泡菜的制作上課課件-副本

1、培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的種類不加凝固劑不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產(chǎn)工業(yè)生產(chǎn)觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類鑒定分類鑒定微生物分離、鑒定、微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種種含化學(xué)成分不明確的天然物含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基成分明確培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)質(zhì), ,以抑制不需要的微生物以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)的生長(zhǎng), ,促進(jìn)所需要的微生促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)物的生長(zhǎng)培養(yǎng)、分離出特培養(yǎng)、分離出特定微生物定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品或

2、化學(xué)藥品, ,用以鑒別不同用以鑒別不同種類的微生物種類的微生物鑒別不同種類微鑒別不同種類微生物生物選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基允許允許特定種類特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止抑制或阻止其他種類其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，叫做微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，叫做選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基尿素尿素尿素尿素以尿素為以尿素為唯一氮源唯一氮源的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨培養(yǎng)基培養(yǎng)基是是分離分離尿素尿素細(xì)菌細(xì)菌判斷該判斷該培養(yǎng)基培養(yǎng)基有無選有無選擇性擇性實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組對(duì)照組培養(yǎng)基類型培養(yǎng)基類型是否是否接種接種目的目的結(jié)果結(jié)果只生長(zhǎng)

3、尿只生長(zhǎng)尿素細(xì)菌素細(xì)菌生長(zhǎng)多種生長(zhǎng)多種微生物微生物是是在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少要涂布至少3 3個(gè)平板，作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力個(gè)平板，作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性與準(zhǔn)確性。在分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，。在分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，一定要考慮所設(shè)置的重復(fù)一定要考慮所設(shè)置的重復(fù)組的結(jié)果是否一致，結(jié)果不一致，意味著操作有誤，需要組的結(jié)果是否一致，結(jié)果不一致，意味著操作有誤，需要重新實(shí)驗(yàn)重新實(shí)驗(yàn)。計(jì)算公式：計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)每克樣品中的菌株數(shù)=（CV）M某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均數(shù)為234，那么每克樣品中的菌落數(shù)是（涂布平板時(shí)所用稀釋液的體

4、積為0.1ml）()A.2.34108B.2.34109C.234D.23.4B（三）設(shè)置對(duì)照（三）設(shè)置對(duì)照判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染：判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染：將未接種的培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。將未接種的培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用：判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用：完全培養(yǎng)基（營(yíng)養(yǎng)成分齊全）接種后培養(yǎng)完全培養(yǎng)基（營(yíng)養(yǎng)成分齊全）接種后培養(yǎng)觀察菌落數(shù)目。觀察菌落數(shù)目。主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。從肥沃、酸堿度接近中性的濕潤(rùn)土壤中取樣。先從肥沃、酸堿度接近中性的濕

5、潤(rùn)土壤中取樣。先鏟去表層土鏟去表層土3 cm3 cm左右，再取樣，將樣品裝入事先左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中。準(zhǔn)備好的信封中。取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。 由于初次實(shí)驗(yàn)，對(duì)于稀釋的范圍沒有把握，因此選由于初次實(shí)驗(yàn)，對(duì)于稀釋的范圍沒有把握，因此選擇了一個(gè)較為寬泛的范圍：擇了一個(gè)較為寬泛的范圍：稀釋倍數(shù)為稀釋倍數(shù)為103107。準(zhǔn)備準(zhǔn)備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和和選擇培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基。每個(gè)稀釋每個(gè)稀釋度下需要度下需要3個(gè)選擇培養(yǎng)基，個(gè)選擇培養(yǎng)基，1個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。還個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。還需要

6、需要8個(gè)滅菌試管和個(gè)滅菌試管和1個(gè)滅菌移液管個(gè)滅菌移液管。將稀釋相同倍數(shù)的菌液，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上將稀釋相同倍數(shù)的菌液，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目應(yīng)明顯生長(zhǎng)的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可以作為對(duì)照，用來判斷選擇培養(yǎng)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可以作為對(duì)照，用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了基是否起到了選擇選擇作用。作用。問題：?jiǎn)栴}：為什么分離不同的微生物要采用不同的稀為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測(cè)定土壤中細(xì)菌的總量和測(cè)定土壤中能分釋度？測(cè)定土壤中細(xì)菌的總量和測(cè)定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？解尿

7、素的細(xì)菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？實(shí)驗(yàn)時(shí)要實(shí)驗(yàn)時(shí)要對(duì)培養(yǎng)皿作對(duì)培養(yǎng)皿作好標(biāo)記。注好標(biāo)記。注明培養(yǎng)基類明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時(shí)型、培養(yǎng)時(shí)間、稀釋度、間、稀釋度、培養(yǎng)物等。培養(yǎng)物等。1 1、取土用的小鐵鏟的盛土樣的信封在使用前都需要滅菌。、取土用的小鐵鏟的盛土樣的信封在使用前都需要滅菌。2 2、應(yīng)在火焰旁稱取土壤。在火焰附近將稱好的土樣倒入錐、應(yīng)在火焰旁稱取土壤。在火焰附近將稱好的土樣倒入錐形瓶中，塞好棉塞。形瓶中，塞好棉塞。3 3、在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁操作。、在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁操作。注明培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)日期、平板培養(yǎng)樣品注明培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)日期、平板

8、培養(yǎng)樣品的稀釋度等。的稀釋度等。 三、三、纖維素：棉花棉花是自然是自然界中纖維素界中纖維素含量最高的含量最高的天然產(chǎn)物；天然產(chǎn)物；纖維素是地球上含量最豐富的纖維素是地球上含量最豐富的多糖類多糖類物質(zhì)，植物質(zhì)，植物每年產(chǎn)生的纖維素超過物每年產(chǎn)生的纖維素超過7070億噸；分布植物的億噸；分布植物的根、莖、葉中；根、莖、葉中；1 1、在草食性動(dòng)物等的消化道內(nèi)，也、在草食性動(dòng)物等的消化道內(nèi)，也共生有分解纖維素共生有分解纖維素的微生物的微生物，其原理也是產(chǎn)生纖維素酶而分解纖維素，其原理也是產(chǎn)生纖維素酶而分解纖維素，而人沒有分解纖維素的能力。而人沒有分解纖維素的能力。2 2、農(nóng)作物秸稈農(nóng)作物秸稈 等富等富

9、含大量的纖維素，被利用的機(jī)會(huì)很少、效率低；含大量的纖維素，被利用的機(jī)會(huì)很少、效率低；纖維素生物燃料：纖維素生物燃料：最有希望替代石油能源最有希望替代石油能源科學(xué)家正致力于研究，怎樣將科學(xué)家正致力于研究，怎樣將農(nóng)業(yè)廢棄物、木材及生長(zhǎng)更為迅農(nóng)業(yè)廢棄物、木材及生長(zhǎng)更為迅速的草本植物，速的草本植物，轉(zhuǎn)化為種類繁多轉(zhuǎn)化為種類繁多的生物燃料的生物燃料（甚至是航空燃油）。（甚至是航空燃油）。一、基礎(chǔ)知識(shí)一、基礎(chǔ)知識(shí)纖維素酶纖維素酶纖維二糖纖維二糖C C1 1酶、酶、CxCx酶酶葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶葡萄糖葡萄糖纖維素纖維素一、基礎(chǔ)知識(shí)一、基礎(chǔ)知識(shí) 在在2支支20mL的試管中，分別放入的試管中，分別放入16cm

