藥物分析16抗生素類藥物的分析資料

1、藥物分析16抗生素類藥物的分析概 述1-內(nèi)酰胺類2氨基糖苷類3四環(huán)素類4高分子雜質(zhì)檢查51.抗生素（antibiotics） 在低微濃度下即可對某些生物（病原微生物）的生命活動有特異抑制作用的化學(xué)物質(zhì)的總稱2.分類l 內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類(青霉素類、頭孢菌素類青霉素類、頭孢菌素類)l 氨基糖苷類氨基糖苷類(鏈霉素、慶大霉素、依替米星鏈霉素、慶大霉素、依替米星)l 四環(huán)素類四環(huán)素類(四環(huán)素、金霉素、土霉素四環(huán)素、金霉素、土霉素)l 大環(huán)內(nèi)酯類大環(huán)內(nèi)酯類(紅霉素、螺旋霉素、麥迪霉素紅霉素、螺旋霉素、麥迪霉素)l 多烯大環(huán)類多烯大環(huán)類(制霉菌素、兩性霉素制霉菌素、兩性霉素B)l 多肽類多肽類(多黏菌素、

2、放線菌素多黏菌素、放線菌素)3.來源 生物合成（發(fā)酵）生物合成（發(fā)酵） 化學(xué)合成或半合成化學(xué)合成或半合成4.特點 化學(xué)純度較低化學(xué)純度較低 活性組分易發(fā)生變異活性組分易發(fā)生變異 穩(wěn)定性差穩(wěn)定性差5.抗生素質(zhì)量分析生物學(xué)法、物理化學(xué)法生物學(xué)法、物理化學(xué)法 鑒別：理化方法、微生物法理化方法、微生物法 檢查：水分、水分、pHpH值、異常毒性、熱原、細菌內(nèi)毒素、值、異常毒性、熱原、細菌內(nèi)毒素、降壓物質(zhì)等降壓物質(zhì)等 含量/效價測定： 微生物法微生物法 ： 與臨床療效吻合,靈敏度高，結(jié)果直觀，適用范圍廣；但操作復(fù)雜費時，誤差大 理化方法：理化方法：準(zhǔn)確度與專屬性較高, 且操作簡便；但與臨床療效有偏差CON

3、SOHNCOOHCH3CH3CH2 青霉素(芐青霉素) (penicillins)CHCOHNNH2NSCH3CH3COOHO氨芐西林氨芐西林CHCOHNNH2HONSCH3CH3COOHO阿莫西林阿莫西林CHCOHNNH2CH3NOSCOOH頭孢氨芐頭孢氨芐CH3NOSCOOHCHCOHNNH2頭孢拉定CH3NOSCOOHCHCOHNNH2HO頭孢羥氨芐SCH2CONONHSCH2OCOCH3COONa頭孢噻吩鈉頭孢噻吩鈉NSCH3CH3COOHOHN1234567RCO母核（6-氨基青霉烷酸）6-aminopenicillanic acid,簡稱簡稱6-APA青霉素類7654321NONH

4、SCH2R1COOH母核（7-氨基頭孢菌烷酸）RCO7-aminocephalosporanic acid,簡稱7-ACA頭孢菌素類氫化噻唑環(huán)氫化噻唑環(huán)氫化噻嗪環(huán)氫化噻嗪環(huán)一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)1.酸性（羧基） pKa 2.5-2.8，酸性較強。堿金屬鹽水溶性好，酸性較強。堿金屬鹽水溶性好，有機堿鹽難溶于水。有機堿鹽難溶于水。NSOHNCOOKCH3CH3OCCH2C2H52N C H2C H2O O CNSOH NC O O HC H3C H3OCC H2N H2普魯卡因青霉素普魯卡因青霉素NSO1234567NOS123456782.手性C （旋光性）3.UV青霉素類：苯環(huán)取代基頭孢菌素類：母核有

