生長期和品種對靈芝萃取物三萜含量的問題和策略3600字

1、生長期和品種對靈芝萃取物三萜含量的問題和策略3600字 靈芝Ganoderma lucidumCurtis：Fr.P.Karst.，屬于擔子菌門Basidiomycota，靈芝科Ganodermataceae，靈芝屬Ganoderma P. karst.。它是我國最為名貴的藥用真菌之一。近年來，關(guān)于靈芝的研究已得到東南亞國家以及美國、加拿大等國有關(guān)學者的廣泛關(guān)注。大量現(xiàn)代研究說明，靈芝含多糖、三萜、甾醇、核酸、蛋白質(zhì)、多肽、脂肪酸等多種生物活性成分。靈芝三萜是靈芝的關(guān)鍵藥效成分，主要是一類高度氧化的羊毛甾烷衍生物，具有重要的藥理作用，如抗腫瘤，抗細胞毒性，抗HIV-1型病毒，護肝，解毒等，且具

2、有誘導NADPH、改善記憶力等功能1-6。近期研究說明，靈芝酸A、F、H具有阻止乳癌生長和作為治療癌癥輔助劑的作用，赤芝酸具有通過線粒體介導的途徑誘導人體白細胞凋亡以及阻止癌細胞侵染的作用等2；靈芝Me和靈芝酸T具有抗肺癌腫瘤作用3。但是，由于靈芝酸類化合物構(gòu)造相似，且較難得到足量對照品化合物，從而使三萜含量HPLC測定方法存在一定困難2-8。近年來，指紋圖譜技術(shù)已成為研究和控制中草藥質(zhì)量的一種主要方法，它能全面反映中藥所含化學成分的種類與數(shù)量，進而反映中藥的質(zhì)量9-10。本研究應用HPLC指紋圖譜技術(shù)，研究不同品種和不同生長期對靈芝子實體三萜成分的影響，討論靈芝品種和生長期對三萜含量和種類的

3、影響，為靈芝消費提供可靠根據(jù)。1 材料和方法1.1 材料與試劑赤靈芝：來源于天津市天壽食用菌科技。靈芝品種：G9、G18、南韓NH、京大JD、G4、美芝MZ。靈芝生長期：從靈芝子實體開場分化形成時，每間隔10 d采集的靈芝子實體，標記為S1、S2、S3和S4，分別表示第一生長階段、第二生長階段、第三生長階段和第四生長階段。靈芝三萜萃取物：課題組自制，方法見1.3.2。甲醇4 L、色譜純，冰醋酸500 mL、分析純：天津東科儀器設(shè)備。1.2 儀器與設(shè)備Agilent1200高效液相色譜儀：真空脫氣機G1322A，四元泵G1311A，自動進樣器1329A，柱溫箱G1316A，二極管陣列檢測器G13

4、15D，美國Agilent公司。Agilent化學工作站。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE52-2，上海滬西分析儀器廠；分析天平FA1004，上海方瑞儀器。1.3 試驗方法1.3.1 高效液相色譜HPLC條件 色譜柱：ZORBAX SB-C184.6 mmx150 mm，5 um；流動相：體積分數(shù)1%醋酸A-甲醇B，梯度洗脫程序表1；柱溫：25 ；進樣量5 mu;l；流量：0.8 mL“min-1；檢測波長：254 nm，參比波長360 nm。1.3.2 供試品溶液的制備 稱取5 g靈芝樣品，按有機溶劑萃取方法：枯燥靈芝rarr;粉碎rarr;95%乙醇提取rarr;提取液濃縮rarr;氯仿提取rarr;提取液

5、濃縮rarr;褐色濃縮液，即為靈芝萃取物。然后取0.25 mL萃取物，甲醇定容至5 mL。再從中取1 mL，過0.45 mu;m濾膜待用11-17。 /1.3.3 指紋圖譜軟件 中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2022A。1.3.4 總峰面積的計算 總峰面積=大于2%總峰面積的各峰面積的總和。2 結(jié)果與分析2.1 靈芝不同生長期的三萜萃取物HPLC圖譜比擬繪制不同生長期指紋圖譜重疊圖，選取24個共有色譜峰，如圖1所示。試驗結(jié)果說明，S1、S2、S3、S4各階段萃取物的HPLC圖譜相似度較高，均高于0.93。由圖1可以看出，子實體從開場分化形成時到子實體成熟期間，三萜類化合物的種類根本穩(wěn)定。這與邢

6、增濤、Masao Hirotani等人的研究報道是一致的。通過計算不同生長期總峰面積，表2結(jié)果顯示，第二生長階段總峰面積和最大，第一生長階段那么最小。由圖2可以看出，19號色譜峰均在第二生長階段S2，峰面積較大，而1014號色譜峰在第三生長階段S3，峰面積也較大。這可能是因為，在靈芝成長中，由于三萜類化合物存在不斷地分解與合成等代謝過程，導致不同生長期三萜量不同。2.2 不同品種靈芝三萜萃取物的HPLC圖譜比擬圖3中S1S6分別為G9、G18、南韓NH、京大JD、G4、美芝MZ等6個品種。圖3結(jié)合表3，比擬結(jié)果說明，各品種間相似度均小于0.90，其中，相似度為0.857的是京大和南韓；相似度為

7、0.839的是G9和G18；相似度為0.817的是美芝和G18；而G4品種與其它品種的相似度均低于0.8。表4結(jié)果顯示，不同品種靈芝萃取物的HPLC總峰面積大小順序為美芝MZ、G4、G9、京大JD、南韓NH、G18。3 結(jié)論與討論經(jīng)HPLC高效液相指紋圖譜軟件分析，不同生長階段所得靈芝子實體三萜萃取物的HPLC圖譜的相似度較高，均大于0.93；且子實體從開場分化形成時到子實體成熟期間，三萜類化合物的種類根本穩(wěn)定，但在靈芝子實體噴孢子之時，靈芝三萜萃取物的HPLC指紋圖譜的總峰面積最大。這可能是因為，在靈芝成長中三萜類化合物存在不斷地分解與合成等代謝過程，導致不同生長期三萜量不同。靈芝的6個品種

8、G9、G18、南韓NH、京大JD、G4和美芝MZ，各品種間子實體三萜萃取物的HPLC圖譜的相似度均小于0.90，其中，相似度為0.857的是京大JD和南韓NH；相似度為0.839的是G9和G18；相似度為0.817的是美芝MZ和G18；而G4品種與其它品種的相似度均低于0.8；此外，按靈芝三萜萃取物的HPLC指紋圖譜的總峰面積大小排序為：美芝MZG4G9京大JD南韓NHG18。參考文獻：1 陶文沂，敖宗華，許泓瑜.藥食用真菌生物技術(shù)M. 北京：化學工業(yè)出版社生物醫(yī)藥出版分社， 2022. 2 丁平，梁英嬌，羅進輝，等.靈芝中6種主要三萜酸類成分的HPLC定量分析J.中國藥學雜志，2022，4411：822.3 劉建文.靈芝酸Me和靈芝酸T的抗腫瘤活性研究C/ 第二屆中國藥理學會補益藥藥理專業(yè)委員會學術(shù)研討會論文匯編.承德：中國藥理學會補益藥藥理專業(yè)委員會，2022：16-17.4 趙佳，陳曉輝，畢開順. HPLC同時測定赤芝中4種三萜酸的含量J. 中國中藥雜志，2022，3417：2220.5 王筱婧，