10、的濾紙條，再分別加入的濾紙條，再分別加入pH為為4.8、物質(zhì)的量、物質(zhì)的量濃度為濃度為0.1mol/L的的醋酸醋酸-醋酸鈉緩沖液醋酸鈉緩沖液10mL、11mL。在加入。在加入10mL緩沖液的試管中加入緩沖液的試管中加入1mL纖維素酶（纖維素酶（7080U/mL）。將二支試管）。將二支試管固定在固定在50mL的錐形瓶中，在搖床上以的錐形瓶中，在搖床上以140r/min的轉(zhuǎn)速振蕩反應(yīng)的轉(zhuǎn)速振蕩反應(yīng)1h，觀察結(jié)果。，觀察結(jié)果。1U表示表示1個(gè)酶活力單位，是指在溫度為個(gè)酶活力單位，是指在溫度為25，其他反應(yīng)條件，其他反應(yīng)條件，如如pH等，均為最適的情況下，在等，均為最適的情況下，在1min內(nèi)轉(zhuǎn)化內(nèi)轉(zhuǎn)化

11、1mmol的底物所的底物所需的酶量。需的酶量。底物：酶所作用和催化的化合物。底物：酶所作用和催化的化合物。 在一支試管中添加纖維素酶，在一支試管中添加纖維素酶，另一支試管不添加纖維素酶；另一支試管不添加纖維素酶；思考思考1實(shí)驗(yàn)分析：實(shí)驗(yàn)分析：P27的小的小實(shí)驗(yàn)是如何構(gòu)成對(duì)照的？實(shí)驗(yàn)是如何構(gòu)成對(duì)照的？濾濾紙紙崩崩潰潰法法（2 2）纖維素分解菌的篩選）纖維素分解菌的篩選1、篩選纖維素分解菌的方法、篩選纖維素分解菌的方法_。該方法可以通過該方法可以通過_反應(yīng)直接篩選。反應(yīng)直接篩選。剛果紅染色法剛果紅染色法顏色顏色2、其原理是：剛果紅可以與纖維素形成、其原理是：剛果紅可以與纖維素形成_，當(dāng)纖維素被，當(dāng)

12、纖維素被_分解后，分解后，紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以_為中心的為中心的_，可以通過，可以通過_來篩選纖維素分解菌。來篩選纖維素分解菌。紅色復(fù)合物紅色復(fù)合物纖維素酶纖維素酶纖維素分解菌纖維素分解菌 透明圈透明圈是否產(chǎn)生透明圈是否產(chǎn)生透明圈可根據(jù)是否可根據(jù)是否產(chǎn)生產(chǎn)生透明圈透明圈來篩選纖維來篩選纖維素分解菌素分解菌練一練：練一練：1.1.下列關(guān)于纖維素酶的說法，錯(cuò)誤的是下列關(guān)于纖維素酶的說法，錯(cuò)誤的是A. 纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包括三種纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包括三種B. 纖維素酶可把纖維素分解成葡萄糖纖維素酶可把纖維素分解成葡萄糖C. 纖維素酶可用于去掉植物的細(xì)胞

13、壁纖維素酶可用于去掉植物的細(xì)胞壁D. 葡萄糖苷酶可把纖維素分解成葡萄糖葡萄糖苷酶可把纖維素分解成葡萄糖2.利用剛果紅法可以篩選出纖維素分解利用剛果紅法可以篩選出纖維素分解菌，下列說法錯(cuò)誤的是菌，下列說法錯(cuò)誤的是A. 剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物 B. 剛果紅能與纖維二糖形成紅色復(fù)合物剛果紅能與纖維二糖形成紅色復(fù)合物 C. 剛果紅不能與葡萄糖形成紅色復(fù)合物剛果紅不能與葡萄糖形成紅色復(fù)合物D. 若培養(yǎng)基上產(chǎn)生了透明圈，則說明已篩若培養(yǎng)基上產(chǎn)生了透明圈，則說明已篩選出了纖維素分解菌選出了纖維素分解菌( (三三) )、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)土壤土壤取樣取樣選擇選擇培養(yǎng)培養(yǎng)梯

14、度梯度稀釋稀釋將樣品涂將樣品涂布到布到鑒別鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基挑選挑選菌落菌落什么什么樣的樣的環(huán)境環(huán)境取樣取樣? 培養(yǎng)的目的培養(yǎng)的目的? ? 選擇培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)基的特點(diǎn)特點(diǎn)? ?挑選什挑選什么樣的么樣的菌落菌落? ?鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基的特點(diǎn)的特點(diǎn)? ?如何鑒別如何鑒別? ?根據(jù)根據(jù)：微生物：微生物對(duì)生存環(huán)境的對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)要求，到相應(yīng)環(huán)境中去找；環(huán)境中去找；目的：目的：增加纖維素增加纖維素分解菌的濃度，分解菌的濃度，以以確保能夠從樣品中確保能夠從樣品中分離到所需要的微分離到所需要的微生物；生物；剛果紅染色法剛果紅染色法1、纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基、纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基屬于屬于_（固體

15、、液體）培（固體、液體）培養(yǎng)基，原因是養(yǎng)基，原因是_【資料二】選擇培養(yǎng)【資料二】選擇培養(yǎng)閱讀資料二閱讀資料二“選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基”，回答以下幾問題：，回答以下幾問題：液體液體沒有添加瓊脂沒有添加瓊脂2、該培養(yǎng)基對(duì)微生物、該培養(yǎng)基對(duì)微生物_（具有，不具有）選擇作用。（具有，不具有）選擇作用。如果具有，其選擇機(jī)制是如果具有，其選擇機(jī)制是_ 具有具有 以纖維素粉為唯一以纖維素粉為唯一碳源，能分碳源，能分解纖維素的微生物可以大量繁解纖維素的微生物可以大量繁殖；殖；若設(shè)置一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)說明選擇培養(yǎng)的作若設(shè)置一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)說明選擇培養(yǎng)的作用，應(yīng)控制的變量是將用，應(yīng)控制的變量是將_改為改為_。3、你能否設(shè)計(jì)一

16、個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，說明選擇培養(yǎng)基、你能否設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，說明選擇培養(yǎng)基的作用？的作用？葡萄糖葡萄糖纖維素粉纖維素粉【資料三】剛果紅染色法【資料三】剛果紅染色法方法一：方法一：先培養(yǎng)微生物，再加先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)方法二：方法二：在倒平板時(shí)就加入剛在倒平板時(shí)就加入剛果紅果紅鑒別鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基纖維素分解菌的培養(yǎng)基(水溶性羧甲基纖維素鈉水溶性羧甲基纖維素鈉)顏色反應(yīng)基本顏色反應(yīng)基本上是纖維素分上是纖維素分解菌的作用解菌的作用操作繁瑣，剛操作繁瑣，剛果紅會(huì)使菌落之間果紅會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜發(fā)生混雜操作簡(jiǎn)便，操作簡(jiǎn)便，不存在菌落不存在菌落混雜問題混雜問題產(chǎn)生淀

17、粉酶的產(chǎn)生淀粉酶的微生物也產(chǎn)生模糊微生物也產(chǎn)生模糊透明圈，有些微生透明圈，有些微生物能降解色素，形物能降解色素，形成明顯的透明圈。成明顯的透明圈。思考：這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與不足思考：這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與不足挑選產(chǎn)生透明圈的菌落挑選產(chǎn)生透明圈的菌落 挑取產(chǎn)生挑取產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落，明顯的透明圈的菌落，一般即為分解纖維素的菌落。一般即為分解纖維素的菌落。 接種到接種到纖維素分解菌的纖維素分解菌的選擇選擇培養(yǎng)培養(yǎng)基上，在基上，在30300 0C C 37370 0C C培養(yǎng)，可獲得純培養(yǎng)，可獲得純培養(yǎng)。培養(yǎng)。四、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)四、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)1.1.培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)基是

