臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(9月季度培訓(xùn)課件)

1、市場部市場部2015-09-132015-09-13目錄 定義 臨床應(yīng)用 優(yōu)勢 前景樣本接收標(biāo)準(zhǔn)及凍存工藝案例分析什么是臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞？ 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesnchymal Stem Cells，MSCs）是指存在于新生兒臍帶組織中的一種多功能干細(xì)胞，它能分化成許多種組織細(xì)胞。 間充質(zhì)干細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞（ mesenchymal stem cells，MSC）是干細(xì)胞家族的重要成員，來源于發(fā)育早期的中胚層和外胚層。MSC最初在骨髓中發(fā)現(xiàn)，因其具有多向分化潛能、造血支持和促進(jìn)干細(xì)胞植入、免疫調(diào)控和自我復(fù)制等特點(diǎn)而日益受到人們的關(guān)注。臍帶臍帶獲取干細(xì)胞的另一來源獲取干細(xì)胞的另一來源我國科學(xué)家

2、2006年首次從新生嬰兒廢棄的臍帶組織中得到了一種多能干細(xì)胞，稱作臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(UC-MSC)。UC-MSC具有胚胎干細(xì)胞類似的增殖能力和多向分化潛能，且來源豐富、取材方便、低病毒感染率、無倫理障礙，又沒有胚胎干細(xì)胞產(chǎn)生畸胎瘤的問題，并且抗原性很低。不產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)，異體使用無需HLA配型。間充質(zhì)干細(xì)胞治療疾病的原理 替代和修復(fù)死亡和受損傷的細(xì)胞； 激活休眠和處于抑制狀態(tài)的細(xì)胞； 旁分泌作用（分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子、抗凋亡因子等）涉及病癥肝臟疾病神經(jīng)系統(tǒng)疾病心血管疾病血液系統(tǒng)疾病骨關(guān)節(jié)疾病燒傷糖尿病間充質(zhì)干細(xì)胞作為種子細(xì)胞，臨床上主要用于治療機(jī)體無法自然修復(fù)的組織細(xì)胞和器官損傷的多種難治性疾病

3、 是關(guān)鍵鑒于間充質(zhì)干細(xì)胞具有多向分化潛能、能支持造血和促進(jìn)造血干細(xì)胞植入、調(diào)節(jié)免疫以及分離培養(yǎng)操作簡便等特點(diǎn)作為免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，治療免疫排斥和自身免疫性疾病臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞具有臨床應(yīng)用價(jià)值臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞具有臨床應(yīng)用價(jià)值 泌尿系統(tǒng)：腎實(shí)質(zhì)的修復(fù)； 消化系統(tǒng)：肝組織的修復(fù)； 內(nèi)分泌系統(tǒng)：胰島細(xì)胞的修復(fù)； 神經(jīng)系統(tǒng)：腦、脊髓損傷的修復(fù)； 血液系統(tǒng)：化療、放療后造血系統(tǒng) 的修復(fù)； 循環(huán)系統(tǒng)：心肌修復(fù)、血管修復(fù)； 免疫系統(tǒng)：調(diào)節(jié)免疫，移植治療時(shí)可降低免疫排斥反應(yīng)； 衰竭器官的結(jié)構(gòu)和功能的修復(fù)和再生：最終替代組織和器官移植。間充質(zhì)干細(xì)胞治療途徑 腰穿途徑 靜脈途徑 局部種植 介入途徑優(yōu)勢 1、取材方便：采

4、集過程簡單、無痛苦，不影響母子健康； 2、細(xì)胞數(shù)量豐富：增值能力強(qiáng)，可為組織器官的修復(fù)和再生提供所需的大量細(xì)胞； 3、免疫原性低：具有獨(dú)特的免疫調(diào) 節(jié)功能，自體使用不引起免疫排斥反應(yīng)，異體移植還可降低免疫反應(yīng)； 4、不涉及社會、倫理及法律方面的更多爭議。前景 干細(xì)胞治療是繼藥物治療、手術(shù)治療之后的又一場醫(yī)療革命。目前，發(fā)達(dá)國家已經(jīng)開始將干細(xì)胞治療技術(shù)用于臨床治療自身免疫性疾病、心肌梗死、脊髓損傷、心力衰竭等疾病。間充質(zhì)干細(xì)胞前景干細(xì)胞的魅力在于：一旦身體需要，這些細(xì)胞可按照發(fā)育途徑通過分裂而產(chǎn)生分化成熟的體細(xì)胞。也許在某一天，人們突然發(fā)現(xiàn)，人體器官可以在實(shí)驗(yàn)室按需要、按流程生產(chǎn)，血細(xì)胞、腦細(xì)胞

