丹參有效成分的分離與提取丹參有

1、丹參有效成分的分離與提取【關(guān)鍵詞】丹參；隱丹參酮；丹參酮IIA丹參為唇形科多年生草本植物，丹參的干燥根及根莖，主產(chǎn)于四川、安徽、 江蘇及河南等省。春秋兩季采挖，除去莖葉泥沙，須根曬干。其根莖短粗，頂 端有殘留莖基，根數(shù)條，長圓柱形，略彎曲，有的分枝并有須狀細(xì)根，長10- 20 cm,直徑0.3-1 cm,表面棕紅色或暗棕紅色，粗糙，具縱皺紋，老根外皮 疏松，多顯紫棕色，常呈鱗片狀脫質(zhì)硬而脆，斷面疏松，有裂隙或略平整而致 密，皮部棕紅色，本部灰黃色或紫色，導(dǎo)管束黃白色，呈放射狀排列，氣微， 味微苦澀。丹參有效成分主要有脂溶性非醌色素類化合物，如丹參酮IIA、丹參 酮IIB、隱丹參酮及其異構(gòu)體。水

2、溶性酚酸類成分如原兒茶醛、丹參素。其中， 隱丹參酮是抗菌的有效成分。1材料與方法1.1材料與試劑丹參粉末，乙醇，苯，氧化鋁，丙酮。1.2實(shí)驗方法取丹參粉末，用乙醇熱煮，煮沸15-20 min,用苯洗脫過 濾，洗脫液經(jīng)氧鋁(III級)層析，再用苯洗脫，樣品呈紫色樣段，橙紅色樣段， 暗紅色樣段，取橙紅色樣段經(jīng)過苯洗脫，再用丙酮洗脫，呈板狀結(jié)晶，為丹參 酸甲脂，呈橙紅色結(jié)晶，為隱丹參酮。將暗紅色樣段，氧化鋁棒置容器中，經(jīng) 苯洗脫，再用丙酮洗脫，呈暗紅色結(jié)晶，為丹參酮IIA。隱丹參酮與丹參酮IIA 為脂溶性成分，樣品的甲醇提取液，回收溶劑至干，殘渣溶于氯仿期濾，濾液 加水振搖靜止，取氯仿層濃縮至干，加

3、氯仿顯色。原兒茶醛、丹參素為水溶性 成分，用熒光法鑒別。取本品粉末，置白瓷板上，于紫外燈(365 ram)下檢視， 呈灰色熒光，即原兒茶醛。薄層色譜法：樣品水提液，濃縮后，以80%醇沉，用 鹽酸調(diào)值，pH 2,乙醚萃取，醚提取液揮去乙醚，用乙醇溶液，點(diǎn)于硅膠G(或H)羧甲基纖維素鈉薄層板上，先以苯一乙酸一乙甲酸(4 : 4 : 1)展開1 cm取 出揮溶劑再以苯一乙酸乙酯一甲酸(80 : 50 : 8)展開，以三氯化鐵一鐵氤化鉀 (1 : 1)試劑顯色。0. 2. 1指紋圖譜參照高效液相色譜法(中國藥典2000版1部VID)測 定。系統(tǒng)適用性試驗十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，流速0.5mL/m

4、in，檢測波長為281 nm，理論板數(shù)按原兒茶醛峰計算，應(yīng)不低于5000,見表1、表2。 表1二元梯度洗脫參數(shù)表2特征峰相對保留時間表 3特征峰標(biāo)準(zhǔn)相對峰面 積1.2.2對照品溶液的制備取原兒茶醛對照品適量，精密稱定，加甲醇制 成相當(dāng)于每2 mL含原兒茶醛0.01 mg的溶液，搖勻，即得。1.2.3供試品溶液的制備取含量測定項下供試品溶液。1.2.4測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10 mL,注入液相色譜儀，根據(jù)色譜峰面積，按照指紋圖譜技術(shù)要求測定，即得。1.2.5確定10個特征峰1號峰為丹參，2號峰為原兒茶醛（參照物S）， 10號峰為丹酚酸B。指紋圖譜見圖1。圖1丹參HPLC指紋圖譜