18、否篩選培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落出菌落對(duì)照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長(zhǎng)則說明對(duì)照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長(zhǎng)則說明培養(yǎng)基制作合格。培養(yǎng)基制作合格。如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落，則說明可能獲得如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落，則說明可能獲得了分解纖維素的微生物。了分解纖維素的微生物。分解分解纖維纖維素的素的微生微生物的物的分離分離纖維素酶纖維素酶種類、作用、催化種類、作用、催化剛果紅染色剛果紅染色篩選原理篩選原理實(shí)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)設(shè)設(shè)計(jì)計(jì)土壤取樣土壤取樣選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)涂布培養(yǎng)涂布培養(yǎng)純化培養(yǎng)純化培養(yǎng)前置染色法前置染色法后置染色法后置染色法富含纖維素土壤富含纖維素土壤增大分解菌含量增

19、大分解菌含量染色鑒別染色鑒別分離出分解菌分離出分解菌課堂總結(jié)課堂總結(jié)一、課題目標(biāo)一、課題目標(biāo)說明植物組織培養(yǎng)的基本原理，學(xué)習(xí)植物組織培說明植物組織培養(yǎng)的基本原理，學(xué)習(xí)植物組織培養(yǎng)的基本技術(shù)，進(jìn)行菊花或其他植物的組織培養(yǎng)。養(yǎng)的基本技術(shù)，進(jìn)行菊花或其他植物的組織培養(yǎng)。二、課題重點(diǎn)與難點(diǎn)二、課題重點(diǎn)與難點(diǎn)課題重點(diǎn)：植物組織培養(yǎng)過程中使用的無菌技術(shù)。課題重點(diǎn)：植物組織培養(yǎng)過程中使用的無菌技術(shù)。課題難點(diǎn)：植物組織培養(yǎng)過程中使用的無菌技術(shù)。課題難點(diǎn)：植物組織培養(yǎng)過程中使用的無菌技術(shù)。教法：談話法、多媒體輔助教學(xué)教法：談話法、多媒體輔助教學(xué)課時(shí)安排：課時(shí)安排：2 2課時(shí)課時(shí)教學(xué)時(shí)間：教學(xué)時(shí)間：3 3月月12

20、12日日由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程。也叫去分化生愈傷組織的過程。也叫去分化脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官的過程又可以重新分化成根或芽等器官的過程接種后的錐形瓶最好放在無菌箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)接種后的錐形瓶最好放在無菌箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)期間應(yīng)定期消毒。培養(yǎng)溫度期間應(yīng)定期消毒。培養(yǎng)溫度18221822，每日用，每日用日光燈光照日光燈光照12h12h 植物的花藥培養(yǎng)在育種上有什植物的花藥培養(yǎng)在育種上有什么意義？么意義？花粉粒（花粉粒（1N）單倍體植株單倍體植株（1N）二倍體純合子二倍體純合子植株（植

21、株（2N）花的結(jié)構(gòu)花的結(jié)構(gòu)花絲花絲花藥：花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉 花粉是由花粉母細(xì)胞（即小孢子母細(xì)胞）花粉是由花粉母細(xì)胞（即小孢子母細(xì)胞）經(jīng)過經(jīng)過而形成的，因此，花粉是而形成的，因此，花粉是。 花粉的發(fā)育要經(jīng)歷：花粉的發(fā)育要經(jīng)歷：時(shí)期、單核時(shí)期、單核期、雙核期期、雙核期等階段。等階段。雄蕊雄蕊（一）被子植物的花粉發(fā)育（一）被子植物的花粉發(fā)育1花粉母花粉母細(xì)胞（細(xì)胞（2n）4個(gè)小孢子個(gè)小孢子(小孢子小孢子四分體四分體)（n）減分減分有分有分1個(gè)花粉管細(xì)胞核（個(gè)花粉管細(xì)胞核（n）1個(gè)生殖細(xì)胞核（個(gè)生殖細(xì)胞核（n）有分有分2個(gè)精子個(gè)精子單核居中期（單核居中期（n）單核靠邊期

22、（單核靠邊期（n）注意： 二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉花粉管細(xì)胞核和生殖細(xì)胞核管細(xì)胞核和生殖細(xì)胞核。（精子在花粉管中。（精子在花粉管中形成）形成） 三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖細(xì)胞進(jìn)行一次有絲分裂，形成兩個(gè)精子，生殖細(xì)胞進(jìn)行一次有絲分裂，形成兩個(gè)精子，這樣的花粉在成熟時(shí)，含有這樣的花粉在成熟時(shí)，含有一個(gè)營(yíng)養(yǎng)核和兩一個(gè)營(yíng)養(yǎng)核和兩個(gè)精子。個(gè)精子。 兩個(gè)精子和一個(gè)營(yíng)養(yǎng)核的兩個(gè)精子和一個(gè)營(yíng)養(yǎng)核的基因型基因型相同。相同。（二）產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑二）產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑形成原因：主要形成原因：主要取決于培養(yǎng)基

23、中取決于培養(yǎng)基中的激素的種類及的激素的種類及其濃度的配比其濃度的配比體細(xì)胞胚（胚狀體）：體細(xì)胞胚（胚狀體）：在組織培養(yǎng)過程中，某些體細(xì)胞在在組織培養(yǎng)過程中，某些體細(xì)胞在形態(tài)上轉(zhuǎn)變?yōu)榕c合子發(fā)育成的胚非常相形態(tài)上轉(zhuǎn)變?yōu)榕c合子發(fā)育成的胚非常相似的結(jié)構(gòu)，發(fā)育過程亦與合子胚類似，似的結(jié)構(gòu)，發(fā)育過程亦與合子胚類似，被稱為被稱為。（三）影響花藥培養(yǎng)的因素（三）影響花藥培養(yǎng)的因素1、材料的選擇、材料的選擇不同植物不同植物同一植物的不同生理狀況同一植物的不同生理狀況（花期早期初花期花期早期初花期）合適的花粉發(fā)育期合適的花粉發(fā)育期（單核居中期與靠邊期之間單核居中期與靠邊期之間）此外，植株生長(zhǎng)條件、材料低溫預(yù)處理、

24、接種此外，植株生長(zhǎng)條件、材料低溫預(yù)處理、接種密度等密度等2、培養(yǎng)基的組成、培養(yǎng)基的組成實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作材料選取材料選取材料和材料和消毒消毒接種和接種和培養(yǎng)培養(yǎng)（一）材料選取（一）材料選取通過鏡檢來確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。通過鏡檢來確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。最常用的方法：最常用的方法：醋酸洋紅法。醋酸洋紅法。某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色，某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色，采用采用焙花青焙花青-鉻礬法鉻礬法，這種方法能將，這種方法能將花粉細(xì)胞核花粉細(xì)胞核染成染成藍(lán)黑色藍(lán)黑色。月季的初花期月季的初花期。選擇合適的花粉發(fā)育時(shí)期也是提高誘導(dǎo)成功率的選擇合適的花粉發(fā)育時(shí)期也是提高誘導(dǎo)成功

25、率的重要因素。一般來說，重要因素。一般來說，在單核期，細(xì)胞核由中央移向在單核期，細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期，花藥培養(yǎng)成功率最高。，花藥培養(yǎng)成功率最高。二、材料的消毒：二、材料的消毒：花花蕾蕾（70酒精）酒精）大約大約30s（無（無菌水）菌水）清洗清洗（無菌（無菌吸水紙）吸水紙）吸干水吸干水分分（1氯化氯化汞溶液）汞溶液）24min（無（無菌水）菌水）沖洗沖洗 月季花蕾的消毒與菊花外植體的消月季花蕾的消毒與菊花外植體的消毒相比較，二者有何不同？毒相比較，二者有何不同？ 在酒精消毒前，花藥不需要預(yù)先用流在酒精消毒前，花藥不需要預(yù)先用流水沖洗、洗衣粉洗滌和軟刷刷洗水沖洗、洗衣粉洗滌

