雜環(huán)類藥物分析(3)

1、第八章 雜環(huán)類藥物的分析Analytical of Heterocyclic drugs雜環(huán)類藥物分析(3)本章簡介本章介紹五類：1、吡啶類：異煙肼、尼克剎米和硝苯地平2、喹啉類：硫酸奎寧、奎尼丁、鹽酸環(huán)丙沙星等3、托烷類：硫酸阿托品、氫溴酸東莨菪堿等4、吩噻嗪類：氯丙嗪、異丙嗪、奮乃靜和鹽酸硫利達(dá)嗪等5、苯并二氮雜卓類：地西泮、奧沙西泮和氯氮卓等雜環(huán)化合物：碳環(huán)中夾雜有非碳原子的環(huán)狀有機(jī)化合物，其中非碳原子稱為雜原子，一般為O、S、N等。在化學(xué)合成藥中，已成為現(xiàn)代藥物中應(yīng)用最多、最廣的一大類。雜環(huán)類藥物分析(3)第一節(jié) 吡啶類藥物結(jié)構(gòu)與化學(xué)性質(zhì)含有N原子的六元單環(huán)，例如：異煙肼、尼克剎米和硝

2、苯地平雜環(huán)類藥物分析(3)主要化學(xué)性質(zhì)與鑒別反應(yīng) 弱堿性：吡啶環(huán)N原子為堿性原子，吡啶環(huán)pKb為8.8（水中）尼克剎米：除了吡啶環(huán)上的N原子外，吡啶環(huán)位被酰氨基取代，遇堿水解釋放二乙胺。Chp2005鑒別：取本品10滴，加氫氧化鈉試液3ml ，加熱，即發(fā)生二乙胺的臭氣， 能使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變藍(lán)色。 雜環(huán)類藥物分析(3)主要化學(xué)性質(zhì)與鑒別反應(yīng)還原性：異煙肼吡啶環(huán)位被酰肼所取代，有較強(qiáng)的還原性，可被不同的氧化劑氧化，也可與某些含有羰基的化合物發(fā)生縮合反應(yīng)。異煙肼與硝酸銀銀鏡反應(yīng)Chp2005：取本品約10mg，置試管中，加水2ml 溶解后，加氨制硝酸銀試液1ml ，即發(fā)生 氣泡與黑色渾濁，并在

3、試管壁上生成銀鏡。 雜環(huán)類藥物分析(3)縮合反應(yīng)Chp2005異煙肼鑒別：取本品約0.1g，加水5ml 溶解后，加10香草醛的乙醇溶液 1ml， 搖勻，微熱，放冷，即析出黃色結(jié)晶；濾過，用稀乙醇重結(jié)晶，在105 干燥后，依法 測定（附錄 C），熔點為228 231 ，熔融時同時分解。 雜環(huán)類藥物分析(3)異煙肼的其他鑒別反應(yīng)與亞硒酸作用，可將其還原為紅色硒的沉淀與1,2-萘醌-4-磺酸在堿性介質(zhì)中，可縮合呈紅色。紅色雜環(huán)類藥物分析(3)主要化學(xué)性質(zhì)與鑒別反應(yīng)吡啶環(huán)的特性： 吡啶環(huán)開環(huán) 戊烯二醛反應(yīng)（kning反應(yīng)） 適用于、位無取代的異煙肼、尼克剎米 Chp2005尼克剎米鑒別反應(yīng)：取本品1

4、滴，加水50ml，搖勻，分取2ml ，加溴化氰試液2ml 與2.5苯胺溶 液3ml ，搖勻，溶液漸顯黃色。 雜環(huán)類藥物分析(3)主要化學(xué)性質(zhì)與鑒別反應(yīng)吡啶環(huán)的特性：二硝基氯苯反應(yīng)（Vongerichten反應(yīng)）：在無水的條件下，吡啶及其衍生物與3,4-二硝基氯苯混合共熱或加熱至熔融，冷卻后，加醇制氫氧化鉀溶液將殘渣溶解，溶液呈紫紅色。異煙肼氧化成羧基；尼克剎米水解成羧基雜環(huán)類藥物分析(3)吡啶環(huán)的鑒別反應(yīng)形成沉淀的反應(yīng)可與重金屬鹽類或苦味酸形成沉淀尼克剎米的鑒別：取本品2滴，加水1ml ，搖勻，加硫酸銅試液2滴與硫氰酸銨試液3 滴，即生 成草綠色沉淀。 異煙肼、尼克剎米可與氯化汞形成白色沉淀。