5、共軛結(jié)構(gòu)260nm4. 內(nèi)酰胺環(huán)(四元環(huán)張力+酰胺鍵 ) 干燥條件較穩(wěn)定，溶液不穩(wěn)定干燥條件較穩(wěn)定，溶液不穩(wěn)定失失效效降降解解青青霉霉素素類類酸酸、堿堿、青青霉霉素素酶酶某些氧化劑、金屬離子、溫度某些氧化劑、金屬離子、溫度失失效效降降解解頭頭孢孢菌菌素素類類酸酸、堿堿、胺胺類類內(nèi)內(nèi)酰酰胺胺酶酶 二、Identification(一)色譜法HPLC (tR)TLC (Rf)(二)光譜法IR UVNMRNH2CONSOHNCOOHCH3CH3HOCH2取本品50mg溶于0.5ml重水中，測定NMR光譜時，應(yīng)顯示3.8 附近附近 6.97.5 7.99.0 單峰信號 多重峰信號 多重峰信號 2 ：

6、3 ： 5(三)呈色反應(yīng)1 1）羥肟酸鐵反應(yīng)）羥肟酸鐵反應(yīng)內(nèi)酰胺環(huán)內(nèi)酰胺環(huán)內(nèi)酰胺類NH2OHHClNaOH羥肟酸 Fe3+ H+顯色NSOH2NOH HClNSCOHNHOHNSCHNHOFe3+3O（紅、棕、褐）2 2）茚三酮反應(yīng)）茚三酮反應(yīng)-氨基氨基 茚三酮 藍紫色藍紫色CNH2H+OOHOHOCOHONCOO+CO2+3H2O3 3）雙縮脲反應(yīng)）雙縮脲反應(yīng)內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類 堿性酒石酸銅紫色2OHCONH2CuCOHNCCH3COONaCH3SNHNCH3CH3COONaCSNOHOHOOCH2NH2CH2HH4 4）變色酸）變色酸- -硫酸反應(yīng)硫酸反應(yīng)NSOHNCOOKCH3CH3OCC

7、H2H2SO4 HCHO變色酸（縮合）顯色5 5）重氮苯磺酸反應(yīng)）重氮苯磺酸反應(yīng)酚羥基酚羥基橙黃色橙黃色重氮苯磺酸重氮苯磺酸 OHHC56（偶合）6 6）銅鹽反應(yīng)）銅鹽反應(yīng)頭孢氨芐的專屬反應(yīng)頭孢氨芐的專屬反應(yīng)橄欖綠色 NaOH4CuSOHAc7 7）硫酸）硫酸- -甲醛反應(yīng)甲醛反應(yīng)(BP)(BP)呈暗黃色氨芐西林水浴加熱甲醛硫酸水濕潤-青霉素鉀和青霉素鈉呈紅棕色(四)焰色反應(yīng)K+、Na+三、Purity Test(聚合物、有關(guān)物質(zhì)、異構(gòu)體等)1.聚合物頭孢他啶中聚合物測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用用葡聚糖凝膠葡聚糖凝膠G-10G-10（4040120120 m m）為填充劑，）為填充劑，玻璃

8、柱玻璃柱內(nèi)徑內(nèi)徑1.31.31.6cm1.6cm，床體積，床體積505060ml60ml；流流動相動相A A為含為含3.5%3.5%硫酸銨的硫酸銨的0.1mol/L0.1mol/L磷酸鹽緩沖液磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鈉（取磷酸氫二鈉2.19g2.19g和磷酸二氫鈉和磷酸二氫鈉0.54g0.54g，加水，加水100ml100ml使溶解，調(diào)節(jié)使溶解，調(diào)節(jié)pHpH至至7.07.0），），流流動相動相B B為水為水；流速為；流速為0.8ml/min0.8ml/min；檢測波長為；檢測波長為254nm254nm。以。以流動相流動相A A為流為流動相，用動相，用0.1mg/ml0.1mg/ml藍色葡聚糖藍

