動物傳染病診斷與現(xiàn)代診療技術

1、山東農業(yè)大學動物傳染病診斷與現(xiàn)代診療技術 減蛋綜合征的診斷與防治 學 院 動物科技學院 專 業(yè) 獸醫(yī)碩士 學生姓名 * 學 號 指導老師 減蛋綜合征的診斷與防治摘要：減蛋綜合征病毒（EDSV）是禽腺病毒屬禽腺病毒群的唯一成員，本文從鴨減蛋綜合征的防治機制的進展作一綜述。關鍵詞：減蛋綜合征；減蛋綜合征病毒；診斷；防治；機制 減蛋綜合征病毒具有典型的腺病毒形態(tài)結構，而且主要感染產蛋雞。1976年荷蘭科學家首次報道了該病，并且命名為產蛋下降綜合征，簡稱EDS-76。世界許多國家都曾有此病流行，造成巨大經濟損失,我國部分地區(qū)亦有報道,并從發(fā)病雞群中分離到病毒盡管發(fā)生本病 的都是產蛋雞(少數(shù)人認為EDS

2、在鴨中可以引起產蛋下降和蛋殼變粗 糙變薄即）但自然宿主是鴨和鵝6。國外大多學者認為本病的發(fā)病機理 主要是由于在輸卵管蛋殼分泌腺有大量病毒分布并產生明顯的炎癥反應從而導致蛋殼異常。本病的主要癥狀是雞產蛋率下降和產異常蛋。產褐殼蛋的肉用種雞發(fā)病較多，發(fā)病雞群產蛋高峰期產蛋率突然下降，在病的極期多數(shù)異常蛋因破損而不能收集，恢復期仍產褪色、薄皮、表面凸凹不平、呈砂紙狀的蛋4。病雞輕微下痢，肛門周圍常污穢不潔。組織學病變局限于輸卵管，黏膜皺褶水腫，有白色滲出物或奶酪樣物，卵巢可見成熟卵泡軟化的現(xiàn)象。發(fā)病極期能見到子宮黏膜固有層、黏膜下層以及肌肉層的疏松結締組織呈明顯水腫，淋巴細胞、漿細胞、偽嗜酸性細胞浸

3、潤，子宮腺體萎縮和減少，黏膜上皮細胞變性和剝離，有時細胞核內能見到包涵體2。我國大部分地區(qū)均發(fā)現(xiàn)了該病原。據(jù)耿亞杰等報道，產蛋雞一旦感染EDS-76后，集群產蛋量無法達到高峰期或產蛋量大幅度下降。有研究發(fā)現(xiàn)，該病原存在于雞的輸卵管狹窄部、輸卵管傘部、蛋殼分泌部以及鼻粘膜等上皮細胞中，且輸卵管峽部是檢測和分離病毒的最佳部位19，并且可隨著卵子的形成進入蛋中形成垂直傳播16。最新有研究發(fā)現(xiàn)，該病毒能使9日齡的鴨子出現(xiàn)呼吸道癥狀1。櫻桃谷種鴨群初期癥狀不期顯，采食和外觀無異常。后期表現(xiàn)精神沉抑，部分種鴨羽毛松亂，下??；該批櫻桃谷種鴨155日齡才見蛋，開產日齡推遲，產蛋上升緩慢及不能達到產蛋高峰，18

4、0日齡產蛋達45%，220日齡時產蛋升到70%，最高峰產蛋率為75%；種蛋合格率明顯下降，不合格種蛋比例上升，產畸形蛋、薄殼蛋、破殼蛋，蛋殼表面粗糙，外面布滿石灰狀物?；蔚暗鞍?、蛋黃正常。后來蛋形變小，蛋重變輕，蛋殼色澤變淡，蛋殼變薄、變軟、粗糙。發(fā)病后期采食量有明顯下降變化。1 EDSV的基本生物學特性EDSV病毒粒子的大小約為80nm，呈現(xiàn)二十面體對稱，具有典型的腺病毒形態(tài)，其DNA的分子質量為22.6103Kb14。EDSV能凝集雞、鴨、鵝的紅細胞，不能凝集哺乳動物的紅細胞，對乙醚、氯仿不敏感。2 EDSV基因組的分析EDSV是一種無囊膜的雙股DNA病毒，基因組全長33213個堿基12

5、，通過中和試驗僅發(fā)現(xiàn)一個血清型，但是用限制性內切酶圖譜分析發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)分離的毒株之間DNA序列有所不同。3 實驗室診斷技術3.1套式PCR檢測技術以優(yōu)化過程中選擇的最適變性溫度及時間、退火溫度及時間、延伸溫度及時間進行PCR反應13。在Eppendorf臂中順序混勻PcR緩沖液、4dNTp、引物、Mgcl、模板和TaqDNA聚合酶。將上述試劑在旋渦式混勻器混勻后-離心5s,94水浴5 min，置于冰上冷卻，迅速離心數(shù)秒，然后加入TaqDNA聚合酶O.5L；混勻后，加50L滅菌液體石蠟蓋上蓋子在PCR擴增儀上按以下程序進行第一輪PcR擴增：先94預變性5 min，進入三步PCR；94變性40s5

