嗜酸性粒細(xì)胞支氣管炎的免疫狀況及干預(yù)

1、嗜酸性粒細(xì)胞支氣管炎的免疫狀況及干預(yù) 許國斌 王焰兵 溫嶺市第一人民醫(yī)院 浙江 317500【摘要】：目的 探討嗜酸性粒細(xì)胞性支氣管炎（eosinophilic bronchitis，EB）的免疫狀況、炎癥因子水平及在治療前后的改變。方法 采用 Brightling 等報(bào)道的方法誘導(dǎo)痰及處理方法確定21例嗜酸性粒細(xì)胞支氣管炎(EB)患者，監(jiān)測患者IgE、IgA、IgM、IgG、TNF、IL-1、IL-4、IL-5、IL-8水平。TNF、IL-1、IL-8測定采用酶聯(lián)免疫吸附，IgE用BN2100 儀及配套試劑檢測，IL- 4、IL-5 雙抗體夾心 EL ISA 試劑酶標(biāo)儀，并測血常規(guī),檢測血中

2、嗜酸性細(xì)胞水平，上述在治療前及半月后各測一次。對照組6例僅測一次IgE、IgA、IgM、IgG,TNF、IL-1、IL-4、IL-5、IL-8水平。治療措施:吸入布地奈德400g，每天兩次，或者必可酮（倍氯米松）氣霧劑2噴，每天3次。使用3天欠佳者同時(shí)口服強(qiáng)的松10mg，每天一次。合并使用酮替芬1mg、每天2次或者阿斯美2片、每天3次，以上持續(xù)半月。以氣霧劑吸入持續(xù)1月。結(jié)果 21例患者均治愈，EB組IgE、IgA水平在治療前后均有差異，高于對照組。IL-4、IL-5、IL-8在治療前高于治療半月后，但仍高于對照組。TNF、IL-1在治療前后以及對照組均無差異。結(jié)論 EB患者治療效果顯著，Ig

3、E、IgA 、IL-4、IL-5、IL-8明顯升高，且與預(yù)后相關(guān)?！娟P(guān)健詞】 嗜酸性粒細(xì)胞支氣管炎； 痰誘導(dǎo)； 免疫球蛋白； 炎癥因子 Observe eosinophilic bronchitis immune state and intervenientXuguobin wangyanbing wenlinshi first people hospital zhejiang wenlin 317500【Abstract】Objective Observe eosinophilic bronchitis（EB）bronchitis immune state、inflammatory fact

4、or level and the alteration after treat。Methods Introduce Brightling methods induce sputum by hypertonic saline aerosol inhalation was performed and determinate 21 EB patient，Detect the patient level of IgE、 IgA、IgM、IgG、TNF、interleukin-1（IL-1）、IL-4、IL-5、IL-8。TNF、IL-1、IL-8 introduce with enzyme-linke

5、d absorbed immunoassay，detect IgE with BN2100 corresponding reagent，IL-4、IL-5 introduce with double antibody radioim-munoassay ELISA reagent，detect eosinophilic granulocyte（Eos）in blood，all detect again after treat fifteen day。Control group 6 patient detect IgE、IgA、IgM、IgG,TNF、IL-1、IL-4、IL-5、IL-8 on

6、ce。 Treat methods：patient inhaled budesdnide 400g twice daily for four weeks，or inhaled beclomethasone 100g，three times daily。Take orally prednison which inefficacious till fourth day，once daily。Consolidate use Tongtifen 1mg、twice daily or Asmel two tabel、three times daily，till fifteen days，budesdni

7、de or beclomethasone continous use one month。Results 21 patient were cure，EB group the level of IgE、IgA which before treat was difference with after treat，all higher than control group。The level of IL-4、IL-5、IL-8 which before treat higher than the level which treat fifteen days，but the level which t

8、reat fifteen days higher than control group。The level of TNF、IL-1 which before treat was no difference with after treat and control group。Conclusions EB patient therapeutic reaction significant，IgE、IgA 、IL-4、IL-5、IL-8 rise evident，and have to do with prognosis。 【Keys word】Eosinophilic bronchitis；Ind

