìn)行診療活動(dòng)前采樣。 （二）采樣方法：被檢者五指并攏，用浸有含相應(yīng)中和劑 的無菌洗脫水液浸濕的棉拭子在雙手指曲面從指跟到指 端往返涂擦2次，一只手涂擦面積約30cm2，涂擦過程中 同時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子；將棉拭子接觸操作者的部分剪去，

11、投 入10ml含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，及時(shí)送檢。 26 外科手消毒監(jiān)測采樣 2 （三）檢測方法：將采樣管在混勻器上振蕩20秒或用力 振打80次，用無菌吸管吸取1.0ml待檢樣品接種于滅 菌平皿，每一樣本接種2個(gè)平皿，平皿內(nèi)加入已溶化 的45-48的營養(yǎng)瓊脂15ml-18ml，邊傾注邊搖勻， 待瓊脂凝固，置361溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。 （四）計(jì)算方法： 細(xì)菌菌落總數(shù)（cfu/cm2）=平板上菌落數(shù)稀釋倍數(shù)/ 采樣面（cm2） 28 （六）結(jié)果判斷： 醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生規(guī)范4.4手消毒效果應(yīng)達(dá)到如 下相應(yīng)要求： 衛(wèi)生手清毒，監(jiān)測的細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)10cfu/2 外科手消毒，監(jiān)測的細(xì)菌菌落總

12、數(shù)應(yīng)5cfu/2 29 醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生規(guī)范81監(jiān)測要求 醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)每季度對手術(shù)室、產(chǎn)房、導(dǎo)管室、層 流潔凈病房、骨髓移植病房、器官移植病房、重癥監(jiān)護(hù) 病房、新生兒室、母嬰室、血液透析病房、燒傷病房、 感染疾病科、口腔科等部門工作的醫(yī)務(wù)人員手進(jìn)行消毒 效果的監(jiān)測；當(dāng)懷疑醫(yī)院感染暴發(fā)與醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生有 關(guān)時(shí)，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行監(jiān)測，并進(jìn)行相應(yīng)致病性微生物的檢 測。 30 三、物品和環(huán)境表面消毒效果監(jiān)測 （一）采樣時(shí)間：在消毒處理后進(jìn)行采樣。 （二）采樣面積：被采面積100c2取全部表 面；采樣面積100 c2，取100c2 31 （三）采樣方法（棉拭子法、壓印法兩種） 棉拭子法：用55cm的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格版

13、，放在被檢物 體表面，用浸有含有相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭 子，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂抹5次，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉 拭子，可連續(xù)采樣14個(gè)規(guī)格板面積。剪去手接觸部 分，并將棉拭子放入裝有10ml含相應(yīng)中和劑的試管 內(nèi)，立即送檢。門把等小型物體則采用棉拭子直接在 物體表面按一定順序涂抹采樣，結(jié)果計(jì)算用cfu件表 示。 32 1、步驟（在25cm2規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂抹各5次，連 續(xù)采4個(gè)規(guī)格板面積） 33 34 2、檢測方法： （1）細(xì)菌總數(shù)檢測：將采樣管在混勻器上振蕩20s或用 力振打80次，用無菌吸管吸取1.0ml待檢樣品接種于滅 菌平皿，每一樣本接種2個(gè)平皿，內(nèi)加入已溶化的45 48的營養(yǎng)瓊

14、脂1518ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝 固，置361左右溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)算菌落數(shù)。 （2）致病菌檢測 檢測原則：致病菌的檢測依據(jù)污染情況進(jìn)行相應(yīng) 指標(biāo)的檢測 35 （四）結(jié)果判斷 標(biāo)準(zhǔn)值 環(huán)境類別 范圍 菌落總數(shù)cfu/cm2 致病菌 類 5 不得檢出 類 5 不得檢出 類 10 不得檢出 類 15 不得檢出 注：致病菌指溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌。母嬰同室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、新 生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門氏菌。 37 潔凈手術(shù)室和其他潔凈場所 非潔凈手術(shù)部（室）、新生兒室、產(chǎn)房、燒傷病房、重癥監(jiān)護(hù)病房、 血液病病區(qū)等 兒科病房、母嬰同室、婦產(chǎn)科檢查室、人流室、輸血科、消毒供應(yīng)