9、色葡聚糖20002000溶液進樣溶液進樣200200 l l進行測定，理論進行測定，理論板數(shù)應(yīng)不低于板數(shù)應(yīng)不低于900900，拖尾因子在，拖尾因子在0.750.751.51.5。兩種流動相系統(tǒng)中藍色兩種流動相系統(tǒng)中藍色葡聚糖的保留時間比應(yīng)在葡聚糖的保留時間比應(yīng)在0.930.931.071.07之間。之間。對照品溶液以流動相對照品溶液以流動相B B為流動相，重復(fù)進樣為流動相，重復(fù)進樣200200 l l，峰面積值的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)小于，峰面積值的相對標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)小于5.0%5.0%。對照品溶液的制備 取頭孢他啶對照品適量，精密稱定，加水取頭孢他啶對照品適量，精密稱定，加水制成每制成每1ml1ml中含頭孢

10、他啶中含頭孢他啶100100 g g的溶液，搖勻的溶液，搖勻測定法 取本品適量，精密稱定，加水制成每取本品適量，精密稱定，加水制成每1ml1ml中約含頭孢他啶中約含頭孢他啶20mg20mg的溶液，立即進樣的溶液，立即進樣200200 l l，以流動相以流動相A A為流動相進行測定，記為流動相進行測定，記錄色譜圖錄色譜圖；另；另取對照品溶液取對照品溶液200200 l l注入液相色譜儀，以流動相注入液相色譜儀，以流動相B B為為流動相，記錄色譜圖流動相，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計算，本品含頭孢他啶聚合物以，按外標(biāo)法計算，本品含頭孢他啶聚合物以頭孢他啶計不得過頭孢他啶計不得過0.3%0.3% 主成分自

11、身對照法 面積歸一化法 限量法 自身對照外標(biāo)法OOOHOOHCH2OOOHOOHCH2OOOHOOHCH2OOOHOOHCH2OOHOOHCH2OOCH3OHOHOOOCH2OHHOOOOHOHOOH2COOOOOHHOH2COOH2COHHOOCH2OOOH2COOHHOOOOOHOOHCH2OOCH2OHHOOOOOCH2OHHOOOOCH2OHHOOOOH2COHHOOOOCH2OHHOOOOOOHOHOH2COOH2COHOCH2OHHOOOH2COCH2CH2HCOHCH2CH2HCOHCH2CH2HCOHCH2CH2HCOHCH2CH2HCOHCH2CH2HCOHCH2CH2HCO

12、HHCOHCH2CH2CH2HCOH 萄聚糖凝膠萄聚糖凝膠立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)圖立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)圖原理“分子篩”2.有關(guān)物質(zhì)與異構(gòu)體頭孢呋辛酯中有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體的檢查頭孢呋辛酯中有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體的檢查 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：ODS分析柱；0.2mol/L磷酸二氫銨-甲醇（62:?38）為流動相，流速1ml/min；檢測波長278 nm。要求頭孢呋辛酯A，B異構(gòu)體之間，頭孢呋辛酯A異構(gòu)體與頭孢呋辛酯2-異構(gòu)體之間的分離度應(yīng)大于1.5；理論板數(shù)按頭孢呋辛酯A異構(gòu)體峰計算，應(yīng)不低于1500異構(gòu)體異構(gòu)體 取本品適量，配制成每1ml中約含0.25mg的溶液，取20l注入液相色譜儀，記錄

13、色譜圖。B異構(gòu)體峰的相對保留時間約為0.85，A異構(gòu)體峰的相對保留時間為1.0。40020600302010時間時間(min)峰高峰高(mAU)65432113.95411.9192.401供試品色譜圖中供試品色譜圖中A異構(gòu)體峰的異構(gòu)體峰的面積與面積與A、B異構(gòu)體峰的面積異構(gòu)體峰的面積和之比應(yīng)為和之比應(yīng)為0.480.55。BA3-EE有關(guān)物質(zhì) 取本品適量，精密稱定，加流動相制成約含0.25mg/ml的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加流動相制成2.5 g/ml的溶液，作為對照溶液。取對照溶液20l注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)儀器靈敏度，使主成分峰高約為記錄儀滿量程的10%，再取供試品溶液和對照品溶