5、雜環(huán)類藥物分析(3)分解產(chǎn)物的鑒別反應(yīng)異煙肼、尼克剎米等與無水碳酸鈉或氫氧化鈣共熱，可發(fā)生脫羧降解，并有吡啶臭味逸出。雜環(huán)類藥物分析(3)紫外吸收光譜鑒別芳雜環(huán)在紫外光區(qū)有特征吸收藥物溶劑max (nm)max (nm)異煙肼HCl (0.01mol/L)265約420水266234 378尼克剎米HCl (0.01mol/L)263 285NaOH (0.01mol/L)255 840260 860硝苯地平無水乙醇333 140雜環(huán)類藥物分析(3)有關(guān)物質(zhì)檢查一、異煙肼中肼的檢查異煙肼不穩(wěn)定，游離肼即可能在原料中引入，又可能在貯藏過程中降解誘變劑和致癌物質(zhì)1、TLC檢查方法：取本品，加水制成

6、每1ml 中含50mg的溶液，作為供試品溶液。另取硫酸肼 加水制成每1ml 中含0.20mg（相當(dāng)于游離肼50g ）的溶液，作為對照溶液。照薄層色譜法（附錄B）試驗，吸取供試品溶液10l 與對照溶液2l，分別點于同一硅膠薄層板（用羧甲基纖維素鈉溶液制備）上，以異丙醇丙醇(3:2) 為展開劑，展開后，晾干，噴以乙醇制對二甲氨基苯甲醛試液，15分鐘后檢視。在供試品主斑點前方與硫酸肼斑點相應(yīng)的位置上，不得顯黃色斑點。 限度：0.02%。雜環(huán)類藥物分析(3)2、比濁法JP(14)采用樣品中加水楊酸的乙醇溶液觀察渾濁的方法專屬性差3、差示分光光度法原理：肼對-二甲氨基苯甲醛黃色縮合物（對-二甲氨基苯甲醛

7、連氮）465nm波長有最大吸收異煙肼對-二甲氨基苯甲醛縮合物（對-二甲氨基芐叉） 465nm波長無吸收加入3%丙酮，可使得黃色縮合物（對-二甲氨基苯甲醛連氮）變?yōu)闊o色的二甲基甲酮連氮，繼而作為參比，用于測定A456nm，并以對照品比較法計算游離肼的含量。專屬、準(zhǔn)確、靈敏，最低檢測限可達(dá)0.1g/ml。有關(guān)物質(zhì)檢查一、異煙肼中肼的檢查雜環(huán)類藥物分析(3)有關(guān)物質(zhì)檢查二、尼克剎米中有關(guān)物質(zhì)的檢查TLC無雜質(zhì)對照品高低濃度對比法檢查方法：取本品，加甲醇制成每1ml 中含40mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加甲醇分別稀釋成每1ml 中含0.4mg 和40g的溶液，作為對照溶液(1)和(2)

8、。照薄層色譜法（附錄 B）試驗，吸取上述三種溶液各10l ，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿丙醇(75:25)為展開劑，展開后，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點，與對照溶液(2)的主斑點比較，不得更深 ；如有1點超過時，應(yīng)不深于對照溶液(1)的主斑點。雜環(huán)類藥物分析(3)有關(guān)物質(zhì)檢查 遇光不穩(wěn)定光化學(xué)歧化作用HPLC法檢查 (A) (B)三、硝苯地平中的有關(guān)物質(zhì)檢查雜環(huán)類藥物分析(3)HPLC法檢查硝苯地平中的有關(guān)物質(zhì)檢查避光操作取本品，精密稱定，加甲醇分別制成每1ml中含1mg和0.2mg的溶液，作為供試品溶液和。取硝苯地平有關(guān)雜質(zhì)對照品A和B各10mg

9、， 精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，作為對照品溶液。分別精密量取供試 品溶液和對照品溶液各1ml，置100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，作為對照品溶液。照高效液相色譜法（附錄 D）試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(3:2)為流動相；檢測波長為235nm。取對照品溶液20l注入液相色譜儀，調(diào)節(jié) 檢測靈敏度，使雜質(zhì)A和B成分色譜峰的峰高為滿量程的20；雜質(zhì)A和B之間，雜質(zhì)B與硝苯地平之間的分離度均應(yīng)符合規(guī)定。取供試品溶液和對照品溶液各20l，分別注入液相色譜儀。記錄色譜圖至主成分峰保留時間的2倍。供試品溶液如出現(xiàn)與對照品溶液中雜質(zhì)A和B相對應(yīng)的峰，其峰面積不得大于對