15、中心（室）其他普通住院病區(qū) 普通門（急）診、化驗(yàn)室、注射室、 換藥室、治療室、感染性疾病科門診和病區(qū)四、使用中消毒液染菌量測定 （一）采樣時(shí)間：采取更換前使用中的消毒劑與 滅菌器械保存液； （二）采樣量及方法：在無菌條件下，用無菌吸 管吸取1.0ml被檢樣液，加入9.0ml含相應(yīng)中和 劑的采樣管內(nèi)混勻； 38 （三）檢測方法： 1、涂抹法：用無菌吸管吸取1.0ml消毒液，加入9.0ml含 相應(yīng)中和劑的采樣管內(nèi)混勻，用無菌吸管吸取上述溶 液0.2ml,滴于干燥普通瓊脂平板，每份樣品同時(shí)做2個(gè) 平行樣，一平行樣板置20培養(yǎng)7d，觀察霉菌生長情 況，另一個(gè)平板置37 溫箱培養(yǎng)72h，計(jì)算菌落數(shù)， 同

16、時(shí)檢測致病菌。 消毒液染菌量（cfu/ml)=每個(gè)平板上的菌落數(shù)50 39 2、傾注法：用無菌吸管吸取1.0ml消毒液，加入9.0ml含 相應(yīng)中和劑的采樣管內(nèi)混勻，分別取0.5ml放入2只滅 菌平皿內(nèi)，加入已溶化的45-48的營養(yǎng)瓊脂15ml- 18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，一平板置20 培養(yǎng)7d,觀察霉菌生長情況；另一平板置37溫箱培養(yǎng) 72h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)，同時(shí)檢測致病菌。 消毒液染菌量（cfu/ml)=每個(gè)平板上的菌落數(shù)20 40 （三）結(jié)果判斷： 使用中消毒液染菌量100cfu/ml,不得檢 出致病菌；無菌物品保存液應(yīng)無菌生長。 注意：采樣時(shí)應(yīng)無菌操作，正確選用中和劑，采 樣后1小

17、時(shí)內(nèi)檢測。 41 醫(yī)院需要常備消毒劑的中和劑 消 毒 劑 中 和 劑 含氯（碘）消毒劑 硫代硫酸鈉（0.1%1.0%) （有效氯或碘0.1%0.5%) 過氧乙酸溶液（0.1%0.5%） 硫代硫酸鈉（0.1%0.5%) 過氧化氫溶液（1.0%3.0%） 硫代硫酸鈉（0.5%1.0%) 1%雙甲酮與0.6%嗎啉的混合液 甲醛溶液（1%） 0.1%0.5%亞硫酸鈉 25%氫氧化鈉 戊二醛溶液（2%） 甘氨酸（1%）或甲醛（1%） 季按鹽類消毒劑 Tween80（0.5%3.0%)+卵磷脂 （0.1%0.5%） （1.0%2.0%） 酚類消毒劑 Tween80（0.5%3.0%) 堿類消毒劑 等當(dāng)量酸

18、 酸類消毒劑 等當(dāng)量酸 酸性氧化電位水 硫代硫酸鈉（0.5%)+PBS(0.03mol/L) 42 復(fù)方消毒劑 Tween80 +卵磷脂 +硫代硫酸鈉 消毒實(shí)驗(yàn)用試劑 磷酸鹽緩沖液（PBS，0.03mol/L，ph7.2） 無水磷酸氫二鈉 2.83g 磷酸二氫鉀 1.36g 將各成分加入到1000ml蒸餾水中，待完全溶解后，調(diào)ph至7.2-7.4，于121 壓力蒸汽滅菌20min備用。 無菌檢驗(yàn)用洗脫液 吐溫-80 1g 蛋白胨10g 氯化鈉 8.5g 將各成分加入到1000ml 0.03mol/LPBS液中，加熱溶解后，調(diào)ph至7.2-7.4， 于121壓力蒸汽滅菌20min備用。 43 五

