藥物的雜質(zhì)檢查(4)

1、第三章藥物的雜質(zhì)檢查 Test for purity藥物的雜質(zhì)檢查(4)第三章 藥物的雜質(zhì)檢查 Test for purity藥物雜質(zhì)與限量藥物中一般雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)檢查與鑒定方法雜質(zhì)的檢查方法藥物的雜質(zhì)檢查(4)一、藥物雜質(zhì)與純度 藥物的純度：是指藥物的純凈程度，藥物中的雜質(zhì)是影響藥物純度的主要因素。 雜質(zhì)：ChP將任何影響藥物純度的物質(zhì)均稱為雜質(zhì)。 對(duì)藥物純度的認(rèn)識(shí)隨著分離檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)步而提高；注意區(qū)別試劑純度與臨床用藥品的純度 第一節(jié) 藥物雜質(zhì)與限量 藥物的雜質(zhì)檢查(4)例：純度要求Pethidine Hydrochloride鹽酸哌替啶無(wú)效異構(gòu)體I 無(wú)效異構(gòu)體 II藥物的雜質(zhì)檢查(4)

2、二、雜質(zhì)來(lái)源 source and sorts of impurities1. 生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)生 酸度：水解試劑帶入 乙醇中不溶物：水解中間體(糊精) SO32-：產(chǎn)品用H2SO3漂白 可溶性淀粉：水解不完全藥物的雜質(zhì)檢查(4)2.貯藏過(guò)程中產(chǎn)生 外界條件影響：日光、空氣、溫度、濕度、 微生物等引起藥物產(chǎn)生 例如： 麻醉乙醚 醛及有毒的 過(guò)氧化物藥物的雜質(zhì)檢查(4)按照來(lái)源分類：(1)一般雜質(zhì)： （也稱信號(hào)雜質(zhì)） 在多種藥物中普遍存在的雜質(zhì)。 (Cl- SO42- Pb As Fe)(2)特殊雜質(zhì)： （也稱有關(guān)物質(zhì)） 個(gè)別藥物的生產(chǎn)及貯藏中引入的雜質(zhì)。按毒性分類：有害雜質(zhì) ( Pb As )：考

3、察生產(chǎn)工藝，信號(hào)雜質(zhì) （Cl- SO42-）：反映藥物的純度水平按化學(xué)類別和特殊性分類：有機(jī)雜質(zhì)、無(wú)機(jī)雜質(zhì)、殘留溶液 三、雜質(zhì)的種類 藥物的雜質(zhì)檢查(4)雜質(zhì)的限量：藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量。限量表示(g/g) ：百分之幾（%） 百萬(wàn)分之幾（10-6）限量檢查： 檢查所含雜質(zhì)是否超過(guò)雜質(zhì)限量的規(guī)定，通常不要求測(cè)定其準(zhǔn)確含量。 四、雜質(zhì)的限量檢查（limit test）藥物的雜質(zhì)檢查(4)雜質(zhì)限量檢查方法 雜質(zhì)的限量檢查多數(shù)采用對(duì)照法，也可采用靈敏度法和比較法 對(duì)照法：取一定量 (CV) 與被檢雜質(zhì)相同的純品或?qū)φ掌放涑蓪?duì)照品溶液，與一定量(S)藥物供試溶液在相同條件下處理后，比較反應(yīng)結(jié)果，以

4、確定雜質(zhì)含量是否超過(guò)規(guī)定。 采用該法注意平行原則藥物的雜質(zhì)檢查(4)NaCl對(duì)照液葡萄糖稀硝酸10ml硝酸銀1ml稀硝酸10ml硝酸銀1ml對(duì)照液濁度 供試液濁度藥物的雜質(zhì)檢查(4)雜質(zhì)限量的計(jì)算：式中： L 雜質(zhì)的限度（%） C 對(duì)照液濃度 （g/ml） V 對(duì)照液的加入體積（ml) S 供試品的量(g) 注意: 單位統(tǒng)一藥物的雜質(zhì)檢查(4)例 1 ： 對(duì)乙酰氨基酚中氯化物的檢查： 樣 2.0g 溶于100ml水中，取25ml檢查Cl-，與標(biāo)準(zhǔn)NaCl溶液(10g/ml) 5ml對(duì)照液相比，不得更深。 C= 10g/ml V=5.0ml S= 25 2.0 100=0.5g藥物的雜質(zhì)檢查(4

