畢業(yè)答辯-鄭惠芬 2

1、姓姓 名：鄭惠芬名：鄭惠芬指導(dǎo)老師：李步洪指導(dǎo)老師：李步洪 教授教授攻讀專業(yè)：生物光學(xué)檢測與成像攻讀專業(yè)：生物光學(xué)檢測與成像研究方向：細(xì)胞光動力治療實驗研究研究方向：細(xì)胞光動力治療實驗研究20132013屆碩士研究生學(xué)位論文答辯屆碩士研究生學(xué)位論文答辯5-ALA-PDT對鼻咽癌細(xì)胞對鼻咽癌細(xì)胞C666-1和和CNE2的殺傷效應(yīng)研究的殺傷效應(yīng)研究2013年6月7日論文結(jié)構(gòu)論文結(jié)構(gòu)第一章第一章 C666-1 C666-1和和CNE2CNE2細(xì)胞的細(xì)胞的EBVEBV檢測檢測第二章第二章 5-ALA 5-ALA在在NPCNPC細(xì)胞中的藥代動力學(xué)研細(xì)胞中的藥代動力學(xué)研究究第三章第三章 鼻咽癌細(xì)胞對鼻咽癌

2、細(xì)胞對5-ALA-PDT5-ALA-PDT的響應(yīng)比較的響應(yīng)比較第四章第四章 全文總結(jié)與研究工作展望緒緒 論論第一章第一章 C666-1 C666-1和和CNE2CNE2細(xì)胞的細(xì)胞的EBVEBV檢測檢測研究背景及選題意義研究背景及選題意義論文工作重點介紹論文工作重點介紹論文工作總結(jié)論文工作總結(jié)工作展望工作展望致謝致謝匯報大綱匯報大綱三四一研究背景和選題意義二論文研究內(nèi)容介紹實驗結(jié)果及分析全文總結(jié)及研究工作展望五個人科研成果與致謝一研究背景和選題意義光動力治療鼻咽癌研究背景光動力治療鼻咽癌研究背景鼻咽癌（NPC）發(fā)病機理EBV DNA(95%)NON-EBV DNA(5)細(xì)胞株C666-1細(xì)胞株H

3、K1,CNE2 光敏劑選擇性潴留于病變組織 特定波長的光源實施靶向治療1 1PDT具有雙重選擇性EBV- C666-12007年，楊小民等人研究5-ALA和HpD介導(dǎo)的PDT對EBV+C666-1和EBV-CNE2 的響應(yīng)情況2009年，陳爭等人研究HMME-PDT對EBV+ C666-1和EBV-CNE2細(xì)胞殺傷效應(yīng)的實驗研究現(xiàn)狀研究現(xiàn)狀PDTPDT對CNE2的殺傷作用大于C666-1研究結(jié)果：研究結(jié)果：CNE2對HMME的吸收能力高于C666-1不足之處：不足之處：未對5-ALA和HpD在細(xì)胞中的潴留情況潴留情況和亞細(xì)胞分布亞細(xì)胞分布進行分析1 1研究結(jié)果：研究結(jié)果：PDTPDT對CNE2

4、的殺傷作用大于C666-1原原 因：因：不足之處：不足之處：EBV對NPC-PDT療效是否產(chǎn)生影響尚不明確研究現(xiàn)狀研究現(xiàn)狀1 1HMMEHMME（外源性）（外源性）: : 通過滲透作用進入細(xì)胞5-ALA5-ALA（內(nèi)源性）（內(nèi)源性）：本身不是光敏劑，進入細(xì)胞后，通過細(xì)胞的新陳代謝作用產(chǎn)生具有光敏性的物質(zhì)PpIXPpIX細(xì)胞的生長狀態(tài)生長狀態(tài)以及新陳新陳代謝代謝情況會影響5-ALA合成PpIX，不同生長周期的同種細(xì)胞合成PpIX的能力不同。生長曲線幾乎所有5-ALA-PDT實驗都是在對細(xì)胞培養(yǎng)24h后開展，不能很好的反映5-ALA-PDT對細(xì)胞的殺傷效果。不足之處：不足之處：選題意義選題意義(創(chuàng)

5、新點創(chuàng)新點)首次選用EBV+C666-1EBV+C666-1、EBV-C666-1EBV-C666-1和 CNE2 CNE2 為研究對象，有望為探討EBV在NPC-PDT的作用機制提供理論依據(jù)。 1 1首次研究相同濃度5-ALA在不同生長期細(xì)胞內(nèi)的藥代動力學(xué)規(guī)律二論文研究內(nèi)容介紹22 25-ALA5-ALA在在NPCNPC細(xì)胞中的藥代動力學(xué)研究細(xì)胞中的藥代動力學(xué)研究5-ALA-PpIX5-ALA-PpIX在在NPCNPC細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞內(nèi)的亞細(xì)胞分布亞細(xì)胞分布的檢測的檢測5-ALA-PpIX5-ALA-PpIX在在不同生長期細(xì)胞內(nèi)熒光量不同生長期細(xì)胞內(nèi)熒光量的檢測的檢測2 25-ALA5-ALA在

