牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制和滅菌方法

1、1 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制和滅菌方法 2一、復(fù)習二、實驗：配培養(yǎng)基與滅菌三、斜面的劃線培養(yǎng)四、倒平板的操作五、平板劃線培養(yǎng)3一、復(fù)習45微生物培養(yǎng)與檢驗主要課程內(nèi)容3.微生物純化、分離4.微生物培養(yǎng)、篩選與保存6課程內(nèi)容微生物吃什么？1微生物長的什么樣？2如何得到微生物？3如何保存微生物？4我很愛吃熟食（豬頭肉），但是聽說熟食微生物超標，這是怎么檢測的？57規(guī)則：1.上課不遲到：第1、5節(jié)課，提前10min到教室 2.下課前，自己的實驗物品歸類，該清洗的清洗，該收拾的收拾 3.值日生負責擦黑板、掃地、擦桌；為大家做好服務(wù)工作 8安全操作與標準操作9（一）微生物培養(yǎng)基的制備（二）微生物的消毒滅

2、菌（三）認識微生物培養(yǎng)所需的儀器設(shè)備微生物吃什么？110（一）微生物培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基：是人工配制的、適合微生物生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)物質(zhì)。滿足微生物生長發(fā)育的水分、C，N，生長因子，P，S，Na，Ca等適宜的酸堿度、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位，合適的滲透壓11根據(jù)物理狀態(tài)劃分培養(yǎng)基分 液體、半固體和固體 3種液體培養(yǎng)基有各種肉湯培養(yǎng)基，主要用于細菌擴大培養(yǎng)；半固體培養(yǎng)基含0.4%瓊脂，主要用于保存細菌固體培養(yǎng)基含15%20%瓊脂，主要用于分離細菌12培養(yǎng)基的配制原則實驗室中常用：不同微生物所需培養(yǎng)基各不同牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基細菌高氏一號放線菌麥芽汁培養(yǎng)基酵母菌察氏培養(yǎng)基霉菌13

3、細菌和放線菌： 酵母菌和霉菌：盡量利用廉價且易獲得的原料作為培養(yǎng)基成分14避免雜菌污染，要對所用器械及工作場所進行消毒與滅菌培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌，一般培養(yǎng)基0.1MPa， 1530min15（二）微生物的消毒滅菌滅菌指利用物理和化學(xué)的方法殺滅或除去物料及設(shè)備中一切生命物質(zhì)的過程。消毒是指用物理或化學(xué)的方法殺死物料、容器、器具內(nèi)外的病原微生物，一般只能殺死營養(yǎng)細胞而不能殺死芽孢。消毒不一定能達到滅菌的要求，而滅菌則可達到消毒的目的無菌16消毒滅菌方法：（一）干熱滅菌法（二）濕熱滅菌法（三）過濾除菌（四）紫外線殺菌（五）藥物殺菌17（一）干熱滅菌法14016023h18（二）濕熱滅菌法121

4、 2030min19（三）過濾除菌mm20（四）紫外線殺菌240280nm波段紫外線殺菌力較強特點：穿透力弱超凈工作臺：21（五）藥物殺菌22（三）認識微生物培養(yǎng)所需的儀器設(shè)備23243.接種環(huán)，涂布棒2526p42 高壓蒸汽滅菌請回顧滅菌鍋的操作方法271）用之前檢查水位及水質(zhì)。若水質(zhì)不好，需換水2）放置滅菌物品，勿過滿；瓶子滅菌，瓶蓋擰松3）蓋上鍋蓋，相對的兩個螺帽一起擰4）啟動加熱，同時打開放氣閥；檢查安全閥是否關(guān)上。調(diào)整溫度時間121 15min。5）待排氣閥冒出大量熱氣并持續(xù)約25min后排盡冷空氣后，再將其關(guān)閉；6）滅菌結(jié)束，待壓力下降至0，可打開放氣閥，之后開蓋。注意防止燙傷7）

5、固體物品可進行干燥；液體物品冷卻后擰緊。盡量避免二次污染。282930每次使用前，先用75%酒精（或新潔爾滅）擦洗臺面，并提前用紫外線滅菌燈照射1530min處理凈化工作區(qū)內(nèi)積存的微生物；關(guān)閉滅菌燈后應(yīng)啟動風機使之運轉(zhuǎn)2min后再進行培養(yǎng)操作；工作區(qū)內(nèi)不應(yīng)存放不必要的物品，以保持潔凈氣流流型不受干擾；使用完畢應(yīng)及時清理工作臺面上的物品并用酒精擦拭臺面使之始終保持潔凈。3132今天的工作：33開始實驗1.固體物品：1）平皿（6只/組）2）試管與棉塞/塑料封口（6只/組）的包扎3）滅菌藍色、黃色和白色槍頭將以上物品放入滅菌鍋中進行滅菌121 20min342.培養(yǎng)基：培養(yǎng)基分 液體、半固體和固體