26、和軟刷刷洗 三、接種和培養(yǎng)三、接種和培養(yǎng)剝?nèi)』ㄋ巹內(nèi)』ㄋ幗臃N花藥接種花藥培養(yǎng)培養(yǎng)分化培養(yǎng)基培養(yǎng)分化培養(yǎng)基培養(yǎng)鑒定和篩選鑒定和篩選不要損傷花藥？不要損傷花藥？要徹底除去花絲？要徹底除去花絲？常常會(huì)出現(xiàn)染色體倍性的變化？常常會(huì)出現(xiàn)染色體倍性的變化？每個(gè)培養(yǎng)瓶接種每個(gè)培養(yǎng)瓶接種 （7 710 10 ） 個(gè)花藥？個(gè)花藥？花藥長(zhǎng)出愈傷組織還要轉(zhuǎn)移到哪？花藥長(zhǎng)出愈傷組織還要轉(zhuǎn)移到哪？主要原因是主要原因是營(yíng)養(yǎng)核和生營(yíng)養(yǎng)核和生殖核融合殖核融合造造成的成的植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的異同點(diǎn)異同點(diǎn)專題4酶的研究與應(yīng)用課題1 果膠酶在果汁 生產(chǎn)中的作用一、課題目標(biāo)一、課題目標(biāo) 1

27、. 1.簡(jiǎn)述果膠酶的作用；簡(jiǎn)述果膠酶的作用； 2.2.檢測(cè)果膠酶的活性；檢測(cè)果膠酶的活性； 3.3.探究溫度和探究溫度和pHpH對(duì)果膠酶活性的對(duì)果膠酶活性的影響以及果膠酶的最適用量；影響以及果膠酶的最適用量； 4.4.搜集有關(guān)果膠酶應(yīng)用的資料。搜集有關(guān)果膠酶應(yīng)用的資料。二、課題重點(diǎn)與難點(diǎn)二、課題重點(diǎn)與難點(diǎn) 課題重點(diǎn)：課題重點(diǎn)： 溫度和溫度和pHpH對(duì)果膠酶活性的影響。對(duì)果膠酶活性的影響。課題難點(diǎn)：課題難點(diǎn)： 果膠酶的最適用量。果膠酶的最適用量。三、基礎(chǔ)知識(shí)分析三、基礎(chǔ)知識(shí)分析 知識(shí)要點(diǎn)知識(shí)要點(diǎn): :1.1.果膠酶的作用；果膠酶的作用；2.2.酶的活性的定義；酶的活性的定義；3.3.影響酶活性的

28、因素；影響酶活性的因素；4.4.果膠酶的用量。果膠酶的用量。 (一)細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)及作用： 作用是什么？作用是什么？ 特點(diǎn)？特點(diǎn)？ 結(jié)構(gòu)組成？結(jié)構(gòu)組成？保護(hù)植物細(xì)胞；支撐植物細(xì)胞彈性?。蝗感岳w維素、果膠1.1.果膠果膠植物細(xì)胞壁及細(xì)胞之間胞間層的成分植物細(xì)胞壁及細(xì)胞之間胞間層的成分 植物細(xì)胞壁以及胞間層的主要組成成植物細(xì)胞壁以及胞間層的主要組成成分之一，它是由分之一，它是由半乳糖醛酸半乳糖醛酸聚合而成的聚合而成的一種一種高分子化合物高分子化合物，不溶于水。，不溶于水。果膠果膠: : 在果汁加工中，果膠不僅會(huì)影響出汁在果汁加工中，果膠不僅會(huì)影響出汁率，還會(huì)使果汁渾濁。果膠酶能夠分解率，還會(huì)使果汁

29、渾濁。果膠酶能夠分解果果膠膠，瓦解植物細(xì)胞的，瓦解植物細(xì)胞的細(xì)胞壁細(xì)胞壁及及胞間層胞間層，使，使榨取果汁更容易，而果膠分解成可溶性的榨取果汁更容易，而果膠分解成可溶性的半乳糖醛酸半乳糖醛酸，也使得渾濁的果汁變得澄清。，也使得渾濁的果汁變得澄清。果膠酶果膠酶 果膠酶并不特指某一種酶，而是分解果膠酶并不特指某一種酶，而是分解果膠的一類酶的總稱，包括果膠的一類酶的總稱，包括多聚多聚半乳糖半乳糖醛酸醛酸酶酶、果膠分解酶果膠分解酶和和果膠脂酶果膠脂酶等。等。果膠酶果膠酶: :2.2.酶的活性與影響酶活性的因素酶的活性與影響酶活性的因素 指酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力。酶反指酶催化一定化學(xué)反應(yīng)的能力。酶反應(yīng)速

30、度用應(yīng)速度用單位時(shí)間單位時(shí)間內(nèi)內(nèi)單位體積單位體積中中反應(yīng)物反應(yīng)物的減少量的減少量或或生成物的增加量生成物的增加量來表示來表示. .(1)(1)酶的活性酶的活性(2)(2)影響酶活性的因素影響酶活性的因素 a.a.溫度溫度b.pHb.pH C. .酶的抑制酶的抑制劑劑. .果膠酶的用量果膠酶的用量 ()探究溫度和探究溫度和pH對(duì)酶活性的影響對(duì)酶活性的影響四、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1、設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案、設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案 A、確定溫度確定溫度/PH梯度（梯度（5C0/ 10C0）/PH5、6、7、8 探究控制溫度探究控制溫度/PH的方法和措施的方法和措施 你的實(shí)驗(yàn)變量是什么？如何設(shè)定？你的實(shí)驗(yàn)變量是什么？如何設(shè)定？ B、

31、確定水果的種類、確定水果的種類確定制備果汁的方確定制備果汁的方法法 確定實(shí)驗(yàn)用的水果用量確定實(shí)驗(yàn)用的水果用量 確定果膠酶的確定果膠酶的用量用量控制測(cè)定果膠酶活性的方法控制測(cè)定果膠酶活性的方法()探究溫度和pH對(duì)酶活性的影響 2、實(shí)驗(yàn)操作步驟：、實(shí)驗(yàn)操作步驟：制備水果泥制備水果泥配制果膠酶配制果膠酶水果泥與果膠酶分別水浴保溫水果泥與果膠酶分別水浴保溫將水果泥和果膠酶混合保溫將水果泥和果膠酶混合保溫過濾出果汁過濾出果汁記錄果汁量記錄果汁量改變不同的溫度改變不同的溫度/PH后重復(fù)以上實(shí)驗(yàn)后重復(fù)以上實(shí)驗(yàn)()探究溫度和pH對(duì)酶活性的影響3、設(shè)計(jì)記錄數(shù)據(jù)的表格、設(shè)計(jì)記錄數(shù)據(jù)的表格4、得出結(jié)論與分析：、得出

32、結(jié)論與分析：畫曲線圖；最適溫度畫曲線圖；最適溫度/PH是是在實(shí)際的操作過程中，還需要注意下列事項(xiàng)：在實(shí)際的操作過程中，還需要注意下列事項(xiàng)：1 1與其他工業(yè)用酶基本相同，果膠酶的與其他工業(yè)用酶基本相同，果膠酶的適宜溫度范圍也比較寬泛，因此，可以選用適宜溫度范圍也比較寬泛，因此，可以選用10 10 作為溫度梯度，設(shè)置的具體溫度為作為溫度梯度，設(shè)置的具體溫度為10 10 、20 20 、30 30 、40 40 、50 50 和和60 60 等，等，也可以嘗試以也可以嘗試以5 5 作為溫度梯度。作為溫度梯度。2 2蘋果、橙子和葡萄等水果都可以作為蘋果、橙子和葡萄等水果都可以作為反應(yīng)物，水果不用去皮。