6、在NPCNPC細(xì)胞中的藥代動力學(xué)研究細(xì)胞中的藥代動力學(xué)研究5-ALA-PpIX5-ALA-PpIX在不同生長期細(xì)胞內(nèi)熒光量的檢測在不同生長期細(xì)胞內(nèi)熒光量的檢測2424、4848、7272、9696和和120 h120 h5-ALA5-ALA在在NPCNPC細(xì)胞中的藥代動力學(xué)研究細(xì)胞中的藥代動力學(xué)研究5-ALA-PpIX5-ALA-PpIX在在NPCNPC細(xì)胞內(nèi)的亞細(xì)胞分布的檢測細(xì)胞內(nèi)的亞細(xì)胞分布的檢測2 2共焦顯微鏡原理圖共焦顯微鏡原理圖NPCNPC細(xì)胞對細(xì)胞對5-ALA-PDT5-ALA-PDT的響應(yīng)評估的響應(yīng)評估PDTPDT實驗實驗2 2三株細(xì)胞以2105/孔的密度接種在六孔板中培養(yǎng)，24

7、、48和72小時后進行PDT實驗細(xì)胞接種：（對照組和實驗組）細(xì)胞接種：（對照組和實驗組）照光光源：照光光源：光功率密度：15mW光 波 長：627nm照光劑量：照光劑量：09 、1.8、2.7和3.6 J/cm2NPCNPC細(xì)胞對細(xì)胞對5-ALA-PDT5-ALA-PDT的響應(yīng)評估的響應(yīng)評估%100對照組吸光度值實驗組吸光度值細(xì)胞存活率細(xì)胞存活率檢測細(xì)胞存活率檢測用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其吸光度值Cell Counting Kit-8（CCK-8）試劑盒活細(xì)胞WST-8WST-8 formazan2 2三實驗結(jié)果及分析5-ALA-PpIX5-ALA-PpIX在不同生長期細(xì)胞內(nèi)熒光

8、量在不同生長期細(xì)胞內(nèi)熒光量2 2 3 32 25-ALA-PpIX5-ALA-PpIX在在NPCNPC細(xì)胞內(nèi)的亞細(xì)胞分布細(xì)胞內(nèi)的亞細(xì)胞分布3 3小結(jié)小結(jié) 1 12 2 3 3生長速度：生長速度：EBV-C666-1 CNE2 EBV+C666-1細(xì)胞吸收細(xì)胞吸收5-ALA-PpIX5-ALA-PpIX的能力：的能力：5-ALA-PpIX5-ALA-PpIX的亞細(xì)胞分布：的亞細(xì)胞分布：C666-1 :CNE2 :線粒體細(xì)胞膜EBV+C666-1 EBV-C666-1CNE2 EBV-C666-13 3NPCNPC細(xì)胞對細(xì)胞對5-ALA-PDT5-ALA-PDT的響應(yīng)評估的響應(yīng)評估EBV+ C66

9、6-1在48 h，72 h的5-ALA-PpIX單細(xì)胞熒光量與24 h的熒光量基本相同，且對PDT的響應(yīng)程度無顯著差異。因此，本實驗只給出EBV+ C666-1在細(xì)胞培養(yǎng)24 h后的PDT存活率。5-ALA-PDT5-ALA-PDT對對EBV+C666-1EBV+C666-1細(xì)胞的殺傷作用最顯著。細(xì)胞的殺傷作用最顯著。3 3EBV-C666-1EBV-C666-1和和CNE2CNE2細(xì)胞存活率比較細(xì)胞存活率比較2 2 3 3EBV-C666-1EBV-C666-1和和CNE2CNE2細(xì)胞存活率比較細(xì)胞存活率比較24 h ：CNE2 EBV-C666-1 48 h ：CNE2 EBV-C666-

10、1 72 h ：CNE2 EBV-C666-1 CNE2 EBV-C666-1 72 h 48 h存活率存活率細(xì)胞膜線粒體19971997年，年，Tabata Tabata 等人提出定位于線粒體的等人提出定位于線粒體的5-ALA-PpIX5-ALA-PpIX 比定位于細(xì)胞膜的比定位于細(xì)胞膜的PpIXPpIX對對PDTPDT療效更好。療效更好。小結(jié)小結(jié) 2 23 3細(xì)胞中細(xì)胞中PpIXPpIX的含量和分布是影響的含量和分布是影響PDTPDT療效的重要因素。療效的重要因素。19971997年，年，Tabata Tabata 等人提出定位于線粒體的等人提出定位于線粒體的5-ALA-PpIX5-ALA