6、3種液體培養(yǎng)基有各種肉湯培養(yǎng)基，主要用于細菌擴大培養(yǎng)；半固體培養(yǎng)基含0.4%瓊脂，主要用于保存細菌固體培養(yǎng)基含15%20%瓊脂，主要用于分離細菌35牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 瓊脂 15-20g-7.6，加水至1 000mL；若需分裝，需先融化，搖勻后分于121高壓滅菌1520min備用用途：普通細菌常用的培養(yǎng)基（1）固體培養(yǎng)基配置36請大家配制：請大家查看“營養(yǎng)瓊脂”的成分與配制說明，每組配置牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基150mL于錐形瓶中請大家先寫出1L的配方，然后再寫出150mL的配方37配制完畢，將配制好的培養(yǎng)基裝入錐形瓶內(nèi)，瓶口塞上棉塞，用牛皮紙/報紙

7、包扎瓶口，標注好組別，進行高溫高壓蒸汽滅菌38（2）液體培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基中不含瓊脂牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g-7.6，加水至1 000mL于121高壓滅菌1520min備用用途：普通細菌常用的培養(yǎng)基39請大家查詢LB培養(yǎng)基配方每組配置LB液體培養(yǎng)基50mL于錐形瓶中，包扎好瓶口（紗布+牛皮紙/報紙）后滅菌請大家先寫出1L的配方，然后再寫出50mL的配方401.固體物品的滅菌 2.配制培養(yǎng)基并進行滅菌 41（1）超凈工作臺的準備將超凈工作臺臺面用酒精棉球擦干凈；關(guān)上門后，紫外燈打開，滅菌15-30min滅菌結(jié)束，打開風機422.加熱融化培養(yǎng)基（若為剛滅菌結(jié)

8、束未凝固的培養(yǎng)基，則略）將培養(yǎng)基放入微波爐內(nèi)加熱融化，注意觀察，不要加熱時間過長或溫度過高，以免液體濺出。43超凈工作臺滅菌完畢，關(guān)紫外燈，打開風機；超凈工作臺門不能開太高，約20cm即可；用新潔爾滅棉球擦拭工作臺和手；將酒精燈瓶外擦干凈，轉(zhuǎn)移入工作臺；將已融化的培養(yǎng)基瓶身擦干凈，轉(zhuǎn)移入工作臺；待培養(yǎng)基冷卻至50C左右（不燙手為原則，但是不可冷卻過度），倒平板。44平板要求：平板平整，無凸起；平板無“掛壁”；培養(yǎng)基布滿整個平皿倒平板操作視頻45平板倒制結(jié)束，靜置，待凝固使用46取無菌試管，倒入1/3高度的培養(yǎng)基，塞上蓋子，斜靠，使得斜面長度34cm，待凝固后使用47請大家先制備4個試管的斜面培

9、養(yǎng)基，然后將剩余培養(yǎng)基用于制備平板481.固體物品的滅菌 2.配制培養(yǎng)基并進行滅菌 3.學(xué)習斜面培養(yǎng)基制作 4.學(xué)習倒平板 5.超凈臺的準備 496.滅菌效果檢查50生化培養(yǎng)箱為微生物培養(yǎng)提供恒溫設(shè)備（固體培養(yǎng)基）517.平板劃線法：取一接種環(huán)細菌，左手持平皿將蓋口微開，用沾有細菌的接種環(huán)在瓊脂平板上劃直線；接種環(huán)火焰滅菌，待冷卻，再用接種環(huán)在頂端邊緣劃線處沾取標本繼續(xù)劃線，如此劃45次，劃畢加蓋。并用蠟筆在皿底玻璃上寫明接種菌名。于37培養(yǎng)1824h觀察，注意平皿表面生長各菌落的大小、形態(tài)、邊沿、表面結(jié)構(gòu)、透明度和顏色等特征。52四區(qū)劃線53 圓形、突起、邊緣整齊、表面光滑、濕潤、有光澤，不透明菌落，直徑12mm54請大家