10、照品溶液中雜質(zhì)A和B的面積；如出現(xiàn)除雜質(zhì)A和B以外的其他雜質(zhì)峰，其峰面積不得大于對照品溶液中硝苯地平的峰面積； 各雜質(zhì)總量不得大于0.5。供試品溶液中小于對照品溶液中硝苯地平峰面積的10 以下的雜質(zhì)峰忽略不計。雜環(huán)類藥物分析(3)第二節(jié) 喹啉類藥物 硫酸奎寧 硫酸奎寧丁 鹽酸環(huán)丙沙星 (quinine sulfate) (quinidine sulfate) (ciprofloxacin hydrochloride) 結(jié)構(gòu)特點：含有吡啶與苯稠合而成的喹啉雜環(huán)，環(huán)上雜原子的反應(yīng)性能基本與吡啶相同。雜環(huán)類藥物分析(3)主要化學(xué)性質(zhì)堿 性： 喹啉環(huán)上的N原子具有堿性，與強(qiáng)酸成鹽環(huán)丙沙星： 鹽酸；奎寧

11、、奎尼丁： 二元酸硫酸（喹核堿含脂環(huán)氮，堿性強(qiáng)）奎寧 (左旋體)：pKb1為5.07 pKb2為9.7，飽和水溶液pH為8.8，易溶 于氯仿無水乙醇(2:1)奎尼丁(右旋體)：pKb1為5.4pKb2為10，易溶于沸水或乙醇。旋 光 性： 硫酸奎寧 (左旋體)，比旋度為-237至-244 硫酸奎寧丁(右旋體)，比旋度為+275至+290 鹽酸環(huán)丙沙星，無旋光性熒光特性： 硫酸奎寧和硫酸奎寧丁在稀硫酸中顯藍(lán)色熒光，鹽酸環(huán)丙 沙星無熒光。雜環(huán)類藥物分析(3)鑒別試驗一、綠奎寧反應(yīng)（Thalleioquin） 用于奎寧和奎尼丁的鑒別鑒別方法：取本品約20mg，加水20ml溶解后，分取5ml，加溴試液

12、3滴與氨試液1ml ，即顯翠綠色。 硫酸奎寧和硫酸奎尼丁的反應(yīng)機(jī)理如圖 取其水溶液加溴試液23滴和氨試液1ml，即顯翠綠色；加酸至中性顯藍(lán)色；酸性則呈紫紅色；翠綠色可轉(zhuǎn)溶于醇、氯仿中不溶于醚。雜環(huán)類藥物分析(3)鑒別試驗二、光譜特征紫外吸收光譜鹽酸環(huán)丙沙星：取本品，加0.1mol/L鹽酸溶液制成每1ml中含8g的溶液，照分光光度法(附錄 A)測定，在 277nm與315nm的波長處有最大吸收。 熒光光譜硫酸奎寧：取本品約20mg，加水20ml溶解后，分取溶液10ml，加稀硫酸使成酸 性，即顯藍(lán)色熒光。雜環(huán)類藥物分析(3)鑒別試驗硫酸奎寧、硫酸奎尼丁硫酸根氯化鋇白色沉淀鹽酸環(huán)丙沙星鹽酸根硝酸銀白

13、色沉淀 三、無機(jī)酸鹽雜環(huán)類藥物分析(3)特殊雜質(zhì)檢查一、硫酸奎寧中的特殊雜質(zhì)檢查酸度酸性雜質(zhì)取本品0.2g，加水20ml溶解后，測定pH值應(yīng)為5.7 6.6 。 氯仿乙醇不溶物取本品2g，加氯仿無水乙醇 (2:1) 的混合液15ml，在50加熱10min后，用稱定重量的垂熔坩堝濾過，濾渣用上述混合液分5 次洗滌，每次10ml ，在105 干燥至恒重，遺留殘渣不得過2mg。 其他金雞納堿（TLC）取本品，加稀乙醇制成每1ml 含10mg的溶液，作為供試品溶液；精 密量取適量，加稀乙醇稀釋制成每1ml 中含50g 的溶液，作為對照溶液。照薄層色譜 法（附錄 B）試驗，吸取上述兩種溶液各5l，分別點