19、、內(nèi)鏡消毒滅菌效果的監(jiān)測 （一）采樣時(shí)間：在消毒滅菌后，使用前進(jìn)行。 （二）采樣方法：監(jiān)測采樣部位為內(nèi)鏡的內(nèi)腔面。 用無菌注射器抽取10ml含相應(yīng)中和劑的緩沖液， 從待檢內(nèi)鏡活檢口注入，用15ml無菌試管從活檢 出口收集，及時(shí)送檢，2小時(shí)內(nèi)檢測。 44 （三）檢測方法：將送檢液用旋渦器充分震蕩，取 0.5ml，加入2只直徑90mm無菌平皿，每個(gè)平皿 分別加入已經(jīng)熔化的45-48營養(yǎng)瓊脂15ml- 18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，于35培養(yǎng) 48小時(shí)后計(jì)數(shù)。 計(jì)算方法：菌落數(shù)/鏡2個(gè)平皿菌落數(shù)平均值 20。 47 （四）致病菌檢測：將送檢液用旋渦器充分震蕩， 取0.2ml分別接種90mm血平

20、皿、中國蘭平皿和SS 平皿，均勻涂布，35培養(yǎng)48小時(shí)，觀察有無致 病菌生長。 （五）結(jié)果判斷： 消毒后內(nèi)鏡：細(xì)菌總數(shù)20cfu/件，不能檢出致病 菌；滅菌后內(nèi)鏡合格標(biāo)準(zhǔn)為：無菌檢測合格。 48 六、血液透析液的監(jiān)測 （一）采樣時(shí)間：每月1次。若采樣結(jié)果超標(biāo) 時(shí)，須重復(fù)檢查，懷疑或確定病人在治療中有 熱原反映和菌血癥時(shí)，應(yīng)隨時(shí)檢測。 49 （二)采樣方法： 透析用水：（即自來水經(jīng)粗濾、砂過濾器、活性 碳過濾器、水軟化器（樹脂置換）、反滲透裝 置、儲(chǔ)水罐、出水加壓泵等步驟處理后出口的 液體）在反滲水進(jìn)入血液透析機(jī)的位置采樣； 50 透析液：（即透析用水與A、B兩種液體混合后進(jìn) 入人體透析之前的液

21、體）應(yīng)在進(jìn)入透析器前采 樣。 注：疑有透析液污染或嚴(yán)重感染病例時(shí)，應(yīng)增加 采樣點(diǎn)，如原水口、軟化水出口、透析液配液 口、反滲水出口、貯水罐出口等。 51 5 (三）檢測方法：用無菌吸管吸取透析用水、透析 液2.0ml-3.0ml，放入無菌試管，檢測時(shí)視透析 用水、透析液污染程度分別取原液或10倍稀釋液 0.5ml放入2個(gè)滅菌平皿內(nèi)，45-48營養(yǎng)瓊脂 15ml-18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，于 37培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)并鑒定細(xì)菌。 53 （四）結(jié)果判斷： 透析用水、透析液：細(xì)菌總數(shù)200cfu/ml，并不得 檢出致病性微生物。 內(nèi)毒素檢測：每3個(gè)月至少檢測一次 內(nèi)毒素含量2EU/ml，干預(yù)限