5、)第二節(jié) 雜質(zhì)檢查方法一、雜質(zhì)的研究規(guī)范1、有機(jī)雜質(zhì)在藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的項(xiàng)目名稱 雜質(zhì)的化學(xué)名稱、某類雜質(zhì)的總稱、檢測(cè)方法。2、雜質(zhì)項(xiàng)目的確立 針對(duì)性3、雜質(zhì)限度的確定 可根據(jù)原料藥每日劑量來(lái)制定質(zhì)控限度。4、雜質(zhì)檢查方法的選擇與驗(yàn)證 化學(xué)法、光譜法、色譜法(特別是HPLC) 藥物中雜質(zhì)的檢查主要是依據(jù)藥物與雜質(zhì)在物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)上的差異來(lái)進(jìn)行。藥物的雜質(zhì)檢查(4)第三節(jié) 一般雜質(zhì)檢查方法條件：硝酸酸性條件（稀硝酸10ml）反應(yīng)試劑：硝酸銀試液 1.0ml雜質(zhì)對(duì)照：NaCl (10g/ml)靈敏度范圍： 5080 g / 50ml 討論：選擇稀硝酸反應(yīng)條件的意義。一 、氯化物（Chloride

6、 ）檢查原理：藥物的雜質(zhì)檢查(4)比濁方法：同置于黑色背景上，自上向下觀察。平行操作原則。3. 若供試品有色，需經(jīng)處理后方可檢查。 注 意：藥物的雜質(zhì)檢查(4)）干擾及排除 （1）外消色法：如高錳酸鉀中氯化物的檢查， 可先加乙醇適量，使其還原褪色后再依法檢查。（2）內(nèi)消色法：倍量法供試品有色處理方法藥物的雜質(zhì)檢查(4)。二、硫酸鹽檢查法 1原理 是利用SO42-在鹽酸酸性溶液中與氯化鋇試液作用，生成硫酸鋇的白色渾濁液，與一定量標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液在相同條件下生成的硫酸鋇渾濁液比較，以判斷供試品中硫酸鹽是否超過(guò)限量。 藥物的雜質(zhì)檢查(4) 2條件： SO42- 0.1mg0.5mg/50ml, 即相當(dāng)

7、于標(biāo)準(zhǔn) 硫酸鉀溶液15ml。 酸 度 稀鹽酸2ml/50ml。 3干擾的排除 供試品有色：可采用內(nèi)消色法。藥物的雜質(zhì)檢查(4) 三、鐵鹽檢查法 （一）硫氰酸鹽法 1原理 Fe3+ + 6SCN- Fe(SCN)6-3- 紅色 2條件：Fe3+ 0.01mg0.05mg/50ml, 即相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)鐵 溶液15ml。 酸 度 稀鹽酸4ml/50ml。 HCl藥物的雜質(zhì)檢查(4) 3干擾的排除 （1） 當(dāng)有Fe2+存在時(shí)，加氧化劑過(guò)硫酸銨氧化Fe2+成Fe3+。 （2）當(dāng)供試液管與對(duì)照溶液管色調(diào)不一致，或所呈硫氰酸鐵的顏色較淺不便比較時(shí)，可分別移入分液漏斗中，加正丁醇或異戊醇提取，分別取提取液比色。藥

