第一章分子生物學實驗基本知識簡介和儀器設備使用

1、任課教師和實驗員：張運峰 分子生物學分子生物學實驗實驗次序次序實實 驗驗 名名 稱稱周次周次學時學時備注備注1課程基本情況簡介和常規(guī)儀器使用課程基本情況簡介和常規(guī)儀器使用1 12.02.02質粒質粒DNADNA的微量提?。▔A裂解法）的微量提?。▔A裂解法）1 14.04.03瓊脂糖凝膠電泳技術的原理和方法瓊脂糖凝膠電泳技術的原理和方法1 14.04.04質粒質粒DNADNA的限制性內切酶酶切及分析鑒定的限制性內切酶酶切及分析鑒定2 26.06.05大腸桿菌大腸桿菌DH5DH5感受態(tài)細胞的制備感受態(tài)細胞的制備1 14.04.06質粒質粒DNADNA的轉化及轉化子篩選的轉化及轉化子篩選2 26.06

2、.07細菌菌落的聚合酶鏈式反應細菌菌落的聚合酶鏈式反應(PCR)(PCR)2 26.06.0一、實驗安排一、實驗安排 以完整、常用、重要完整、常用、重要為原則，經(jīng)典與先進技術相結合，同時介紹相關知識，盡量讓學生在有限的學時內掌握更多的分子生物學技術以及相關的知識。 我們的分子生物學實驗課程的設計從整體上可以說是一個完整的大實驗，因為自始至終，各實驗之間相互連貫，要求學生每一次實驗既本次實驗的結果，同時也為下一次更深入的實驗做準備二、課程基本情況二、課程基本情況1.1.課程基本技術課程基本技術 核酸的分離和純化； 電泳技術(Gel Electrophoresis)； PCR技術 ( Polyme

3、rase Chain Reaction)； 限制性酶切技術 細菌感受態(tài)制備技術 質粒轉化細菌的篩選和鑒定技術 .2.2.實驗操作基本要求實驗操作基本要求認真預習實驗指導，明確知識難點和技術要點；嚴格遵照操作規(guī)程使用儀器設備, 注意個人以及公共設施安全；（對設備要有愛惜和敬畏之心，要像對待朋友）做到節(jié)約實驗試劑及材料；（像掏自己的錢包）實驗完畢后，注意將實驗臺面及實驗器皿清洗干凈，整理好實驗記錄； （像自己的小家）準時、保質、保量完成實驗工作，不遲到，不早退；實事求是、認真而及時地書寫實驗報告。（1）基本生存規(guī)則聽從老師的安排，沒有獲得允許的情況之下，不得隨意串桌；不得隨意使用別人的試劑和緩沖液

4、；使用新設備之前，先學會設備的使用技能，注意設備的報警信號;不要移動周圍的東西(試劑、儀器等）；不要隨意放東西，除非屬于你的地方;做錯了，坦白承認;實驗完成以后收拾干凈;要求最小的關心。3.3.實驗室工作守則實驗室工作守則（2）著裝和發(fā)飾統(tǒng)一著白大褂（實驗服）；頭發(fā)統(tǒng)一扎起來，置后；不得披散頭發(fā)，盡量少帶頭飾。（3）基本禮儀規(guī)則請問，而不是命令，合作而不是隸屬；記下別人給你的全部指導，不要問同一個問題；預約時間或請求時間。（4）基本安全規(guī)則不要在教室吃東西、喝酒或抽煙；不要穿短褲、涼鞋，盡量減少暴漏皮膚；不要用嘴吸吸管；不做任何你感覺不安全的事；記住緊急的電話和逃生通道的位置；清楚明白一些標志

5、的含義及使用事項。3.3.實驗報告與評分考慮實驗報告與評分考慮2.評分 （1）出勤占20%；（抽查3次）（2）實驗操作及結果成績占 50%；（3）綜合技術考核占30%。1.實驗報告（6部分）（1）實驗目的；（2）實驗原理；（3）實驗材料;（4）實驗方法和步驟;（5）結果與討論；（6）實驗心得體會。1人/份三、實驗的常規(guī)設備簡介三、實驗的常規(guī)設備簡介1.移液器（槍）2.高速冷凍離心機3.PCR儀4. 凝膠電泳儀5.凝膠成像儀6.微量分光光度計7.分子雜交爐8.恒溫搖床9.超純水機10.干、濕熱滅菌器11.低溫和超低溫冰箱 12.制冰機四、實驗設計思路四、實驗設計思路甘油菌培養(yǎng)和活化獲得質粒的檢測實驗質粒DNA提取質粒的瓊脂糖凝膠檢測PCR檢測限制性酶切檢測DH5a感受態(tài)