第二節(jié)質(zhì)量檢驗(yàn)的基本程序與方法ppt課件

1、第二節(jié) 質(zhì)量檢驗(yàn)的根本程序與方法朱逢佳 01藥2 301190102.鑒別實(shí)驗(yàn)雜質(zhì)檢查平安性檢查含量效價(jià)測(cè)定.一、鑒別實(shí)驗(yàn) 鑒別：利用化學(xué)法、物理法及生物學(xué)方法來(lái)確證生化藥物和基因工程藥物的真?zhèn)?。通常需求用?guī)范品或?qū)φ掌吩谕粭l件下進(jìn)展對(duì)照實(shí)驗(yàn)加以確證。 理化鑒別法 生化鑒別法 生物鑒別法.一理化鑒別法1、化學(xué)鑒別法呈色法 e.g. 溶菌酶分子中的四個(gè)肽鍵上的氮原子能與Cu2+絡(luò)合，生成有顏色的配位化合物，肽鍵越多，顏色越深。沉淀法 e.g.胃蛋白酶受酸、堿、重金屬或有機(jī)溶劑的作用，蛋白質(zhì)肽鏈的空間構(gòu)造被破壞，引起變性而產(chǎn)生不溶性沉淀。 鞣酸、沒(méi)食子酸或多種重金屬鹽溶液Ch.P2000) .2

2、、紫外分光光度法 利用藥物中的共軛系統(tǒng)在紫外區(qū)有特征吸收用于鑒別。 3、高效液相色譜法 利用對(duì)照品溶液和供試品溶液色譜圖的保管時(shí)間和肽圖譜的一致性進(jìn)展鑒別。 .二、生化鑒別法1.酶法 e.g. 尿激酶能激活牛纖維蛋白溶酶原，而具有一樣作用的鏈激酶不能激活牛纖維蛋白溶酶原而加以區(qū)別，并用直接察看溶解纖維蛋白作用的氣泡上升法作為判別目的。.2.電泳法 電泳：在電解質(zhì)溶液中，帶電粒子或離子在電場(chǎng)的作用下，以不同的速度向其所帶電荷相反方向遷移的景象。 e.g.肝素糖凝膠電泳法3.樣品脫鹽后用等電點(diǎn)聚焦法測(cè)定 對(duì)于同一個(gè)產(chǎn)品來(lái)說(shuō)不論有幾個(gè)等電點(diǎn)，但批與批之間必需一致，可闡明其工藝穩(wěn)定.三、生物鑒別法 利

3、用生物體進(jìn)展實(shí)驗(yàn)來(lái)鑒別藥物。 e.g.胰島素家兔驚厥實(shí)驗(yàn) .二、雜質(zhì)檢查一普通雜質(zhì)檢查 包括氯化物、硫酸鹽、磷酸鹽、銨鹽、鐵鹽、重金屬、酸度、溶液的廓清度或溶液的顏色、水分及枯燥失重、熾灼殘?jiān)取?二特殊雜質(zhì)檢查 特殊雜質(zhì)主要是指從消費(fèi)工藝中引入或原料中帶入的雜質(zhì)。許多生化藥物是從生物組織中提取或用微生物發(fā)酵法制得，藥物中易殘存一些雜質(zhì)或其他成分。 1.原料藥的純度分析 2.消費(fèi)過(guò)程中雜質(zhì)的檢查基因工程藥物的質(zhì)量控制要比用傳統(tǒng)工藝消費(fèi)的生物藥物有更高的要求。.三、平安性檢查一熱原檢查法和細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法二異常毒性實(shí)驗(yàn)三過(guò)敏實(shí)驗(yàn)四降壓物質(zhì)實(shí)驗(yàn)五無(wú)菌實(shí)驗(yàn)六基因工程藥物中能夠雜質(zhì)與污染物檢查七致突變