33、如用蘋果為原材料，反應(yīng)物，水果不用去皮。如用蘋果為原材料，一般可按每個(gè)中等大小的蘋果加水一般可按每個(gè)中等大小的蘋果加水100100200 200 mLmL的比例進(jìn)行攪拌，獲得稀的蘋果泥。的比例進(jìn)行攪拌，獲得稀的蘋果泥。3 3果泥的用量可以采用果泥的用量可以采用5 mL5 mL左右，果左右，果膠酶的用量可采用質(zhì)量濃度為膠酶的用量可采用質(zhì)量濃度為2%2%的果膠酶的果膠酶溶液溶液2 mL2 mL。4 4水浴時(shí)間可以為水浴時(shí)間可以為202030 min30 min。5 5過濾果汁時(shí)，漏斗中應(yīng)放置濾紙。過濾果汁時(shí)，漏斗中應(yīng)放置濾紙。6 6探究探究pHpH對(duì)果膠酶活性的影響，只須對(duì)果膠酶活性的影響，只須將

34、溫度梯度改成將溫度梯度改成pHpH梯度，并選定一個(gè)適宜梯度，并選定一個(gè)適宜的溫度進(jìn)行水浴加熱。反應(yīng)液中的的溫度進(jìn)行水浴加熱。反應(yīng)液中的pHpH可以可以通過體積分?jǐn)?shù)為通過體積分?jǐn)?shù)為0.1%0.1%的氫氧化鈉或鹽酸溶的氫氧化鈉或鹽酸溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)。液進(jìn)行調(diào)節(jié)。( () )探究果膠酶的用量探究果膠酶的用量 探究果膠酶的用量是建立在探究最適溫探究果膠酶的用量是建立在探究最適溫度和度和pHpH對(duì)果膠酶活性影響的基礎(chǔ)之上的。對(duì)果膠酶活性影響的基礎(chǔ)之上的。此時(shí)，研究的變量是此時(shí)，研究的變量是 ，其他因素，其他因素都應(yīng)都應(yīng) 。果膠酶的用量果膠酶的用量保持不變保持不變方案方案：可以配制不同濃度的果膠酶溶液，：可以

35、配制不同濃度的果膠酶溶液，也可以只配制一種濃度的果膠酶溶液，然也可以只配制一種濃度的果膠酶溶液，然后使用不同的體積即可。需要注意的是，后使用不同的體積即可。需要注意的是，反應(yīng)液的反應(yīng)液的pH必須相同，否則將影響實(shí)驗(yàn)必須相同，否則將影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。結(jié)果的準(zhǔn)確性。五、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)五、結(jié)果分析與評(píng)價(jià) 根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)繪制出的溫度和根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)繪制出的溫度和pHpH對(duì)對(duì)果膠酶活性影響的曲線圖；果膠酶活性影響的曲線圖； 不同果膠酶用量對(duì)出汁量影響的曲不同果膠酶用量對(duì)出汁量影響的曲線圖（在濃度和體積相同的條件下）；線圖（在濃度和體積相同的條件下）； 果膠酶最適溫度、果膠酶最適溫度、pHpH以及果膠酶以

36、及果膠酶的最適用量。的最適用量。六、本課題知識(shí)小結(jié)六、本課題知識(shí)小結(jié) 123456雞血雞血溫故知新溫故知新：1 1、洗衣粉中添加洗衣粉中添加_，可以可以更有效地清除頑漬。常用的酶制劑更有效地清除頑漬。常用的酶制劑有有_四類四類。2 2、影響酶活性的因素有影響酶活性的因素有_、_和和_。酶制劑的優(yōu)點(diǎn)：酶制劑的優(yōu)點(diǎn)： 催化效率高、低耗能、低污染，催化效率高、低耗能、低污染，大規(guī)模地應(yīng)用于食品、化工等各個(gè)大規(guī)模地應(yīng)用于食品、化工等各個(gè)領(lǐng)域。領(lǐng)域。酶制劑存在的缺陷：酶制劑存在的缺陷： 1 1、通常對(duì)、通常對(duì)強(qiáng)酸強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、高溫和強(qiáng)堿、高溫和有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑等條件非常敏感，容易失等條件非常敏感，容易失活

37、；活； 2 2、溶液中的酶很難回收，不能、溶液中的酶很難回收，不能被再次利用，提高了生產(chǎn)成本；被再次利用，提高了生產(chǎn)成本； 3 3、反應(yīng)后會(huì)混在產(chǎn)物中，可能、反應(yīng)后會(huì)混在產(chǎn)物中，可能影響產(chǎn)品質(zhì)量。影響產(chǎn)品質(zhì)量。 如果你是工程技術(shù)人員，你如果你是工程技術(shù)人員，你如何解決這個(gè)問題如何解決這個(gè)問題？固定化酶技術(shù)固定化酶技術(shù) 閱讀閱讀P49-50P49-50，并思考：，并思考：1 1、解決酶應(yīng)用中存在問題的方法是？、解決酶應(yīng)用中存在問題的方法是？2 2、什么是高果糖漿？使用它有何好處？、什么是高果糖漿？使用它有何好處？3 3、生產(chǎn)高果糖漿需要什么酶？其作用、生產(chǎn)高果糖漿需要什么酶？其作用是什么？這種酶

38、有何特點(diǎn)？是什么？這種酶有何特點(diǎn)？4 4、了解高果糖漿生產(chǎn)過程。、了解高果糖漿生產(chǎn)過程。5 5、這種方法的優(yōu)點(diǎn)是什么？、這種方法的優(yōu)點(diǎn)是什么？一、固定化酶的應(yīng)用實(shí)例一、固定化酶的應(yīng)用實(shí)例1 1、固定化酶技術(shù)。即將酶固定在、固定化酶技術(shù)。即將酶固定在一定空間內(nèi)的技術(shù)（如固定在不一定空間內(nèi)的技術(shù)（如固定在不溶于水的載體上）。溶于水的載體上）。1、解決酶應(yīng)用中存在問題的方法是？、解決酶應(yīng)用中存在問題的方法是？2 2、高果糖漿是果糖含量為、高果糖漿是果糖含量為42%42%左右左右的糖漿。作為蔗糖的替代品，高果的糖漿。作為蔗糖的替代品，高果糖漿不會(huì)像蔗糖那樣誘發(fā)肥胖、糖糖漿不會(huì)像蔗糖那樣誘發(fā)肥胖、糖尿病

39、、齲齒和心血管病，對(duì)人的健尿病、齲齒和心血管病，對(duì)人的健康有利?？涤欣?。你能寫出果糖的分子式嗎你能寫出果糖的分子式嗎? ?它屬于什么糖它屬于什么糖? ?2、什么是高果糖漿？使用它有何好處？、什么是高果糖漿？使用它有何好處？3 3、生產(chǎn)高果糖漿需要、生產(chǎn)高果糖漿需要葡萄糖異構(gòu)葡萄糖異構(gòu)酶酶；其作用是將葡萄糖轉(zhuǎn)化為果；其作用是將葡萄糖轉(zhuǎn)化為果糖；這種酶穩(wěn)定性好，可持續(xù)發(fā)糖；這種酶穩(wěn)定性好，可持續(xù)發(fā)揮作用。揮作用。3、生產(chǎn)高果糖漿需要什么酶？其作用、生產(chǎn)高果糖漿需要什么酶？其作用是什么？這種酶有何特點(diǎn)？是什么？這種酶有何特點(diǎn)？4 4、固定化酶技術(shù)生產(chǎn)高果糖漿的過程：、固定化酶技術(shù)生產(chǎn)高果糖漿的過程：

