不同劑量甜菜堿對(duì)小鼠腹腔酸性磷酸酶活性的影響(共5頁(yè))

1、不同劑量(jling)甜菜堿對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞酸性(sun xn)磷酸酶的影響摘要(zhiyo) 甜菜堿不僅可以同時(shí)降低血清乳酸脫氫酶、醛縮酶活力，抑制荷瘤小鼠的糖代謝過程來(lái)達(dá)到抗腫瘤的目的，也可以通過劑量性地降低血清總膽固醇、三酰甘油來(lái)降低血脂。通過查閱大量文獻(xiàn)資料，現(xiàn)已判定甜菜堿對(duì)于提高機(jī)體免疫力有提升的作用。為此，本次實(shí)驗(yàn)通過每天對(duì)昆明小鼠喂以不同劑量的甜菜堿來(lái)探究其對(duì)昆明小鼠腹腔內(nèi)巨噬細(xì)胞中酸性磷酸酶活性的影響來(lái)間接揭示其在免疫作用方面的影響。1 材料和方法1.1動(dòng)物 昆明小鼠，體重（202g）全部雄性，出生4周齡。1.2主要器材和試劑 1.2.1器材：眼科剪、眼科鑷、10ml一次性注

2、射器、10-1000ml移液槍、報(bào)紙、玻片架。1.2.2試劑：不同梯度濃度甜菜堿、6%淀粉肉湯、生理鹽水、75%酒精溶液、3%甘油磷酸鈉、10%中性福爾馬林、酸性磷酸酶作用液、1%硫化銨溶液。1.2.3試劑配方：醋酸緩沖液：貯備液A：0.2mol/L醋酸（冰醋酸11.55ml稀釋至1000ml）。 貯備液B：0.2mol/L醋酸鈉（無(wú)水醋酸鈉16.4g配成1000ml）。PH4.6：25.5mlA+24.5mlB稀釋成100ml。10%中性福爾馬林（PH6.8-7.1）：甲醛10ml+蒸餾水90ml+醋酸鈉2g酸性(sun xn)磷酸酶作用液:蒸餾水90ml+0.2mol/L醋酸鈉緩沖液（PH

3、：4.6）12ml+5%硝酸鉛（捕獲(bhu)劑）2ml+3.2%甘油(n yu)磷酸鈉（底物）4ml。先將蒸餾水和醋酸緩沖液混合，隨后分成大致相等的兩份，一份中加硝酸鉛溶液，另一份加甘油磷酸鈉溶液，然后再將兩者緩慢混合，變混邊攪勻后若PH不夠5.0，可加入少量醋酸調(diào)整。此作用液最好在臨用前配制，不能貯存。配好后的作用液應(yīng)透明無(wú)絮狀懸浮物和沉淀，否則將嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。1%硫化銨溶液：硫化銨1ml+99ml蒸餾水6%淀粉肉湯（滅菌）：肉湯3g+6g淀粉+100蒸餾水1.3小鼠的飼養(yǎng) 實(shí)驗(yàn)前二周將40只小鼠隨機(jī)等分為5組，每組8只，其中陰性對(duì)照1組，每天用注射器灌胃0.2ml蒸餾水;實(shí)驗(yàn)組3組，

4、每天分別用注射器灌胃100mg/ml、150mg/ml、200mg/ml的甜菜堿0.2ml;陽(yáng)性對(duì)照1組，每天用注射器灌胃0.2ml葉酸。所有小鼠均在同一時(shí)間進(jìn)行灌胃。1.4腹腔灌洗液的提取 參考文獻(xiàn)并加以改進(jìn)。實(shí)驗(yàn)前3天每天向消毒的小鼠腹中線左右0.5cm內(nèi)的腹腔中注射已滅菌的6%淀粉肉湯1ml。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天將小鼠在報(bào)紙上脫頸處死，用75%酒精溶液浸泡3min，后用注射針頭將小鼠的四肢固定在無(wú)菌板上。用眼科剪先將腹中線左側(cè)或者右側(cè)鼠毛的剪掉，裸露出皮后剪一小開口，后用酒精擦拭的移液槍緩慢地注入（30s）1ml生理鹽水，小心地輕柔小鼠腹部30s后再緩慢地回抽。2 實(shí)驗(yàn)步驟2.1 酸性磷酸酶活力的測(cè)