14、于同一硅膠G薄層板上，以氯 仿丙酮二乙胺 (5:4:1.25)為展開劑，展開后，微熱使展開劑揮散，噴以碘鉑酸鉀試 液使顯色。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點，與對照溶液的主斑點比較，不得更深。 雜環(huán)類藥物分析(3)特殊雜質(zhì)檢查二、鹽酸環(huán)丙沙星中特殊雜質(zhì)檢查酸 度取本品，加水制成每1ml中含25mg的溶液，測定 pH值應(yīng)為3.0 4.5。 溶液的澄清度和顏色取本品0.1g，加水10ml溶解后，溶液應(yīng)澄清；如顯色，與黃色或黃綠色4號標(biāo)準(zhǔn)比色液(附錄 A)比較，不得更深。 有關(guān)物質(zhì)（HPLC）ODS色譜柱；以0.05mol/L枸櫞酸溶液-乙腈 (82:18)用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至3.5為流動相；檢測波長為277

15、nm。理論板數(shù)按鹽酸環(huán)丙沙星峰計算應(yīng)不低 于2000，鹽酸環(huán)丙沙星峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。 測定法 取本品適量，加水制成每1ml中含0.4mg的溶液，取20l注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度 和記錄儀衰減，使主成分的峰高為記錄儀滿量程的24倍，記錄時間應(yīng)為主成分峰保留時間的2倍。按面積 歸一化法計算，雜質(zhì)總量不得過1.5。 雜環(huán)類藥物分析(3)第三節(jié) 托烷類藥物 硫酸阿托品 氫溴酸東莨菪堿 (atropine) (scopolamine hydrochloride)結(jié)構(gòu)特點：大多數(shù)為莨菪烷衍生的氨基醇與不同的有機(jī)酸縮合成酯的生物堿，常見的有顛茄生物堿和古柯生物堿。雜環(huán)類藥物分析(3)化

16、學(xué)性質(zhì)水解性（酯水解生成醇和酸） 阿托品 莨菪醇 莨菪酸雜環(huán)類藥物分析(3)化學(xué)性質(zhì)堿性阿托品和東莨菪堿結(jié)構(gòu)中，五原脂環(huán)含有叔胺氮原子，較強(qiáng)的堿性，易于酸成鹽，如阿托品pKb1為4.35旋光性氫溴酸東莨菪堿含有不對稱碳原子，左旋體比旋度為-24至-27阿托品雖然含有不對稱碳原子，但外消旋化，無旋光性雜環(huán)類藥物分析(3)鑒別試驗托烷生物堿一般鑒別試驗鑒別方法：取供試品約10mg，加發(fā)煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黃色的殘渣，放冷，加乙醇23滴，加固體氫氧化鉀一小粒，即顯深紫色。雜環(huán)類藥物分析(3)鑒別試驗氧化反應(yīng)水解生成的莨菪酸，在硫酸和重鉻酸鉀在加熱條件下，發(fā)生氧化反應(yīng)，生成苯甲醛，逸出苦杏仁的

17、臭味。雜環(huán)類藥物分析(3)鑒別試驗沉淀反應(yīng)堿性生物堿沉淀劑生成沉淀例：阿托品：氯化汞醇試液黃色沉淀東莨菪堿：氯化汞醇白色復(fù)鹽沉淀雜環(huán)類藥物分析(3)鑒別試驗硫酸鹽與溴化物反應(yīng)硫酸阿托品：水溶液加氯化鋇生成白色沉淀，沉淀在鹽酸或硝酸中均不溶解；加醋酸鉛試液也生成白色沉淀，在醋酸銨或氫氧化鈉試液中溶解。氫溴酸東莨菪堿：水溶液加硝酸銀試液，生成淡黃色凝乳沉淀，能在氨試液中微溶，但在硝酸中幾乎不溶；滴加氯試液，溴即游離，加氯仿振搖，氯仿層顯黃色或紅棕色。雜環(huán)類藥物分析(3)氫溴酸東莨菪堿中特殊雜質(zhì)檢查來 源： 茄科植物顛茄、白曼陀羅、莨菪中等提?。ㄎ覈?，白曼陀羅的干燥品：洋金花中提取東莨菪堿，制成氫溴