22、度為1EU/ml 54 七、滅菌質(zhì)量的監(jiān)測 壓力蒸汽滅菌的監(jiān)測 （一）物理監(jiān)測法：每次滅菌應(yīng)連續(xù)監(jiān)測并記錄 滅菌時(shí)的溫度、壓力和時(shí)間等滅菌參數(shù)。 （二）化學(xué)監(jiān)測法：應(yīng)進(jìn)行包外、包內(nèi)化學(xué)指示 物監(jiān)測。采用快速壓力蒸汽滅菌程序滅菌時(shí)， 應(yīng)直接將一片包內(nèi)化學(xué)指示物置于待滅菌物品 旁進(jìn)行化學(xué)監(jiān)測。 55 （三）生物監(jiān)測法： 生物指示劑有芽孢懸液、芽孢菌片以及菌片與培養(yǎng) 基混裝（自含式）的指示管。 指示菌株：嗜熱脂肪桿菌芽孢（ACTT7953或SSIK31 株），菌片含量為5.0105- 5.0106cfu/片， 在1210.5 條件下，D值為1.0-1.9min。KT值 19min,ST值為3.9mi

23、n。 56 1、監(jiān)測方法為： 將生物指示物置于標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包的中心部位。標(biāo)準(zhǔn)試 驗(yàn)包由16條41cm66cm的全棉手術(shù)巾制成。制作方法： 將每條手術(shù)巾的長邊先折成3層，短邊折成2層，然后疊 放，制成23 cm 23 cm 15 cm大小的測試包。經(jīng)一 個(gè)滅菌周期后，在無菌條件下取出標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包的指示菌 片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，經(jīng) 561培養(yǎng)7d（自含式生物指示物按產(chǎn)品說明書執(zhí) 行），觀察培養(yǎng)結(jié)果。 57 2、采用快速壓力蒸汽滅菌程序滅菌時(shí)，應(yīng)直接 將一支生物指示物，置于空載的滅菌器內(nèi)，經(jīng) 一個(gè)滅菌周期后取出，規(guī)定條件下培養(yǎng)，觀察 結(jié)果。 3、監(jiān)測周期：生物監(jiān)測應(yīng)每周監(jiān)測一次。 58

24、（四）結(jié)果判斷： 陽性對照組培養(yǎng)陽性，陰性對照組培養(yǎng)陰性， 試驗(yàn)組培養(yǎng)陰性，判定為滅菌合格。陽性對照組 培養(yǎng)陽性，陰性對照組培養(yǎng)陰性，試驗(yàn)組培養(yǎng)陽 性，則滅菌不合格；同時(shí)應(yīng)進(jìn)一步鑒定試驗(yàn)組陽 性的細(xì)菌是否為指示菌或是污染所致。 59 溴甲酚子蛋白胨培養(yǎng)液 蛋白胨 10g 葡萄糖 5g 可溶性淀粉 1g 2%溴甲酚紫乙醇溶液 0.6ml 蒸餾水 1000ml 將蛋白胨、葡萄糖溶解于蒸餾水中，調(diào)pH至7.0-7.2，加 入2%溴甲酚紫酒精溶液，于115 壓力蒸汽滅菌30min。 置4 冰箱備用。 62 干熱滅菌的監(jiān)測： （一）物理監(jiān)測法：每滅菌批次應(yīng)進(jìn)行物理監(jiān)測。監(jiān)測 方法為將多點(diǎn)溫度檢測儀的多個(gè)

25、探頭分別放于滅菌器 各層內(nèi)、中、外各點(diǎn)，關(guān)好柜門，引出導(dǎo)線，由記錄 儀中觀察溫度上升與持續(xù)時(shí)間。溫度在設(shè)定時(shí)間內(nèi)均 達(dá)到預(yù)置溫度，則物理監(jiān)測合格。 （二）化學(xué)監(jiān)測法：每一滅菌包外應(yīng)使用包外化學(xué)指示 物，每一滅菌包內(nèi)應(yīng)使用包內(nèi)化學(xué)指示物，并置于最 難滅菌的部位。 63 （三）生物監(jiān)測法： 指示菌株：枯草桿菌黑色變種芽孢（ACTT9372）， 菌片含量為5.0105-5.0106cfu/片，在1602 條件下，D值為1.3-1.9min，KT值19min,ST值為 3.9min。 64 1、監(jiān)測方法為：將枯草桿菌芽孢菌片分別裝入超負(fù)荷運(yùn)轉(zhuǎn) 試管內(nèi)（1片/管）。滅菌器與每層門把手對角線內(nèi)，外 角處放

