酶聯(lián)免疫吸附法和化學(xué)發(fā)光法對(duì)甲胎蛋白檢測(cè)功效的比較

1、酶聯(lián)免疫吸附法和化學(xué)發(fā)光法對(duì)甲胎蛋白檢測(cè)功效的比較【摘要】目的比較ELISA (enzyme linked immuno-sorbent assay)和CL(chemi-luminescence)兩種檢測(cè)方法對(duì)AFP檢測(cè)的穩(wěn)定性、敏感性及重復(fù)性。 方法對(duì)110名患者血標(biāo)本同時(shí)采用ELISA和CL兩種方法進(jìn)行AFP檢測(cè)，對(duì)同一標(biāo)本連續(xù)測(cè)定20次進(jìn)行批內(nèi)變異的比較；同時(shí)對(duì)標(biāo)本每天測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定20天進(jìn)行批間變異比較。采用方差分析比較兩種方法敏感性；并對(duì)兩種方法進(jìn)行線性回歸分析，評(píng)價(jià)兩種方法相關(guān)性。結(jié)果CL批內(nèi)變異系數(shù)和批間變異系數(shù)均較ELISA小，具有較好的重復(fù)性及穩(wěn)定性；當(dāng)AFP400g/L

2、時(shí)，CL法敏感性高于ELISA（P0.05）。結(jié)論CL較ELISA穩(wěn)定性好、敏感性高、重復(fù)性好，而ELISA具有經(jīng)濟(jì)、在AFP濃度值低于400g/L時(shí)也具有較好的敏感性。 【關(guān)鍵詞】甲胎蛋白酶聯(lián)免疫吸附法化學(xué)發(fā)光法 【Abstract】Object：To compare the stability,sensitivity and reproducibility of ELISA and CL on the detection of AFP. Method：Enrolled 110 patients who were drawn blood samples to undertook ELISA

3、and CL detections AFP totally 20 times to compare intraassay coefficient variation and once every day for 20 days to compare interassay coefficient variation;analysis of variance was used to compare the sensitivity between these two methods，and we also used lineal regression analysis to compare the

4、correlation between these two methods. Result:Intra-assay and inter-assay coefficient variation of CL were smaller than ELISA which indicated that the CL had a better reproducibility and stability. The sensitivity was similar between ELISA and CL when AFP 400g/L（P 0.05.）. Conclusion：CL was more stab

5、le ,more sensitive and better reproducibility than ELISA whereas ELISA was less expensive and had a similar sensitivity with CL when AFP concentration was smaller than 400g/L. 【Keywords】AFP (alpha fetal protein)ELISA (enzyme linked immuno-sorbent assay)CL (chemi-luminescence) 腫瘤已成為當(dāng)今世界嚴(yán)重危害人類(lèi)的疾病，死亡率僅

6、次于心血管疾病居全球第二。每年有成千上萬(wàn)新診斷腫瘤患者，當(dāng)中不少患者由于就診時(shí)已出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或是已出現(xiàn)全身嚴(yán)重癥狀，導(dǎo)致治療效果不佳、遠(yuǎn)期預(yù)后差1,2。隨著近幾十年來(lái)各種生化檢測(cè)儀器的發(fā)展以及腫瘤標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)，使得對(duì)腫瘤的早期篩查和診斷成為可能。腫瘤標(biāo)志物（tumor markers,TM）是腫瘤組織和細(xì)胞由于其癌基因異常表達(dá)所分泌的、存在于腫瘤組織及全身血液和體液中的濃度明顯高于正常值的一類(lèi)物質(zhì)。如甲胎蛋白（alpha fetal protein, AFP）和癌胚抗原（carcinoma antigen embryo，CEA）等，其中甲胎蛋白（AFP）被公認(rèn)為是診斷原發(fā)性肝癌的重要腫瘤標(biāo)志物

