基因工程制藥復(fù)習(xí)提綱答案

1、名詞解釋1. 基因工程 基因工程是值在體外合成或重組特定的DNA，再與載體連接，最后導(dǎo)入到宿主細(xì)胞內(nèi)表達(dá)、擴(kuò)增出人們需要的蛋白質(zhì)，而且使這種性狀可遺傳給后代的技術(shù)。包括上游技術(shù)和下游技術(shù)。2. 基因工程制藥 基因工程制藥是通過(guò)基因工程的方法生產(chǎn)藥物，具體包括獲得目的基因、構(gòu)建重組質(zhì)粒、構(gòu)建基因工程菌、培養(yǎng)工程菌、產(chǎn)物分離純化、產(chǎn)品加工檢驗(yàn)等步驟。3. 逆轉(zhuǎn)錄 逆轉(zhuǎn)錄（reverse transcription）是某些RNA病毒由逆轉(zhuǎn)錄酶直接利用RNA為模板合成DNA的過(guò)程。4. CDNA以生物細(xì)胞的mRNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成cDNA的第一條鏈，然后在合成雙鏈DNA，并將合成的cDN

2、A雙鏈重組到質(zhì)粒載體或噬菌體載體上，倒入宿主細(xì)胞進(jìn)行增殖。在這個(gè)過(guò)程中合成的雙鏈DNA叫做cDNA。5. 引物 引物是人工合成的單鏈DNA小片段，堿基順序分別與所要擴(kuò)增的模板DNA雙鏈的5端相同。是PCR的起始點(diǎn)。6. 表達(dá)載體所謂表達(dá)載體（expression vector）是指具有宿主細(xì)胞基因表達(dá)所需的調(diào)節(jié)控制序列，能使外源基因在宿主細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄和翻譯的載體。7. 克隆載體克隆載體（cloning vector)是把一個(gè)有用的制藥DNA片段通過(guò)重組DNA技術(shù)，送進(jìn)受體細(xì)胞中進(jìn)行繁殖的工具。8. 載體 載體（vector） ，指在基因工程重組DNA技術(shù)中將DNA片段（目的基因）轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞的

3、一種能自我復(fù)制的DNA分子。9. 報(bào)告基因載體分子上有一種特殊意義的基因序列，它們表達(dá)的目的是為了證明載體已經(jīng)進(jìn)入宿主細(xì)胞，并將含有外源基因的宿主細(xì)胞從其他細(xì)胞中區(qū)分并挑選出來(lái)。這種基因就是報(bào)告基因。10. 啟動(dòng)子 啟動(dòng)子是位于結(jié)構(gòu)基因5端上游的DNA序列，能被RNA聚合酶識(shí)別并結(jié)合，具有轉(zhuǎn)錄起始的特異性11. PCR聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是一種體外放大擴(kuò)增特定DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它主要包括變性、退火、延伸三個(gè)過(guò)程，并且多次循環(huán)。12. 包涵體 包涵體（inclusion body）是存在于細(xì)胞質(zhì)中的一種不可溶的蛋白質(zhì)聚集折疊而形成的晶體結(jié)構(gòu)物。通常包涵體雖然具有正確的氨基酸序列，但是空間結(jié)構(gòu)

4、卻是錯(cuò)誤的。13. 蛋白表達(dá)系統(tǒng)蛋白表達(dá)系統(tǒng)是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系，通過(guò)這個(gè)體系實(shí)現(xiàn)外源基因在宿主細(xì)胞中表達(dá)的目的。14. 單克隆抗體由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對(duì)某一特定抗原表位的抗體，稱(chēng)為單克隆抗體。15. 基因工程抗體 基因工程抗體就是按不同的目的和需求，對(duì)抗體基因進(jìn)行加工、改造和重新裝配，然后導(dǎo)入適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞中表達(dá)得到的抗體分子。16. 改形抗體改性抗體（reshaped antibody,RAb）是指利用基因工程技術(shù)，將人抗體可變區(qū)（V）中互補(bǔ)決定簇序列改換成鼠源單抗互補(bǔ)決定簇。重構(gòu)成既具有鼠源性單抗的特異性又保持抗體親和力的人源化抗體。17. 嵌合