14、液各20l，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時間的3.5倍，供試品溶液如顯雜質(zhì)峰，量取各雜質(zhì)峰面積的和，其中E異構(gòu)體峰面積不得大于對照溶液主峰面積之和(1.0%)，3-異構(gòu)體峰面積不得大于1.5倍(1.5%)，其余單個雜質(zhì)峰面積的和不得大于3倍(3.0%)。(供試品溶液中任何小于對照品溶液主峰面積之和0.05倍的峰可忽略不計)3.UV4.有機溶劑5.結(jié)晶性第一法(偏光顯微鏡法)第二法(X射線粉末衍射法)四、Assayu 碘量法u 汞量法u 酸堿滴定法u 羥肟酸比色法u HPLC法阿莫西林克拉維酸鉀片阿莫西林克拉維酸鉀片色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充用十八烷基硅烷

15、鍵合硅膠為填充劑；劑；以磷酸鹽緩沖液以磷酸鹽緩沖液( (取磷酸二氫鈉取磷酸二氫鈉7.8g7.8g，加水，加水900 ml900 ml溶解，用溶解，用磷酸或磷酸或10mol/L10mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pHpH值至值至4.44.40.10.1，加水稀釋至，加水稀釋至1000ml)-1000ml)-甲醇甲醇(95:5(95:5) )為流動相為流動相；流速為；流速為0.7ml/min0.7ml/min；檢測波長為；檢測波長為220nm220nm。阿莫西林峰與克拉維酸峰的分離度應(yīng)大于阿莫西林峰與克拉維酸峰的分離度應(yīng)大于3.53.5 測定法測定法 取本品取本品1010片，置片，置10

16、00ml1000ml量瓶中，加水適量，振搖使溶解，量瓶中，加水適量，振搖使溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml10ml，置，置50ml50ml量瓶中，加水稀量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液1010 l l注入液相色譜儀，記錄色注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取阿莫西林對照品與克拉維酸對照品各適量，加水溶解，譜圖；另取阿莫西林對照品與克拉維酸對照品各適量，加水溶解，制成每制成每1ml1ml中含阿莫西林中含阿莫西林0.5mg0.5mg和克拉維酸和克拉維酸0.25mg0.25mg的混合溶液的混合溶液，同，同法測定。按外標(biāo)法

17、以峰面積分別計算供試品中法測定。按外標(biāo)法以峰面積分別計算供試品中C C1616H H1919N N3 3O O5 5S S和和C C8 8H H9 9NONO5 5的含量。的含量。 氨基環(huán)醇氨基環(huán)醇+ +氨基糖氨基糖苷苷鏈霉素鏈霉素(Streptomycin)巴龍霉素巴龍霉素(paromomycin)OCH2OHHOOHNH2OOHNH2H2NOOHOOOR2OHHOH2NCH2OHR1D-D-葡萄糖胺脫氧鏈霉胺葡萄糖胺脫氧鏈霉胺巴龍胺巴龍胺D核糖巴龍霉糖核糖巴龍霉糖巴龍二糖胺巴龍二糖胺ROC R1R2HNNH2OOHH2NNH2OOOHNHCH3OHCH3慶大霉素慶大霉素(gentamyci