5、1.2.6丹參素的鑒別0. 2. 6. 1取本品粉末5 g，加水50 mL,煎煮15-20 min,放冷，濾過， 濾液置水浴上濃縮至粘稠狀，放冷后，加乙醇3-5 mL使溶解，濾過，取濾液數(shù) 滴，點(diǎn)于濾紙上。午后，置紫外線燈（365 nm）下觀察，顯亮藍(lán)灰色熒光，將濾 紅懸掛在濃氨溶液瓶中（不接觸液面），20 min后取出，置紫外燈（365 nm） K觀 察，顯亮藍(lán)灰色熒光。0.2.6. 2取前項下的濾液0.5 mL，加三氯化鐵液1-2滴，顯污綠色。1.2. 6. 3取本品粉末1 g加乙醇0. 5 mL,置具塞試管中，振搖，放置1 h， 濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯1 mL溶解作為供試品溶液。

6、另取，丹參對照 藥材1 g，同法制成對照液藥材溶液再取丹參酮IIA對照品加醋酸乙酯制成每1 raL含2 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2000年版的 1部附錄VIB）試驗，吸取上述3種溶液各5 mL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上， 以苯一醋酸乙酯（19 : 1）為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對 照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)；在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯 相同的暗紅色斑點(diǎn)。1.2.7原兒茶醛的鑒別1.2.7.1樣品的水提液濃縮用鹽酸調(diào)至pH 2，乙醚萃取，醚提液揮去乙醚，用乙醇溶解，點(diǎn)于硅膠G（或H） CMC板上，以苯乙酸乙酯甲醇（80: 50： 8）

7、展開。以氯化鐵鐵氤化鉀（1 : 1）試劑顯色。1.2. 7.2樣品前項下的制備點(diǎn)樣液。點(diǎn)于硅膠H CMC板上，以（I）苯 乙酸乙酯甲酸（80 : 70 : 8）或（II）氯仿丙酮甲醇甲酸（70 : 20 : 15 : 5）展 開，紫外燈下檢視后噴三氯化鐵、鐵氤化鉀（1:1）試劑，再將薄板置0. 1MHCL 中泡數(shù)分鐘，流水沖去酸液顯色。2實(shí)驗結(jié)果2.1化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖2。圖2參照高效液相色譜法（中國藥典2000版1部VID）測定。2.2系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相；甲醇水醋酸 （8 : 91 : 1）為流動相；檢測波表為281 nm。理論板數(shù)按丹參素峰計算，應(yīng)低于 2000。2.3

8、對照品溶液的制備精密稱定丹參素鈉對照品適量，加甲醇制成相當(dāng)于每1 mL含丹參0. 15 mg的溶液(1 mL丹參素鈉相當(dāng)于0. 900 mg丹參素)，搖 勻，即得。2. 4供試品溶液的制備精稱丹參藥材 5. 0 g加入30 mL，水浴回流2 h, 放冷，過濾精取濾液2 mL,甲醇定容25 mL，搖勻，即得。1.5測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 mL,注入液相 色譜儀，根據(jù)色譜圖的峰面積，以外標(biāo)法進(jìn)行計算，即得。本品含丹參素(C9H1005)不得少于1%；按中國藥典2000版丹參中丹參 酮IIA含量測定法測定，丹參酮IIA(C9H1803)不得少子0. 20%。3討論中藥的提取應(yīng)

9、該嚴(yán)格按照具體藥品品種的提取工藝而進(jìn)行。得到的成品必 須按標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗，符合持量標(biāo)準(zhǔn)的才能用于藥品制劑的生產(chǎn)。丹參的分離提取要注意原料的選擇，原料要優(yōu)質(zhì)，測量光密度選擇原料較 可靠。丹參的得取生產(chǎn)現(xiàn)場內(nèi)選題保證部門應(yīng)派現(xiàn)場質(zhì)量管理員進(jìn)行現(xiàn)場控制。 做好生產(chǎn)現(xiàn)場監(jiān)控記錄，轉(zhuǎn)序、藥品檢驗、取樣、異常情況處置及現(xiàn)場物品定 置、定位等的管理，從而保證最終產(chǎn)品檢驗合格，保證產(chǎn)品質(zhì)量和穩(wěn)定性。本實(shí)驗中，從中藥丹參中提取得到多種菲醌衍生物，丹參醌結(jié)構(gòu)己具有菲 醌母核，但生源都屬于二萜類，丹參中有效成分之間溶解各不相同，故提取方 法也多種多樣。一般選用甲醇、乙醇作為提取溶劑，把不同的有效成分提取出 來，濃縮后