8、物的雜質(zhì)檢查(4) (二）巰基醋酸法 1. 原理 巰基醋酸還原Fe3+為Fe2+，在氨堿性試液中與Fe 2 + 作用生成紅色配位離子。 2Fe3+ + 2HSCH2COOH 2Fe2+ + SCH2COOH + 2H+ SCH2COOH Fe2+ + 2HSCH2COOH Fe(SCH2COOH)2 + H+ Fe(SCH2COOH)2 Fe(SCH2COOH)2 2- + 2H2O 2OH-藥物的雜質(zhì)檢查(4) 2. 說(shuō)明 在加巰基醋酸溶液前，先加枸櫞酸溶液，使其與鐵離 形成配位離子，以免在氨堿性溶液中產(chǎn)生氫氧化鐵沉 淀。（此法靈敏度比較高，但試劑較貴）藥物的雜質(zhì)檢查(4)四 、重金屬（He

9、avy Metals ）的檢查1、第一法 硫代乙酰胺法 適用對(duì)象：溶于水、稀酸和乙醇的藥物原 理： Pb2+ + 醋酸鹽緩沖液 + 硫代乙酰胺(CH3CSNH2) PbS (黃棕黑)條件：介質(zhì)：醋酸鹽緩沖液 (pH 3.5) 2ml 試劑：硫代乙酰胺 (CH3CSNH2) 2ml雜質(zhì)對(duì)照液： PbNO3 (10g/ml)靈敏度范圍： 1020 g / 27ml藥物的雜質(zhì)檢查(4)葡萄糖中重金屬的檢查：樣4.0g溶于23ml水，加入2ml緩沖鹽，依法檢查，其重金屬不得超過(guò) 百萬(wàn)分之五，取標(biāo)準(zhǔn)鉛（ 10g/ml），v=? C= 10g/ml L= 5 10-6 S=4.0g V = 2.0 ml

10、例 2：藥物的雜質(zhì)檢查(4) 注意：供試品如有色，需經(jīng)處理后方可檢查。 1. 外消色法：在對(duì)照管中加稀焦糖溶液或其他無(wú)干擾的有色溶液。2. 內(nèi)消色法。3. 改用第四法，微孔濾膜過(guò)濾法。 藥物的雜質(zhì)檢查(4)第二法：熾灼后的硫代乙酰胺法 適用對(duì)象：含芳環(huán)或雜環(huán)的有機(jī)藥物，如苯佐卡因、甲硝唑第三法: 硫化鈉法 適用對(duì)象：溶于堿的藥物或在稀酸產(chǎn)生沉淀的藥物，如磺胺類、巴比妥類藥物的雜質(zhì)檢查(4)C 墊圈(外徑10mm,內(nèi)徑6mm) D 濾膜(直徑10mm,孔徑3.0m)E 輔助濾板CDABFE濾器下部濾器上蓋連接頭 微孔濾膜過(guò)濾法檢查重金屬裝置藥物的雜質(zhì)檢查(4)五、砷 鹽 (arsenic) 第一

11、法 古蔡氏法 Gutzeit第二法 Ag-DDC法白田道夫法 Bettendorff 國(guó)內(nèi)外常用方法：藥物的雜質(zhì)檢查(4)古 蔡 氏 法 ：SbH3+HgBr2SbH2(HgBr)+HBr 銻斑 Zn+HCl藥物的雜質(zhì)檢查(4)二乙基二硫代氨基甲酸銀法Ag-diethyldithiocarbamateAg-DDC法藥物的雜質(zhì)檢查(4)白田道夫法藥物的雜質(zhì)檢查(4) 檢查砷鹽儀器裝置8cm18cm有孔玻璃旋塞導(dǎo)氣管AsH3發(fā)生瓶藥物的雜質(zhì)檢查(4)六、干燥失重 （ loss on drying）恒溫干燥 干燥劑干燥 減壓干燥熱分析法 thermal analysis,TA干燥失重物主要指水分 (