7、3。甲胎蛋白(AFP)是胚胎發(fā)育早期的一種主要血清蛋白，由胚胎期肝臟卵黃囊合成的一種糖蛋白，分子量約70000，含糖40g/L，由96%蛋白質(zhì)和4%的碳水化合物組成，正常人血清中AFP含量在2-8g/L之間，AFP正常值一般低于25g/L，AFP是診斷肝癌最特異的標(biāo)志物，是目前最好的可實(shí)際用于早期診斷原發(fā)性肝癌的指標(biāo)，可在癥狀出現(xiàn)之前作出診斷。目前臨床檢驗(yàn)中AFP的檢測(cè)方法主要有放射免疫法(RIA)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、熒光免疫法(FIA)、化學(xué)發(fā)光分析法(CLIA)等，本研究主要比較近幾年來(lái)我院常用的ELISA和CL兩種檢測(cè)方法，分析兩種方法對(duì)AFP診斷的穩(wěn)定性、敏感性及重復(fù)性，現(xiàn)

8、報(bào)道如下。 1材料與方法 1.1材料 1.1.1標(biāo)本采集本研究收集了從2008年8月至2010年9月在我院住院及門(mén)診患者110例的血清標(biāo)本，男性9名，女性101名，年齡45.23.1歲。 1.1.2試劑ELISA檢測(cè)使用鄭州博賽生物工程股份有限公司AFP診斷試劑盒，操作步聚均嚴(yán)格按照試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行；CL法檢測(cè)試劑從雅培公司購(gòu)買(mǎi)并按照儀器的使用說(shuō)明及操作規(guī)程進(jìn)行。 1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器采用芬蘭雷勃全自動(dòng)酶標(biāo)儀、深圳雷杜全自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)進(jìn)行ELISA檢測(cè)；Axsym 高效能全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀進(jìn)行CL檢測(cè)；質(zhì)控品由雅培公司提供。 1.2 方法對(duì)同一患者的血清分別用ELISA和CL法進(jìn)行A

9、FP檢測(cè)，每份標(biāo)本每天檢測(cè)1次，連續(xù)檢測(cè)20天，比較ELISA和CL在AFP檢測(cè)上的重復(fù)性和穩(wěn)定性，同時(shí)比較ELISA和CL檢測(cè)AFP的敏感性。 1.3 數(shù)據(jù)分析和統(tǒng)計(jì)方法 1.3.1 AFP20g/L為陽(yáng)性，陽(yáng)性中分為20-400g/L和400g/L為強(qiáng)陽(yáng)性（原發(fā)性肝癌診斷界值）。 1.3.2 采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析。采用x2檢驗(yàn)對(duì)資料進(jìn)行敏感性和穩(wěn)定性比較，同時(shí)采用Pearson相關(guān)對(duì)ELISA和CL進(jìn)行相關(guān)性分析。P0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2結(jié)果 2.1 敏感性比較： ELISA和CL對(duì)AFP檢測(cè)敏感性比較見(jiàn)表1 由表1見(jiàn)當(dāng)AFP400g/L時(shí)，CL（38例）檢

10、測(cè)敏感性高于ELISA（29例），差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.05）。 2.2 重復(fù)性和穩(wěn)定性測(cè)定：采用批內(nèi)和批間差異進(jìn)行確定。ELISA和CL兩種檢測(cè)方法分別對(duì)低、中、高值質(zhì)控品進(jìn)行精密度試驗(yàn),每份標(biāo)本連續(xù)測(cè)定20 次，計(jì)算均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差,求批內(nèi)變異系數(shù)（coefficient variable，CV）值。每份標(biāo)本每日測(cè)定1 次，連續(xù)測(cè)定20 天，計(jì)算均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差，求批間CV 值，結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn)在AFP檢測(cè)上，CL較ELISA重復(fù)性好、穩(wěn)定性高。 2.3 ELISA和CL相關(guān)性分析：對(duì)110名患者分別同時(shí)采用ELISA和CL檢測(cè)AFP，結(jié)果表明ELISA和CL兩種檢測(cè)方法在AFP400

11、g/L時(shí)，兩種相關(guān)性差（r=0.401，95CI 0.3430.455）。 3討論 近幾十年來(lái)由于環(huán)境污染以及不健康的生活方式，癌癥發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。目前對(duì)惡性腫瘤防治的首要原則為早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療。血清腫瘤標(biāo)志物含量的檢測(cè)是一項(xiàng)非侵襲性檢查方法，日益受到醫(yī)學(xué)界的廣泛重視，成為腫瘤患者早期診斷的重要輔助檢查手段之一，故腫瘤標(biāo)志物測(cè)檢方法的敏感性、穩(wěn)定性和重復(fù)性對(duì)早期腫瘤的篩查和診斷至關(guān)重要。AFP是1956年由Bergstrandh和Czar在人胎兒血清中發(fā)現(xiàn)的一種甲種球蛋白, 它被認(rèn)為是輔助診斷肝癌最好的腫瘤標(biāo)志物。用化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)AFP是公認(rèn)的快速、精確、重復(fù)性好且安全無(wú)毒的方