5、抗體在基因水平上將鼠源單克隆抗體可變區(qū)和人抗體恒定區(qū)連接起來(lái)并在合適的宿主細(xì)胞中表達(dá)，這種抗體叫做嵌合抗體（chimeric antibody）。18. 鑲面抗體將鼠源單抗可變區(qū)中氨基酸殘基改造成人源的，消除了異源性且不影響可變區(qū)的整體空間構(gòu)象。19. 單鏈抗體 單鏈抗體(single chain antibody fragment，scFv)，是由抗體重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)通過(guò)1520個(gè)氨基酸的短肽(linker)連接而成。scFv能較好地保留其對(duì)抗原的親和活性,并具有分子量小、穿透力強(qiáng)和抗原性弱等特點(diǎn)。20. 雙特異性抗體雙特異性抗體（bispecific antibody,BsAb)是指

6、具有兩種抗原結(jié)合特性的抗體21. 展示技術(shù)是在基因或突變體文庫(kù)中選擇有用的基因或突變體的一種高通量的篩選方法，該技術(shù)的特點(diǎn)是利用篩選基因的表型和基因型密切相連的特性，通過(guò)篩選表型而獲得基因型22. 重組蛋白藥物的復(fù)制對(duì)專(zhuān)利期滿(mǎn)的重組蛋白藥物進(jìn)行復(fù)制生產(chǎn)23. 易錯(cuò)PCR易錯(cuò)PCR 是指通過(guò)改變PCR反應(yīng)條件來(lái)調(diào)整PCR反應(yīng)中的突變頻率，降低聚合酶固有的突變序列的傾向性，提高突變譜的多樣性，使得錯(cuò)誤堿基隨機(jī)地以一定的頻率摻入到擴(kuò)增的基因中，從而得到隨機(jī)突變的DNA群體，最后用合適的載體克隆突變基因。24. Gene 改組DNA改組是指DNA分子的體外重組，是基因在分子水平上進(jìn)行有性重組(sexu

7、al recombination)。通過(guò)改變單個(gè)基因(或基因家族， gene family)原有的核苷酸序列，創(chuàng)造新基因，并賦予表達(dá)產(chǎn)物以新功能。25. 盒式誘變是一種定點(diǎn)突變技術(shù)，將目的基因的一段DNA刪掉，并用人工化學(xué)合成所具有的突變核苷酸的雙鏈寡核苷酸片段取代，產(chǎn)生相應(yīng)的突變體。26. 大引物誘變法一種簡(jiǎn)單的PCR定點(diǎn)誘變法，是以第一輪PCR擴(kuò)增產(chǎn)物作為第二輪PCR擴(kuò)增的大引物，只需三種擴(kuò)增引物進(jìn)行兩輪PCR反應(yīng)，即可獲得突變體DNA27. 基因工程疫苗使用DNA重組生物技術(shù)，把天然的或人工合成的遺傳物質(zhì)定向插入細(xì)菌、酵母菌或哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，使之充分表達(dá)，經(jīng)純化后而制得的疫苗。28. 新

8、型疫苗新型疫苗是采用生物化學(xué)合成技術(shù)、人工變異技術(shù)、分子微生物學(xué)技術(shù)、基因工程技術(shù)等現(xiàn)代生物技術(shù)制造出的疫苗，是近年來(lái)新發(fā)展的疫苗。其有別于傳統(tǒng)常規(guī)疫苗。包括基因工程亞單位疫苗、重組疫苗、合成肽疫苗、基因工程載體疫苗、核酸疫苗和抗獨(dú)特型抗體疫苗等。29. 滅活疫苗滅活疫苗是先對(duì)病毒或細(xì)菌培養(yǎng)，然后用加熱或化學(xué)劑（通常是福爾馬林）將其滅活使其失去致病力，但仍保留免疫原性而制成的生物制劑30. 弱毒疫苗弱毒疫苗，是一種病原致病力減弱但仍具有活力的完整病原疫苗，也就是用人工致弱或自然篩選的弱毒株，經(jīng)培養(yǎng)后制備的疫苗。31. 合成多肽疫苗用化學(xué)手段合成病原微生物的保護(hù)性多肽活表位并將其連接到大分子載體