40、注意反應(yīng)柱的注意反應(yīng)柱的各部分名稱。各部分名稱。你能說出反應(yīng)你能說出反應(yīng)柱的優(yōu)點(diǎn)嗎？柱的優(yōu)點(diǎn)嗎？5 5、固定化酶技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：、固定化酶技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：（1 1）使酶既能與反應(yīng)物接觸，又）使酶既能與反應(yīng)物接觸，又能與產(chǎn)物分離；能與產(chǎn)物分離；（2 2）固定在載體上的酶可以被反）固定在載體上的酶可以被反復(fù)利用。復(fù)利用。5、這種方法的優(yōu)點(diǎn)是什么？、這種方法的優(yōu)點(diǎn)是什么？ 在生產(chǎn)實(shí)際中使用固定化酶技在生產(chǎn)實(shí)際中使用固定化酶技術(shù)的不足：術(shù)的不足： 一種酶只能催化一種化學(xué)反應(yīng)，一種酶只能催化一種化學(xué)反應(yīng)，而在生產(chǎn)實(shí)際中很多產(chǎn)物的形成都而在生產(chǎn)實(shí)際中很多產(chǎn)物的形成都通過一系列的酶促反應(yīng)才能進(jìn)行，通過一系列的酶促反

41、應(yīng)才能進(jìn)行，所以操作比較麻煩。所以操作比較麻煩。怎么辦怎么辦?可采用固定化細(xì)胞技術(shù)。可采用固定化細(xì)胞技術(shù)。二、固定化細(xì)胞技術(shù)二、固定化細(xì)胞技術(shù)1 1、概念：、概念：利用物理或化學(xué)方法將細(xì)胞固利用物理或化學(xué)方法將細(xì)胞固定在一定空間的技術(shù)。定在一定空間的技術(shù)。細(xì)胞中含有一系列酶，在細(xì)胞細(xì)胞中含有一系列酶，在細(xì)胞正常生命活動(dòng)的過程中，通過正常生命活動(dòng)的過程中，通過代謝產(chǎn)生所需要的代謝產(chǎn)物。代謝產(chǎn)生所需要的代謝產(chǎn)物。閱讀閱讀P50P50：思考第二段的問題：思考第二段的問題2.2.將酶或細(xì)胞固定化的方法將酶或細(xì)胞固定化的方法將酶（或細(xì)胞）包將酶（或細(xì)胞）包埋在細(xì)微網(wǎng)格里埋在細(xì)微網(wǎng)格里將酶（或細(xì)胞）將酶（

42、或細(xì)胞）相互連接起來相互連接起來將酶（或細(xì)胞）吸將酶（或細(xì)胞）吸附在載體表面上附在載體表面上包埋法包埋法化學(xué)結(jié)合法化學(xué)結(jié)合法物理吸附法物理吸附法酶適合采用化學(xué)結(jié)合和物酶適合采用化學(xué)結(jié)合和物理吸附法固定理吸附法固定細(xì)胞適合采用包埋法固定細(xì)胞適合采用包埋法固定細(xì)胞個(gè)大，酶分子很小細(xì)胞個(gè)大，酶分子很小個(gè)體大的細(xì)胞難以被吸附或結(jié)合而個(gè)體大的細(xì)胞難以被吸附或結(jié)合而個(gè)小的酶容易從包埋的材料中漏出個(gè)小的酶容易從包埋的材料中漏出3 3、固定化細(xì)胞常用的載體、固定化細(xì)胞常用的載體常用的不溶于水的多孔性載體常用的不溶于水的多孔性載體有哪些？有哪些？明膠、瓊脂糖、海藻酸鈉、明膠、瓊脂糖、海藻酸鈉、醋酸纖維素、聚丙烯

43、酰胺等醋酸纖維素、聚丙烯酰胺等 如果反應(yīng)底物是大分如果反應(yīng)底物是大分子物質(zhì)，能否用固定化細(xì)子物質(zhì)，能否用固定化細(xì)胞技術(shù)胞技術(shù)? ? 為什么？為什么？ 那應(yīng)該采用何種技術(shù)那應(yīng)該采用何種技術(shù)? ?三、實(shí)驗(yàn)操作三、實(shí)驗(yàn)操作（一）制備固定化酵母細(xì)胞（一）制備固定化酵母細(xì)胞閱讀閱讀P5051P5051思考下列問題：思考下列問題：（1 1）制備過程包括哪幾個(gè)步驟？）制備過程包括哪幾個(gè)步驟？（2 2）你認(rèn)為哪個(gè)步驟的操作是最）你認(rèn)為哪個(gè)步驟的操作是最重要的一環(huán)？重要的一環(huán)？1 1、酵母細(xì)胞的活化、酵母細(xì)胞的活化思考：思考： 關(guān)于酵母菌你有哪些知識(shí)？關(guān)于酵母菌你有哪些知識(shí)？ 什么是活化？什么是活化？ 怎樣活化

44、？怎樣活化？ 應(yīng)注意什么？應(yīng)注意什么？活化：活化： 讓處于休眠狀態(tài)的微生物重讓處于休眠狀態(tài)的微生物重新恢復(fù)正常的生活狀態(tài)；新恢復(fù)正常的生活狀態(tài)；本質(zhì)：本質(zhì)： 加快新陳代謝；加快新陳代謝；方法：方法： 加入適量的水。加入適量的水。 取取1g1g干酵母，放干酵母，放入入50ml50ml的小燒杯的小燒杯中，加入蒸餾水中，加入蒸餾水10ml10ml，用玻璃棒，用玻璃棒攪拌，使酵母細(xì)攪拌，使酵母細(xì)胞混合均勻，成胞混合均勻，成糊狀，放置糊狀，放置1h1h左左右使其活化右使其活化思考：思考： 你認(rèn)為酵母的活化操作有你認(rèn)為酵母的活化操作有哪些注意事項(xiàng)？哪些注意事項(xiàng)？1 1、所用容器要大一些；、所用容器要大一些

45、；2 2、要保證酵母菌的活性；、要保證酵母菌的活性；2 2、配制物質(zhì)的量濃度為、配制物質(zhì)的量濃度為0.05mol/L0.05mol/L的的CaClCaCl2 2溶液溶液稱取無水稱取無水CaClCaCl2 2 0.83g 0.83g。放入。放入200mL200mL的燒杯中，加入的燒杯中，加入150mL150mL的蒸的蒸餾水，使其充分溶解，待用。餾水，使其充分溶解，待用。3 3、配制海藻酸鈉溶液、配制海藻酸鈉溶液操作：操作： 稱取稱取0.7g0.7g海藻酸鈉，放入海藻酸鈉，放入50mL50mL小燒杯中小燒杯中. .加人加人10mL10mL水，用酒精燈水，用酒精燈加熱，邊加熱邊攪拌，將海藻酸鈉加熱，