12、法；而ELISA法定量AFP試劑盒的線性及標(biāo)準(zhǔn)問(wèn)題是測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵，ELISA法的“鉤狀效應(yīng)”，即測(cè)定顯色隨著待測(cè)標(biāo)本中抗原濃度的增加而升高至一定程度后，測(cè)定吸光度隨抗原濃度的增加而開(kāi)始下降至不顯色，容易造成假陰性結(jié)果；但ELISA以快速、簡(jiǎn)便實(shí)效的優(yōu)勢(shì)在基層廣應(yīng)用。 本研究比較了ELISA和CL對(duì)AFP檢測(cè)的穩(wěn)定性、敏感性、重復(fù)性及兩者的相關(guān)性。兩法比較，CL具有如下優(yōu)點(diǎn)： CL具有較好的穩(wěn)定性：CL 是一種特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng),，是當(dāng)今國(guó)內(nèi)外最新最先進(jìn)的臨床免疫技術(shù)的集中體現(xiàn)，根據(jù)待測(cè)物的不同靈活選擇不同的分析技術(shù)、分析步驟和分析過(guò)程，以達(dá)到最佳的檢測(cè)效果、最高的檢測(cè)精密度，結(jié)果準(zhǔn)確可

13、靠，因此具有較好的穩(wěn)定性。 CL具有較高的敏感性：在AFP400g/L時(shí), CL敏感性好于ELISA，兩者差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.05）。近年來(lái)CL檢測(cè)采用磁珠包被技術(shù)，由于磁珠體積小，可以吸附更多的抗體和抗原，使得CL的檢測(cè)靈敏度得到進(jìn)一步的提高。 CL具有較好的重復(fù)性：由表2可見(jiàn)CL在質(zhì)控品低、中、高三個(gè)級(jí)別中批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于ELISA，提示CL與ELISA相比，具有較好的重復(fù)性。在臨床檢驗(yàn)中采用CL檢測(cè)AFP，檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線可以穩(wěn)定大約20天，無(wú)需如ELISA每批檢測(cè)都需要重新制作檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線，且ELISA存在受人工操作影響大的問(wèn)題4。 隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的快速發(fā)展，以及生化檢測(cè)儀器

14、和技術(shù)的更新，化學(xué)發(fā)光法的應(yīng)用實(shí)現(xiàn)了免疫測(cè)定的自動(dòng)化，具有結(jié)果穩(wěn)定可靠、敏感性高、重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)，顯示出具有良好的應(yīng)用前景。本研究提示在早期原發(fā)性肝癌篩查時(shí)，可采用CL檢測(cè)法，但是對(duì)于基層醫(yī)院，在人體正常值參考范圍內(nèi)AFP的檢測(cè), ELISA法具有快速、簡(jiǎn)便、成本低廉的優(yōu)點(diǎn),及在健康體檢, 人群普查, 良性肝病患者定期檢查中起到很好篩查作用。因此對(duì)一時(shí)難以購(gòu)買(mǎi)化學(xué)發(fā)光儀器的基層醫(yī)療機(jī)構(gòu), EL ISA法也是一個(gè)很好而實(shí)用的檢測(cè)方法；但筆者認(rèn)為對(duì)于臨界值的標(biāo)本要加以關(guān)注及隨訪, 或送血清至上級(jí)醫(yī)院進(jìn)一步檢測(cè)確診, 檢測(cè)人員在工作中需加以把握。 參 考 文 獻(xiàn) 1Okura H. Usefulness of tumor marker in early diagnosis. Nippon Naika Gakkai Zasshi,2005,94:2479-85. 2Duffy MJ. Role of tumor markers in patients with solid cancers: A critical review. Eur J Intern Med, 2007,18:175-184. 3Wiwanit