9、上，再加入佐劑制成的疫苗。32. 基因缺失疫苗用基因工程技術(shù)將病毒或細(xì)菌的致病性基因進(jìn)行缺失，從而獲得弱毒株活疫苗。33. 亞單位疫苗指除去病原體中無(wú)免疫保護(hù)作用的有害成分，保留其有效的免疫原成分制成疫苗。34. 重組活載體疫苗用基因工程技術(shù)將病毒或細(xì)菌構(gòu)建成一個(gè)載體，把外源保護(hù)性抗原基因插入其中使之表達(dá)的活疫苗。35. 反向遺傳操作與經(jīng)典的從表型改變到進(jìn)行基因特征研究的思路相反，是指通過(guò)構(gòu)建 RNA病毒的感染性分子克隆，在病毒 cDNA 分子水平上對(duì)其進(jìn)行體外人工操作36. 基因疫苗基因疫苗指的是DNA疫苗，即將編碼某種抗原蛋白的外源基因插入到含真核表達(dá)系統(tǒng)的質(zhì)粒上，然后將質(zhì)粒直接導(dǎo)入人或動(dòng)

10、物體內(nèi)，讓其在宿主細(xì)胞中表達(dá)合成抗原蛋白，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。37. 核酸疫苗核酸疫苗是將編碼某種抗原蛋白的外源基因(DNA 或RNA ) 直接導(dǎo)入動(dòng)物體細(xì)胞內(nèi)， 并通過(guò)宿主細(xì)胞的表達(dá)系統(tǒng)合成抗原蛋白， 誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生對(duì)該抗原蛋白的免疫應(yīng)答， 以達(dá)到預(yù)防和治療疾病的目的38. 腫瘤疫苗是通過(guò)激活患者自身免疫系統(tǒng)，利用腫瘤細(xì)胞或腫瘤抗原物質(zhì)誘導(dǎo)機(jī)體的特異性細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)，增強(qiáng)機(jī)體的抗癌能力，阻止腫瘤的生長(zhǎng)、擴(kuò)散和復(fù)發(fā)，以達(dá)到清除或控制腫瘤的目的。39. 避孕疫苗避孕疫苗是一種具有科學(xué)性、長(zhǎng)期性及可逆性的避孕方法。世界各國(guó)都在從事這方面的研究工作。其基 本原理是通過(guò)提取一種抗原成分制成疫苗

11、，給予受試對(duì)象產(chǎn)生相應(yīng)的免疫反應(yīng)，從而阻止受孕。此法只處于實(shí)驗(yàn)和研究階段，尚未進(jìn)入臨床試驗(yàn)。問(wèn)答題、1 制藥基因的獲得方法有哪些制藥基因獲得的方法一般分為直接獲得法和間接獲得法。一般來(lái)說(shuō)，所謂的直接獲得法 就是直接從基因組DNA中獲得制藥基因；而間接獲得法要先獲得mRNA、cDNA等，間接從基因組DNA中獲得制藥基因。但真核生物基因組不僅龐大，而且結(jié)構(gòu)復(fù)雜，分離時(shí)還要盡可能排除內(nèi)含子，所以常用間接法獲得制藥基因。具體方法常有兩種：一是從cDNA文庫(kù)克隆制藥基因，首先以mRNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成cDNA的第一條鏈，然后再合成雙鏈DNA，并將雙鏈DNA重組到質(zhì)粒載體或噬菌體載體上，導(dǎo)入