46、邊加熱邊攪拌，將海藻酸鈉調(diào)成糊狀，直至完全溶化，用蒸餾調(diào)成糊狀，直至完全溶化，用蒸餾水定容至水定容至10mL10mL。注意，。注意，加熱時(shí)要用加熱時(shí)要用小火，或者間斷加熱，反復(fù)幾次，小火，或者間斷加熱，反復(fù)幾次，直到海藻酸鈉溶化為止直到海藻酸鈉溶化為止 加熱使海藻酸鈉溶化是操作中加熱使海藻酸鈉溶化是操作中最重要最重要的一環(huán)，涉及到實(shí)驗(yàn)的成敗，的一環(huán)，涉及到實(shí)驗(yàn)的成敗，一定要按照教材的提示進(jìn)行操作。一定要按照教材的提示進(jìn)行操作。海藻酸鈉的濃度涉及到固定化細(xì)胞海藻酸鈉的濃度涉及到固定化細(xì)胞的質(zhì)量。如果海藻酸鈉濃度過高，的質(zhì)量。如果海藻酸鈉濃度過高，將很難形成凝膠珠；如果濃度過低，將很難形成凝膠珠；

47、如果濃度過低，形成的凝膠珠所包埋的酵母細(xì)胞的形成的凝膠珠所包埋的酵母細(xì)胞的數(shù)目少，影響實(shí)驗(yàn)效果。數(shù)目少，影響實(shí)驗(yàn)效果。應(yīng)當(dāng)注意什么問題？應(yīng)當(dāng)注意什么問題？4 4、海藻酸鈉溶液與酵母細(xì)胞混合、海藻酸鈉溶液與酵母細(xì)胞混合 將溶化好的海藻酸鈉溶液冷將溶化好的海藻酸鈉溶液冷卻至室溫，加入已活化的醉母細(xì)卻至室溫，加入已活化的醉母細(xì)胞，進(jìn)行充分?jǐn)嚢?，使其混合均胞，進(jìn)行充分?jǐn)嚢瑁蛊浠旌暇鶆?，再轉(zhuǎn)移至注射器中。勻，再轉(zhuǎn)移至注射器中。為什么海藻酸鈉溶液要冷卻？為什么海藻酸鈉溶液要冷卻？5 5、固定化酵母細(xì)胞、固定化酵母細(xì)胞 以以恒定的速度緩慢地恒定的速度緩慢地將注射將注射器中的溶液器中的溶液滴加滴加到配制好的

48、到配制好的CaClCaCl2 2溶液中，觀察液滴在溶液中，觀察液滴在CaClCaCl2 2溶液中形成凝膠珠的情形。將這溶液中形成凝膠珠的情形。將這些凝膠珠在些凝膠珠在CaClCaCl2 2溶液中溶液中浸泡浸泡30 30 minmin左右。左右。 剛形成的凝膠珠應(yīng)在剛形成的凝膠珠應(yīng)在CaClCaCl2 2溶液中溶液中浸泡一段時(shí)間，以便形成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。浸泡一段時(shí)間，以便形成穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。 檢驗(yàn)?zāi)z珠的質(zhì)量是否合格，可以檢驗(yàn)?zāi)z珠的質(zhì)量是否合格，可以使用下列方法：使用下列方法： 一是用鑷子夾起一個(gè)凝膠珠放在實(shí)一是用鑷子夾起一個(gè)凝膠珠放在實(shí)驗(yàn)桌上用手?jǐn)D壓，如果凝膠珠不容易破驗(yàn)桌上用手?jǐn)D壓，如果凝膠珠不容

49、易破裂，沒有液體流出，就表明凝膠珠的制裂，沒有液體流出，就表明凝膠珠的制作成功。作成功。 二是在實(shí)驗(yàn)桌上用力摔打凝膠珠，二是在實(shí)驗(yàn)桌上用力摔打凝膠珠，如果凝膠珠很容易彈起，也能表明制備如果凝膠珠很容易彈起，也能表明制備的凝膠珠是成功的。的凝膠珠是成功的。這一階段成功與否呢？怎樣評(píng)價(jià)？這一階段成功與否呢？怎樣評(píng)價(jià)？觀察凝膠珠的顏色和形狀觀察凝膠珠的顏色和形狀:如果制作的凝膠珠如果制作的凝膠珠顏色過淺、呈白顏色過淺、呈白色色，說明海藻酸鈉的濃度，說明海藻酸鈉的濃度偏低偏低，固，固定的酵母細(xì)胞數(shù)目定的酵母細(xì)胞數(shù)目較少較少；如果形成；如果形成的凝膠珠的凝膠珠不是圓形或橢圓形不是圓形或橢圓形，則說，則說

50、明海藻酸鈉的濃度偏明海藻酸鈉的濃度偏高高，制作失敗，制作失敗，需要再作嘗試。需要再作嘗試。（二）用固定化細(xì)胞發(fā)酵（二）用固定化細(xì)胞發(fā)酵1 1、將固定好的酵母細(xì)胞、將固定好的酵母細(xì)胞( (凝膠凝膠珠珠) )用蒸餾水沖洗用蒸餾水沖洗2-32-3次。次。 2 2、 將將150mL150mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%10%的的葡萄糖溶液轉(zhuǎn)移到葡萄糖溶液轉(zhuǎn)移到200mL200mL的錐形的錐形瓶中，再加入固定好的酵母細(xì)瓶中，再加入固定好的酵母細(xì)胞，置于胞，置于2525下發(fā)酵下發(fā)酵24h24h。這一階段成功與否呢？怎這一階段成功與否呢？怎樣評(píng)價(jià)？樣評(píng)價(jià)？觀察發(fā)酵的葡萄糖溶液；觀察發(fā)酵的葡萄糖溶液；利用固定的

51、酵母細(xì)胞發(fā)酵產(chǎn)生利用固定的酵母細(xì)胞發(fā)酵產(chǎn)生酒精，可以看到產(chǎn)生了很多氣酒精，可以看到產(chǎn)生了很多氣泡，同時(shí)會(huì)聞到酒味。泡，同時(shí)會(huì)聞到酒味。還有其他方法嗎？還有其他方法嗎？目的要求目的要求 1 1、了解從細(xì)胞中提取、了解從細(xì)胞中提取DNADNA的基本的基本原理原理 2 2、初步掌握、初步掌握DNADNA的粗提取和鑒定的粗提取和鑒定的方法的方法 3 3、觀察提取出來的、觀察提取出來的DNADNA實(shí)驗(yàn)思路實(shí)驗(yàn)思路 1、DNA從哪提取？從哪提取？ 2、怎樣將、怎樣將DNA與細(xì)胞中的其他物質(zhì)分離？與細(xì)胞中的其他物質(zhì)分離？ 3、怎樣鑒定我們提取的、怎樣鑒定我們提取的DNA？實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理1. DNA1. D

52、NA在在NaClNaCl溶液中的溶解度，是隨著溶液中的溶解度，是隨著NaClNaCl的濃度的變化而改變的。當(dāng)?shù)臐舛鹊淖兓淖兊?。?dāng)NaClNaCl的的物質(zhì)的量濃度為物質(zhì)的量濃度為0.14 mol0.14 molL L時(shí)時(shí),DNA,DNA的溶的溶解度最低。解度最低。利用這一原理，可以使溶解利用這一原理，可以使溶解在在NaClNaCl溶液中的溶液中的DNADNA析出。析出。2.DNA2.DNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液，但是細(xì)胞中的某些，但是細(xì)胞中的某些物質(zhì)則可以溶于酒精溶液。利用這一原物質(zhì)則可以溶于酒精溶液。利用這一原理，可以進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少的理，可以進(jìn)一步提取出含雜質(zhì)較少的DNADN

