DB15∕T 2602-2022 苜蓿中咪草煙殘留量的測(cè)定 高效液相色譜法

1、 ICS 65.020.01CCS B 2515內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)DB15/T 26022022苜蓿中咪草煙殘留量的測(cè)定高效液相色譜法Determination ofImazethapyr residue in alfalfa-Highperformance liquidchromatography2022-06-24發(fā)布2022-07-24實(shí)施 DB15/T 26022022目次前言. II12345678910范圍. 1規(guī)范性引用文件 . 1術(shù)語(yǔ)和定義 . 1原理. 1試劑和材料 . 1儀器和設(shè)備 . 2試樣制備 . 2測(cè)定步驟 . 2結(jié)果計(jì)算和表示 . 3精密度 . 4附錄A（資料性）

2、高效液相色譜法測(cè)定咪草煙標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜法. 5I DB15/T 26022022前言本文件按照GB/T 1.12020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（SAM/TC 19）歸口。II DB15/T 26022022苜蓿中咪草煙殘留量的測(cè)定高效液相色譜法1范圍本文件規(guī)定了高效液相色譜法測(cè)定苜蓿中咪草煙殘留量的原理、試劑和材料、儀器和設(shè)備、試樣制備、測(cè)定步驟、結(jié)果計(jì)算和表示、精密度。本文件適用于苜蓿中咪草煙殘留量的測(cè)定。本文件的檢出限為0.025 mg/kg。本文件的定量限為0.10 mg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容

3、通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T 14699.1飼料采樣GB/T 20195動(dòng)物飼料試樣的制備34術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。原理試樣中咪草煙殘留物樣品經(jīng)過(guò)甲醇和碳酸鈉提取液提取、離心、萃取、旋蒸，用離子交換型（SCX）固相萃取小柱凈化，甲醇和氨水洗脫，用高效液相色譜儀測(cè)定，外標(biāo)法定量。5試劑和材料乙腈（CH3CN）：色譜純。甲醇（CH3OH）：色譜純。磷酸（H3PO4）：優(yōu)級(jí)純。二氯甲烷（C

4、H2Cl2）。冰乙酸（CH3COOH）：優(yōu)級(jí)純。氨水（NH4OH）。無(wú)水硫酸鈉（Na2SO4）：優(yōu)級(jí)純。碳酸鈉（Na2CO3）：優(yōu)級(jí)純。碳酸鈉溶液（0.1mol/L）：稱(chēng)取10.6 g碳酸鈉，用水溶解，定容至1 L容量瓶中。1 DB15/T 26022022甲醇-碳酸鈉溶液（1+1，v/v）：量取100 mL甲醇，加入100 mL碳酸鈉溶液（5.9），混勻。磷酸溶液（1+9，v/v）：量取10 mL磷酸，用水稀釋定容至100 mL。氨水-甲醇（1+9，v/v）：量取10 mL氨水，加入90 mL甲醇，混勻。水+甲醇（1+9，v/v）：量取10 mL水，加入90 mL甲醇，混勻。乙酸溶液（5+9

5、5，v/v）：量取5 mL冰乙酸，用水稀釋定容至100 mL。標(biāo)準(zhǔn)品：咪草煙（C15H19N3O3）：純度不小于95%，或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1.00 mg/mL)：準(zhǔn)確稱(chēng)取適量的咪草煙標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇溶解并配制成(1.00 mg/mL)的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，保存于-18冰箱內(nèi)，可使用6個(gè)月。標(biāo)準(zhǔn)使用液：準(zhǔn)確吸取0.10 mL咪草煙的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(5.16)至10 mL容量瓶?jī)?nèi)，用甲醇稀釋定容至刻度，配制成10.0g/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，于-18冰箱內(nèi)避光保存，可使用1個(gè)月。標(biāo)準(zhǔn)系列工作液：分別吸取濃度為10.0g/mL咪草煙標(biāo)準(zhǔn)液 0.25 mL、0.50 mL、1.00

6、mL、1.50 mL、2.00 mL于10.00 mL容量瓶，用水+甲醇(5.13)定容至刻度，該標(biāo)準(zhǔn)系列咪草煙濃度分別為0.25g/mL、0.50g/mL、1.00g/mL、1.50g/mL、2.00g/mL。固相萃取柱：SCX，60 mg/3mL。微孔過(guò)濾膜（尼龍）：13 mm0.22 m。注：除非另有規(guī)定，在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑和GB/T 6682所規(guī)定的一級(jí)水。6儀器和設(shè)備高效液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器（或二極管陣列檢測(cè)器）。電子天平：感量0.01 mg和0.01 g。離心機(jī)：轉(zhuǎn)速大于等于4000 r/min。超聲波水浴。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。渦旋混合器。氮吹儀。組織粉碎機(jī)。樣品篩：篩