26、置2個(gè)含菌片的試管，試管帽置于試管旁，關(guān)好柜 六，經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，待溫度降至80時(shí)，加蓋試管 帽后取出試管。在無菌條件下，加入普通營養(yǎng)肉湯培養(yǎng) 基（5ml/管），361培養(yǎng)48h，觀察初步結(jié)果，無 菌生長管繼續(xù)培養(yǎng)至第7日。 2、監(jiān)測周期：生物監(jiān)測應(yīng)每周監(jiān)測一次。 65 （四）結(jié)果判定：陽性對照組培養(yǎng)陽性，陰性對照組培 養(yǎng)陰性，若每個(gè)指示菌片接種的肉湯均澄清，判為滅 菌合格；若陽性對照組培養(yǎng)陽性，陰性對照組培養(yǎng)陰 性，而指示菌片之一接種的肉湯管混濁，判為不合 格；對難以判定的肉湯管，取0.1ml接種于營養(yǎng)瓊脂平 板，同滅菌L棒或接種環(huán)涂勻，置361培養(yǎng)48h， 觀察菌落形態(tài)，并做涂片染色鏡檢

27、，判斷是否有指示 菌生長，若有指示菌生長，判為滅菌不合格；若無指 示菌生長，判為滅菌合格。 66 環(huán)氧乙烷滅菌 （一）物理監(jiān)測法：每次滅菌應(yīng)連續(xù)進(jìn)行物理監(jiān)測。 （二）化學(xué)監(jiān)測法：每個(gè)滅菌物品包外應(yīng)使用包外化學(xué) 指示物，作為滅菌過程的標(biāo)志；每包內(nèi)最難滅菌位置 放置包內(nèi)化學(xué)指示物，通過觀察其顏色變化，判定其 是否達(dá)到滅菌合格要求。 67 （三）生物監(jiān)測法： 指示菌株：枯草桿菌黑色變種芽孢（ACTT9372）， 1、監(jiān)測方法：常規(guī)生物測試包放在滅菌器最難滅菌的部 位（整個(gè)裝載滅菌包的中心部位）。滅菌周期完成后 應(yīng)立即將生物指示物從被滅菌物品中取出，361 培養(yǎng)7d（自含式生物指示物應(yīng)遵循產(chǎn)品說明），

28、觀察 培養(yǎng)基顏色變化。同時(shí)設(shè)陽性對照和陰性對照。 2、監(jiān)測周期：應(yīng)每滅菌批次應(yīng)進(jìn)行生物監(jiān)測， 68 （四）結(jié)果判定：陽性對照組培養(yǎng)陽性，陰性對 照組培養(yǎng)陰性，試驗(yàn)組培養(yǎng)陰性，判定為滅菌 合格。陽性對照組培養(yǎng)陽性，陰性對照組培養(yǎng) 陰性，試驗(yàn)組培養(yǎng)陽性，則滅菌不合格；同時(shí) 應(yīng)進(jìn)一步鑒定試驗(yàn)組陽性的細(xì)菌是否為指示菌 或是污染所致。 69 過氧化氫等離子滅菌的監(jiān)測 一、物理監(jiān)測法： 二、化學(xué)監(jiān)測法： 三、生物監(jiān)測： 指示菌株：嗜熱脂肪桿菌芽孢（ACTT7953） 監(jiān)測周期：應(yīng)每天至少進(jìn)行一次滅菌循環(huán) 的生物監(jiān)測， 70 生物指示菌 生物監(jiān)測周期 嗜熱脂肪桿菌芽孢 壓力蒸汽滅菌 每周一次 （ACTT7953） 枯草桿菌黑色變種芽孢 干熱滅菌 每周一次 （AC