12、大腸桿菌宿主細(xì)胞進(jìn)行增殖；二是通過(guò)RT-PCR以mRNA逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA第一條鏈為模板，設(shè)計(jì)特定的引物，擴(kuò)增獲得制藥基因產(chǎn)物。但是RT-PCR分離制藥基因必須以制藥基因的序列已知為前提。2 基因工程制藥的內(nèi)涵？基因工程制藥是根據(jù)所需要的蛋白藥物，3 什么是PCR?一般的PBL包括哪些步驟？PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction）技術(shù)是利用酶促反應(yīng)在體外指導(dǎo)特定DNA序列擴(kuò)增的方法，以熱變性的雙鏈DNA分子為模板，利用引物和四種脫氧核苷三磷酸（dNTPs）為原料在DNA聚合酶的作用下大量擴(kuò)增了特定的DNA片段。一般的PCR包括以下幾個(gè)過(guò)程：

13、1. 變性，DNA雙鏈在高溫下（一般為94）會(huì)解離成兩條單鏈DNA分子。2.退火，降低反應(yīng)溫度（約50），使專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)的一對(duì)寡核苷酸引物與兩條單鏈模板 DNA 因發(fā)生退火作用而結(jié)合在靶DNA區(qū)段兩端的互補(bǔ)序列位置上。3.延伸，將反應(yīng)混合物的溫度上升到72左右，此時(shí)在DNA聚合酶的作用下，引物的 3端便開(kāi)始依次參入脫氧核苷三磷酸分子，并沿著模板分子按照53方向延伸，合成新的DNA互補(bǔ)鏈。4 什么是引物？引物設(shè)計(jì)的原則有哪些？引物是人工合成的兩端寡核苷酸序列，一個(gè)引物與目的基因一段的一條DNA模板鏈互 補(bǔ)，另一個(gè)引物與目的基因的另一端的另一條DNA模板鏈互補(bǔ)。是PCR的起始點(diǎn)。 1.引物長(zhǎng)度在15-

14、30bp之間，而且上下游引物長(zhǎng)度差別不能大于3bp. 2引物堿基的分布是隨機(jī)的，理論上是分布均勻的。 3.GC堿基含量在45%55%左右。 4.兩個(gè)引物在3端必須與模板互補(bǔ)，在5端可以不互補(bǔ)。 5.自身連續(xù)互補(bǔ)堿基小于4個(gè) 6.引物之間連續(xù)互補(bǔ)堿基應(yīng)小于45個(gè) 7.3端末位堿基最好不選A5 基因工程載體的特性有哪些？ 1能夠在宿主細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行獨(dú)立和穩(wěn)定的自我復(fù)制，盡管有外源基因的插入，這種穩(wěn)定復(fù)制狀態(tài)和遺傳特性不會(huì)改變。 2易于從宿主細(xì)胞中分離、純化。 3具有較小的分子量和松弛型復(fù)制子。、 4在載體DNA復(fù)制的非必需區(qū)內(nèi)，存在有適當(dāng)?shù)南拗菩詢(xún)?nèi)切酶位點(diǎn)。 5具有能夠觀(guān)察的表型特征。6 基因工程載體

15、一般分為哪兩類(lèi)？分別適應(yīng)于何種實(shí)驗(yàn)?zāi)康?？基因工程載體一般分為克隆載體和表達(dá)載體?？寺≥d體是攜帶外源基因進(jìn)入宿主細(xì)胞， 使外源基因在宿主細(xì)胞中繁殖的載體。適用于擴(kuò)增重組質(zhì)粒但不要求表達(dá)蛋白。表達(dá)載體是 適合在宿主細(xì)胞中表達(dá)外源基因的載體，它必須具有強(qiáng)啟動(dòng)子和終止子，能夠高效的轉(zhuǎn)錄來(lái)自外源基因的mRNA。適用于下游技術(shù)中蛋白質(zhì)的表達(dá)。7 cDNA的獲得過(guò)程？cDNA是以生物細(xì)胞內(nèi)的mRNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成cDNA的第一條鏈，再經(jīng)過(guò)RNAse酶的作用消化RNA鏈，再以得到的cDNA單鏈為模板合成雙鏈cDNA。并將合成的cDNA雙鏈重組到質(zhì)粒載體或噬菌體載體中增殖。8 原核表達(dá)載體的基本