18、酸鹽）制 法：洋金花粗粉乙醇/滲漉滲漉液減壓蒸餾浸膏H2SO4/提取酸性提取液Na2CO3, CHCl3/提取總生物堿Na2CO3, CHCl3/分離東莨菪堿HBr/成鹽氫溴酸東莨菪堿（粗品）75% C2H5OH/精制成品雜環(huán)類藥物分析(3)氫溴酸東莨菪堿中特殊雜質(zhì)檢查酸度取本品0.50g，加水10ml溶解后，依法測定（附錄 H），pH值應(yīng)為4.05.5。強(qiáng)酸弱堿其他生物堿取本品0.10g ，加水2ml 溶解后，分成兩等份：一份中加氨試液23滴，不得發(fā)生渾濁；另一份中加氫氧化鉀試液數(shù)滴，只許發(fā)生瞬即消失的類白色渾濁。阿撲阿托品、顛茄堿 易氧化物取本品0.15g,加水5ml溶解后，在1520加高

19、錳酸鉀滴定液(0.02mol /L)0.05ml，10分鐘內(nèi)紅色不得完全消失。阿撲阿托品、其他含有不飽和雙鍵的有機(jī)物質(zhì)雜環(huán)類藥物分析(3)第四節(jié) 吩噻嗪類藥物R: -H、-Cl、-CF3、-COCH3、-SCH2CH3R: 具有23碳鏈的二甲或二乙胺基，或含氮雜環(huán)如哌嗪和哌啶的衍生物典型藥物：鹽酸氯丙嗪、鹽酸異丙嗪、奮乃靜、鹽酸氟奮乃靜、癸氟奮乃靜、鹽酸三氟拉嗪和鹽酸硫利達(dá)嗪等吩噻嗪類藥物為苯并噻嗪的衍生物，分子結(jié)構(gòu)中均含有硫氮雜蒽母核，基本結(jié)構(gòu)如下：雜環(huán)類藥物分析(3)主要的化學(xué)性質(zhì)紫外吸收光譜特性硫氮雜蒽母核為共軛三環(huán)的系統(tǒng)，紫外區(qū)三個吸收峰值，約205nm、254nm、300nm，最強(qiáng)多

20、在254nm附近，根據(jù)2位、10位取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。當(dāng)母核的二價硫被氧化為砜或亞砜，則呈現(xiàn)四個峰值。紅外吸收光譜特性由于取代基R和R的不同，具有不同的紅外光譜，已被藥典用于不同品種的鑒別。雜環(huán)類藥物分析(3)主要的化學(xué)性質(zhì)易氧化呈色硫氮雜蒽母核中的二價硫易氧化，不同的氧化劑如硫酸、硝酸、三氯化鐵試液及過氧化氫等，母核易被氧化成亞砜、砜等不同的產(chǎn)物，隨取代基的不同，呈現(xiàn)不同的顏色，可用于鑒別。金屬離子絡(luò)合呈色未氧化的硫可與金屬鈀離子形成配位化合物，而氧化產(chǎn)物亞砜、砜則不能，可用于鑒別和含有測定，具有專屬性。雜環(huán)類藥物分析(3)鑒別試驗紫外吸收光譜鑒別藥物溶劑濃度 (g/ml)

21、max (nm) A鹽酸氯丙嗪鹽酸 (91000)52540.46915306鹽酸異丙嗪鹽酸 (0.1mol/L)6249883937奮乃靜無水乙醇72580.65癸氟奮乃靜乙醇10260鹽酸氟奮乃靜鹽酸 (91000)10255553593鹽酸三氟拉嗪鹽酸 (120)10256630鹽酸硫利達(dá)嗪乙醇8264與315雜環(huán)類藥物分析(3)鑒別試驗氧化顯色反應(yīng)藥物硫酸硝酸過氧化氫鹽酸氯丙嗪顯紅色，漸變?yōu)榈S色鹽酸異丙嗪顯櫻桃紅色，放置后顏色漸變深生成紅色沉淀，加熱即溶解，溶液由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)槌赛S色奮乃靜顯深紅色，放置后紅色漸褪去鹽酸氟奮乃靜顯淡紅色，溫?zé)岷笞兂杉t褐色鹽酸三氟拉嗪生成微帶紅色的白色沉淀；