4、實(shí)驗(yàn)八生殖毒性實(shí)驗(yàn).熱原檢查法家兔法 本法是將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔體內(nèi)，以其體溫升高的程度，斷定該供試品中所含熱原能否符合規(guī)定，是一種限制實(shí)驗(yàn)法。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法 利用鱟試劑和細(xì)菌內(nèi)毒素的凝聚反響。. 異常毒性實(shí)驗(yàn)是用一定劑量的藥物按指定的操作方法和給藥途徑給予規(guī)定體重的某種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，察看其急性毒性反響。反響的判別以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡與否為終點(diǎn)。 中國(guó)藥典1995年版中規(guī)定了50多種藥物需做異常毒性檢查。 . 動(dòng)物：小鼠 給藥途徑：尾靜脈注射法，皮下注射法，腹腔注射法，口服給藥 結(jié)果判別：除另有規(guī)定外，全部5只小鼠在給藥后48小時(shí)內(nèi)不得有死亡；如有死亡時(shí)，應(yīng)另取體重1819g的小鼠10復(fù)試

5、，全部小鼠在48小時(shí)內(nèi)不得有死亡。 ChP2000附錄C. 過(guò)敏實(shí)驗(yàn)是檢查異性蛋白的實(shí)驗(yàn)。藥物中假設(shè)夾雜有異性蛋白，在臨床運(yùn)用時(shí)易引起病人多種過(guò)敏反響，輕者皮膚出現(xiàn)紅斑或丘疹，嚴(yán)重者可出現(xiàn)窒息、發(fā)結(jié)、血管神經(jīng)性水腫、血壓下降，甚至休克和死亡。因此，有能夠存在異性蛋白的藥物、應(yīng)作過(guò)敏實(shí)驗(yàn)。 動(dòng)物：豚鼠.降壓物質(zhì)：指某些藥物中含有的能導(dǎo)致血壓降低的雜質(zhì)，包括組胺、類(lèi)組胺或其他導(dǎo)致血壓降低的物質(zhì)。危害：面部潮紅，脈搏加速，血壓下降來(lái)源：在用動(dòng)物臟器或組織為原料制備生化藥物的過(guò)程中，正常組織內(nèi)存在的組胺及部分氨基酸脫羧構(gòu)成的組胺、酪胺等胺類(lèi)物質(zhì)。方法：比較對(duì)照品和供試品引起麻醉貓或狗血壓下降的程度，以

6、判別供試品中所含降壓物質(zhì)的限制能否符合規(guī)定。 ChP2000.無(wú)菌檢查法是檢查藥品及敷料能否染有活菌的一種方法，是藥典中較重要的檢查工程之一。由于許多生化藥物是在無(wú)菌條件下制備的，且不能高溫滅菌。因此，無(wú)菌檢查就更有必要。中國(guó)藥典中幾乎一切的注射用藥均做無(wú)菌檢查。參照.基因工程藥物中能夠的雜質(zhì)： 殘留DNA、宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)、內(nèi)毒素、蛋白質(zhì)突變體和蛋白質(zhì)裂解物等。主要檢查工程： 外源性DNA、宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)、其他有關(guān)雜質(zhì)和細(xì)菌內(nèi)毒素。.致突變實(shí)驗(yàn)包括： 微生物回復(fù)突變實(shí)驗(yàn)檢測(cè)基因突變 哺乳動(dòng)物培育細(xì)胞染色體畸變實(shí)驗(yàn)檢測(cè)能否影響DNA構(gòu)造或改動(dòng)信息 嚙齒動(dòng)物微核實(shí)驗(yàn)染色體畸變實(shí)驗(yàn)的補(bǔ)充 微生物電極法的致突變實(shí)驗(yàn)鼠傷寒沙門(mén)菌營(yíng)養(yǎng)缺陷型回復(fù)突變實(shí)驗(yàn)中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞CHL)NIH小鼠.生殖毒性實(shí)驗(yàn)包括：普通生殖毒性實(shí)驗(yàn) 反映對(duì)生殖過(guò)程第一階段的影響妊娠前和妊娠初期致畸敏感期毒性實(shí)驗(yàn)生殖過(guò)程第二階段的影響圍生期毒性實(shí)驗(yàn)生殖過(guò)程第三階段分娩前后和泌乳期 .四、含量效價(jià)測(cè)定含量表示方法百分含量構(gòu)造明確的小分子藥物或經(jīng)水解后變成小分子的藥物生物效價(jià)或酶活力單位酶類(lèi)和蛋白質(zhì)等藥物.含量測(cè)定 1.HPLC法 運(yùn)用適當(dāng)?shù)姆治鲋鶞y(cè)定產(chǎn)品的總體純度。達(dá)95以上。 2.十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳法SDS法 產(chǎn)品假設(shè)存在聚合體，在非復(fù)原情況下用掃描計(jì)算