電泳應(yīng)用--SEBIAppt課件

1、電泳技術(shù)在臨床檢驗(yàn)中的運(yùn)用.背景簡(jiǎn)介電泳：在直流電場(chǎng)中，帶電粒子向帶符號(hào)相反的電極挪動(dòng)的景象electrophoresis電泳技術(shù)就是利用在電場(chǎng)的作用下，由于待分別樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小、外形等性質(zhì)的差別，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而對(duì)樣品進(jìn)展分別、鑒定或提純的技術(shù).開(kāi)展歷程1809年俄國(guó)科學(xué)家列伊斯首先發(fā)現(xiàn)電泳景象1937年瑞典科學(xué)家Tiselius建立了界面電泳技術(shù) ，并初次證明了血清是由白蛋白及、球蛋白組成的因此獲得1948年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)1950年后，區(qū)帶電泳從開(kāi)展到成熟1980年以來(lái)，毛細(xì)管電泳逐漸遭到注重.常用的電泳技術(shù)醋酸纖維素薄膜電泳凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳

2、: 瓊脂糖凝膠適用于蛋白質(zhì)和核酸的電泳支持介質(zhì).聚丙烯酰胺凝膠電泳 : 最常用的定性分析蛋白質(zhì)的電泳方法，特別是用于蛋白質(zhì)純度檢測(cè)和測(cè)定蛋白質(zhì)分子量.毛細(xì)管電泳 :經(jīng)典電泳技術(shù)和現(xiàn)代微柱分別相結(jié)合的產(chǎn)物.毛細(xì)管電泳(Capillary Electrophoresis) CE是經(jīng)典電泳技術(shù)和現(xiàn)代微柱分別相結(jié)合的產(chǎn)物 “CE統(tǒng)指以高壓電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力, 以毛細(xì)管為分別通道, 根據(jù)樣品中各組分之間電泳速度及分配行為上的差別而實(shí)現(xiàn)分別的一類(lèi)液相分別技術(shù)。.檢測(cè)器200nm紫外光毛細(xì)管圖象處置.毛細(xì)管電泳所用的石英毛細(xì)管柱，在pH3的情況下，其內(nèi)外表帶負(fù)電，和緩沖液接觸時(shí)構(gòu)成雙電層，在高壓電場(chǎng)的作用下，構(gòu)成

3、雙電層，一側(cè)的緩沖液由于帶正電荷而向負(fù)極方向挪動(dòng)構(gòu)成電滲流。同時(shí)，在緩沖液中，帶電粒子在電場(chǎng)的作用下，以不同的速度向其所帶電荷極性相反方向挪動(dòng)，構(gòu)成電泳，電泳流速度即電泳淌度。帶電粒子在毛細(xì)管緩沖液中的遷移速度等于電泳淌度和電滲流的矢量和。各種粒子由于所帶電荷多少、質(zhì)量、體積以及外形不同等要素引起遷移速度不同而實(shí)現(xiàn)分別。 毛細(xì)管電泳 .+飛馳列車(chē)上的反向賽跑-.影響電泳分別的主要要素 實(shí)踐上影響電泳的要素 介質(zhì)(種類(lèi), 寬度等) 溶劑(種類(lèi),離子強(qiáng)度,PH) 電壓 電泳時(shí)間 點(diǎn)樣技術(shù) 染色劑 氣泡的影響.加樣梳.電泳技術(shù)的醫(yī)學(xué)運(yùn)用 蛋白質(zhì)電泳分析是實(shí)驗(yàn)室必備的檢測(cè)手段，可全面、準(zhǔn)確描畫(huà)出患者蛋

4、白質(zhì)的全貌。對(duì)疾病的早期診斷，療效察看及預(yù)后判別具有非常重要的臨床價(jià)值。.蛋白的電泳檢測(cè) 根據(jù)運(yùn)用的染料或者是底物的不同，我們可以檢測(cè)到不同類(lèi)型的蛋白: 血清蛋白 脂蛋白 (運(yùn)送脂類(lèi)) 各種酶類(lèi)血紅蛋白.電泳技術(shù)在臨檢中的運(yùn)用：急、慢性炎癥造血系統(tǒng)疾病：多發(fā)性骨髓瘤、腎臟疾病肝臟疾病中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾?。憾喟l(fā)性硬化癥遺傳性疾?。旱刂泻Ｘ氀x性疾?。禾悄虿⌒难芗膊。盒墓?、動(dòng)脈粥樣硬化惡性腫瘤.正確解釋電泳結(jié)果有助于臨床疾病判別的參考.血清蛋白電泳.免疫球蛋白C3補(bǔ)體Alpha-1抗胰蛋白酶結(jié)合珠蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白白蛋白Alpha-1 酸性糖蛋白電泳條帶的鑒定 Alpha-2 巨球蛋白血液結(jié)合素白蛋白G

