骨髓活體組織檢查課件

1、 骨髓活體組織檢查 Pianese(1903年)首先創(chuàng)用套管針在腓骨骨骺進行骨髓穿刺術Ghedini(1908)年在脛骨上三分之一部位進行骨髓環(huán)鉆術Seyfarth(1923年)選擇胸骨作環(huán)鉆術1929年Arinkin使用骨髓穿刺針抽吸髓液涂片作為血液病的檢查方法以來,骨髓活檢似乎已由骨髓穿刺涂片檢查所代替。但是由于抽吸骨髓往往被竇血所稀釋,Berlin用同位素檢查稀釋度為40100%,有時干抽或抽出的髓液不能確切地代表骨髓細胞的增殖情況;而骨髓活檢組織切片可以觀察造血組織的完整結構包括細胞的多寡及其分布、脂肪組織、有無腫瘤細胞等 骨髓穿刺檢查反映的是血細胞數量、形態(tài)、比例的改變，不能有效反映

2、骨髓組織結構及間質成分的變化，了解骨髓造血組織結構與細胞之間以及組織之間的相互關系對很多血液系統(tǒng)疾病的診斷具有重要意義。 骨髓活體組織檢查（bone marrow biopsy，BMB）簡稱骨髓活檢，是觀察骨髓組織結構和空間定位，補充骨髓涂片的有效方法。方法1選擇檢查部位骨髓活組織檢查多選擇髂前上棘或髂后上棘。2體位采用髂前上棘檢查時，病人取仰臥位；采用髂后上棘檢查時，病人取側臥位。3.麻醉 常規(guī)消毒局部皮膚，操作者戴無菌手套，鋪無菌洞巾，然后行皮膚、皮下和骨膜麻醉4.穿刺將骨髓活組織檢查穿刺針的針管套在手柄上。操作者左手拇指和示指將穿刺部位皮膚壓緊固定，右手持穿刺針手柄以順時針方向進針至骨質

3、一定的深度后，拔出針芯，在針座后端連接上接柱（接柱可為1.5cm或2.0cm），再插入針芯，繼續(xù)按順時針方向進針，其深度達1.0cm左右，再轉動針管360，針管前端的溝槽即可將骨髓組織離斷。5取材按順時針方向退出穿刺針，取出骨髓組織，立即置于95乙醇或10甲醛中固定，并及時送檢。6加壓固定以2碘酊棉球涂布輕壓穿刺部位后，再用干棉球壓迫創(chuàng)口，敷以消毒紗布并固定注意事項1開始進針不要太深，否則不易取得骨髓組織。2由于骨髓活組織檢查穿刺針的內徑較大，抽取骨髓液的量不易控制。因此，一般不用于吸取骨髓液做涂片檢查。3穿刺前應檢查出血時間和凝血時間。有出血傾向者穿刺時應特別注意，血友病病人禁止骨髓活組織檢

4、查。 適應癥 1.骨髓穿刺多次失?。☉岩晒撬枥w維化、骨髓轉移癌、多發(fā)性骨髓瘤、多毛細胞白血病等）。2.血象顯示全血細胞減少，反復骨髓穿刺均為“血稀”或骨髓增生低下，病態(tài)造血、懷疑再生障礙性貧血、骨髓異常增生綜合征及增生性白血病患者。3.某些貧血、原因不明的發(fā)熱、脾或淋巴結腫大，骨髓涂片不能確診。4.白血病療效觀察：有時骨髓涂片已達到完全緩解，但骨髓活檢切片內仍可檢出白血病性原始細胞簇。 骨髓穿刺與骨髓活檢的比較骨髓穿刺骨髓活檢取材方式骨髓液涂片染色一條骨髓組織，固定包埋染色優(yōu)點操作簡單細胞形態(tài)容易辨認，可觀察細微結構易于識別巨形變等染色效果好，結果可量化保持造血組織天然結構，便于判斷紅骨髓與脂

5、肪比全面了解骨髓增生程度避免血竇稀釋避免“干抽”缺點天然結構破壞 可造成血竇稀釋“干抽”無法分析細胞聚集，不易區(qū)分難以觀察細胞細微結構細胞化學染色無法量化1.全面了解骨髓增生程度，造血組織、脂肪細胞和纖維組織所占的容積比例：了解粒/紅比值及骨髓內鐵存儲情況，對于某些疾?。ㄈ缭偕系K性貧血、缺鐵性貧血及骨髓增生異常綜合征）及化療后骨髓抑制程度有明確的診斷價值。 臨床意義2.可以發(fā)現骨髓穿刺涂片檢查不易發(fā)現的病理變化，當骨髓增生極度活躍或極度減低，纖維組織增多及骨質增生而發(fā)生干抽或骨髓稀釋是活檢格外重要。如低增生白血病、多毛細胞白血病、骨髓纖維化、骨髓壞死、惡性腫瘤累及骨髓等。對相關疾病的診斷、骨