22、放置后，紅色變深，加熱后變黃色鹽酸硫利達(dá)嗪顯藍(lán)色雜環(huán)類藥物分析(3)鑒別試驗與鈀離子絡(luò)合顯色鑒別方法：取本品約50mg，加甲醇2ml溶解后，加0.1%氯化鈀溶液3ml，既有沉淀生成，并顯紅色，再加過量的氯化鈀溶液，顏色變深。雜環(huán)類藥物分析(3)鑒別試驗分解產(chǎn)物反應(yīng)（如癸氟奮乃靜等含氟有機(jī)藥物）鑒別方法：取本品1520mg，加碳酸鈉與碳酸鉀各約0.1g，混勻，在600 熾 灼1520分鐘，放冷，加水2ml使溶解，加鹽酸溶液(12)酸化，濾過，濾液加茜素鋯試液0.5ml，應(yīng)顯黃色。 雜環(huán)類藥物分析(3)特殊雜質(zhì)檢查鹽酸異丙嗪合成工藝雜環(huán)類藥物分析(3)特殊雜質(zhì)檢查鹽酸異丙嗪雜質(zhì)來源使得最終合成產(chǎn)物

23、變?yōu)椋捍水悩?gòu)體在丙酮中溶解度大，精制也不易除去。另外，異丙嗪不太穩(wěn)定，易氧化，貯藏過程可能分解，雜環(huán)類藥物分析(3)特殊雜質(zhì)檢查檢查方法: (TLC)取本品，加二氯甲烷制成每1ml中含10mg的溶液，作為供試 品溶液；精密量取適量，加二氯甲烷稀釋成每1ml 中含0.15mg和0.05mg的溶液，作為對照溶液(1)和(2) 。照薄層色譜法（附錄 B）試驗，吸取上述三種溶液各10l，分別點于同一硅膠GF254 薄層板上，以己烷丙酮二乙胺(8.5:1:0.5) 為展開劑，展開后，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視，供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點，不得多于3 個 ；其雜質(zhì)斑點與對照溶液(2)的主斑點比較，不

24、得更深；如有一點超過，應(yīng)不深于對照 溶液(1)的主斑點。 注：避光操作；溶液臨用新配。雜環(huán)類藥物分析(3)特殊雜質(zhì)檢查鹽酸硫利達(dá)嗪中的有關(guān)物質(zhì)檢查對光不穩(wěn)定，無雜質(zhì)對照品，TLC高低濃度對比法檢查方法：取本品，加氯仿制成每1ml中約含10mg的溶液，作為供試品溶液; 精密量取適量，加氯仿稀釋成每1ml中約含50g的溶液，作為對照溶液。照薄層色譜法( 附錄 )試驗，吸取上述兩種溶液各5l，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿異丙醇濃氨溶液(74:25:1)為展開劑，展開后，晾干，先用碘化鉍鉀試液冰醋酸水(10:20 :70)的混合液噴霧，然后噴以過氧化氫試液，立即覆蓋同樣大小的潔凈玻璃板，檢視，供

25、試 品溶液如顯雜質(zhì)斑點，其顏色與對照溶液所顯的主斑點比較，不得更深。 （避光操作）雜環(huán)類藥物分析(3)第五節(jié) 苯并二氮雜卓類藥物 地西泮 阿普唑侖 奧沙西泮 氯氮卓 (diazepam) (alprozolam) (oxazepam) (chlordiazepoxide)結(jié)構(gòu)特點：含氮雜原子、六元和七元環(huán)雙環(huán)并合而成，其中1,4-苯并二氮雜卓類藥物是目前臨床應(yīng)用最廣泛的抗焦慮、抗驚厥藥。如：地西泮、硝基地西泮、艾司唑侖、氯氮卓、阿普唑侖、三唑侖、鹽酸氟西泮、氯硝西泮和奧沙西泮等，其中，除了氯氮卓外，均為地西泮的衍生物。雜環(huán)類藥物分析(3)化學(xué)性質(zhì)堿 性：非水溶液滴定法測定含量水 解：在強(qiáng)酸性溶

26、液中，形成二苯甲酮衍生物，具有的特性可用于鑒別和含有測定雜環(huán)類藥物分析(3)鑒別試驗1、沉淀反應(yīng)氯氮卓稀鹽酸溶液阿普唑侖稀鹽酸溶液鹽酸氟西泮水溶液氯硝西泮稀鹽酸溶液碘化鉍鉀試液橙紅色沉淀放置后顏色變深 2、水解后呈芳伯胺反應(yīng) 氯氮卓和奧沙西泮的鹽酸溶液(12)，緩緩加熱煮沸，放冷，加亞硝酸鈉和堿性-萘酚試液，生成橙紅色沉淀，后者放置后顏色變暗。一、化學(xué)鑒別雜環(huán)類藥物分析(3)鑒別試驗3、硫酸熒光反應(yīng)：苯并二氮雜卓類藥物溶于硫酸/稀硫酸在紫外光(365nm)下顯不同的顏色。藥物硫酸稀硫酸地西泮黃綠色黃色氯氮卓黃色紫色艾司唑侖亮綠色天藍(lán)色硝西泮淡藍(lán)色藍(lán)綠色4、分解產(chǎn)物的反應(yīng) 有機(jī)氯化合物，氧瓶燃燒