9、uce sputum；Immune factor；Inflammatory factor 嗜酸性粒細(xì)胞支氣管炎(EB)是慢性咳嗽的一大原因,患者往往不能得到及時(shí)診斷而延誤治，帶來身心的巨大痛苦,EB患者的免疫狀況未見報(bào)到。本文探討21例EB患者的免疫狀況及其干預(yù)措施。1臨床資料1.1一般資料：20052007年底21例患者門診病人，咳嗽時(shí)間大于1年以上，輾轉(zhuǎn)治療3家以上醫(yī)院。男15例，女6例，年齡2455歲，平均354.2歲。1.2排除標(biāo)準(zhǔn)：排除有鼻炎、鼻竇炎、哮喘、胃-食管返流史、服用ACEI類藥物史,排除COPD病史,無近期感染史。1.3 EB的診斷標(biāo)準(zhǔn): 具體診斷標(biāo)準(zhǔn)為：慢性咳嗽 多為刺

10、激性干咳 或伴少量黏痰；X線胸片正常；肺通氣功能正常 氣道高反應(yīng)性檢測陰性 PEF日間變異率正常；痰細(xì)胞學(xué)檢查嗜酸粒細(xì)胞比例0.03；排除其他嗜酸粒細(xì)胞增多性疾??；口服或吸入糖皮質(zhì)激素有效。11.4監(jiān)測患者IgE、IgA、IgM、IgG,TNF、IL-1、IL-4、IL-5、IL-8水平，TNF、IL-1、IL-8測定采用酶聯(lián)免疫吸附，試劑盒來自晶美公司。IgE用BN2100 儀及配套試劑檢測。IL- 4、 IL-5 雙抗體夾心 EL ISA 試劑 (美國Neogen 公司) ，酶標(biāo)儀(美國 Stax Fax 2100 型) ，Dade Behring BN2100 速率散射比濁儀及配套試劑(

11、德國) 。并測血常規(guī),檢測血中嗜酸性細(xì)胞水平。1.5誘導(dǎo)痰及處理方法:采用 Brightling 等2報(bào)道的方法 ,并進(jìn)行適當(dāng)修改:3 %的高滲鹽水超聲霧化吸入 1520 min ,咳痰至培養(yǎng)皿 ,向痰液內(nèi)加入4 倍體積的 011 %的二硫蘇糖醇(DTT) ,渦旋震蕩10 min ,再加入等量的磷酸鹽緩沖液 ( PBS) 震蕩5 min ,2 000 r/ min離心 10 min ,上清液分裝 - 70 凍存待檢。沉淀用 PBS懸浮 ,用臺盼藍(lán)鑒定細(xì)胞活力 ,大于 50 %為合格痰。用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù) ,制作細(xì)胞涂片 , HE染色光鏡下進(jìn)行細(xì)胞學(xué)分類。1.6依從性：因患者病程均達(dá)

12、1年以上，迫切希望治療，依從性極好，無一例退出檢查。1.7對照組：測試6例普通支氣管炎咳嗽少于7天明確感染史且經(jīng)濟(jì)條件極佳者，作血液檢查而不作痰誘導(dǎo)處理，血液檢查嗜酸性細(xì)胞均正常，考慮依從性僅抽血一次檢驗(yàn)。1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用 SPSS 1010 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資以 x s 表示 ,多組間的比較采用單因素方差分析方差不齊時(shí)采用 Log 轉(zhuǎn)換 ,方差齊后再進(jìn)行檢驗(yàn)多組間兩兩比較采用最小顯著差異法(LSD) 。1.9治療措施:吸入布地奈德400g，每天兩次，或者必可酮（倍氯米松）氣霧劑2噴，每天3次。使用3天欠佳者同時(shí)口服強(qiáng)的松10mg，每天一次。合并使用酮替芬1mg、每天2次或者阿斯美2