6、髓造血微環(huán)境及骨髓抑制的研究有重要意義。3.活檢比涂片能較早地預測疾病的預后。因活檢比涂片能更早、更全面地發(fā)現早期的病理改變，對各種急慢性白血病和骨髓纖維化異常增生綜合征有確診和判定預后的意義，對骨髓轉移癌、惡性組織細胞病、戈謝病和尼曼匹克病等診斷陽性率比骨髓涂片高。4.活檢可協(xié)助診斷慢性骨髓增生性疾病，如真性紅細胞增多癥、原發(fā)性血小板增多癥、骨髓纖維化等。骨髓活檢在血液腫瘤細胞中起輔助作用，結合骨髓涂片結果才有診斷價值。尤其是骨髓“干抽”患者，干抽的材料處理特別重要，最好不經過脫鈣，塑料包埋亦需低溫。可以做多種免疫標記，還可以進行原位雜交，聚合酶鏈反應。經抽提后還可以進行比較基因組雜交、基因

7、重組、芯片技術等分子水平診斷。脫鈣去除骨質中的無機鹽，不容易做免疫組化。造血細胞培養(yǎng)檢驗 體外造血祖細胞培養(yǎng)或造血細胞克隆形成實驗（colony-stimulating assays，CSA）主要就是體外模擬體內的生理環(huán)境，培養(yǎng)從機體取出的造血祖細胞，使之生存、增殖和分化。 作用與意義： 1.研究造血過程造血細胞分化、成熟及調節(jié)機制； 2.各種細胞因子對造血調節(jié)的作用機制 3.造血細胞與非造血細胞之間相互作用及調控的分子機制 4.藥物對骨髓造血的影響 5.造血系統(tǒng)疾病的發(fā)生機制、診斷和治療效果紅系祖細胞培養(yǎng) 實驗原理： 在培養(yǎng)體系中選擇甲基纖維素作為支持物，加入適量EPO等細胞因子，使骨髓中紅

8、細胞系造血細胞形成BFU-E和CFU-E集落.每個集落可視為由一個紅系祖細胞增殖分化而來。集落數的多少可反映培養(yǎng)物中紅系祖細胞的量。參考范圍 CFU-E集落為8-50個細胞組成的細胞團。 BFU-E集落為50個以上細胞組成的細胞團。 骨髓：BFU-E：（25.37.6）個/2105有核細胞（MNC) CFU-E:（141.668.4）個/2105MNC 外周血：BFU-E：（264）個/2105MNC 臍血：BFU-E：（767）個/2105MNC臨床意義1.BFU-E、CFU-E減少：見于再生障礙性貧血、單純紅細胞再障、急性白血病、慢粒等2.BFU-E、CFU-E增加：見于真性紅細胞增多癥、

9、原發(fā)性骨髓纖維化及部分慢?；颊吡?單系造血細胞培養(yǎng) 原理：受檢者血液、骨髓或臍血經過分離獲得的單個核細胞在HGFs的作用下，在體外半固體瓊脂上形成不同階段的粒細胞和單核細胞集落。 刺激CFU-GM生長的造血因子主要有：GM-CSF、IL-3、G-CSF、M-CSF及SCF 培養(yǎng)7d后，培養(yǎng)皿倒置顯微鏡觀察。 40個細胞團成為集落，40個細胞的團成為簇，3-15個細胞為小簇，16-40個細胞為大簇。參考范圍 骨髓：集落數為（150.0658.4）個/2105MNC細胞簇與集落之比為5-20:1 外周血：集落數為BM的1/10 臍血：集落數為（486）個/2105MNC臨床意義1.CFU-GM減少

10、：再障、PNH、急性白血病、慢粒急變期、紅白血病等2.CFU-GM增加：慢性粒細胞白血病、真性紅細胞增多癥、部分缺鐵性貧血巨核細胞培養(yǎng) 以血漿凝塊或甲基纖維素為支持物，加入再生障礙性貧血患者血清或TPO、IL-3及SCF等生長因子，是骨髓中巨核細胞系祖細胞形成CFU-MK。參考范圍培養(yǎng)10-14天后，倒置顯微鏡觀察，含有3個巨核細胞以上者為CFU-MK集落。20-500個巨核細胞的集落稱為BFU-MK。骨髓：（16.410.3）/2105MNC臨床意義CFU-MK減少：再障、獲得性無巨核細胞血小板減少性紫癜、骨髓增生性疾病、血小板減少癥和白血病。CFU-MK增加：常見于慢?；旌献婕毎囵B(yǎng) 以甲基纖維素作為支持物配以各種造血生長因子如IL-3、GM-CSF和EPO或PHA-LCM加EPO作為CFU-