細(xì)菌的形態(tài)與染色.

1、實(shí) 驗(yàn) 一 細(xì)菌的形態(tài)與染色一. 錄像：微生物學(xué)發(fā)展史二. 實(shí)驗(yàn)室規(guī)則介紹（生物安全）三. 細(xì)菌形態(tài)示教及示教操作四. 學(xué)生操作： 革蘭染色法（Gram stain)五. 作業(yè)實(shí)驗(yàn)室規(guī)則介紹（生物安全）牢固樹立“有菌觀念” 嚴(yán)格執(zhí)行“無(wú)菌操作” 嚴(yán)防“雜菌污染”實(shí)驗(yàn)室規(guī)則介紹（生物安全）一. 安全使用水、電、煤二. 保持實(shí)驗(yàn)室安靜有序、愛護(hù)實(shí)驗(yàn)器材三. 培養(yǎng)良好習(xí)慣，樹立自我保護(hù)意識(shí) 穿實(shí)驗(yàn)服 不在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)吃東西 不將任何實(shí)驗(yàn)材料（如細(xì)菌涂片、細(xì)菌培養(yǎng)物）攜帶出實(shí)驗(yàn)室 實(shí)驗(yàn)室規(guī)則介紹（生物安全） 若有傳染性材料污染桌面、地面、書、衣物或人體，應(yīng)立即報(bào)告教師，并在教師指導(dǎo)下進(jìn)行消毒處理 實(shí)驗(yàn)用過(guò)

2、的物品歸還原處，帶有傳染性的吸管、玻片等，必須放在指定地點(diǎn) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，清洗消毒（0.1%新潔爾滅溶液中浸泡）雙手后方可離開 四. 做好實(shí)驗(yàn)室清潔衛(wèi)生工作細(xì)菌形態(tài)示教及示教操作細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu) 細(xì)菌的大小及排列 細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu) 莢膜、鞭毛、菌毛、芽孢3.細(xì)菌的染色檢查法細(xì) 菌 形 態(tài) 示 教 莢膜肺 炎 球 菌 莢 膜 （capsule）細(xì)菌形態(tài)示教 鞭毛、菌毛菌毛 pilus電鏡下變形桿菌周身鞭毛flagellum 光學(xué)顯微鏡下細(xì) 菌 形 態(tài) 示 教 芽孢破傷風(fēng)桿菌芽孢 endospore of C.tetani光學(xué)顯微鏡下形態(tài)電子顯微鏡下形態(tài) G+菌 G-菌等電點(diǎn) PI 23

3、PI 45 帶負(fù)電荷多 帶負(fù)電荷少通透性 低 高 肽聚糖多，脂質(zhì)少 肽聚糖少，脂質(zhì)多 酒精不易進(jìn)入 酒精易進(jìn)入Gram stain 原 理 Gram stain 意 義1.鑒別細(xì)菌：分成G+菌和G菌2. 選擇藥物： G+菌和G菌對(duì)抗菌藥物 敏感性不一樣3. 與致病性有關(guān)： G+ 菌產(chǎn)生外毒素 G菌產(chǎn)生內(nèi)毒素革蘭染色法 Gram stain 學(xué)生操作：兩人一組材料：兩人一組菌種： 表皮葡萄球菌及大腸桿菌斜面各一支 玻片每人1張 革蘭染色液一套 接種環(huán)每人一支革蘭染色法 Gram stain 基本過(guò)程： 涂片 干燥 固定4. 染色接種棒冷卻事先加好NS量少革蘭染色法 Gram stain1. 涂片

4、制備：按下圖分別加生理鹽水各一滴，再按下圖分別加菌研勻 菌 1菌 1+ 菌 2菌 2革蘭染色法 Gram stain制備一張好涂片的基本要素：1.玻片不含油脂(若有油脂可用卷筒紙蘸95%酒精擦干凈)。2.生理鹽水應(yīng)盡量少加。3.取菌不宜過(guò)多。2.干燥： 自然干燥或烘干（標(biāo)本面朝上）3.固定： 熱固定（火焰上來(lái)回通過(guò)3次固定）目的： 1. 使細(xì)胞質(zhì)凝固,以固定細(xì)胞形態(tài),并使之牢固附著在載玻片上。2. 殺死細(xì)菌，操作更安全涂片結(jié)晶紫初染1min 碘液媒染1min95%酒精脫色30s復(fù)紅復(fù)染30s水洗，干 革 蘭 染 色 全 過(guò) 程 示 意 圖（紫 碘 酒 紅， 1 1 半半，每次水洗，陽(yáng)紫陰紅。）

5、水洗，干烘干,油鏡檢水洗，干水洗，干水洗，干實(shí) 驗(yàn) 報(bào) 告（格 式）一. 目的二. 材料與方法三. 結(jié)果（需用彩筆畫示意圖）四. 分析與討論 作為平時(shí)成績(jī)記入總成績(jī)革蘭染色影響因素分析 脫色是關(guān)鍵 菌液涂片不能太厚3. 細(xì)菌生長(zhǎng)周期的影響細(xì) 菌 形 態(tài) 示 教（革蘭染色）Streptococcus鏈球菌 streptococcus 鏈球菌Staphylococcus葡萄球菌E.Coli大腸桿菌細(xì) 菌 形 態(tài) 示 教美 藍(lán) 染 色奈 瑟 染 色腦脊液標(biāo)本涂片中的腦膜炎雙球菌 1. 分成10組，每組23人，每組成員參與討論1次，以小組計(jì)成績(jī)，占總成績(jī)的10%。2. 評(píng)價(jià)指標(biāo)包括以下5個(gè)方面（每個(gè)指

6、標(biāo)2分）： A. 主題明確，講解思路清晰并能即興回答提問(wèn) B. 口頭表達(dá)能力強(qiáng)，語(yǔ)言生動(dòng)流暢，能吸引學(xué)生的注意力 C. PPT制作精美，重點(diǎn)突出并與講解內(nèi)容協(xié)調(diào) D. 資料準(zhǔn)備翔實(shí)，數(shù)據(jù)可靠 E. 有良好的團(tuán)隊(duì)協(xié)作精神討論課基本要求討論課安排消毒與滅菌 （實(shí)驗(yàn)二）奈瑟菌（實(shí)驗(yàn)三）細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷（實(shí)驗(yàn)四）微小桿菌等（實(shí)驗(yàn)七）梅毒螺旋體（實(shí)驗(yàn)八）鉤端螺旋體（實(shí)驗(yàn)八）立克次體（實(shí)驗(yàn)八）支原體（實(shí)驗(yàn)八）衣原體（實(shí)驗(yàn)八）真菌（實(shí)驗(yàn)九）由專人負(fù)責(zé)安排討論課討論課提綱：消毒與滅菌1、何為消毒、滅菌、防腐、無(wú)菌？2、你認(rèn)為在哪些情況下常會(huì)使用到消毒與滅菌技術(shù)？3、消毒與滅菌通?？墒褂媚男┓椒?？4、濕熱的滅菌效果為什么比干熱要好？5、當(dāng)對(duì)某一件器物既可用物理方法也可用化學(xué)方法 進(jìn)行消毒滅菌時(shí)，你認(rèn)為應(yīng)該優(yōu)先選哪一種方法 較好？為什么？6、你認(rèn)為物理或化學(xué)方法可導(dǎo)致微生物或感染因子 滅 活或死亡的機(jī)理是什么？ 注：講解時(shí)間必須控制在20min之內(nèi)，留5min 讓