18、n)絳紅糖胺(紫素胺)2-脫氧鏈霉胺加洛糖胺(N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺)一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)1）堿性（氨基）：臨床應(yīng)用其硫酸鹽2）溶解度（氨基、羥基）：水溶性3）旋光性（糖）：多個手性碳4）穩(wěn)定性（苷）：強酸、堿條件均可水解NH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3二、Identification坂口反應(yīng)麥芽酚反應(yīng)N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)1.茚三酮反應(yīng)羥基胺類,-氨基酸藍藍紫紫色色慶慶大大霉霉素素鏈鏈霉霉素素茚茚三三酮酮2. Molisch 試驗 五碳糖或六碳糖結(jié)構(gòu)OHOH2CCHOOHOHOH2CCHOHOH紅紫色羥甲基糠醛( (含含六

19、碳糖六碳糖結(jié)構(gòu)氨基糖結(jié)構(gòu)氨基糖苷類酸性水解產(chǎn)物苷類酸性水解產(chǎn)物) )藍紫色OHOH2CCHOoOH2CCHoo3. N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)（Elson-Morgan反應(yīng)）甲甲基基葡葡萄萄糖糖胺胺慶慶大大霉霉素素鏈鏈霉霉素素水水解解 N乙酰丙酮OH-吡咯衍生物對二甲氨基苯甲醛H+紅色NHCH3NHNHNH C NH2HOOHOHNHCH2NOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOH乙酰丙酮OH-NCH3COCH3HHOCH2CHOH3HHH3CH3CCHNNCOCH3CH3COCH3CH3N對二甲氨基苯甲醛H+4.麥芽酚反應(yīng)鏈霉糖特有反應(yīng)紫紅色麥芽酚鏈霉糖鏈霉素分子重排3OHFeH+5.坂口反應(yīng)鏈

20、霉胍特有反應(yīng)鏈霉素OH-水解8-羥基喹啉 NaOBr或-萘酚 鏈霉胍橙紅色6.硫酸鹽反應(yīng)7.色譜法8.光譜法三、Purity Test1.鏈霉素中鏈霉素B（甘露糖鏈霉素）的檢查來源：發(fā)酵中產(chǎn)生方法：TLC中的對照品法2.硫酸奈替米星中西索米星的檢查(TLC)3.慶大霉素C組分的測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以水冰醋酸甲醇以水冰醋酸甲醇(25:5:70) (25:5:70) 配制的配制的0.02mol/L0.02mol/L庚烷磺酸鈉庚烷磺酸鈉溶液溶液為流動相（必要時調(diào)節(jié)甲醇的含量）；檢測波長為為流動相（必要

21、時調(diào)節(jié)甲醇的含量）；檢測波長為330nm 330nm 。理論板。理論板數(shù)按數(shù)按C C2 2組分峰計算應(yīng)不低于組分峰計算應(yīng)不低于20002000。C C2a2a 峰和峰和C C2 2峰的分離峰的分離 度應(yīng)符合要度應(yīng)符合要求。求。 測定法測定法 取本品適量，精密稱定，加水制成每取本品適量，精密稱定，加水制成每1ml 1ml 中含中含0.65mg0.65mg的溶液，精密量取的溶液，精密量取4.0 ml4.0 ml，置，置10ml10ml量瓶中，加量瓶中，加異丙醇異丙醇2ml2ml與與鄰苯二鄰苯二醛試液醛試液1.6ml1.6ml，用異丙醇稀釋至刻度，搖勻，置，用異丙醇稀釋至刻度，搖勻，置6060水浴中

22、加熱水浴中加熱1515分鐘，冷卻，濾過，取續(xù)濾液分鐘，冷卻，濾過，取續(xù)濾液10l 10l 注入液相色譜儀，記錄色譜圖；注入液相色譜儀，記錄色譜圖； 另取慶大霉素標(biāo)準(zhǔn)品，同法測定。另取慶大霉素標(biāo)準(zhǔn)品，同法測定。C C組分的保留時間依次為：組分的保留時間依次為：C C1 1、C C1a1a、C C2a2a、C C2 2。量取。量取C1、C1a、C2a、C2的峰面積。的峰面積。 C1應(yīng)為2550，C1a應(yīng)為1540，C2aC2應(yīng)為2050 。 慶大霉素?zé)o紫外吸收，需進行衍生化處理后再進行慶大霉素?zé)o紫外吸收，需進行衍生化處理后再進行HPLCHPLC測定。測定。吲哚衍生物巰基醋酸鄰苯二醛氨基4 .10p