53、A。3.DNA3.DNA遇二苯胺（沸水浴）會(huì)染成藍(lán)色遇二苯胺（沸水?。?huì)染成藍(lán)色，因，因此，二苯胺可以作為鑒定此，二苯胺可以作為鑒定DNADNA的試劑。的試劑。實(shí)驗(yàn)材料和用具實(shí)驗(yàn)材料和用具實(shí)驗(yàn)材料：實(shí)驗(yàn)材料：1 1、雞血細(xì)胞液（、雞血細(xì)胞液（510ml510ml）；）；2 2、體積分?jǐn)?shù)為、體積分?jǐn)?shù)為95%95%的冷酒精溶液（實(shí)驗(yàn)前置于的冷酒精溶液（實(shí)驗(yàn)前置于冰箱內(nèi)冷卻冰箱內(nèi)冷卻24h24h）；）；3 3、蒸餾水；、蒸餾水；4 4、質(zhì)量濃度為、質(zhì)量濃度為0 0g/mlg/ml的檸檬酸鈉溶液；的檸檬酸鈉溶液； （抗凝劑）（抗凝劑）5 5、物質(zhì)的量濃度分別為、物質(zhì)的量濃度分別為2mol/L2mol/

54、L和和0 0015mol/L015mol/L的的NaClNaCl溶液；溶液；6 6、二苯胺試劑。、二苯胺試劑。實(shí)驗(yàn)用具：實(shí)驗(yàn)用具：鐵架臺(tái)；鐵環(huán)；鑷子；三鐵架臺(tái)；鐵環(huán)；鑷子；三角架；酒精燈；石棉網(wǎng)；載玻片；玻角架；酒精燈；石棉網(wǎng)；載玻片；玻璃棒；濾紙；滴管；量筒（璃棒；濾紙；滴管；量筒（100ml100ml，一，一個(gè)）；燒杯；（個(gè)）；燒杯；（100ml100ml，一個(gè)，一個(gè)，50ml50ml、500ml500ml各二個(gè)）；試管（各二個(gè)）；試管（20ml20ml，二個(gè)）；，二個(gè)）；漏斗；試管夾；紗布。漏斗；試管夾；紗布。 本實(shí)驗(yàn)中，本實(shí)驗(yàn)中，要往雞血中加入抗凝劑要往雞血中加入抗凝劑(1)(1)先將

55、新鮮的雞血離心，獲得雞血細(xì)胞先將新鮮的雞血離心，獲得雞血細(xì)胞(2)(2)在雞血細(xì)胞中加入一定量的蒸餾水，同時(shí)用在雞血細(xì)胞中加入一定量的蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒攪拌，過濾后收集濾液即可玻璃棒攪拌，過濾后收集濾液即可小結(jié)小結(jié) 1、DNA的粗提取與鑒定的方法的粗提取與鑒定的方法 2、原理、原理 3、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的步驟，原則、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的步驟，原則課題課題3血紅蛋白的提取和分離血紅蛋白的提取和分離主要內(nèi)容：主要內(nèi)容：一、基礎(chǔ)知識(shí)一、基礎(chǔ)知識(shí)二、實(shí)驗(yàn)操作二、實(shí)驗(yàn)操作一、基礎(chǔ)知識(shí)一、基礎(chǔ)知識(shí)- 凝膠色譜法（分配色譜法）凝膠色譜法（分配色譜法）1 1、凝膠：、凝膠：一些微小多孔的球體（內(nèi)含許多貫穿的通一些微小多孔的球

56、體（內(nèi)含許多貫穿的通道，由多糖類構(gòu)成如葡聚糖、瓊脂糖）道，由多糖類構(gòu)成如葡聚糖、瓊脂糖）2 2、概念：、概念：根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法有效方法3 3、原理：、原理：一、基礎(chǔ)知識(shí)一、基礎(chǔ)知識(shí)-4 4、具體過程、具體過程一、基礎(chǔ)知識(shí)一、基礎(chǔ)知識(shí)-1 1、概念：、概念：在一定的范圍內(nèi)，能對(duì)抗外來少在一定的范圍內(nèi)，能對(duì)抗外來少量強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或稍加稀釋不引起溶液量強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或稍加稀釋不引起溶液PHPH發(fā)發(fā)生明顯變化的作用叫做緩沖作用，具有緩生明顯變化的作用叫做緩沖作用，具有緩沖作用的溶液叫做緩沖溶液。沖作用的溶液叫做緩沖溶液。 緩沖溶液：緩沖溶液：2 2

57、、作用：、作用：能夠抵制（能夠抵制（ ）對(duì)溶）對(duì)溶液（液（ ）的影響，維持）的影響，維持PHPH基本不基本不變。變。外界的酸或堿外界的酸或堿pHpH值值3 3、緩沖溶液的配制、緩沖溶液的配制通常由（通常由（ ）種緩沖劑溶解于水中）種緩沖劑溶解于水中配制而成。調(diào)節(jié)緩沖劑的（配制而成。調(diào)節(jié)緩沖劑的（ ）就可以制得（就可以制得（ ）使用的緩沖液。使用的緩沖液。1 12 2使用比例使用比例在不同在不同PHPH范圍內(nèi)范圍內(nèi)思考：說出人體血液中緩沖液。思考：說出人體血液中緩沖液。 NaH2PO4 / Na2HPO4 H2CO3/NaHCO3磷酸緩沖液，磷酸緩沖液，保證血紅蛋白的正常結(jié)構(gòu)和保證血紅蛋白的正常

58、結(jié)構(gòu)和功能，便于觀察功能，便于觀察()和科學(xué)研究其和科學(xué)研究其()4、在本課題中使用的緩沖液？、在本課題中使用的緩沖液？（三）（三） 電泳：電泳：帶電粒子在電場(chǎng)作用下發(fā)生遷移的過程。帶電粒子在電場(chǎng)作用下發(fā)生遷移的過程。 許多重要的生物大分子，如多肽、許多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解離的基團(tuán)，在一定的核酸等都具有可解離的基團(tuán)，在一定的PHPH下，下，這些基團(tuán)會(huì)帶上正電或負(fù)電。這些基團(tuán)會(huì)帶上正電或負(fù)電。在電場(chǎng)的作用在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)。電極移動(dòng)。電泳利用了待分離樣品中各種分電泳利用了待分離樣品中各種分子帶

59、電性質(zhì)的差異以及分子本身的大小，形狀子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身的大小，形狀的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。瓊脂糖瓊脂糖凝膠電泳、凝膠電泳、聚丙稀酰胺聚丙稀酰胺凝膠電泳。凝膠電泳。在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)其所帶電荷相反的電極移動(dòng) 4 4、聚丙稀酰胺凝膠電泳聚丙稀酰胺凝膠電泳（1 1）聚丙稀酰胺凝膠：）聚丙稀酰胺凝膠：是由單體丙烯酰是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑胺和交聯(lián)劑N,NN,N，亞甲基雙丙烯酰胺在引發(fā)劑亞甲基雙丙烯酰胺在引

60、發(fā)劑和催化劑的作用下聚合交聯(lián)成的具有三維網(wǎng)和催化劑的作用下聚合交聯(lián)成的具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。狀結(jié)構(gòu)的凝膠。蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率遷移率取取決于它所帶決于它所帶凈電荷凈電荷的多少以及的多少以及分子的大分子的大小小等因素。等因素。為了消除為了消除凈電荷對(duì)遷移率的影響，凈電荷對(duì)遷移率的影響，可以可以在凝膠中加入在凝膠中加入SDSSDS。（2 2）原理：）原理：SDSSDS能使蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性。能使蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性。由幾條肽由幾條肽鏈組成的鏈組成的蛋白質(zhì)復(fù)合體蛋白質(zhì)復(fù)合體在在SDSSDS的作用下會(huì)的作用下會(huì)，因此測(cè)定的結(jié)果只是，因此測(cè)定的結(jié)果只是。SDSSDS