12、結(jié)晶水或吸附水) 或揮發(fā)性物質(zhì)藥物的雜質(zhì)檢查(4)七、水分測(cè)定費(fèi)休法或K-F法，是在1935年由卡爾費(fèi)休提出的測(cè)定水分的容量方法，屬于碘量法，對(duì)于測(cè)定水分最為專一，也是測(cè)定水分最為準(zhǔn)確的化學(xué)方法。費(fèi)休氏法和甲苯法藥物的雜質(zhì)檢查(4)八、熾灼殘?jiān)鼨z查法(residue on ignition) BP稱硫酸灰分（sulphated ash) 是檢查有機(jī)藥物中混入的各種無(wú)機(jī)雜質(zhì)。常采用 重量方法進(jìn)行檢查。 殘?jiān)佰釄逯?坩堝重 殘?jiān)? = 100% 供試品重藥物的雜質(zhì)檢查(4)九、易炭化物檢查法 是檢查藥物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有機(jī)雜質(zhì)。這類雜質(zhì)多數(shù)結(jié)構(gòu)未知，常采用與標(biāo)準(zhǔn)比色液比色的方法

13、進(jìn)行檢查。(標(biāo)準(zhǔn)比色液為CoCl2, K2Cr2O7, CuSO4) 藥物的雜質(zhì)檢查(4)十、殘留溶劑測(cè)定法 主要檢查藥物在生產(chǎn)過(guò)程中引入的有害的有機(jī)溶劑(如苯、氯仿、二氯甲烷、吡啶、甲苯、環(huán)氧乙烷、二氧六環(huán)等）。常采用氣相色譜法方法進(jìn)行檢查。常用的方法有二種： 直接進(jìn)樣法和頂空進(jìn)樣法（試用于揮發(fā)性大的樣品測(cè)定）色譜系統(tǒng)性試驗(yàn)的要求： (1) N1000; (2) 用內(nèi)標(biāo)法測(cè)定時(shí)，要求R1.5; (3)外標(biāo)法測(cè)定時(shí)，待測(cè)物的峰面積的RSD10%。藥物的雜質(zhì)檢查(4)殘留有機(jī)溶劑測(cè)定的方法和限量有機(jī)溶劑 柱溫（） 內(nèi)標(biāo) 物 測(cè)定方法 限量（%） 二氧六環(huán) 170 吡啶 1 法 0.038吡啶 1

14、70 二氧六環(huán) 1 法 0.02苯 170 甲苯 1 法或2 法 0.0002甲苯 170 苯 1法或2 法 0.089氯方 140 二氯甲烷 1 法或2 法 0.006二氯甲烷 140 1法或2 法 0.06環(huán)氧乙烷 80 2 法 0.001返 回藥物的雜質(zhì)檢查(4)十一、溶液顏色檢查法 溶液顏色檢查法是控制藥物中有色雜質(zhì)量的方法。中國(guó)藥典收載有三種方法： 1. 標(biāo)準(zhǔn)比色液進(jìn)行比較的方法,標(biāo)準(zhǔn)比色液2. 分光光度法3. 色差計(jì)法 通過(guò)測(cè)定供試品與標(biāo)準(zhǔn)比色 液或水之間的色差值K2Cr2O7 黃、綠CoCl2 橙黃,橙紅CuSO4 棕紅藥物的雜質(zhì)檢查(4) 是檢查藥物中的微量不溶性雜質(zhì)。常采用與

15、濁 度標(biāo)準(zhǔn)液比濁的方法進(jìn)行檢查。濁 度標(biāo)準(zhǔn)液制備原理： (CH2)6N4 + 6H2O 6HCHO + 4NH3 HCHO + H2N-NH2 H2C=N-NH2 + H2O 甲醛腙白色混濁 不同級(jí)號(hào)濁度標(biāo)準(zhǔn)液 級(jí) 號(hào) 0.5 1 2 3 4濁度標(biāo)準(zhǔn)原液（ml） 2.5 5.0 10.0 30.0 50.0水 （ml） 97.5 95.0 90.0 70.0 50.0十二、溶液澄清度檢查法藥物的雜質(zhì)檢查(4)嗅味及揮發(fā)性的差異顏色的差異溶解行為的差異旋光性質(zhì)的差異吸附或分配性質(zhì)的差異對(duì)光選擇吸收性質(zhì)的差異第四節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查物理性質(zhì)上差異：藥物的雜質(zhì)檢查(4)酸、堿性質(zhì)的差異氧化還原性的差異雜