11、-PpIX 比定位于細(xì)胞膜的比定位于細(xì)胞膜的PpIXPpIX對對PDTPDT療效更好。療效更好。EBV- C666-1EBV- C666-1和和CNE2CNE2細(xì)胞在分別培養(yǎng)細(xì)胞在分別培養(yǎng)4848和和72 h72 h后進行后進行PDTPDT實驗，殺傷效果最好且兩者存活率無顯著差異。實驗，殺傷效果最好且兩者存活率無顯著差異。5-ALA-PDT5-ALA-PDT對對EBV+C666-1EBV+C666-1細(xì)胞的殺傷作用最顯著。細(xì)胞的殺傷作用最顯著。四全文總結(jié)及研究工作展望不同細(xì)胞、不同生長期的同一種細(xì)胞吸收不同細(xì)胞、不同生長期的同一種細(xì)胞吸收5-ALA生成生成PpIX的能力不同，且的能力不同，且E

12、BV+C666-1對對5-ALA的選擇性的選擇性高于高于EBV -C666-15-ALA-PpIX5-ALA-PpIX在在C666-1C666-1細(xì)胞中主要分布在線粒體上，而細(xì)胞中主要分布在線粒體上，而在在CNE2CNE2細(xì)胞中主要分布在細(xì)胞膜。不同鼻咽癌細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞中主要分布在細(xì)胞膜。不同鼻咽癌細(xì)胞內(nèi)的的5-ALA-PpIX5-ALA-PpIX的亞細(xì)胞分布有所差異的亞細(xì)胞分布有所差異相同實驗條件下，相同實驗條件下，5-ALA-PDT對對EBV+ C666-1的殺的殺傷效果最明顯。傷效果最明顯。EBV- EBV- C666-1和和CNE2細(xì)胞在分別培養(yǎng)細(xì)胞在分別培養(yǎng)48和和72 h后進行后進行P

13、DT實驗，殺傷效果最好且兩者存活實驗，殺傷效果最好且兩者存活率無顯著差異。率無顯著差異。4全文總結(jié)全文總結(jié)1.1.比較比較EBV+C666-1和和EBV-C666-1細(xì)胞的粘附、運動和遷細(xì)胞的粘附、運動和遷 移能力，分析兩株細(xì)胞的惡性生物行為，探討移能力，分析兩株細(xì)胞的惡性生物行為，探討EBVEBV對鼻對鼻 咽癌細(xì)胞體外浸襲轉(zhuǎn)移能力的影響。咽癌細(xì)胞體外浸襲轉(zhuǎn)移能力的影響。2.2.利用不同亞細(xì)胞定位的光敏劑，研究當(dāng)利用不同亞細(xì)胞定位的光敏劑，研究當(dāng)EBV+C666-1 和和EBV- C666-1細(xì)胞內(nèi)的光敏劑潴留濃度相同時，對細(xì)胞內(nèi)的光敏劑潴留濃度相同時，對 PDT的響應(yīng)情況。的響應(yīng)情況。4工作

14、展望工作展望為什么為什么EBV+C666-1EBV+C666-1吸收吸收5-ALA-PpIX5-ALA-PpIX高于高于EBV-C666-1EBV-C666-1？EBVEBV在在NPC-PDTNPC-PDT的作用機制的作用機制 ？4研究工作的創(chuàng)新點回顧與總結(jié)首次研究相同濃度5-ALA在不同生長期細(xì)胞內(nèi)的藥代動力學(xué)規(guī)律為為5-ALA-PDT5-ALA-PDT治療腫瘤的研究提供一種新思路治療腫瘤的研究提供一種新思路首次選用EBV+C666-1EBV+C666-1、EBV-C666-1EBV-C666-1和 CNE2 CNE2 為研究對象，有望為探討EBV在NPC-PDT的作用機制提供理論依據(jù)。 五個人科研成果與致謝承擔(dān)項目發(fā)表論文1. 鄭惠芬鄭惠芬，林黎升，鄭秋萍，李步洪. 5-ALA-PDT對 兩種鼻咽癌細(xì)胞EBV- C666-1和CNE2的殺傷效應(yīng) 研究J. 中國激光醫(yī)學(xué)雜志中國激光醫(yī)學(xué)雜志，2013，22(02)，69-73.2. Chen D, Zheng H, Huang Z, et al. Light-emitting d