13、片、每天3次，以上持續(xù)半月。以氣霧劑吸入持續(xù)1月，必要時(shí)使用抗生素以大環(huán)內(nèi)酯類或者奎諾酮類為主，以避免長期使用青霉素和頭孢類引起的耐藥或者L-菌的存在。2結(jié)果2.1總體結(jié)果：治療組血液中嗜酸性粒細(xì)胞占白細(xì)胞比例8%2例。所有病例痰中嗜酸粒細(xì)胞 ( Eos)明顯升高（5.5%43.5%），符合EB診斷。2.2治療結(jié)果：17例病人在710天咳嗽消失，另有4例病人在第13天時(shí)咳嗽消失。2月后有2例患者復(fù)診，再次治療后消失。2.3兩組免疫球蛋白水平治療半月時(shí)改變見表一：(xs、g/L) IgE IgA IgG IgM 治療前 424.6138.7 3.680.35 13.653.04 1.190.30

14、治療后 151.385.4 2.500.37 13.012.98 1.220.23對照組 103.231.5 2.490.39 11.171.89 1.280.24EB患者IgE水平在治療前后P0.001,IgA水平在治療前后P0.05,均有差異。2.4兩組炎癥因子水平在治療半月時(shí)的改變見表二：（xs，ng/l）TNF IL-1 IL-4 IL-5 IL-8 治療前 503177 102.1429.05 51.52 29.14 63. 67 28. 65 623275 治療后 509212 101.4220.62 24.57 11.77 31. 44 16. 22 404294 對照組 498

15、183 99.2119.54 8.88 8.47 11. 05 7. 22 328167 患者TNF、IL-1在治療前后以及對照組均無差異，IL-4、IL-5、IL-8在治療前后P0.001,治療半月后和對照組相比P 3 % ,肺功能正常 ,無呼吸道高反應(yīng)性(AHR)的證據(jù) PEF變異率正常 ,糖皮質(zhì)激素治療效果良好。它是引起慢性咳嗽的一個(gè)重要原因 ,國外研究其大約占慢性咳嗽的 10 %20 %4，5。3.2血清總IgE水平受多種因素影響，在哮喘的發(fā)病機(jī)理中起重要作用6。T細(xì)胞按細(xì)胞表面分化群抗原主要分為CD4+和CD8+亞群，按免疫功能不同分為、Ts和Tc亞群，CD4分子一般表達(dá)在Th細(xì)胞表

16、面。T細(xì)胞在哮喘的發(fā)病機(jī)制中主要起著免疫調(diào)節(jié)的作用，這種調(diào)節(jié)作用是通過其分泌的多種細(xì)胞因子間復(fù)雜的相互作用實(shí)現(xiàn)的7。人類Th細(xì)胞分為Th1和Th2亞群，Th2細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-5，哮喘患者IL-4明顯升高，IL-4和IgE呈正相關(guān)，IL-4有促進(jìn)IgE產(chǎn)生的作用，IL-4是通過誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞發(fā)生免疫球蛋白的重鏈的類別轉(zhuǎn)換而產(chǎn)生8。 因此檢測血清總IgE不僅能敏感、直接、準(zhǔn)確地反映氣道反應(yīng)性增高的情況，而且在治療過程中可根據(jù)IgE的含量改變準(zhǔn)確適時(shí)地調(diào)整治療方案，并可用其評價(jià)療效9。、 3.3白介素-5（IL-5）是引起體內(nèi)不同組織中Eos增多的關(guān)鍵的細(xì)胞因子。IL-5可促進(jìn)Eos前體

17、細(xì)胞的生長分化，通過抑制細(xì)胞凋亡延長細(xì)胞在組織中的生存時(shí)間，并可激活Eos中花生四烯酸代謝途徑，產(chǎn)生大量引起支氣管痙攣的活性物質(zhì)如白三烯C4、D4、E4。高氣道反應(yīng)性患者IL-5的基因表達(dá)增加。EB引起的慢性咳嗽與哮喘具有類似的病理生理過程，都可見到IL-5基因表達(dá)以及花生四烯酸產(chǎn)物的增加10。3.4近年發(fā)現(xiàn)的重要前炎因子 IL-8 也增高 ,且誘導(dǎo)痰中性粒細(xì)胞比例也增高。提示在 EB 患者中 ,不單純是 Eos性氣道炎癥 ,可能與哮喘類似 ,是以 Eos 浸潤為主 ,多種炎細(xì)胞參與的炎癥反應(yīng)。IL-8 作為重要的前炎因子 ,不僅對中性粒細(xì)胞的聚集和活化起重要作用 ,同時(shí)對 Eos的活化也起一