10、再進(jìn)行提取分離。它的質(zhì)譜特征是分子、離子峰為基峰；游離醌依 次脫去2個分子C0,得到M CO及M 2C0的強(qiáng)峰以及它們的雙電荷峰，見圖3。圖3由于丹參的有效成分都在酚羥基，故具有酸性，易溶于堿性溶劑。分子中 酚羥基的數(shù)目及位置不同，酸性強(qiáng)弱也不一樣。羥基數(shù)目越多，酸性越強(qiáng)。如 用堿性不同和水溶液；15%碳酸氫氧鈉溶液、5%碳酸鈉溶液、1%氫氧化鈉溶液、 5%氫氧化鈉溶液，依次提取，其結(jié)果為酸性較強(qiáng)的化合物被碳酸氫鈉提取，酸 性較弱的合物被酸鈉提取，酸性更弱的化合物被 1%的氫氧化鈉提取，酸性最弱 的化合物只能溶于5%的氫氧化鈉。由于氧原子的存在，其它具有微弱的堿性， 能溶于H2S04,成鹽后再

11、轉(zhuǎn)邁出有離子，并伴有顏色的改變。在本實(shí)驗中，成功提取了丹參的有效成分隱丹參酮和丹參酮IIA。通過薄層層析法，先用苯洗脫丹參粉末，呈現(xiàn)出3種不同和顏色樣段；再用丙酮洗脫后， 呈現(xiàn)出橙紅色結(jié)晶的部分即為隱丹參酮，呈暗紅色結(jié)晶的為丹參酮IIA。二者均 為脂溶液性成分。提取出的原兒茶酸和丹參素為水溶性成分。在紫外燈下顯灰色熒光和即為 原兒茶酸，其含有較多酚羥基，可與體內(nèi)的葡萄糖醛酸和硫酸發(fā)生體內(nèi)藥物代 謝和第II相反應(yīng)，生成丹參素硫酸結(jié)合物與原兒茶醛葡萄糖醛結(jié)合物。利用熒光法可鑒別丹參又一有效成分丹參素。先在紫外線燈下顯亮藍(lán)色熒 光，濾紙懸掛在濃氨溶液瓶中，20 min后紫外燈下顯亮藍(lán)綠色熒光，其濾液

12、加 三氯化鐵后顯污綠色。以上2種水溶性成分當(dāng)遇水或乙酸時易溶解、分離。本實(shí)驗中提取和分離了丹參中的有效成分原兒茶醛、丹參素、丹參酮IIA、 隱丹參酮。臨床上提取有效成分制劑的藥物主要有丹參注射液、冠心寧、復(fù)方 丹參片、復(fù)方丹參滴丸等。其有效成分的成功提取與分離加快了利用丹參類藥 物醫(yī)治心腦血管疾病和步伐，以此理論精制的有關(guān)藥物也相繼問世。這類藥物 可以經(jīng)口腔粘膜及舌下粘膜吸收，直接進(jìn)入人體血液循環(huán)。同時減少了胃腸道 消化液和肝臟首過效應(yīng)對其有效成分的降解和破壞，大大提高了人體生物利用 度，充分體現(xiàn)高效之特點(diǎn)。用丹參制成的藥物直接或間接降低血小板凝聚性、 血液中和甘油三酯和膽固醇的含量，抑制低密

13、度脂蛋白的形成，有效地抑制內(nèi) 原性膽固醇的合成，從而降低了總膽固醇的含量，擴(kuò)張血管保護(hù)內(nèi)膜，改善供 血供氧，增強(qiáng)心肌收縮力，有效減少冠脈血管堵等癥狀，使冠心病得到良好的 控制和減輕1-4。丹參有效成分提取與分離的先進(jìn)技術(shù)還有待于進(jìn)一步的討論和研究。筆者 從接觸丹參有效成分的文獻(xiàn)整理到研究總結(jié)過程中，深深的體會到丹參制劑在 臨床上獲得充分的驗證，獲得醫(yī)生和病人的一致高度評價。又反過來，對其進(jìn) 行更深入的研究，這一過程本身，已經(jīng)形成對中藥有效成分和分離與提取研究 的一條通道，也使中藥現(xiàn)代化之途具有更深遠(yuǎn)的意義。研究中藥的有效成分， 既要注意發(fā)掘、整理中國醫(yī)藥學(xué)遺產(chǎn)，又要運(yùn)用現(xiàn)代科學(xué)知識和方法，通過對 中藥有效成分和研究，可以發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)新穎或新的用機(jī)理的活性物質(zhì)，并以此為 先導(dǎo)化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造或修飾，從中找出高效、低毒的新藥；也可為原藥材 的適時采集、正確加工、控制質(zhì)量、安全使用等方面提供科學(xué)依據(jù)；還可以通