23、Hmax = 330nm討論討論1、柱效：以以C C2 2峰計算，理論板數(shù)應(yīng)不低于峰計算，理論板數(shù)應(yīng)不低于20002000，在此柱效，在此柱效下各組分之間才能達到規(guī)定的分離度。為此色譜柱做適當(dāng)選擇。下各組分之間才能達到規(guī)定的分離度。為此色譜柱做適當(dāng)選擇。2、流動相：流動相極性適當(dāng)控制流動相極性適當(dāng)控制( (適當(dāng)調(diào)節(jié)甲醇的比例適當(dāng)調(diào)節(jié)甲醇的比例) )。 極性過強，出峰快，分離不佳。極性過強，出峰快，分離不佳。C C1 1峰與衍生試劑等雜質(zhì)峰難分峰與衍生試劑等雜質(zhì)峰難分析析; ;極性過弱，出峰太慢。實驗表明，極性過弱，出峰太慢。實驗表明，C C2 2峰的保留時間控制在峰的保留時間控制在20min2

24、0min30min30min較為適宜。較為適宜。3、衍生化試劑與衍生物的穩(wěn)定性：配制后不能久置，時配制后不能久置，時間久了試劑峰峰高增加并影響組分測定，一般避光保存可使用間久了試劑峰峰高增加并影響組分測定，一般避光保存可使用三天。生成的衍生物不穩(wěn)定。三天。生成的衍生物不穩(wěn)定。4、離子對試劑濃度影響：離子對試劑濃度對慶大霉素離子對試劑濃度對慶大霉素OPAOPA衍生物保留值有影響。衍生物保留值有影響。l BP(2005)HPLC-ECDl Ch.PHPLC-ELSD4.硫酸鹽測定EDTA滴定四、Assay微生物檢定法HPLC法2CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR2R1ABCD1234

25、56789101112一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)1）兩性： -OH酸性 N(CH3)2堿性 CaCa2+2+、MgMg2+2+生成不溶性鹽；生成不溶性鹽；FeFe3+3+形成紅色配合物；形成紅色配合物； AlAl3+3+形成黃色配合物形成黃色配合物 ；pH3 7.5 多價陽離子與酚二酮多價陽離子與酚二酮熒光熒光 l 與酸、堿均可成鹽；l 臨床多用鹽酸鹽；l 強酸或強堿中溶解度 2）旋光性3）UV和熒光 4）與金屬離子絡(luò)合(酚羥基、烯醇基)弱酸性（弱酸性（pH2-6） A環(huán)環(huán)C-4異構(gòu)化異構(gòu)化 差向四環(huán)素差向四環(huán)素酸性（酸性（pH 2） C環(huán)脫水環(huán)脫水 脫水四環(huán)素脫水四環(huán)素 堿性堿性 C環(huán)開環(huán)，形成內(nèi)酯環(huán)開

26、環(huán)，形成內(nèi)酯 異四環(huán)素異四環(huán)素5）不穩(wěn)定性A.A.差向異構(gòu)化差向異構(gòu)化差差向向金金霉霉素素差差向向四四環(huán)環(huán)素素金金霉霉素素四四環(huán)環(huán)素素 4462pH藍色熒光淡黃黑OOHCONH2(CH3)2NOHHOOHCONH2N(CH3)2HOHAApH2.06.02CH3NHOHCONH2OOHOHOOHR2R1HO（氫鍵，土霉素、多西環(huán)素不易差向異構(gòu)化）B.B.酸性酸性脫水脫水降解降解脫脫水水金金霉霉素素脫脫水水四四環(huán)環(huán)素素金金霉霉素素四四環(huán)環(huán)素素 2pHmax = 445nmmax = 435nmROHCH3OHOOHHRCH3OHOOHRCH3OHOHOH2ODDDCBBCBCC.C.堿性堿性脫水