18、定作用。這就是為什么 EB 和哮喘(包括咳嗽變異性哮喘簡稱CVA)具有相似的氣道特征,Gibson、 Brightling等發(fā)現(xiàn) EB 的 BALF與哮喘相似的 IL-5、 GM2CSF、 Th2 基因表達(dá)11,12.。3.5TNF-主要由單核巨噬細(xì)胞應(yīng)答各種刺激時(shí)產(chǎn)生, 是機(jī)體炎癥及免疫反應(yīng)與增強(qiáng)單核細(xì)胞活力的重要調(diào)節(jié)因子。有學(xué)者13 認(rèn)為, TNF-引起局部炎癥反應(yīng), 器官的損害甚至多系統(tǒng)的受損病理作用有: 參與內(nèi)皮細(xì)胞的損害, 促進(jìn)微血栓形成; 降低肌細(xì)胞跨膜電位N a+、K+泵失效; 誘發(fā)其它炎癥介質(zhì)釋放, 活化中性多核細(xì)胞, 產(chǎn)生活性氧自由基, 引起組織細(xì)胞損傷。TN F 水平與病死

19、率呈正相關(guān)。3.6我們的實(shí)驗(yàn)顯示，EB與 CVA 和哮喘類似 ,血清IgE升高以及與IgE呈正相關(guān)的IL-4亦升高。誘導(dǎo)痰 Eos比例明顯增高 , 重要前炎因子 IL-8 增高，抑制Eos細(xì)胞凋亡延長細(xì)胞在組織中的生存時(shí)間，并可激活Eos中花生四烯酸代謝途徑的IL-5升高，提示在 EB 患者中 ,Eos也表現(xiàn)為與哮喘類似的活化狀態(tài) ,產(chǎn)生毒性蛋白（我院不能檢測嗜酸細(xì)胞陽離子蛋白）。這些數(shù)據(jù)說明 EB、 CVA 和哮喘本質(zhì)上也許是一樣的 ,只是同一個(gè)疾病的不同階段 。但TNF-和IL-1的數(shù)據(jù)在EB組和對照組無差異，證明EB和哮喘或CAV在程度上有明顯差的，同哮喘患者的TNF升高是有區(qū)別的，EB

20、患者氣管形態(tài)結(jié)構(gòu)尚無明顯改變，所以治療效果極佳，在激素服治療一月后病情均能消失。氣管免疫中占優(yōu)的IgA在使用激素服后亦能下降。1 中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)哮喘學(xué)組.咳嗽的診斷與治療指南(草案)2 Brightling CE , Ward R , Goh KL ,et al1Eosinophilic bronchitis is animportant cause of chronic cough1Am J Respir Crit Care Med ,1999 ,160 :406241013 Gibson PG,Dolovich J ,Denburg J , et al . Chronic coug

21、h : eosinophilicbronchitis without asthmaJ .Lancet ,1989 ,1(8651) :1346213484 Brightling CE ,Pavord ID. Eosinophilic bronchitis2what is it and why isit important J Clin Exp Allergy ,2000 ,30(1) :426.5 Gibson PG. How to measure airway inflammation :induced sputumJ .Can Respir J ,1998 ,5 Suppl A :22226。6魯繼榮，姚麗萍，宋麗君等，哮喘患兒T細(xì)胞亞群及細(xì)胞因子的變化，中華兒科雜志 2000；38（2）：1187Vecchiarcll A，Siracusa a，Monari C，et al。Cytbkine regulation of lowaffinity IgE subjects。Clin Exp Immund 1994；97：2488張克軍,李聰敏,王春光,等.兒童支氣管哮喘血清物異性IgE檢測臨床意義.中華兒科雜志社999;37(6):3719陸際晨，咳嗽變異型哮喘，臨床兒科雜志 1996；14（4）：2