5、、骨骼、心肌細(xì)胞、肝臟、神經(jīng)等的更換都不成問題，即使患上白血病、帕金森氏癥和癌癥這些不治之癥也能絕處逢生。供者篩選供者篩選 供者需要提供供者的既往病史、現(xiàn)病史、家族史等資料。樣本采集運(yùn)輸要求 臍帶采集標(biāo)準(zhǔn)： 1.臍帶長度不得低于20cm 2.臍帶兩端均在2-3cm處結(jié)扎 3.臍帶保存液在有效期內(nèi)，并且無明顯顏色變化 4.臍帶保存瓶無漏液現(xiàn)象，密封嚴(yán)實(shí)、無裂橫 5.采集套裝內(nèi)容完整，無缺失 6.采集信息登記完整、字跡清楚易辨認(rèn) 7.臍帶運(yùn)輸時(shí)間在規(guī)定范圍內(nèi) 8.溫度控制在適度范圍內(nèi)（0度-25度）樣本接收標(biāo)準(zhǔn) 臍帶的接收標(biāo)準(zhǔn)： 1.樣本信息一致、無誤，并能追溯至臍帶所有人。 2.母血采集量5ml

6、 臍血檢測樣本采集量5ml 3. 采集套裝內(nèi)容完整，無缺失；采集信息登記完整、字跡清楚易辨認(rèn)。 4.無可能造成供者基因型異常的家族史。 5.供者健康調(diào)查表登記信息無異常。 間充質(zhì)干細(xì)胞的制備方式 間充質(zhì)干細(xì)胞的制備原理： 臍帶華通氏膠內(nèi)富含間充質(zhì)干細(xì)胞，通過分離獲得華通氏膠后，并進(jìn)行體外培養(yǎng)，利用間充質(zhì)干細(xì)胞貼壁生長和可體外擴(kuò)增特性，可獲得更多的間充質(zhì)干細(xì)胞。組織塊分組織塊分離法離法免疫五項(xiàng)檢測均為陰性工藝流程簡介供者篩選供者篩選采集采集接收接收制備制備培養(yǎng)培養(yǎng)凍存凍存復(fù)蘇復(fù)蘇發(fā)放發(fā)放運(yùn)輸運(yùn)輸臨床應(yīng)用臨床應(yīng)用信息反饋信息反饋間充質(zhì)干細(xì)胞的制備方式華通氏膠的提取與培養(yǎng)華通氏膠的提取與培養(yǎng) 華通氏

7、膠提取： 1.消毒 2.清洗 3.分離出兩條動(dòng)脈和一條靜脈 4.剝?nèi)∪A通氏膠 5.剪碎華通氏膠（大小1mm3 ） 6.接種至培養(yǎng)皿培養(yǎng)（密度2-3g/10cm皿）間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng) 細(xì)胞補(bǔ)液和換液（原代培養(yǎng)）細(xì)胞補(bǔ)液和換液（原代培養(yǎng)） 1. 制備五天補(bǔ)液（觀察是否有細(xì)胞爬出） 2.八天換液 間充質(zhì)干細(xì)胞的凍存 細(xì)胞收集前須給檢測送樣做細(xì)菌檢測和流式（CD90+、CD105+、CD166+） 冷凍保護(hù)劑（胎牛血清+DMSO） 配制：DMSO 10% 冷凍方式 深低溫冰箱梯度降溫細(xì)胞治療程序 1 1、治療前咨詢：治療前咨詢： 明確診斷，明確疾病處于哪一期；明確診斷，明確疾病處于哪一期； 2 2、

8、治療風(fēng)險(xiǎn)：、治療風(fēng)險(xiǎn)： 分析利弊；可能的副作用；獲益分析利弊；可能的副作用；獲益 3 3、知情同意：、知情同意：治療前準(zhǔn)備 1). 1). 安全檢測安全檢測: :菌檢；菌檢； 2). 2). 個(gè)體化治療方案設(shè)計(jì)：每一位病個(gè)體化治療方案設(shè)計(jì)：每一位病人的治療方案，都根據(jù)其評價(jià)結(jié)果具人的治療方案，都根據(jù)其評價(jià)結(jié)果具體制定體制定; ; 3). 3). 需要的細(xì)胞數(shù)量；需要的細(xì)胞數(shù)量； 4). 4). 細(xì)胞的使用方法；細(xì)胞的使用方法； 5). 5). 可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)及應(yīng)對措施?？赡艹霈F(xiàn)的不良反應(yīng)及應(yīng)對措施。間充質(zhì)干細(xì)胞質(zhì)量要求 細(xì)菌檢測細(xì)菌檢測 內(nèi)毒素檢測內(nèi)毒素檢測 革蘭氏檢測革蘭氏檢測 支原體檢