7、孔尺寸1.0 mm。7試樣制備按照GB/T 14699.1中有關(guān)規(guī)定采集樣品，去雜質(zhì)后充分混勻，按照GB/T 20195制備試樣，利用四分法取樣后，充分研磨，過(guò)1.0 mm篩，新鮮樣品利用四分法取樣后，充分破碎作為分析樣品備用，將處理好的試樣放置-18冰箱保存。8測(cè)定步驟提取準(zhǔn)確稱(chēng)取苜蓿新鮮樣品5 g（精確至0.01g）或草粉2 g（精確至0.01g）于50 mL的塑料離心管中，加入30 mL的甲醇-碳酸鈉溶液（5.10），混勻，超聲提取30 min，用磷酸溶液（5.11）調(diào)至pH=2.5，于4000 r/min離心10 min，收集上清液于分液漏斗中，用50 mL二氯甲烷（5.4）萃取兩次（

8、25 mL+25 mL），2 DB15/T 26022022有機(jī)相加適量無(wú)水硫酸鈉（5.7）除水后收集于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，于45減壓蒸至近干，加適量甲醇（5.2）溶解。凈化強(qiáng)陽(yáng)離子交換固相萃取柱SCX（5.19）凈化，用1 mL水、1 mL甲醇（5.2）活化固相萃取柱，試樣全部過(guò)柱，用1 mL水、1 mL甲醇（5.2）淋洗固相萃取柱，再用6 mL氨水-甲醇（5.12）洗脫，收集流出液于10 mL比色管中，整個(gè)固相萃取過(guò)程流速不超過(guò)1 mL/min。洗脫液于50條件下氮吹至近干，用2.00mL水-甲醇（5.13）溶解、渦旋混勻，過(guò)0.22m微孔過(guò)濾膜（5.20），待測(cè)。測(cè)定8.3.1相液色譜測(cè)定參考

9、條件液相色譜法測(cè)定參考條件如下：a)b)c)d)e)f)色譜柱：C18型柱，長(zhǎng)150 mm，內(nèi)徑3.9 mm，粒徑5m，或等效的色譜柱；流動(dòng)相：A:乙酸（5.14）+B:乙腈（5.1）= 60+40（v/v）；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10.00L；柱溫：40；檢測(cè)波長(zhǎng)：258 nm。8.3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作按照8.3.1測(cè)定條件，將標(biāo)準(zhǔn)工作液（5.18）注入高效液相色譜儀中進(jìn)行測(cè)試。測(cè)定相應(yīng)的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作液（5.18）的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。8.3.3試樣溶液的測(cè)定按照8.3.1測(cè)定條件，將待測(cè)樣品溶液注入高效液相色譜儀中進(jìn)行測(cè)試。待測(cè)樣品溶液中目標(biāo)物

10、質(zhì)的響應(yīng)值應(yīng)在儀器線性范圍內(nèi)，否則應(yīng)適當(dāng)稀釋。標(biāo)準(zhǔn)工作液與待測(cè)樣品溶液等體積進(jìn)樣。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜峰的保留時(shí)間和峰面積，對(duì)試樣溶液的色譜峰根據(jù)保留時(shí)間進(jìn)行定性，外標(biāo)法定量。咪草煙標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見(jiàn)附錄A中圖A.1。平行實(shí)驗(yàn)按上述步驟，對(duì)同一試樣進(jìn)行平行試驗(yàn)測(cè)定?？瞻讓?shí)驗(yàn)除不稱(chēng)取試樣外，均按上述分析步驟進(jìn)行。9結(jié)果計(jì)算和表示試樣中咪草煙含量X按式（1）計(jì)算：（C-C0）VX=(1)m式中：X試樣中咪草煙的含量，mg/kg；3 DB15/T 26022022C待測(cè)液中咪草煙的濃度，g/mL；C0試劑空白；V試樣溶液定容體積，mL；m試樣的稱(chēng)樣量，g。注：測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，保留兩位有效數(shù)字。10精密度在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)重復(fù)性條件下獲得的2次獨(dú)立測(cè)定