16、元件有哪些？原核表達(dá)載體的基本元件有 1啟動(dòng)子：?jiǎn)?dòng)子是指DNA鏈上一段能與RNA聚合酶結(jié)合并能啟動(dòng)mRNA合成的序列。 2阻遏子：使啟動(dòng)子受到控制，只有當(dāng)誘導(dǎo)時(shí)才能進(jìn)行轉(zhuǎn)錄 3 SD序列：核糖體RNA識(shí)別結(jié)合位點(diǎn) 4選擇標(biāo)記：載體中的表達(dá)標(biāo)記用于轉(zhuǎn)化后的菌體篩選。 5轉(zhuǎn)錄終止子：在一個(gè)基因的3末端或是一個(gè)操縱子的3末端往往有特定的核苷酸序列，且具有終止轉(zhuǎn)錄功能。9 外源蛋白的表達(dá)形式有哪些？ 1.以包涵體的形式表達(dá)外源蛋白，包涵體是存在于細(xì)胞質(zhì)中一種不可溶的蛋白質(zhì)聚集折疊形成的晶體結(jié)構(gòu)物。 2以外分泌形式表達(dá)的外源蛋白，分泌型蛋白是指將外源基因的表達(dá)產(chǎn)物運(yùn)輸?shù)街苜|(zhì)或細(xì)胞外的一種表達(dá)方式。 3

17、以融合蛋白的形式表達(dá)外源蛋白，融合蛋白是指由克隆在一起的兩個(gè)或數(shù)個(gè)不同基因的編碼序列組成的融合基因轉(zhuǎn)譯產(chǎn)生的單一多肽序列。10 蛋白表達(dá)系統(tǒng)有哪些？列表比較其優(yōu)劣及適用范圍 P 43, 表2-3各種表達(dá)系統(tǒng)的比較11 原核系統(tǒng)表達(dá)系統(tǒng)有哪些優(yōu)缺點(diǎn)？原核表達(dá)載體的郵電：遺傳背景相對(duì)清楚、使用安全、易操作、表達(dá)量大、生產(chǎn)成本低、周期短，以及有大量可供選擇的克隆或表達(dá)載體；主要缺點(diǎn)在于：缺乏翻譯后加工修飾系統(tǒng)，特別是缺少糖基化功能。自身含有內(nèi)毒素和毒蛋白，對(duì)純化帶來(lái)一定的難度。蛋白不能正確折疊，復(fù)性較困難，多形成包涵體，提取步驟繁瑣。12 植物表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)缺點(diǎn)？經(jīng)濟(jì)實(shí)用，成本低，表達(dá)產(chǎn)物能進(jìn)行正確的

18、折疊，但產(chǎn)物的分離純化難。適用于大分子量的蛋白，特別是藥用蛋白。13 酵母表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)缺點(diǎn)？兼具原核細(xì)胞良好的可操作性和真核系統(tǒng)的后加工能力，但存在產(chǎn)量低以及過(guò)度糖基化等問(wèn)題。第二代酵母表達(dá)系統(tǒng)部分克服了過(guò)度糖基化缺點(diǎn)，有較好的分泌性、產(chǎn)量較高，但產(chǎn)物結(jié)構(gòu)與天然分子仍有一些差異。14 舉例說(shuō)明某基因工程藥物的生產(chǎn)過(guò)程15 單克隆抗體的制備過(guò)程？ 每個(gè)B細(xì)胞只能與一種抗原決定簇特異性結(jié)合，并能產(chǎn)生一種只針對(duì)這一抗原決定簇的抗體，這種只能從一株克隆系中產(chǎn)生的抗體稱(chēng)為單克隆抗體。將B細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合就可以獲得無(wú)限繁殖能力并可分泌均質(zhì)抗體的雜交瘤細(xì)胞，具體過(guò)程為： 1.對(duì)小鼠注射特定的抗原蛋白