5、ammaBeta-2Beta-1Alpha-2Alpha-1.正常血清標(biāo)本. 含有單克隆免疫球蛋白的血清標(biāo)本.血清蛋白電泳的目的是什么？檢測(cè)異常 :含量的變化 : 條帶中蛋白含量的添加或減少性質(zhì)的變化 : 異常條帶的出現(xiàn).臨床意義將電泳作為常規(guī)檢測(cè)之一，有助于我們對(duì)以下疾病的篩查 :炎癥 營(yíng)養(yǎng)不良肺氣腫.臨床意義對(duì)異常條帶的篩查,有助于我們檢測(cè)以下疾病: 骨髓瘤 Waldenstrom巨球蛋白血癥細(xì)菌和病毒感染在這些情況下, 必需求做其他輔助測(cè)試, 比如說(shuō)免疫固定, 運(yùn)用不同類(lèi)型的抗血清對(duì)異常蛋白進(jìn)展檢測(cè). (對(duì)于后期治療有很重要的指點(diǎn)意義) .什么情況下必需進(jìn)展電泳檢測(cè)？血液沉降速度發(fā)生異常

6、變化出現(xiàn)惡性疾病征兆在免疫球蛋白定量檢測(cè)中發(fā)現(xiàn) 某一種免疫球蛋白出現(xiàn)大量異常添加. 雙白蛋白,或者一條寬峰,或者在白蛋白條帶出現(xiàn)附屬條帶能夠是由以下緣由呵斥 :- 遺傳性雙白蛋白血癥- 暫時(shí)性的雙白蛋白血癥能夠是由于藥物刺 激導(dǎo)致的 - 急性胰腺炎導(dǎo)致的雙白蛋白血癥 : 大量的 胰酶的出現(xiàn)可以導(dǎo)致白蛋白降解Albumin.雙白蛋白血癥gba2a1Alb. 在以下情況下白蛋白會(huì)出現(xiàn)下降 :- 腎病綜合癥, 蛋白流失, 胃腸病: 檢查尿蛋白- 淋巴細(xì)胞增生綜合征- 營(yíng)養(yǎng)不良- 肝臟功能不全- 慢性炎癥- 嚴(yán)重?zé)齻? 血液稀釋. 在以下情況中白蛋白會(huì)出現(xiàn)添加:- 脫水病癥- 血液濃縮- 白蛋白注射.

7、Alpha 1 globulins 將會(huì)在以下情況下出現(xiàn)下降:- 蛋白流失- 肝功能不全- 先天性抗胰蛋白酶缺乏癥 出現(xiàn)兩個(gè)條帶:- 抗胰蛋白酶的不同基因型 出現(xiàn)添加:- 炎癥病癥.Alpha 1-酸性糖蛋白 : AAG是主要的急性時(shí)相反響蛋白，在急性炎癥時(shí)增高，顯然與免疫防御功能有關(guān)明。 AAG的測(cè)定目前主要作為急性時(shí)相反響的目的，在風(fēng)濕病、惡性腫瘤及心肌梗死患者亦常增高，在營(yíng)養(yǎng)不良、嚴(yán)重肝損害等情況下降低。 .Heterozygous phenotype of A1AT .Alpha 2 globulins 以下情況中出現(xiàn)下降:- 肝功能不全- 血管內(nèi)溶血. 出現(xiàn)兩個(gè)條帶:- 溶血的標(biāo)本

8、(haptoglobin-hemoglobin complex)- 出現(xiàn)特殊表型的結(jié)合珠蛋白- 出現(xiàn)遷移率接近正極端的單克隆免疫球蛋白 . 出現(xiàn)兩個(gè)條帶:- 溶血的標(biāo)本 (haptoglobin-hemoglobin complex)- 出現(xiàn)特殊表型的結(jié)合珠蛋白- 出現(xiàn)遷移率接近正極端的單克隆免疫球蛋白 Alpha 2條帶在電泳圖譜中,是一個(gè)很特殊的條帶. 由于這一條帶中含有五種蛋白: HDL, Haptoglobin, Alpha 2 Macroglobulin, Ceruloplasmin and Gc globulin. 由于結(jié)合珠蛋白有不同的基因表現(xiàn)型, 添加了這一條帶的復(fù)雜程度. 結(jié)

