生長期和品種對靈芝萃取物三萜含量的問題和策略3600字

1、生長期和品種對靈芝萃取物三萜含量的問題和策略3600字 靈芝Ganoderma lucidumCurtis：Fr.P.Karst.，屬于擔子菌門Basidiomycota，靈芝科Ganodermataceae，靈芝屬Ganoderma P. karst.。它是我國最為名貴的藥用真菌之一。近年來，關(guān)于靈芝的研究已得到東南亞國家以及美國、加拿大等國有關(guān)學(xué)者的廣泛關(guān)注。大量現(xiàn)代研究說明，靈芝含多糖、三萜、甾醇、核酸、蛋白質(zhì)、多肽、脂肪酸等多種生物活性成分。靈芝三萜是靈芝的關(guān)鍵藥效成分，主要是一類高度氧化的羊毛甾烷衍生物，具有重要的藥理作用，如抗腫瘤，抗細胞毒性，抗HIV-1型病毒，護肝，解毒等，且具

2、有誘導(dǎo)NADPH、改善記憶力等功能1-6。近期研究說明，靈芝酸A、F、H具有阻止乳癌生長和作為治療癌癥輔助劑的作用，赤芝酸具有通過線粒體介導(dǎo)的途徑誘導(dǎo)人體白細胞凋亡以及阻止癌細胞侵染的作用等2；靈芝Me和靈芝酸T具有抗肺癌腫瘤作用3。但是，由于靈芝酸類化合物構(gòu)造相似，且較難得到足量對照品化合物，從而使三萜含量HPLC測定方法存在一定困難2-8。近年來，指紋圖譜技術(shù)已成為研究和控制中草藥質(zhì)量的一種主要方法，它能全面反映中藥所含化學(xué)成分的種類與數(shù)量，進而反映中藥的質(zhì)量9-10。本研究應(yīng)用HPLC指紋圖譜技術(shù)，研究不同品種和不同生長期對靈芝子實體三萜成分的影響，討論靈芝品種和生長期對三萜含量和種類的

3、影響，為靈芝消費提供可靠根據(jù)。1 材料和方法1.1 材料與試劑赤靈芝：來源于天津市天壽食用菌科技。靈芝品種：G9、G18、南韓NH、京大JD、G4、美芝MZ。靈芝生長期：從靈芝子實體開場分化形成時，每間隔10 d采集的靈芝子實體，標記為S1、S2、S3和S4，分別表示第一生長階段、第二生長階段、第三生長階段和第四生長階段。靈芝三萜萃取物：課題組自制，方法見1.3.2。甲醇4 L、色譜純，冰醋酸500 mL、分析純：天津東科儀器設(shè)備。1.2 儀器與設(shè)備Agilent1200高效液相色譜儀：真空脫氣機G1322A，四元泵G1311A，自動進樣器1329A，柱溫箱G1316A，二極管陣列檢測器G13

4、15D，美國Agilent公司。Agilent化學(xué)工作站。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE52-2，上海滬西分析儀器廠；分析天平FA1004，上海方瑞儀器。1.3 試驗方法1.3.1 高效液相色譜HPLC條件 色譜柱：ZORBAX SB-C184.6 mmx150 mm，5 um；流動相：體積分數(shù)1%醋酸A-甲醇B，梯度洗脫程序表1；柱溫：25 ；進樣量5 mu;l；流量：0.8 mL“min-1；檢測波長：254 nm，參比波長360 nm。1.3.2 供試品溶液的制備 稱取5 g靈芝樣品，按有機溶劑萃取方法：枯燥靈芝rarr;粉碎rarr;95%乙醇提取rarr;提取液濃縮rarr;氯仿提取rarr;提取液

5、濃縮rarr;褐色濃縮液，即為靈芝萃取物。然后取0.25 mL萃取物，甲醇定容至5 mL。再從中取1 mL，過0.45 mu;m濾膜待用11-17。 /1.3.3 指紋圖譜軟件 中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2022A。1.3.4 總峰面積的計算 總峰面積=大于2%總峰面積的各峰面積的總和。2 結(jié)果與分析2.1 靈芝不同生長期的三萜萃取物HPLC圖譜比擬繪制不同生長期指紋圖譜重疊圖，選取24個共有色譜峰，如圖1所示。試驗結(jié)果說明，S1、S2、S3、S4各階段萃取物的HPLC圖譜相似度較高，均高于0.93。由圖1可以看出，子實體從開場分化形成時到子實體成熟期間，三萜類化合物的種類根本穩(wěn)定。這與邢

6、增濤、Masao Hirotani等人的研究報道是一致的。通過計算不同生長期總峰面積，表2結(jié)果顯示，第二生長階段總峰面積和最大，第一生長階段那么最小。由圖2可以看出，19號色譜峰均在第二生長階段S2，峰面積較大，而1014號色譜峰在第三生長階段S3，峰面積也較大。這可能是因為，在靈芝成長中，由于三萜類化合物存在不斷地分解與合成等代謝過程，導(dǎo)致不同生長期三萜量不同。2.2 不同品種靈芝三萜萃取物的HPLC圖譜比擬圖3中S1S6分別為G9、G18、南韓NH、京大JD、G4、美芝MZ等6個品種。圖3結(jié)合表3，比擬結(jié)果說明，各品種間相似度均小于0.90，其中，相似度為0.857的是京大和南韓；相似度為

7、0.839的是G9和G18；相似度為0.817的是美芝和G18；而G4品種與其它品種的相似度均低于0.8。表4結(jié)果顯示，不同品種靈芝萃取物的HPLC總峰面積大小順序為美芝MZ、G4、G9、京大JD、南韓NH、G18。3 結(jié)論與討論經(jīng)HPLC高效液相指紋圖譜軟件分析，不同生長階段所得靈芝子實體三萜萃取物的HPLC圖譜的相似度較高，均大于0.93；且子實體從開場分化形成時到子實體成熟期間，三萜類化合物的種類根本穩(wěn)定，但在靈芝子實體噴孢子之時，靈芝三萜萃取物的HPLC指紋圖譜的總峰面積最大。這可能是因為，在靈芝成長中三萜類化合物存在不斷地分解與合成等代謝過程，導(dǎo)致不同生長期三萜量不同。靈芝的6個品種

8、G9、G18、南韓NH、京大JD、G4和美芝MZ，各品種間子實體三萜萃取物的HPLC圖譜的相似度均小于0.90，其中，相似度為0.857的是京大JD和南韓NH；相似度為0.839的是G9和G18；相似度為0.817的是美芝MZ和G18；而G4品種與其它品種的相似度均低于0.8；此外，按靈芝三萜萃取物的HPLC指紋圖譜的總峰面積大小排序為：美芝MZG4G9京大JD南韓NHG18。參考文獻：1 陶文沂，敖宗華，許泓瑜.藥食用真菌生物技術(shù)M. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社生物醫(yī)藥出版分社， 2022. 2 丁平，梁英嬌，羅進輝，等.靈芝中6種主要三萜酸類成分的HPLC定量分析J.中國藥學(xué)雜志，2022，4411：822.3 劉建文.靈芝酸Me和靈芝酸T的抗腫瘤活性研究C/ 第二屆中國藥理學(xué)會補益藥藥理專業(yè)委員會學(xué)術(shù)研討會論文匯編.承德：中國藥理學(xué)會補益藥藥理專業(yè)委員會，2022：16-17.4 趙佳，陳曉輝，畢開順. HPLC同時測定赤芝中4種三萜酸的含量J. 中國中藥雜志，2022，3417：2220.5 王筱婧，