19、，使小鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)。 2.得到相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞。 3.將小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞進(jìn)行融合，再用特定的選擇培養(yǎng)基篩選。 4.在該培養(yǎng)基上，未融合的親本細(xì)胞和融合的具有同種核細(xì)胞都會(huì)死亡，只有融合的雜種細(xì)胞才能生長(zhǎng)。 5.對(duì)上述雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆培養(yǎng)和抗體檢測(cè)。 6.最后，將雜交瘤細(xì)胞擴(kuò)大培育，并提取單克隆抗體。16 基因工程抗體的特點(diǎn)？ 通過(guò)基因工程技術(shù)的改造，可以最大程度降低抗體的鼠源性，降低甚至消除人體內(nèi)對(duì)抗體的排斥反應(yīng)。 基因工程抗體的分子較小，穿透性強(qiáng)，更易到達(dá)病灶的核心部位。 可以根據(jù)治療的需要，制備多種用途的新型抗體。 可以采用原核細(xì)胞、真核細(xì)胞或者植物細(xì)胞等多種表達(dá)系統(tǒng)產(chǎn)生大量的抗

20、體分子，成本大大降低。17 基因工程抗體研發(fā)中的關(guān)鍵問(wèn)題是什么？如何解決？ 基因工程抗議研發(fā)過(guò)程中最關(guān)鍵的問(wèn)題是如何選擇有效的體內(nèi)抗原靶標(biāo)，理想的抗原靶標(biāo)應(yīng)該具備以下條件： 特異性，靶標(biāo)抗原應(yīng)該特意地分布于特定癥狀的細(xì)胞或組織 均一性，靶標(biāo)分子應(yīng)該較均勻的分布于治療對(duì)象上，不能存在量的高低、質(zhì)的變異 唯一性，在某個(gè)信號(hào)通道中該抗原具有不可替代（至少是關(guān)鍵性）的作用，其活性一旦被抑制，信號(hào)被切斷，無(wú)旁路途經(jīng)存在。 有效性，對(duì)于治療抗體而言，抗體抑制相應(yīng)抗原的活性后可以有效地改變?cè)瓉?lái)的癥狀，如細(xì)胞增殖、惡變等。18 抗體基因的克隆途徑有哪些？各有何優(yōu)缺點(diǎn)？抗體基因的克隆有三條途徑雜交瘤細(xì)胞或漿細(xì)胞

21、、B細(xì)胞自然基因庫(kù)和合成基因庫(kù)。 在雜交瘤細(xì)胞中，制備抗體的親和性和陽(yáng)性率都很高，且重鏈和輕鏈屬自然配對(duì)。缺點(diǎn)是雜交瘤細(xì)胞只分泌單一特異性的單克隆抗體，結(jié)果限制了各種特異性抗體的選擇范圍。 B細(xì)胞含有抗體的全套自然基因庫(kù)，能夠代表機(jī)體所有初級(jí)B細(xì)胞含有的抗體基因的多樣性，使用任何抗原都可能從中篩選到相應(yīng)抗體。缺點(diǎn)是天然抗體庫(kù)的偏向性，抗體從自然基因庫(kù)中得到的抗體親和性低，再次應(yīng)答過(guò)程中存在交叉反應(yīng)。 合成基因庫(kù)融合細(xì)胞不穩(wěn)定，不適宜多次的親和成熟篩選。優(yōu)點(diǎn)是抗原特異性高，制備抗體質(zhì)量較高。19 抗體基因克隆中有哪三個(gè)重要技術(shù)環(huán)節(jié)？ P109 ，這題絕逼不會(huì)考20 改形抗體的制備過(guò)程？應(yīng)用？?jī)?yōu)缺