9、合珠蛋白非常接近Alpha 1條帶; 出現(xiàn)溶血時(shí)結(jié)合珠蛋白的遷移率會(huì)發(fā)生改動(dòng). 同時(shí),由于HDL的含量或者是存放過(guò)久的標(biāo)本, HDL的遷移速度能夠會(huì)更快.Hemolysed sample.急性炎癥及應(yīng)激型 主要特征： Alb減少或正常，1、2-球蛋白增高，-球蛋白增高不明顯，當(dāng)炎癥轉(zhuǎn)為慢性時(shí)，可明顯添加。病理生理： Alb下降主要是由于蛋白分解亢進(jìn)所致,1和2-球蛋白添加與急性時(shí)相反響蛋白1糖蛋白添加有關(guān)。.急性時(shí)相反響. 以下情況下Alpha2區(qū)域會(huì)出現(xiàn)添加景象: - 炎癥病癥- 腎病綜合征- 出現(xiàn)游離輕鏈 .Nephrotic syndrome.腎病綜合征.Beta globulins 在

10、以下情況下會(huì)出現(xiàn)下降 :- 肝功能不全- C3 長(zhǎng)期缺乏 或者 C3 代謝過(guò)快 (同樣會(huì)出如今存放過(guò)久的標(biāo)本中,C3 失活, 這時(shí)C3補(bǔ)領(lǐng)會(huì)被分成四部分: 1 between a2 and b, 1 on b1, 1 on b2 and 1 on g) .在以下情況下會(huì)出現(xiàn)兩個(gè)條帶:- 長(zhǎng)期存放的標(biāo)本或者是高膽固醇的標(biāo)本, LDL 有不同的遷移率; 從而導(dǎo)致LDL電泳是偏移Beta位置 . Beta球蛋白在以下情況下會(huì)出現(xiàn)添加景象:- Biliary obstruction膽管阻塞- 腎病綜合征- 肝硬化- 缺鐵性貧血- 血球蛋白異常- 高脂蛋白血癥- 大量溶血 .Beta lipoprote

11、ins.Beta gamma bloc in alcohol cirrhosis.Free light chain disease.Gamma 球蛋白區(qū)帶免疫球蛋白是一組具有抗體活性的蛋白質(zhì)，主要存在于生物體血液、組織液和外分泌液中，是檢查機(jī)體體液免疫功能的一項(xiàng)重要目的。 人類(lèi)的免疫球蛋白分為五類(lèi)，即lgG、lgA、lgM、IgD和lgE，其中IgD和IgE含量很低，故我們常規(guī)所測(cè)定的Ig主要為lgG、lgA、IgM三項(xiàng)。 . 血清蛋白電泳是 M蛋白Monoclonal Protein 多克隆 polyclonal Protein) 寡克隆 Oligoclonal Protein) 的首選檢測(cè)

12、工程.Gamma globulins 在以下情況中會(huì)出現(xiàn)下降景象: - 部分的或全部的免疫缺陷- 免疫抑制治療- 游離輕鏈病或非分泌型骨髓瘤 常見(jiàn)于新生兒生理性低球蛋白血癥、先天性漿細(xì)胞缺陷或漿細(xì)胞不能產(chǎn)生免疫球蛋白.Hypogammaglobulinemia. 多克隆免疫球蛋白的添加:- 炎癥- 肝硬化- 亞急性和慢性感染 檢測(cè)到其他條帶- 單克隆免疫球蛋白- 寡克隆免疫球蛋白.血清蛋白021216狼瘡病血清蛋白030127酒精肝B-r橋.與以下各類(lèi)疾病相關(guān)的寡克隆免疫球蛋白(多個(gè)條帶) :- 本身免疫病- 先天性免疫缺陷癥- 病毒感染 (C Hepatitis, HIV disease,

13、CMV巨細(xì)胞病毒, EBV,)- 免疫抑制治療 .Oligoclonal pattern.M蛋白疾病(Monoclonal gammapathies, MG)是由于單一克隆漿細(xì)胞無(wú)限增殖產(chǎn)生的均一單克隆蛋白(Monoclonal-proteins)所導(dǎo)致的一組疾病。M蛋白疾病的“M含義是Myeloma, Macroglobulinemia, Malignant lymphoma和Monoclonal Gammapathies均以“M開(kāi)頭. M蛋白在電泳上表現(xiàn)為高而狹窄的尖峰.意義未明的單克隆免疫球蛋白疾病: benign MC在法國(guó), 在對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)展檢測(cè)時(shí),會(huì)檢測(cè)到0,15% 比例的單克隆免疫

14、球蛋白標(biāo)本 在老齡人群中檢測(cè)到的頻率更高 (80歲以上人群). 在對(duì)60到99歲人群的檢測(cè)顯示,出現(xiàn)Ig的比例從2,6%上升至19,2%(平均數(shù)= 5%) . MGUS.特征: - 未出現(xiàn)臨床和影像學(xué)特征- 未出現(xiàn)不良反響, 未檢測(cè)到血鈣升高,也未出現(xiàn)腎功 能衰竭- 未見(jiàn)骨髓瘤的臨床特征- 單克隆免疫球蛋白 20g/l - 其他免疫球蛋白都是正常的,同時(shí)在患者尿液中未檢測(cè)到本周氏蛋白- 單克隆免疫球蛋白的濃度隨著時(shí)間的推移未發(fā)生增 加景象- 其他的免疫球蛋白的濃度也未隨時(shí)間推移而出現(xiàn)下 降 在20%的情況中, MGUS 將會(huì)轉(zhuǎn)化成惡性疾病 (6-10 years).Kyle report顯示,