9、測支原體檢測 活性檢測90%陰性陰性細(xì)胞發(fā)放 1.細(xì)胞的保存(基質(zhì)：生理鹽水或者保存液） 2.運(yùn)輸要求：時(shí)間、溫度 3.病人信息填寫完整 4.樣本檢測合格MSCMSC治療禁忌證：治療禁忌證： 1. 1. 懷孕。懷孕。 2. 2. 精神病。精神病。 3. 3. 嚴(yán)重的心、肝、腎、肺功能不全。嚴(yán)重的心、肝、腎、肺功能不全。3. 3. 不能控制的嚴(yán)重感染。不能控制的嚴(yán)重感染。4. 4. 合并其他有致命危險(xiǎn)的疾病。合并其他有致命危險(xiǎn)的疾病。 5. 5. 一般受者年齡不超過一般受者年齡不超過6565歲歲 （個(gè)別患者個(gè)別患者6565歲歲）。）。 6. 6. 自體免疫性疾病晚期。自體免疫性疾病晚期。 7.

10、7. 惡性腫瘤惡性腫瘤。 8. HIV 8. HIV 陽性陽性案例分析干細(xì)胞臨床應(yīng)用 一、肝硬化一、肝硬化細(xì)胞移植有可能成為肝硬化治療的最佳備選方案。越來越多的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)表明MSC可以橫向分化為功能性肝細(xì)胞，動(dòng)物研究表明臍帶MSC可以抑制誘導(dǎo)型的肝硬化發(fā)生，并促進(jìn)肝硬化的消退。 臨床資料本組男10例，女2例，年齡38-63歲。均為慢性乙型肝炎，肝硬化, Child-Pugh分級B級9例，C級3例。健康嬰兒臍帶提取間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)實(shí)驗(yàn)室傳代、擴(kuò)增，取108制成40ml混懸液，第一次經(jīng)肝動(dòng)脈注入，第二次以后為靜脈輸注，每周一次，共4次。4周后復(fù)查生化指標(biāo)。結(jié)果食欲改善、體力好轉(zhuǎn)11例（91.66%）

11、；腹脹減輕11例（91.66%）；腹水減少、下肢浮腫減輕10例（83.33%）。12例患者術(shù)中均未發(fā)生嚴(yán)重并發(fā)癥，術(shù)后無不良反應(yīng)。12例肝硬化患者臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植前后實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)變化MSC治療肝硬化的機(jī)制 主要有以下幾個(gè)方面： 1)MSC分化形成正常肝細(xì)胞，補(bǔ)充肝細(xì)胞數(shù)量，改善肝功能； 2)MSC分泌細(xì)胞因子/生長因子、抑制炎癥反應(yīng)； 3)MSC抑制肝星形細(xì)胞，活化、阻止細(xì)胞外基質(zhì)的生成； 4)MSC激活卵原細(xì)胞，促進(jìn)肝細(xì)胞再生； 5)MSC降解肝內(nèi)過量的細(xì)胞外基質(zhì)。 二、脊髓損傷臨床資料本組男11例，女4例。年齡11-48歲，平均37歲。病程4個(gè)月-5年，平均1.2年。治療前均有損傷平面以下肌力、肌張力減退，其中尿失禁9例，大便失禁7例。 臨床資料臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞108，第一次、第三次制成混懸液20ml，其中5ml通過腰穿作椎管內(nèi)注射，另外15ml經(jīng)靜脈輸注。第二次、第四次制成混懸液40ml，作靜脈輸注。每次間隔一周，共4次為一療程。評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)感覺平面恢復(fù)2個(gè)椎體節(jié)段以上，肌力恢復(fù)2級及以上，肌張力恢復(fù)2級及以上，大小便能控制，達(dá)到上述之一者，為顯效。有改善但達(dá)不到上述標(biāo)準(zhǔn)，為有效。結(jié)果15例患者，顯效5例，有效9例，無效1例。三、肌萎縮側(cè)索硬化癥 肌萎縮側(cè)索硬化癥(amy