27、法破壞，生成HCl，以5%氫氧化鈉溶液吸收，硝酸酸化，顯氯化物反應(yīng)。 雜環(huán)類藥物分析(3)鑒別試驗5、氯化銅焰色反應(yīng)分子結(jié)構(gòu)含有氯元素，在銅網(wǎng)上燃燒發(fā)出氯化銅的綠色火焰。一、化學(xué)鑒別雜環(huán)類藥物分析(3)鑒別試驗二、紫外特征吸收藥物溶劑濃度 (g/ml) max (nm) A地西泮0.5%硫酸甲醇溶液5242約0.51282約0.23366氯氮卓鹽酸 (91000)7245、3080.65阿普唑侖鹽酸 (91000)12264鹽酸氟西泮硫酸甲醇(136)102392、2842比值1.952.503622氯硝西泮0.5%硫酸甲醇溶液102392，3072奧沙西泮乙醇10229，3152 (較弱)I

28、R：地西泮、阿普唑侖、艾司唑侖、鹽酸氟西泮、氯硝西泮和奧沙西泮雜環(huán)類藥物分析(3)鑒別試驗硅膠G薄層板，苯丙酮(3:2)為展開劑，稀硫酸噴霧，105干燥30min，紫外燈下檢視熒光斑點：藥物Rf值斑點顏色*單一點樣混合點樣自然光254nm365nm地西泮0.800.78無色黃色 (m)黃色 (m)氯氮卓0.340.34無色藍(lán)紫色 (s)藍(lán)紫色 (w)艾司唑侖0.220.20無色灰紫色 (m)藍(lán)紫色 (m)硝西泮0.720.72黃色紫色 (w)紫色 (w)奧沙西泮0.490.52黃色亮灰藍(lán)色 (s)亮灰藍(lán)色 (s)*s, m, w分別表示熒光的強(qiáng)、中、弱三、薄層色譜法雜環(huán)類藥物分析(3)鑒別試驗

29、酸水解產(chǎn)物的薄層色譜法苯并二氮雜卓類經(jīng)酸水解后生成二苯甲酮衍生物，但專屬性差，不同的藥物可能水解產(chǎn)生相同的二苯甲酮衍生物（三唑侖、阿普唑侖等經(jīng)水解后不產(chǎn)生二苯甲酮衍生物，可以區(qū)別）。雜環(huán)類藥物分析(3)特殊雜質(zhì)檢查TLC是本類藥物較為常用的檢查方法例：地西泮檢查方法：取本品，加丙酮制成每1ml 中含100mg 的溶液，作為供試品溶液；精密 量取適量，加丙酮稀釋成每1ml 中含0.3mg 的溶液，作為對照溶液。照薄層色譜法（附 錄 B）試驗，吸取上述兩種溶液各5l，分別點于同一硅膠GF254 薄層板上，以醋酸乙酯己烷(1:1)為展開劑，展開后，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品溶液如顯

30、雜質(zhì)斑點，與對照溶液的主斑點比較，不得更深。雜環(huán)類藥物分析(3)特殊雜質(zhì)檢查HPLC法在雜質(zhì)檢查中的應(yīng)用也逐漸增加例：氯氮卓（USP24、BP2000采用薄層色譜法）HPLC檢查法：色譜條件：色譜柱：C18柱；流動相：甲醇磷酸液(0.05mol/L)(60:40), 40%氫氧化鈉調(diào)pH6.0；流速1ml/min，檢測波長254nm。 結(jié)果：靈敏度高，可檢測未知結(jié)構(gòu)的痕量雜質(zhì)。雜環(huán)類藥物分析(3)特殊雜質(zhì)檢查HPLC法用于地西泮降解產(chǎn)物的檢查色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇水(70:30) 為流動相；檢測波長為254nm 。理論板數(shù)按地西泮峰計算應(yīng)不低于1500