27、脫水降解降解)(無活性無活性異四環(huán)素異四環(huán)素四環(huán)素四環(huán)素 OHROHCH3OHROOHOOHCONH2NHOHCH3CH3CH3CH3ROHROOOHCONH2NHOHOCH3OOH-二、Identification1、HPLC2、TLC (正相分配薄層色譜)EDTA克服痕量金屬造成的拖尾現(xiàn)象3、IR4、UV5、顯色法濃硫酸三氯化鐵200nm300nm400nmTC三、Purity Test1.有關(guān)物質(zhì)HPLC2.雜質(zhì)吸光度UV268nm355nmETC)39. 036. 0(Anm380 控制EATCATC5 . 0Anm430、控制 )(12. 0Anm530注射用異四環(huán)素控制 生產(chǎn)過程貯

28、存過程使用不當(dāng)高分子雜質(zhì)內(nèi)源性(藥物自身聚合物 )外源性(蛋白、多肽、多糖及其與藥物的結(jié)合物 )發(fā)酵過程控制重點1.1.基本結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)青霉素族多肽（青霉素噻唑多肽）聚合物母核參于反應(yīng)側(cè)鏈參于反應(yīng)頭孢菌素族與母核有關(guān)的N型聚合反應(yīng)側(cè)鏈參與反應(yīng)的L型聚合反應(yīng)2.2.特點特點（1 1）發(fā)酵中產(chǎn)生的任何蛋白及蛋白碎片均可帶入產(chǎn)品中，相同的發(fā)酵中產(chǎn)生的任何蛋白及蛋白碎片均可帶入產(chǎn)品中，相同的蛋白或蛋白碎片上可以結(jié)合不同數(shù)目的藥物分子，形成青霉素噻蛋白或蛋白碎片上可以結(jié)合不同數(shù)目的藥物分子，形成青霉素噻唑多肽類雜質(zhì)。唑多肽類雜質(zhì)。（2 2）有不同聚合度和不同機理聚合反應(yīng)形成的聚合物，聚合物發(fā)有不同聚合度

29、和不同機理聚合反應(yīng)形成的聚合物，聚合物發(fā)生不同程度的降解作用。生不同程度的降解作用。（3 3）以異構(gòu)體存在樣品，同聚和異聚反應(yīng)可同時發(fā)生。以異構(gòu)體存在樣品，同聚和異聚反應(yīng)可同時發(fā)生。（4 4）高分子雜質(zhì)的種類、數(shù)量與生產(chǎn)工藝密切相關(guān)（溶媒結(jié)晶、高分子雜質(zhì)的種類、數(shù)量與生產(chǎn)工藝密切相關(guān)（溶媒結(jié)晶、噴霧干燥）噴霧干燥）3.3.雜質(zhì)控制方法雜質(zhì)控制方法反相高效液相、離子交換色譜和反相高效液相、離子交換色譜和凝膠色譜凝膠色譜。葡聚糖凝膠葡聚糖凝膠SephadexCSephadexC1010自身對照外標(biāo)法LOGO青青霉霉素素青霉噻唑酸青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸H2OpH2100青霉噻唑青霉噻唑?；u胺酸?；u胺酸NH2OH青霉烯酸青霉烯酸pH4青霉胺青霉胺CO2青霉醛青霉醛HgCl21. 熟悉抗生素類藥物分析的特點及其 常規(guī)檢驗項目。了解抗生素類藥物 的分析現(xiàn)狀，熟悉生物學(xué)法與物理 化學(xué)法測定效價的原理及優(yōu)缺點。2. 掌握內(nèi)酰胺類抗生素