15、經(jīng)過(guò)對(duì)4名含有MGUS的患者的 2035(average : 22 years)年的跟蹤監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn), 24%的患者最終演化成惡性的淋巴細(xì)胞增生癥(multiple myeloma, macroglobulinemia, amyloidosis,).從檢測(cè)到單克隆免疫球蛋白,直到作出多發(fā)性骨髓瘤的診斷報(bào)告,這段時(shí)間是不定的,從2-29年(平均是10年左右).大量報(bào)告顯示,在以下情況中,開(kāi)展成為惡性淋巴細(xì)胞增生疾病的能夠性很小 :- 單克隆免疫球蛋白:IgG 15 g/L IgA 10 g/L IgM 5 g/L- 尿蛋白中未出現(xiàn)本周氏蛋白- 其他類(lèi)型的免疫球蛋白未出現(xiàn)下降.寡克隆免疫球蛋白 由于藥

16、物緣由導(dǎo)致的免疫缺陷:- 在器官或者骨移植后 - 本身免疫病 由于病毒感染導(dǎo)致的免疫缺陷:- Viral : HIV (63%), EBV, CMV, viral hepatitis,- Bacterial,parasitic infections: (腦膜炎, 腦炎,).巨球蛋白血癥Waldenstrom氏患者血中存在大量單克隆IgM，血粘度明顯增多，骨骼損害不常見(jiàn)，疾病開(kāi)展類(lèi)似淋巴瘤。.常所致。血中出現(xiàn)大量無(wú)免疫功能的Ig片段重鏈。 重鏈病是免疫球蛋白的構(gòu)造異常見(jiàn)有三型，該病發(fā)病率極低。.表1 646例M蛋白類(lèi)型分類(lèi)型別 例數(shù) %IgG型骨髓瘤 205 31.73IgA型骨髓瘤 93 14

17、.40IgM型骨髓瘤 56 8.67IgD型骨髓瘤 12 1.86重鏈病 5 0.77輕鏈病 214 33.13半分子病 1 0.157S IgM 2 0.31BMG 49 7.59雙M蛋白病 8 1.24.MM是造血系統(tǒng)的惡性腫瘤，占整個(gè)惡性腫瘤的1%。 常見(jiàn)于中、老年人(50-70歲居多，40歲以下少見(jiàn))。以往對(duì)此病認(rèn)識(shí)缺乏，漏診、誤診可到達(dá)70%以上。隨著壽命的延伸對(duì)此病認(rèn)識(shí)的提高病例數(shù)顯著添加。 美國(guó)MM的發(fā)病率僅次于非霍奇金淋巴瘤高于急性白血病位居血液腫瘤的第二位。多發(fā)性骨髓瘤Multiple Myeloma,MM. 骨痛、骨骼腫塊與病理性骨折,骨質(zhì)疏松和溶骨景象 貧血 免疫功能低下

18、,反復(fù)感染 腎臟損害 高鈣、高粘血漿相對(duì)黏度6以上、 高尿酸血癥表現(xiàn) MM的臨床表現(xiàn)多樣化，經(jīng)常因此就診于骨科、腎臟內(nèi)科等，延誤診治。 MM臨床表現(xiàn)特點(diǎn).多發(fā)性骨髓瘤的免疫學(xué)特征:血中出現(xiàn)M蛋白,正常Ig程度明顯減低尿中出現(xiàn)M蛋白和輕鏈蛋白(BJP)骨髓中漿細(xì)胞明顯添加無(wú)免疫活性Ig導(dǎo)致免疫功能低下.多發(fā)性骨髓瘤病人溶骨報(bào)告.多發(fā)性骨髓瘤病人溶骨報(bào)告(骨盆).多發(fā)性骨髓瘤病人溶骨報(bào)告(顱骨). MM MGUS 骨髓漿細(xì)胞 增多15% 15% 電泳中M蛋白程度 IgG30g/L IgG30g/L IgA10g/L IgA10g/L 尿電泳、輕鏈 有 本周蛋白1.0g/L/24h 溶骨損害 有 無(wú) 病癥體征 有 無(wú)MGUS與MM的鑒別要點(diǎn).含有纖維蛋白原的血清電泳曲線 gba2a1Alb.血清蛋白質(zhì)的圖譜類(lèi)型 總蛋白