22、點(diǎn)？ 改型抗體（RAB）是指利用基因工程技術(shù)，將人體可變區(qū)(V)中互補(bǔ)決定簇（CDR）序列換成鼠源單抗CDE序列。重構(gòu)成既具有鼠源性單抗的特異性又保持抗體親和力的人源化抗體具體制備過(guò)程為：1、制備鼠雜交瘤細(xì)胞；2、克隆鼠可變區(qū)基因并測(cè)序；3、設(shè)計(jì)改形人可變區(qū)基因；4、構(gòu)建改形人可變區(qū)基因；5、將人改形可變區(qū)基因和人恒定區(qū)基因連在一起。 RAB使得多種特異的鼠源單抗有可能用于臨床治療，可生產(chǎn)通過(guò)人體免疫難以誘生的特異性抗人抗原抗體；缺點(diǎn)是構(gòu)建方法復(fù)雜，費(fèi)時(shí)費(fèi)力；在獲得抗體的晶體結(jié)構(gòu)及在計(jì)算機(jī)模擬抗體的細(xì)微結(jié)構(gòu)上還有很大困難，在降低免疫原性與保持抗體結(jié)合活性之間仍然存在著難以調(diào)和的矛盾，可供選著的

23、人源FRs相對(duì)不足。21 單鏈抗體的優(yōu)缺點(diǎn)？應(yīng)用？p122優(yōu)點(diǎn)1用于免疫診斷時(shí)成像清晰。2.易滲透腫瘤組織中增加藥物治療濃度。3.分子量小，免疫源性小，不易產(chǎn)生排異反應(yīng)。4.在體內(nèi)循環(huán)的半衰期短，易清除，利于解毒排出;5.易于與毒素或酶基因連接，便于直接獲得免疫毒素或酶標(biāo)抗體等。6.抗體基因結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，易操作。缺點(diǎn)：穩(wěn)定性低、功能單一、親和力低應(yīng)用：1.在腫瘤診斷中的應(yīng)用 其用于放射性顯影具有優(yōu)勢(shì)，在腫瘤定位診斷時(shí)圖像清晰2在腫瘤治療中的應(yīng)用 單抗與藥物代謝酶相連用于治療腫瘤 3.中和毒素和對(duì)病毒病的治療4.細(xì)胞內(nèi)免疫 將單抗基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)并表達(dá)，利用抗體與抗原特異性結(jié)合的特性，調(diào)節(jié)或改變細(xì)胞生

24、物學(xué)特性，達(dá)到治病目的22 雙特異性抗體與單克隆抗體比較有哪些優(yōu)點(diǎn)？p12423 展示技術(shù)有哪些？比較其優(yōu)缺點(diǎn)及應(yīng)用p129.132.135.137噬菌體展示技術(shù)、酵母展示、核糖體展示、細(xì)菌展示24 你如何看待“重組蛋白藥物的復(fù)制”現(xiàn)象？15125 復(fù)制重組蛋白藥物的基因技術(shù)流程有哪些？152目的基因克隆、表達(dá)系統(tǒng)的選擇和建立、穩(wěn)定細(xì)胞系的建立、蛋白的高效表達(dá)、藥物蛋白的純化技術(shù)、體內(nèi)和體外的檢測(cè)方法建立、表達(dá)細(xì)胞的工業(yè)化培養(yǎng)、藥物蛋白的大規(guī)模純化技術(shù)、質(zhì)量控制、臨床試驗(yàn)、市場(chǎng)開(kāi)發(fā)26 為什么要改造和優(yōu)化基因工程藥物？方法有哪些？P154定向突變：易錯(cuò)PCR、基因改組、大腸桿菌突變株、盒式誘變、定點(diǎn)突變：寡核苷酸引物誘變、定位誘變、PCR誘變 27 人類(lèi)基因組計(jì)劃對(duì)基因工程新藥研發(fā)有何影響？16728 論述創(chuàng)新藥物的研發(fā)策略有哪些？29 疫苗的基本成分包括哪些？174抗原、佐劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、