31、，地西泮峰和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。 檢查方法： 取本品，加甲醇分別制成每1ml中含1mg的供試品溶液和每1ml中含5g的對照溶液。照含量測定項下的色譜條件進(jìn)行試驗，取對照溶液10l注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為記錄儀滿量程的10；再準(zhǔn)確量取上述兩種溶液各10l分別進(jìn)樣，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的4倍，供試品溶液的色譜圖中主成分峰之后如顯示雜質(zhì)峰，量取各雜質(zhì)峰面積的和，不得大于對照溶液主成分峰的峰面積。 雜環(huán)類藥物分析(3) 第六節(jié) 含量測定 高效液相色譜法非水溶液滴定法鈰量法比色法紫外分光光度法氣相色譜法雜環(huán)類藥物分析(3)非水溶液滴定法原理一般方法冰醋酸

32、作為溶劑，若滴定氫鹵酸鹽，則加5%醋酸汞的冰醋酸溶液，用高氯酸(0.1mol/L)滴定，并用空白試驗校正。問題討論適用范圍：Kb10-8的有機(jī)堿鹽酸根影響：高氯酸氫溴酸硫酸鹽酸硝酸滴定劑穩(wěn)定性：溫度、貯藏條件都有影響終點指示方法：結(jié)晶紫指示劑，電位法雜環(huán)類藥物分析(3)非水溶液滴定法應(yīng)用實例游離弱堿性藥物：地西泮、尼克剎米或氯氮卓，基于氮原子的弱堿性可以結(jié)晶紫為指示劑，非水溶液直接滴定，終點顏色綠色藍(lán)綠色藍(lán)色不等。氫鹵酸鹽類藥物：加入過量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其形成難電離的鹵化汞，再用高氯酸滴定，可用結(jié)晶紫、橙黃作為指示劑，或用電位法指示終點。硫酸鹽類藥物：硫酸為二元酸，但在非水介質(zhì)中只顯示一

33、元酸解離為HSO4-雜環(huán)類藥物分析(3)硫酸奎寧的非水滴定3H+H+雜環(huán)類藥物分析(3)硫酸奎寧的非水滴定雜環(huán)類藥物分析(3) 非水溶液滴定法應(yīng)用實例硝酸鹽的滴定：由于硝酸的氧化性破壞指示劑變色，用電位法指示終點磷酸鹽與有機(jī)酸鹽：直接滴定雜環(huán)類藥物分析(3)鈰量法原理：氧化還原適用范圍：硝苯地平鄰二氮菲指示劑(還原型) 紅色 (氧化型) 淺藍(lán)色C12H8N2溶于亞鐵鹽溶液吩噻嗪類藥物自身顏色的變化+Free radical 紅色自由基Bivalent cation 二價陽離子，無色雜環(huán)類藥物分析(3)比色法一、酸性染料比色法原理：在適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)中，堿性藥物(B) 可與氫離子結(jié)合成(BH+)，而一

34、些酸性染料可解離為(In-)，兩者定量結(jié)合成有色絡(luò)合物(BH+ In-)離子對，可被有機(jī)溶劑定量提取，在一定波長處測定其吸收，即可算出堿性藥物的含量。雜環(huán)類藥物分析(3)對照品溶液的制備 精密稱取在120干燥至恒重的硫酸阿托品對照品25mg，置25ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。 供試品溶液的制備 取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于硫酸阿托品2.5mg ），置50ml量瓶中，加水振搖使硫酸阿托品溶解并稀釋至刻度，用干燥濾紙濾過，收集續(xù)濾液，即得。測定方法 精密量取對照品溶液與供試品溶液各2ml，分別置預(yù)先

35、精密加入氯仿10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚綠溶液取溴甲酚綠50mg與鄰苯二甲酸氫鉀1.021g，加0.2mol/L氫氧化鈉溶液6.0ml使溶解，再加水稀釋至100ml，搖勻，必要時濾過2.0ml，振搖提取2min后，靜置使分層，分取澄清的氯仿液，照分光光度法（附錄 B），在420nm的波長處分別測定吸收度，計算，并將結(jié)果與1.027 相乘，即得供試量中含有(C17H23N O3)2H2SO4H2O的重量。 例：硫酸阿托品片的含量測定雜環(huán)類藥物分析(3)比色法一、酸性染料比色法影響因素水性最佳pH值：使得BH+和In-最多酸性染料及其濃度：定量結(jié)合，產(chǎn)物溶解性好；可稍過量有機(jī)溶劑的選擇：提取效率高，氯仿最理想水分的影響：影響結(jié)果，脫水劑或濾紙除去水分雜環(huán)類藥物分析(3)比色法二、鈀離子比色法原理：吩噻嗪類藥物的