6、4退火30s，74延伸40s。反復35個循環(huán)最后74保溫6 min。第二輪PCR用內引物20。以第1次擴增產物為模板進行擴增。除退火溫度改為57外其他與第一輪擴增相同。3.2.1 病毒DNA的提取將純化的病毒用SDS（10%）終濃度為1蛋白酶消化飽和酚/氯仿/異戊醇（25241）抽提沉淀用無水乙醇洗滌，并用TE緩沖液溶解DNA，存于20保存?zhèn)溆谩?.2.2 實時熒光定量RT-PCR使用THUNDERBIRD qPCR Mix試劑盒，按照20L反應體系，其中H2O7.26L;probeqpeRMix10L;TGEv-Fo.6L;TGEv-Ro.6L;TGEV-p0.5L;3條引物濃度均10M;5

7、0XROXrefereneedyeo.O4L;質粒模版1L混勻加入專用96孔板進行反應，反應的程序為502min;95lmin;95155;60lmin，40個循環(huán)，其中每個模版濃度均做3個重復。然后取平均值分析結果，每次均設立陰性對照。4 防治策略 4.1鴨減蛋綜合征的預防鴨減蛋綜合征主要發(fā)生在冬春季節(jié)，各品種的產蛋期母鴨都有發(fā)生。該病是由禽型副粘病毒、某些腺病毒及其它一些病原因素和營養(yǎng)缺乏因素（如蛋氨酸、精氨酸、維生素E、維生素A缺乏等）引起的，以鴨群產蛋率急劇下降為特征的急性、低致死率的傳染病。主要發(fā)生于產蛋鴨群，其傳染途徑既可經蛋垂直傳播，也可通過呼吸道、消化道水平傳播。病毒主要侵害生

8、殖系統(tǒng)，經繁殖、喉頭和排糞時排毒。本病尚無特效的治療藥物，在飼糧中增加維生素、魚肝油和礦物質以利于產蛋的恢復。該病重點在于預防，在開產前接種鴨減蛋綜合癥疫苗可有效防制本病。4.1.1.對種鴨群，從幼齡期起，堅持用“鴨產蛋下降綜合癥油乳劑滅活疫苗”實施合理的免疫接種程序：于1520日齡接種該疫苗一次，皮下注射0.5毫升/只，產蛋前1個月接種1次肌注11.5毫升/只，以后每年春末、冬初（或中秋）各接種一次，1.01.5毫升/只。在此免疫接種過程可以同時考慮配合免疫接種大腸桿菌滅活苗和鴨瘟疫苗，并作好常規(guī)的飼養(yǎng)管理與衛(wèi)生消毒工作。4.1.2控制好環(huán)境（1）由于此病是垂直傳播，因此要嚴格注意從非疫區(qū)引

9、種，杜絕EDS76病毒的傳入，以減少發(fā)病機會。堅決不能使用來自感染鴨群的種蛋。（2）病毒能在糞便中存活，具有抵抗力，因此要有合理有效的衛(wèi)生管理措施。嚴格控制外人及野鳥進入鴨舍，以防疾病傳播。（3）對肉用鴨采取“全進、全出”的飼蕎方式，對空鴨舍全面清潔及消毒后，空置一段時間方可進鴨。對種鴨采取鴨群凈化措施，即將產蛋鴨所產蛋孵化成雛后，分成若干小組，隔開飼養(yǎng)，每隔6周測定一下抗體，一般測定10%25%的鴨，淘汰陽性鴨，直到100%陰性小鴨繼續(xù)養(yǎng)殖15。4.2加強飼養(yǎng)管理加強飼養(yǎng)管理，認真打掃舍內及過道的環(huán)境。清掃后的糞便要堆放在指定位置，并且做相應處理，對飼養(yǎng)工具等定期進行清洗和消毒。舍內過道使用

10、4%的火堿溶液進行消毒，飼養(yǎng)工具用百毒殺或碘伏進行消毒，還可以使用氯制劑帶雞噴霧消毒。消毒劑要經常更換使用，嚴禁無關人員外來運輸車輛等進入雞場，以防止將病毒帶入。嚴禁從疫區(qū)購進種蛋或引種，若需引種盡量從無該病的雞場引入，并且隔離觀察一定時間后再進行飼養(yǎng)。要定期淘汰病殘雞做到無害化處理。4.3溫度及光照冬季雞舍要做好保溫措施，并且注意通風換氣，使氨氣含量低于15mg/L，硫化氫低于10 mg/L。冬季陰冷天氣較多要保證舍內有充足的光照每天光照時間不低于1416h，光照強度在20lx以上。夏季氣溫過高要打開所有通風設施進行降溫，要保證有充足干凈的飲水。控制好濕度。4.4藥物預防 定期在飲水中添加新

11、霉素每100kg水添加5g，飼料中添加增蛋散金蟾毒敗或毒瘟清散每千克飼料中添加40g，連續(xù)飼喂7d停止用藥。3d后用量減半再用藥7d同時全群應補充多種維生素加快其恢復16。 4.5免疫接種在蛋雞115135日齡時，使用EDS-76油乳劑滅活苗或EDS-76-新城疫-傳染性支氣管炎三聯(lián)苗肌肉注射每只雞0.51.0mL。2周后便可產生抗體35周齡時再免疫接種1次。4.6本病治療原則早發(fā)現(xiàn)，早治療。因本病鴨群發(fā)生率較雞小，發(fā)病迅速且發(fā)病初期癥狀不明顯，故一般容易被忽視而延誤治療，從而影響種鴨生產性能恢復的最佳時期，導致產蛋量不易恢復。因此在病變早期發(fā)現(xiàn)有利于疾病的治療和生產性能的恢復。參考文獻：1

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