16、質(zhì)與一定試劑產(chǎn)生沉淀雜質(zhì)與一定試劑產(chǎn)生顏色反應(yīng)雜質(zhì)與一定試劑反應(yīng)產(chǎn)生氣體化學(xué)性質(zhì)上差異：藥物的雜質(zhì)檢查(4)旋光性質(zhì)的差異Ch.P規(guī)定黃體酮在乙醇中的比旋度為：186198黃體酮及其中間體的比旋度（溶劑：乙醇） 化合物 濃度% 溫度 D 黃體酮 11.4 2025 +1934 醋酸雙烯醇酮 0.9 20 -312 醋酸妊娠烯醇酮 1 常溫 +202藥物的雜質(zhì)檢查(4)220 260 300 nm腎上腺酮及腎上腺素的紫外吸收曲線max310nm藥物的雜質(zhì)檢查(4)藥物的雜質(zhì)檢查(4)吸附或分配性質(zhì)的差異薄層色譜法 TLC一般要求：顆粒直徑1040m薄層涂布：無(wú)粘合劑 含粘合劑：常加入 1015%

17、 煅石膏 (CaSO42H2O,180烘4h) 或0.50.7%羧甲基纖維素鈉水溶液比移值藥物的雜質(zhì)檢查(4) 常 用 方 法：雜質(zhì)對(duì)照品法供試品自身對(duì)照法對(duì)照藥物法藥物的雜質(zhì)檢查(4)供試品10l N-甲基哌嗪10l 50mg/ml 50g/ml 枸櫞酸乙胺嗪I2蒸氣顯色藥物的雜質(zhì)檢查(4) 規(guī)定： 如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于2個(gè)，其顏色與對(duì)照品主斑點(diǎn)相比較，不得更深。地塞米松磷酸鈉 地塞米松 20mg/ml 0.20mg/ml 藥物的雜質(zhì)檢查(4)如有12個(gè)雜質(zhì)點(diǎn)超過(guò)時(shí)，應(yīng)不得深于0.01%對(duì)照液的主斑點(diǎn)。其中有1個(gè)雜質(zhì)點(diǎn)應(yīng)不深于0.002%供試品的主斑點(diǎn)。氨苯砜中檢查“有關(guān)物質(zhì)”規(guī)定：0.0

18、1%供試品100g/ml1%供試品10mg/ml0.002%供試品20g/ml藥物的雜質(zhì)檢查(4) 分類 柱填充劑流動(dòng)相正相色譜硅膠極性小的有機(jī)溶劑極性化學(xué)鍵合硅膠正己烷,氯仿,二氧六環(huán)等反相色譜十八烷基硅烷鍵合硅膠甲醇/水乙腈/水四氫呋喃/水離子對(duì)色譜ODSRP流動(dòng)相中加離子對(duì)試劑離子交換色譜離子交換填料電解質(zhì)水溶液排阻色譜 凝膠滲透有機(jī)凝膠有機(jī)溶劑 凝膠過(guò)濾玻璃微孔球水溶液高效液相色譜法 HPLC藥物的雜質(zhì)檢查(4)主 要 方 法：峰面積歸一化法不加校正因子的主成分自身對(duì)照法 加校正因子的主成分自身對(duì)照法：用于有雜質(zhì)對(duì)照品時(shí)，雜質(zhì)的含量測(cè)定。內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中雜質(zhì)的含量：用于有雜質(zhì)對(duì)照品時(shí)，雜質(zhì)的含量測(cè)定。外標(biāo)法測(cè)定供試