細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)入門

1、會計學(xué)1細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)入門細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)入門1.1.培養(yǎng)室和超凈臺的消毒培養(yǎng)室和超凈臺的消毒 培養(yǎng)室培養(yǎng)室 無菌培養(yǎng)室每天都要用速消凈或無菌培養(yǎng)室每天都要用速消凈或0.20.2的的新潔而滅（苯扎溴銨）拖洗地面一次（拖布要新潔而滅（苯扎溴銨）拖洗地面一次（拖布要專用），紫外線照射消毒專用），紫外線照射消毒303050min50min。 濕熱消毒：一般使用高壓蒸汽滅菌器進行濕熱消毒：一般使用高壓蒸汽滅菌器進行消毒，要求是：消毒，要求是： 不能裝太滿，保持消毒器內(nèi)氣體流通。不能裝太滿，保持消毒器內(nèi)氣體流通。 在加熱升壓之前，打開排氣閥門，使加在加熱升壓之前，打開排氣閥門，使加熱后消毒器內(nèi)的殘留冷空氣排出

2、。熱后消毒器內(nèi)的殘留冷空氣排出。 關(guān)閉排氣關(guān)閉排氣閥門，開始升壓，待達(dá)到所需要的壓力時，開閥門，開始升壓，待達(dá)到所需要的壓力時，開始記錄時間，并控制壓力恒定。始記錄時間，并控制壓力恒定。 4.4.細(xì)胞培養(yǎng)用液及培養(yǎng)基（液）細(xì)胞培養(yǎng)用液及培養(yǎng)基（液）: : （1 1）水：）水：雙蒸水、三蒸水，可高壓除菌。雙蒸水、三蒸水，可高壓除菌。 （2 2）平衡鹽溶液（）平衡鹽溶液（PBS)PBS)：PHPH為為7.27.27.47.4，不，不含鈣鎂離子含鈣鎂離子 ，可高壓除菌。，可高壓除菌。（3 3）消化液）消化液 ： 胰蛋白酶液：胰蛋白酶液：常用胰蛋白酶的濃度為常用胰蛋白酶的濃度為0 025 25 ，pH

3、pH值值7.27.2左右。需過濾除菌。左右。需過濾除菌。（4 4）l640l640培養(yǎng)液培養(yǎng)液( (常用常用) )（5 5）DMEMDMEM、F12F12培養(yǎng)液培養(yǎng)液 （6 6）HamHam培養(yǎng)液培養(yǎng)液 ( (無血清培養(yǎng)中常用的無血清培養(yǎng)中常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基) )（7 7）HepesHepes：具有較強的緩沖能力，能具有較強的緩沖能力，能常時間恒定緩沖液的常時間恒定緩沖液的PHPH值。使用濃度可根值。使用濃度可根據(jù)緩沖要求而定。據(jù)緩沖要求而定。3737培養(yǎng)箱（或培養(yǎng)箱（或5%CO5%CO2 2培養(yǎng)箱）中培養(yǎng)培養(yǎng)箱）中培養(yǎng)2424小時后換液小時后換液去處對細(xì)胞生長有毒物質(zhì)，如去處對細(xì)胞生

4、長有毒物質(zhì)，如DMSODMSO、細(xì)胞組織殘渣、細(xì)胞代謝產(chǎn)物、細(xì)胞組織殘渣、細(xì)胞代謝產(chǎn)物 貼壁細(xì)胞貼壁細(xì)胞 懸浮細(xì)胞懸浮細(xì)胞直接去掉上清液直接去掉上清液 離心去掉上清液，必要時做細(xì)胞飼離心去掉上清液，必要時做細(xì)胞飼養(yǎng)層以凈化細(xì)胞養(yǎng)層以凈化細(xì)胞 傳代傳代 細(xì)胞生長細(xì)胞生長8080以上覆蓋培養(yǎng)瓶底，根據(jù)細(xì)胞生長周期不同而異，以上覆蓋培養(yǎng)瓶底，根據(jù)細(xì)胞生長周期不同而異， 2 23 3天或天或1 1周左右一代周左右一代 貼壁細(xì)胞貼壁細(xì)胞 懸浮細(xì)胞懸浮細(xì)胞. .消化法，用胰酶消化法，用胰酶EDTANa2EDTANa2消化，消化， 直接吹打或離心法、自然沉淀法直接吹打或離心法、自然沉淀法， 時間根據(jù)細(xì)胞而定

5、時間根據(jù)細(xì)胞而定 吸一半液到另一瓶吸一半液到另一瓶 凍存凍存四、細(xì)胞計數(shù)要點：四、細(xì)胞計數(shù)要點： 1.1.要求懸液中細(xì)胞數(shù)目不低于要求懸液中細(xì)胞數(shù)目不低于10104 4個個/ml/ml，如，如果細(xì)胞數(shù)目很少要進行離心再懸浮于少量培養(yǎng)果細(xì)胞數(shù)目很少要進行離心再懸浮于少量培養(yǎng)液中；液中； 2.2.要求細(xì)胞懸液中的細(xì)胞分散良好，否則要求細(xì)胞懸液中的細(xì)胞分散良好，否則影響計數(shù)準(zhǔn)確性。影響計數(shù)準(zhǔn)確性。 3.3.取樣計數(shù)前，應(yīng)充分混勻細(xì)胞懸液，尤其取樣計數(shù)前，應(yīng)充分混勻細(xì)胞懸液，尤其時多次取樣計數(shù)時更意每次取樣都要混勻，以時多次取樣計數(shù)時更意每次取樣都要混勻，以求計數(shù)準(zhǔn)確；求計數(shù)準(zhǔn)確； PC-3ECVLNCaPLNCaPCHO80以上sp20sp20HL-60 HL-60442 2 3h3h冰箱冰箱棄上清棄上清混勻混勻HeLa4（4 4）l640l640培養(yǎng)液培養(yǎng)液( (常用常用) )（5 5）DMEMDMEM、F12F12培養(yǎng)液培養(yǎng)液 （6 6）HamHam培養(yǎng)液培養(yǎng)液 ( (無血清培養(yǎng)中常用的無血清培養(yǎng)中常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基) )（7 7）Hepe