HbA1c行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)全面解讀

1、HbA1c行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)全面解讀目錄一、HbA1c檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化意義與進(jìn)展二、HbA1c行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求三、HbA1c檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化現(xiàn)狀一 HbA1c檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化的意義與進(jìn)展糖化血紅蛋白（HbA1c）相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)成人血紅蛋白（Hb）通常由HbA（97%）、HbA2（%）和HbF（%）組成。對(duì)HbA進(jìn)行色譜分析發(fā)現(xiàn)了幾種次要血紅蛋白，即：HbA1a、HbA1b和HbA1c，統(tǒng)稱為HbA1，它們的糖基化位點(diǎn)是鏈N末端的纈氨酸殘基。沒有連接糖類的血紅蛋白稱為HbA0。血紅蛋白組成HbA1cHbA1c是糖化血紅蛋白的主要組成成分,占總糖化血紅蛋白的60%,目前臨床定量測(cè)定及應(yīng)用的是HbA1c結(jié)果。HbA1c由葡萄糖的游離

2、醛基與HbA的鏈N末端纈氨酸的氨基經(jīng)非酶促結(jié)合反應(yīng),先形成不穩(wěn)定的Schiff堿(醛亞胺),然后經(jīng)過Amadori(葡糖胺)重排,最后形成穩(wěn)定的酮胺化合物,糖化血紅蛋白的個(gè)體內(nèi)生物學(xué)變異小于2%。反應(yīng)過去6-8周的平均血糖濃度，可為評(píng)估血糖的控制情況提供可靠的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。HbA1c為糖尿病患者心血管事件的獨(dú)立預(yù)測(cè)危險(xiǎn)因素。糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)2010年美國(guó)糖尿病學(xué)會(huì)（ADA）推薦糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)1、HbA1c6.5%（48mmol/mol）?；?、FPG126mg/dl（）?？崭苟x是至少8小時(shí)沒有進(jìn)食熱量?；?、OGTT試驗(yàn)兩小時(shí)血漿葡萄糖200mg/dl（）.該試驗(yàn)應(yīng)遵循WHO要求，服用75g葡萄

3、糖的糖水?；?、在伴有典型的高血糖或高血糖危象癥狀的患者，隨機(jī)血糖200mg/dl（）無明確高血糖癥時(shí)，應(yīng)通過重復(fù)檢測(cè)來證實(shí)標(biāo)準(zhǔn)1-32010年糖尿病診療指南正式確定將HbA1c作為糖尿病診斷的一種方法，診斷界值為6.5%如無明確高血糖，則HbA1c與血糖檢測(cè)應(yīng)通過重復(fù)檢測(cè)來證實(shí)將HbA1c 5.7%-6.4%的患者歸類為“糖尿病高危人群”HbA1c（糖化血紅蛋白）患者無需準(zhǔn)備（任何時(shí)間段，無需空腹）標(biāo)本穩(wěn)定性：非常好生物學(xué)變異?。簜€(gè)體內(nèi)生物學(xué)變異小于2.0%閾值與眼底病變風(fēng)險(xiǎn)高度相關(guān)，比FPG提早預(yù)測(cè)當(dāng)結(jié)果是7.0%時(shí)，變化范圍為0.5%（6.5-7.5%）相對(duì)來講不受急性的血糖波動(dòng)的影響中

4、國(guó)2型糖尿病防治指南（2010版）原因1：提出的診斷切點(diǎn)（6.5%）是否適用于中國(guó)人群有待驗(yàn)證未將HbA1c列入糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)原因2：我國(guó)HbA1c測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)化程度不夠，各實(shí)驗(yàn)室間結(jié)果差異較大，如果采用HbA1c診斷糖尿病必然會(huì)造成很高的漏診率和誤診率鑒于HbA1c檢測(cè)在我國(guó)尚不普遍，檢測(cè)方法的標(biāo)準(zhǔn)化程度不夠，測(cè)定HbA1c的儀器和質(zhì)量控制尚不能符合目前糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)的要求。本指南仍不推薦在我國(guó)采用HbA1c診斷糖尿病。但對(duì)于用標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)方法，并有嚴(yán)格質(zhì)量控制，正常參考值在%-6.0%的醫(yī)院，HbA1c6.5%可作為診斷糖尿病的參考。糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)：以數(shù)字形式參與臨床評(píng)估美國(guó)I型糖

5、尿病控制及并發(fā)癥試驗(yàn)（DCCT ）英國(guó)II型糖尿病控制及并發(fā)癥關(guān)系研究（UKPDS ）表明：糖化血紅蛋白是糖尿病長(zhǎng)期血糖控制的最佳評(píng)估指標(biāo)微血管并發(fā)癥HbA1c1%糖化血紅蛋白控制的越好，糖尿病患者的預(yù)后越好14%14%21%21%心肌梗塞14%21%糖尿病相關(guān)的死亡37%HbA1c檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化至關(guān)重要若HbA1c檢測(cè)應(yīng)用于臨床，需實(shí)驗(yàn)室測(cè)定結(jié)果具有跨時(shí)空、跨檢測(cè)系統(tǒng)的一致、可比性：才能建立起普遍可用的參考區(qū)間，而不是某個(gè)具體方法的參考范圍才能夠有效地應(yīng)用循證醫(yī)學(xué)和檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)實(shí)踐才可以合并分析、比較不同醫(yī)學(xué)中心的研究資料，促進(jìn)醫(yī)學(xué)研究和研究成果的轉(zhuǎn)化 標(biāo)準(zhǔn)化工作是實(shí)現(xiàn)臨床實(shí)驗(yàn)室測(cè)定結(jié)果可比性的關(guān)鍵

6、目前糖化血紅蛋白測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)化最著名的是美國(guó)國(guó)家糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃（National Glycohemoglobin Standardization Program，NGSP）國(guó)際臨床化學(xué)和檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)聯(lián)合會(huì)（International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine,IFCC）糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃NGSP糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化1、NGSP成立1996年美國(guó)國(guó)家糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃（National Glycohemoglobin Standardization Program，NGSP）替代了美國(guó)臨床化學(xué)學(xué)會(huì)（AA

7、CC）成立的糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)，7月開始工作。NGSP糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化2、NGSP標(biāo)準(zhǔn)化對(duì)廠商的測(cè)定方法進(jìn)行校準(zhǔn)，使廠商實(shí)驗(yàn)室糖化血紅蛋白結(jié)果和NGSP網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果具有可比性；廠商確認(rèn)他們的產(chǎn)品，也和NGSP的網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果具有可比性；各臨床實(shí)驗(yàn)室參加室間評(píng)估，對(duì)具有NGSP實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)定值的新鮮全血樣品檢測(cè)，驗(yàn)證他們?nèi)粘?bào)告的結(jié)果可比性。NGSP對(duì)實(shí)驗(yàn)室的認(rèn)證由NGSP的二級(jí)參考實(shí)驗(yàn)室來對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行認(rèn)證工作得到認(rèn)證的實(shí)驗(yàn)室所測(cè)結(jié)果是可靠的認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)：逐步提高認(rèn)證有效期：1年我國(guó)目前有近20家實(shí)驗(yàn)室得到認(rèn)證IFCC糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化1、IFCC1995年IFCC成立HbA1c標(biāo)準(zhǔn)化工作組

8、，旨在建立具有高計(jì)量學(xué)水準(zhǔn)的參考系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)檢測(cè)的統(tǒng)一國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)展和確認(rèn)了2個(gè)候選參考方法和HbA1c、HbA0（非糖化血紅蛋白）參考物，作為全球可比性分析準(zhǔn)確度的基礎(chǔ)。首先確定HbA1c被測(cè)量-糖化部分-鏈N-纈氨酰-1-果糖基血紅蛋白（HbA1c）可被IFCC參考測(cè)量程序特異地測(cè)量，所以計(jì)量上可溯源至具有“毫摩爾每摩爾（mmol/mol）”計(jì)量單位某物質(zhì)組分。IFCC參考測(cè)量系統(tǒng)-發(fā)布了參考物質(zhì)，是人全血分離的血紅蛋白-發(fā)表了檢測(cè)人全血中HbA1c的IFCC參考方法-實(shí)施參考檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的網(wǎng)絡(luò)-在IFCC參考檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室和NGSP實(shí)施比較研究-產(chǎn)生二級(jí)參考物質(zhì)，分發(fā)給廠商和實(shí)驗(yàn)室，使其方法校正

9、至IFCC參考系統(tǒng)地區(qū)標(biāo)準(zhǔn)化和國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化的區(qū)別NGSP/JDS/Mono-S美國(guó)/日本/瑞典IFCC級(jí)別 地區(qū)級(jí)糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃國(guó)際糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃國(guó)內(nèi)指南否指南：標(biāo)準(zhǔn)化唯一有效的參考系統(tǒng)原理非特異性，色譜峰識(shí)別，HbA1c和其他成分同時(shí)檢出特異性檢測(cè)，通過參考方法(HPLC-ESI/MS,HPLC-CE)檢測(cè)HbA1c分子標(biāo)準(zhǔn)品基于DCCT參考值得出的標(biāo)準(zhǔn)品根據(jù)純化的HbA1c和HbA0得出參考物質(zhì)，制成標(biāo)準(zhǔn)品CAP SURVEY (mean 2SD)2003年，99%實(shí)驗(yàn)室以HbA1c報(bào)告結(jié)果，室間CV 5%， 測(cè)定值與靶值的偏倚 0.8%HbA1c國(guó)內(nèi)、外變異度對(duì)比靶值：5.

10、4 最大值：6.3 最小值：4.6 變異系數(shù)：3.5我國(guó)室間質(zhì)評(píng)CAP能力驗(yàn)證靶值：5.5最大值：7.2最小值：3.9變異系數(shù)：8.41 所有儀器組 2 Abbott Architect System/Aeroset組 3 Bio-Rad HPLC組 4 TOSOH G7組 5 Drew DS5/Bio-Rad Diastat組 6 其它儀器組 7 Primus HPLC組 8 NycoCard Reader II組 9 ARKRAY HA-8160組 10 Beckman Synchron Systems組 11 Olypus AU Systems組 12 Roche COBAS,Roche

11、/Hitachi組 13 惠中MQ-2000組 第一階段 第二階段項(xiàng)目目的：促進(jìn)HbA1c在我國(guó)廣泛和正確使用，促進(jìn)HbA1c檢測(cè)方法的標(biāo)準(zhǔn)化在全國(guó)30個(gè)省會(huì)城市和直轄市開展醫(yī)務(wù)工作者培訓(xùn)在全國(guó)30個(gè)省份的59個(gè)城市展開展醫(yī)務(wù)工作者培訓(xùn)會(huì)議同步在全國(guó)31個(gè)省份開展患者面授培訓(xùn)項(xiàng)目目標(biāo)：覆蓋全國(guó)89個(gè)城市，培訓(xùn)醫(yī)務(wù)工作者約1.8萬人。面授培訓(xùn)糖尿病患者約2萬人，媒體宣傳覆蓋全國(guó)糖尿病患者約30萬人中國(guó)糖化血紅蛋白教育計(jì)劃二HbA1c行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制流程分析前控制樣品的采集、運(yùn)送、接收和保存分析中控制人員：培訓(xùn)儀器和試劑：管理、性能評(píng)價(jià)文控：操作規(guī)程、記錄質(zhì)控：IQC、EQA分析后控

12、制結(jié)果報(bào)告、解釋、與臨床診斷的符合程度樣品采集、處理和儲(chǔ)存檢測(cè)樣品不受飲食和采血時(shí)間的影響按照適用于臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的常規(guī)方法采集靜脈血，末端毛細(xì)血管血一般情況下，全血樣品在4儲(chǔ)存，可以穩(wěn)定1周在-70或更低溫度可以長(zhǎng)期儲(chǔ)存，至少穩(wěn)定1年以上，但不宜在-20長(zhǎng)期儲(chǔ)存各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有樣本采集、運(yùn)送、接收（拒收）和儲(chǔ)存的具體要求并記錄任何對(duì)樣品的不當(dāng)處理，如置于高溫環(huán)境，可引入大量未知干擾，干擾程度取決于所用方法影響檢測(cè)質(zhì)量的因素人員：能力參差不齊室內(nèi)質(zhì)控：少做、不做校準(zhǔn)：不能定期、定時(shí)校準(zhǔn)，不使用配套校準(zhǔn)品試劑：色譜柱（適用時(shí)）：超限使用儀器：不能定期維護(hù)、保養(yǎng)使用方法種類多，有的方法沒有進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化認(rèn)

13、證檢測(cè)方法的原理不同方法測(cè)定糖化血紅蛋白不同的組分HbA1c、HbA1（A1a + A1b + A1c）或總糖化血紅蛋白目前皆以HbA1c或等同于HbA1c來報(bào)告結(jié)果原理電荷不同離子交換色譜法電泳結(jié)構(gòu)不同免疫法親和層析法、酶法6.1 分析系統(tǒng)選擇6.1.1 應(yīng)選用測(cè)定結(jié)果可溯源至IFCC參考方法的分析系統(tǒng),包括儀器、試劑及校準(zhǔn)物。例如:獲得NGSP認(rèn)證。可選用專用糖化血紅蛋白分析儀,或全自動(dòng)生化、免疫分析儀。6.1.2 NGSP認(rèn)證的分析系統(tǒng)(方法)有效期為1年。注:查詢網(wǎng)址: /docs/methods.pdf。6.1.3 不同分析系統(tǒng)干擾因素是不同的,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)知曉所選分析系

14、統(tǒng)可能存在的干擾因素。注1:常見的變異及衍生血紅蛋白對(duì)HbA1c測(cè)定的影響參見 /factors.asp。注2:多數(shù)POC(point-of-care)方法的精準(zhǔn)性不能滿足臨床需求,目前不能用于糖尿病的診斷。IFCC參考方法特異測(cè)定HbA1c：-鏈N-纈氨酰-1-果糖基血紅蛋白（HbA1c） 谷氨酸內(nèi)切酶HbA1c六肽HbA0六肽測(cè)定HbA1c國(guó)際公認(rèn)的參考方法為IFCC推薦的高效液相色譜串聯(lián)電噴霧電離一級(jí)質(zhì)譜或高效液相色譜串聯(lián)毛細(xì)管電泳。測(cè)定方法主要分為三步:1、首先制備溶血液;2、采用蛋白內(nèi)切酶Glu-C將溶血液酶解消化,得到糖基化和非糖基化的鏈N 末端六肽(HbA1c六肽

15、 HbA0 六肽);3、采用高效液相色譜串聯(lián)電噴霧電離一級(jí)質(zhì)譜或高效液相色譜串聯(lián)毛細(xì)管電泳對(duì)HbA1c六肽和HbA0 六肽進(jìn)行定量分析。參考方法流程溶血液制備酶解HPLC串聯(lián)毛細(xì)管電泳HPLC串聯(lián)質(zhì)譜HbA1c測(cè)定指定比對(duì)方法(Designated Comparison Method,DCM)1、美國(guó)國(guó)家糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃(NGSP)使用離子交換高效液相色譜法為參考方法,目前為HbA1c測(cè)定的指定比對(duì)方法。方法原理主要基于HbA1c與其他組分所帶的電荷不同,分別洗脫檢出,由于受技術(shù)條件的限制,不能特異測(cè)定HbA1c,有其他組分同時(shí)檢出,因此,測(cè)定結(jié)果高于IFCC結(jié)果。NGSP高于IFCCI

16、FCC參考實(shí)驗(yàn)室及NGSP參考實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過幾年的比對(duì),得出結(jié)論:NGSP測(cè)定結(jié)果與IFCC測(cè)定結(jié)果之間存在非常確定的相關(guān)性,可用回歸方程表為:NGSP-HbA1c =0.0915 (IFCC-HbA1c)+2.15%(r2=0.998),因此,現(xiàn)行的NGSP結(jié)果可以溯源到IFCC參考系統(tǒng),即可以溯源到溯源鏈的最高等級(jí)國(guó)際單位(SI單位)制。2、另外還有兩個(gè)HbA1c測(cè)定的指定比對(duì)方法,一個(gè)為日本的KO500方法,另一個(gè)為瑞典的MonoS方法。三個(gè)指定比對(duì)方法測(cè)定結(jié)果與IFCC測(cè)定結(jié)果之間存在非常確定的相關(guān)性,皆可用回歸方程表示,方法特異性從高到低的順序依次為:IFCC方法、瑞典方法、日本方法、美

17、國(guó)方法,因此,測(cè)定結(jié)果從高到低的順序依次為:美國(guó)結(jié)果、日本結(jié)果、瑞典結(jié)果、IFCC結(jié)果。IFCC 結(jié)果與比對(duì)方法結(jié)果的轉(zhuǎn)換指定比較方法由IFCC結(jié)果導(dǎo)出比對(duì)方法結(jié)果由比對(duì)方法結(jié)果導(dǎo)出IFCC結(jié)果NGSP(USA)NGSP=(0.09148IFCC)+2.152IFCC=(10.93NGSP)23.50 JDS/JSCC（Japan）JDS=(0.09274IFCC)+1.724IFCC=(10.78JDS)18.59 Momo-S（Swedish）Mono-S=(0.09890IFCC)+0.884IFCC=(10.11Mono-S)8.94 IFCC與指定比對(duì)方法結(jié)果之間的關(guān)系HbA1c-N

18、GSP = 0.0915 HbA1c-IFCC + 2.15% (r2= 0.998)IFCC 結(jié)果與比對(duì)方法結(jié)果的關(guān)系IFCC HbA1c (mmol/mol) NGSP HbA1c(%) JDS HbA1c(%) Swedish HbA1c(%) eAG(mmol/l) 42 6 5.8 50歲 5.3 7.0 53 76.6 6.13 8.6 64 87.7 7.2 10.2 7598.7 8.3 11.8 86109.7 9.413.4 971110.7 10.514.9 1081211.7 11.6 16.5 IFCC參考系統(tǒng)的地位及應(yīng)用IFCC參考系統(tǒng)是HbA1c測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)化唯一有效

19、的參考系統(tǒng)。廠商應(yīng)提供可溯源至IFCC參考方法的證明。NGSP單位(% ) / IFCC (mmol /mol)的雙重報(bào)告NGSP&IFCC 溯源性證書6.2 分析系統(tǒng)性能指標(biāo)6.2.1 報(bào)告結(jié)果以“HbA1c”或相當(dāng)于“HbA1c”報(bào)告結(jié)果。6.2.2 精密度室內(nèi)變異系數(shù)(CV)小于3%,以小于2%為宜。注1:目前許多測(cè)定方法的室內(nèi)CV 小于2%。注2:只有控制室內(nèi)CV 小于2%,才能實(shí)現(xiàn)室間CV 小于3.5%。注3:HbA1c測(cè)定質(zhì)量目標(biāo):小于0.5% HbA1c。6.2.3 精密度實(shí)驗(yàn)方法分別采用不少于兩個(gè)水平的質(zhì)控物或樣品(高、低值),每天測(cè)定兩次(兩次時(shí)間間隔不少于兩小時(shí)),每次重復(fù)

20、測(cè)兩個(gè)結(jié)果,測(cè)定20個(gè)工作日,以20個(gè)工作日的80個(gè)結(jié)果計(jì)算平均值、標(biāo)準(zhǔn)差及變異系數(shù)。6.2.4 正確度與可接受參考值的差值在0.5% HbA1c范圍內(nèi),以控制在0.3% HbA1c范圍內(nèi)為宜。正確度驗(yàn)證方法,包括但不限于以下方式:參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)(能力驗(yàn)證)計(jì)劃;采用適當(dāng)?shù)挠凶C標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì);與運(yùn)行經(jīng)過認(rèn)證分析系統(tǒng)的有資質(zhì)實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比對(duì)。只有無法得到驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)方法的其他替代材料或過程時(shí),才宜使用廠商產(chǎn)品校準(zhǔn)物或正確度控制物。6.3 分析系統(tǒng)使用6.3.1 實(shí)驗(yàn)室在準(zhǔn)備使用一個(gè)新的分析系統(tǒng)(或新儀器、新試劑)測(cè)定臨床樣品前,應(yīng)對(duì)系統(tǒng)性能進(jìn)行驗(yàn)證。6.3.2 使用經(jīng)過認(rèn)證的分析系統(tǒng),如廠商給出

21、的性能指標(biāo)不符合要求時(shí),應(yīng)對(duì)系統(tǒng)性能進(jìn)行驗(yàn)證; 符合要求時(shí),只驗(yàn)證正確度即可。6.3.3 使用未經(jīng)認(rèn)證的封閉系統(tǒng)或開放系統(tǒng)1,應(yīng)對(duì)分析系統(tǒng)性能進(jìn)行充分驗(yàn)證,性能指標(biāo)除要求外,還應(yīng)包括干擾因素、測(cè)量范圍等。6.3.4 不宜使用組合系統(tǒng)2。注： 1 試劑和校準(zhǔn)物來自同一廠商,儀器另選。 2 試劑、校準(zhǔn)物和儀器分別來自不同廠商,由實(shí)驗(yàn)室自己組合。實(shí)驗(yàn)室管理文件的基本內(nèi)容實(shí)驗(yàn)室應(yīng)認(rèn)真實(shí)現(xiàn)質(zhì)量管理，按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)做好實(shí)驗(yàn)室管理文件：管理文件至少應(yīng)包括以下基本內(nèi)容：ISO 15189醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法（衛(wèi)醫(yī)發(fā)（2006）73號(hào)）臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程編寫要求（WS/T227-2002）廠家的操作指南等人員

22、要求質(zhì)量控制要求檢測(cè)系統(tǒng)操作規(guī)程樣本采集、樣本處理和儲(chǔ)存結(jié)果報(bào)告儀器和試劑實(shí)驗(yàn)室生物安全記錄7.實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定標(biāo)準(zhǔn)操作程序,至少包括以下內(nèi)容: 項(xiàng)目名稱; 方法學(xué)原理; 樣本(采血管/抗凝劑、儲(chǔ)存); 校準(zhǔn)程序(校準(zhǔn)日期間隔、校準(zhǔn)方、校準(zhǔn)方法); 室內(nèi)質(zhì)量控制程序(參見附錄C); 樣品的測(cè)定程序; 干擾因素; 參考區(qū)間(范圍); 試劑; 色譜柱(可測(cè)定樣品數(shù)量,適用于使用色譜柱的方法); 維護(hù)程序。室內(nèi)質(zhì)量控制室內(nèi)質(zhì)控每個(gè)測(cè)定日的開始和結(jié)束均應(yīng)做質(zhì)控分析應(yīng)同時(shí)測(cè)定至少2個(gè)不同水平（高、低值）的質(zhì)控品凍干粉質(zhì)控品在更換試劑或色譜柱時(shí)可能會(huì)有基質(zhì)效應(yīng)，程度取決于所用方法更換試劑、校準(zhǔn)物、儀器設(shè)備的關(guān)

23、鍵配件或質(zhì)控值超出質(zhì)控限，應(yīng)再做質(zhì)控室間質(zhì)評(píng)：測(cè)定質(zhì)量的監(jiān)測(cè)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（能力驗(yàn)證，PT）計(jì)劃是目前驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室測(cè)定結(jié)果是否具有可比性的有效手段:室間質(zhì)評(píng)樣品應(yīng)與臨床樣品同樣對(duì)待是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量改進(jìn)的積極組成部分保證HbA1c檢測(cè)質(zhì)量實(shí)驗(yàn)室從四個(gè)質(zhì)量環(huán)節(jié)保證HbA1c測(cè)定結(jié)果質(zhì)量：選用一個(gè)可靠的分析系統(tǒng)，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)可溯源至IFCC參考系統(tǒng)規(guī)范化操作，整個(gè)檢測(cè)過程應(yīng)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行知曉HbA1c檢測(cè)的干擾因素參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)：目前為止國(guó)際通用的評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室測(cè)定結(jié)果可靠性從而改進(jìn)檢測(cè)質(zhì)量的有效手段HbA1c報(bào)告現(xiàn)狀HbA1c的結(jié)果報(bào)告還沒有實(shí)現(xiàn)全球標(biāo)準(zhǔn)化SI (mmol/mol)及NGSP (%

24、)mmol/mol英國(guó) 意大利 德國(guó) 荷蘭加拿大 澳大利亞 新西蘭美國(guó)報(bào)告NGSP (%)單位及eAG（估算的平均血糖）我國(guó)有幾種報(bào)告方式NGSP (%)NGSP (%)+ eAGmmol/mol+ NGSP (%)NGSP與IFCC2007年: ADA、EASD、IFCC、IDF聯(lián)合聲明：HbA1c檢測(cè)結(jié)果將在全球范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)化，包括參考系統(tǒng)和結(jié)果報(bào)告全新的IFCC參考系統(tǒng)是HbA1c檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化唯一的參考系統(tǒng)在全球范圍內(nèi)，HbA1c結(jié)果應(yīng)采用SI單位（mmo/mol）以及NGSP單位（%）單位共同報(bào)告結(jié)果報(bào)告8.1 單位以NGSP的傳統(tǒng)單位%HbA1c報(bào)告糖化血紅蛋白測(cè)定結(jié)果,并同時(shí)報(bào)告IFC

25、C的國(guó)際單位制單位(mmol/mol)結(jié)果。NGSP的傳統(tǒng)單位與IFCC的國(guó)際單位制單位換算的回歸方程為: HbA1c(NGSP)=0.0915HbA1c(IFCC)+2.15%(適用范圍為:4%HbA1c-12%HbA1c)。以%HbA1c為單位的結(jié)果小數(shù)點(diǎn)后保留1位小數(shù)。如臨床需要,應(yīng)提供方法學(xué)名稱。8.2 參考區(qū)間HbA1c源于DCCT/UKPDS3)的參考區(qū)間為4%HbA1c -6%HbA1c(20 mmol/mol-42mmol/mol),實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)此參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證,如不適用,應(yīng)建立適用于自己實(shí)驗(yàn)室的參考范圍,并在報(bào)告中注明。7.4 異常結(jié)果的處理7.4.1 對(duì)于測(cè)定結(jié)果低于參考區(qū)

26、間下限或高于15%HbA1c(140mmoL/moL)的樣品應(yīng)進(jìn)行復(fù)查,并與臨床醫(yī)生溝通。7.4.2 對(duì)測(cè)定結(jié)果與臨床表現(xiàn)不符的樣品應(yīng)進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)。無論你的實(shí)驗(yàn)室采用什么方法檢測(cè)HbA1c，都應(yīng)該認(rèn)真學(xué)習(xí)Hb變異體對(duì)HbA1c檢測(cè)結(jié)果的影響。選擇HbA1c檢測(cè)產(chǎn)品時(shí)，一定要詳細(xì)了解具體的資料，閱讀廠商提供的說明書。使用免疫方法或酶法檢測(cè)HbA1c的實(shí)驗(yàn)室，最好能另外具有諸如離子交換HPLC的產(chǎn)品。它將在確定有無Hb變異體時(shí)發(fā)揮作用。對(duì)于正在使用離子交換HPLC的實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)有諸如免疫方法或酶法的產(chǎn)品備用。一旦在層析圖上出現(xiàn)確定為Hb變異體時(shí)，使用其他方法比較，并應(yīng)及時(shí)與臨床聯(lián)系。檢查患者的糖化

27、白蛋白、近期使用血糖儀自我監(jiān)視的資料和臨床表現(xiàn)等，防止發(fā)出錯(cuò)誤報(bào)告。針對(duì)我國(guó)情況，還有很多經(jīng)濟(jì)欠好的地區(qū)。特別要注意因營(yíng)養(yǎng)不良、近期有出血事例、近期有輸血的過程等。因?yàn)檫@些均會(huì)影響紅細(xì)胞的壽命。對(duì)于這樣的患者不應(yīng)使用HbA1c作為糖尿病診斷或監(jiān)視的指標(biāo)。應(yīng)該采取糖化白蛋白、果糖胺、以及直接葡萄糖檢測(cè)等項(xiàng)目替代，方能避免錯(cuò)誤診斷和延誤治療。HbA1c的結(jié)果的干擾非方法學(xué)特異的干擾因素紅細(xì)胞生存周期的異常：縮短紅細(xì)胞壽命的疾病使結(jié)果降低 溶血性貧血、大量失血、脾腫大、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性肝臟疾病等。引起紅細(xì)胞壽命增加的疾病使結(jié)果增高脾切除、再生障礙性貧血、缺乏維生素B12、腎損傷等。血紅蛋白病：特殊

28、的變異血紅蛋白干擾測(cè)定結(jié)果目前許多測(cè)定方法可以在一定程度上克服大部分常見的變異血紅蛋白的干擾,但仍有特殊的變異血紅蛋白干擾測(cè)定結(jié)果。藥物：維生素C和維生素E使結(jié)果降低，乙酰水楊酸鹽、慢性麻醉劑、羥基脲等使結(jié)果升高特殊時(shí)期：妊娠時(shí)血容量增加, 結(jié)果假性降低。非方法學(xué)特異的干擾因素疾病狀態(tài)：黃疸、高脂血癥，使結(jié)果假性升高進(jìn)展迅速的1型糖尿病，HbA1c不能真實(shí)反映急性血糖變化情況,測(cè)定結(jié)果假性降低其它因素：種族和年齡非方法學(xué)特異的干擾因素方法學(xué)特異的干擾因素血紅蛋白?。?變異血紅蛋白HbS、HbC、HbD和HbE等可使測(cè)定結(jié)果假性降低或升高,主要取決于變異血紅蛋白的種類和所采用的測(cè)定方法。衍生血紅

29、蛋白：-腎病患者可使血紅蛋白甲?；?，使結(jié)果升高。Schiff堿的干擾-Schiff堿是HbA1c形成過程的中間體,也稱“HbA1c前體”或“不穩(wěn)定的HbA1c”,主要干擾基于糖化與非糖化血紅蛋白所帶電荷不同原理的離子交換色譜法,可參照廠家操作說明自動(dòng)或手工去除Schiff堿的干擾。目前許多全自動(dòng)的測(cè)定方法已經(jīng)在很大程度上消除了Schiff堿的干擾,但個(gè)別樣品的干擾依然存在,會(huì)使測(cè)定結(jié)果假性升高,離子交換HPLC法亦包括在內(nèi),因此,應(yīng)仔細(xì)觀察測(cè)定結(jié)果圖譜。方法學(xué)特異的干擾因素三HbA1c檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化現(xiàn)狀1983年DCCT糖尿病控制和并發(fā)癥研究實(shí)驗(yàn)1996年NGSP國(guó)家糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃1995

30、年IFCC啟動(dòng)HbA1c標(biāo)準(zhǔn)化工作組，2002年完成參考系統(tǒng)建立2007年ADA/EASD/IDF/IFCC國(guó)際共識(shí)2013年 中國(guó)HbA1c實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指南2014年 中國(guó)HbA1c測(cè)定專家共識(shí)2015年 中國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)HbA1c檢測(cè)HbA1c檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)程確認(rèn) IFCC 參考系統(tǒng)是檢測(cè)“金標(biāo)準(zhǔn)”我國(guó)HbA1c標(biāo)準(zhǔn)化工作進(jìn)展基于IFCC推薦的LC-MS測(cè)定參考方法研制出HbA1c國(guó)家一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（GBW181、182、183）室間質(zhì)量評(píng)價(jià)樣本：凍干粉新鮮冰凍起草糖化血紅蛋白實(shí)驗(yàn)室測(cè)定指南衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)2011年關(guān)于HbA1c的專題研究工作得到了國(guó)家自然科學(xué)基金的支持改進(jìn)、完善EQA計(jì)劃我國(guó)Hb

31、A1c檢測(cè)室間質(zhì)量評(píng)進(jìn)步明顯方法實(shí)驗(yàn)室數(shù)平均數(shù)中位數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差變異系數(shù)%最大值最小值所有方法13105.415.39.427.7610.73.3免疫比濁1958.337.83.3酶法545.516.24.83低壓液相45.435.75.3高效液相色譜法-硼酸鹽親和法745.415.31.458.3295高效液相色譜法-離子交換法8615.385.3.325.959.94.5POCT-膠乳免疫法35.265.28.5510.465.84.7POCT-親和分離35.435.4.0毛細(xì)管電泳42.755.2

32、5我國(guó)HbA1c檢測(cè)EQA CV%統(tǒng)計(jì)儀器實(shí)驗(yàn)室數(shù)平均數(shù)中位數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差變異系數(shù)%最大值最小值所有儀器13105.415.39.427.7610.73.3Bio-Rad D-10375.0994.5Tosoh G81615.586.15.14ARKRAY HA-81601275.275.3.315.888.24.8Bio-Rad VariantII955.215.84.8ARKRAY HA-8180725.265.75Hitachi 系列生化分析儀665.335.38.448.266.13.3Tosoh G7565.476.34.7Beckman AU Systems505.285.3.377.016.14.16惠中MQ-2000PT485.666.35.1Primus HPLC465.345.65.1HbA1c(%)儀器實(shí)驗(yàn)室