5、定2.1.1取細(xì)胞懸液在預(yù)冷的載波片上1-2滴，將玻片迅速放到冰箱內(nèi)（4C），讓細(xì)胞自行鋪展30min。后將玻片轉(zhuǎn)入10%中性福爾馬林，冰箱內(nèi)4C固定30min。自來(lái)水漂洗5min，把水甩干。滴加酸性磷酸酶作用液中，37C處理30min。自來(lái)水漂洗片刻后，1%硫化銨處理5min。自來(lái)水沖洗，甩干。用磷酸鹽緩沖液臨時(shí)封片，鏡檢。2.1.2鏡檢時(shí)取多處不同(b tn)的視野拍出照片，后做灰度對(duì)比(dub)。3 實(shí)驗(yàn)(shyn)結(jié)果3.1 灰度測(cè)量結(jié)果 表格1 Image測(cè)量小鼠腹腔中巨噬細(xì)胞酸性磷酸酶的灰度 組觀測(cè)數(shù)劑量單位像素下的灰度值水6.000 0.000g/ml213.0550.448 甜

6、菜堿6.000 0.100g/ml223.6104.4336.000 0.150g/ml235.5042.4736.000 0.200g/ml210.9985.828 與陰性對(duì)照組相比*P0.01表1所示用劑量為0.100g/ml以及0.150g/ml濃度的甜菜堿處理過的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞酸性磷酸酶的灰度值較陰性對(duì)照組呈極顯著性差異。3.2 灰度趨勢(shì)圖 圖1不同劑量甜菜堿下小鼠腹腔中巨噬細(xì)胞酸性磷酸酶的灰度趨勢(shì)圖圖1所示所測(cè)小鼠腹腔中巨噬細(xì)胞酸性磷酸酶灰度值先隨甜菜堿的劑量增加而增加，后隨其劑量的增加而降低。3.3 含陽(yáng)性(yngxng)對(duì)照組的柱形圖結(jié)果 圖2不同(b tn)劑量甜菜堿及一定劑

7、量葉酸下小鼠腹腔巨噬細(xì)胞酸性磷酸酶灰度柱形圖 圖2所示一定劑量下的甜菜堿的確與陽(yáng)性(yngxng)對(duì)照組一樣起到了相同的作用。4 討論本次實(shí)驗(yàn)通過表1可初步確定甜菜堿對(duì)小鼠腹腔中巨噬細(xì)胞的酸性磷酸酶活性產(chǎn)生了極顯著的影響，但是0.100g/ml、0.150g/ml和0.200g/ml劑量的甜菜堿其標(biāo)準(zhǔn)差較陰性對(duì)照組波動(dòng)較大，相對(duì)不穩(wěn)定。圖1所示隨著甜菜堿劑量從0增至其最適濃度，灰度的值也隨之增加；超過最適濃度后灰度值開始隨甜菜堿劑量的增加而降低。即小鼠腹腔中巨噬細(xì)胞的酸性磷酸酶活性先隨甜菜堿的劑量增加而升高，到達(dá)最適濃度后（0.150g/ml左右）又隨著甜菜堿的劑量增加而降低。當(dāng)所用劑量達(dá)到0

8、.200g/ml時(shí)其灰度值比陰性對(duì)照組還要低，說明此時(shí)的甜菜堿可能抑制了酸性磷酸酶的活性。但僅從趨勢(shì)圖我們還無(wú)法給出甜菜堿與酸性磷酸酶的活性之間是否線性，以及過多劑量的甜菜堿是否對(duì)酸性磷酸酶的活性起到了抑制作用等結(jié)論，為此，有待做進(jìn)一步研究。圖2結(jié)果表示在一定劑量下的甜菜堿確和陽(yáng)性對(duì)照組一樣對(duì)酸性磷酸酶的活性起到了促進(jìn)的作用。但僅憑本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果尚不能給出甜菜堿與葉酸相比哪一個(gè)對(duì)小鼠腹腔中巨噬細(xì)胞的酸性磷酸酶活性影響更大。綜上所述當(dāng)甜菜堿的劑量在0.200g/ml之前均可以增加小鼠腹腔中巨噬細(xì)胞酸性磷酸酶的活性，雖然其作用的機(jī)制還不太清楚，但其確實(shí)在免疫學(xué)方面起到了增強(qiáng)的作用。1張宇金,季宇彬,何立巍.甜菜堿的抗腫瘤作用(zuyng)及對(duì)S180荷瘤小鼠機(jī)體糖代謝(dixi)過程的影響.哈爾濱商業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與環(huán)境科學(xué)研究中心, 2006年9月,第 37卷,第9期2徐中南(zhn nn),謝梅林,陸倫根,等.甜菜堿對(duì)大鼠酒精性脂肪肝的影響.肝臟,2006年6月3徐遠(yuǎn)義,黃允寧,常越,等.免疫學(xué)雜志,2006年4期 4張淑莉,張琪,景曉紅.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2015年2期 5范仕郡,劉鑫,黃敏,等.局解手術(shù)學(xué)雜志,2015年2期 內(nèi)容總結(jié)（1）不同劑量甜菜堿對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞酸