甲型肝炎病毒IgM抗體測(cè)定ppt

1、甲型肝炎病毒IgM抗體測(cè)定ppt酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA法）將抗體(抗原)包被在固相表面后，按不同的步驟加入待測(cè)抗原(抗體)和酶標(biāo)抗體(抗原)，充分反應(yīng)后用洗滌的方法，使固相上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分離，洗去游離的酶標(biāo)抗體(抗原)，最后加入底物，根據(jù)酶對(duì)底物催化的顯色反應(yīng)程度，而對(duì)標(biāo)本中的抗原(抗體)進(jìn)行定性或定量。ELISA類型夾心法間接法測(cè)抗體競(jìng)爭(zhēng)法捕獲法捕獲法測(cè)IgM抗體血清中針對(duì)某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時(shí)存在，后者會(huì)干擾IgM抗體的測(cè)定。因此測(cè)定IgM抗本多用捕獲法。（1）包被抗體：用抗人鏈抗體包被固相載體上,形成固相抗人鏈;（2）加入病人的血清標(biāo)本;（3）

2、加入特異性抗原試劑;，（4）加入針對(duì)特異性抗原的酶標(biāo)抗體，（5）加底物顯色免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)一、基本結(jié)構(gòu)：四肽鏈結(jié)構(gòu) 由兩條相同的輕鏈（Light Chain）和兩條相同的重鏈（Heavy chain）通過鏈間二硫鍵連結(jié)形成。 分子式為：H2L2四條肽鏈兩端游離的NH2和COOH方向一致分別命名為N端和C端（一）輕鏈和重鏈輕鏈（L鏈） 鏈 鏈輕鏈決定型別 型 型正常人：2 ：1重鏈（H鏈）:根據(jù)其抗原性的差異，人類Ig的H鏈分為 鏈 鏈 鏈 鏈 鏈重鏈決定Ig類別 IgG IgA IgM IgD IgE捕獲法主要用于 血清中某種抗體亞型成分（如IgM）的測(cè)定。實(shí)驗(yàn)原理用抗人鏈抗體包被酶標(biāo)板，用以

3、捕獲血清中IgM類抗體，然后用特異性HAVAg與IgM抗體結(jié)合，再加酶標(biāo)抗HAV抗體，最后加底物顯色，顯色深淺與HAVIgM的含量成正相關(guān)。試劑盒組成1 抗- 鏈包被干板條 412 孔2 抗-HAVIgM 陰性對(duì)照 1 ml1 瓶3 抗-HAVIgM 陽性對(duì)照 1 ml1 瓶4 HA-Ag 2.6 ml1 瓶5 酶結(jié)合物 2.6 ml1 瓶6濃縮洗滌液 20 ml1 瓶（用蒸餾水 1：20 稀釋）7 顯色劑 A 3 ml1 瓶8 顯色劑 B 3 ml1 瓶9 終止液 3 ml1瓶操作步驟1將微孔條固定在支架上，按順序編號(hào)。2分別將待測(cè)標(biāo)本，陰、陽性對(duì)照100l（2滴）加入相應(yīng)的孔中，設(shè)空白對(duì)照

4、孔。置3720分鐘。3洗滌：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿各孔，靜置5秒，共三次，每次洗后均需扣干。4每孔加HAAg50l，酶結(jié)合物50l（空白對(duì)照除外），振蕩混勻，置3720分鐘。5洗滌：重復(fù)上述36顯色：每孔加顯色劑A液50l，再加顯色劑B液50l，振蕩混勻，置3715分鐘。l結(jié)果判定酶標(biāo)儀讀數(shù)：450nm波長630nm副波長讀數(shù)， ( 陰性對(duì)照 OD 小于 0.05 以 0.05 計(jì)算)結(jié)果判定: S/CO1 為 HAV-IgM 陽性， S/CO1，為陽性； S/CO值1，為陰性；競(jìng)爭(zhēng)抑制法：若S/CO值1，為陰性。 HAV HBV 肝炎病毒- HCV HDV HEV 其他（HGV、TTV） （SEN、TLMV）甲型肝炎急性期血清標(biāo)志物出現(xiàn)過程要點(diǎn)：1. HAV的傳播途徑(糞口)2. HAV的潛伏期(30天2周)3. 血清標(biāo)志物出現(xiàn)的規(guī)律4. 免疫學(xué)檢測(cè)指標(biāo)HAV Ag 抗HAV總抗體 抗HAV-IgM 臨床意義血清中抗HAVIgM出現(xiàn)于感染HAVIgM陽性,尤其是效價(jià)較高時(shí),表明處于感染的早期,被公認(rèn)為早期診斷甲肝的依據(jù),是區(qū)別是急性感染還是慢性感染的有