大熊貓寄生蟲病研究課件

1、大熊貓寄生蟲病防控研究進(jìn)展四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 楊光友 一、危害大熊貓的寄生蟲種類 寄生蟲是危害大熊貓的一類重要病原。到目前為止，在野生和圈養(yǎng)大熊貓?bào)w內(nèi)外共報(bào)道26種寄生蟲。 一、外寄生蟲 1、蜱（13種），其中血蜱屬蜱9種。 2、螨2種（熊貓足螨和熊貓蠕形螨） 3、蚤2種（鬃蚤屬蚤） 二、內(nèi)寄生蟲 1、吸蟲1種（羚羊列葉吸蟲） 2、絳蟲1種（線中絳蟲） 3、線蟲3種（鉤口線蟲2種、西氏貝蛔蟲） 4、原蟲4種（住肉孢子蟲1種、溶組織內(nèi)阿米巴原蟲1種、隱孢子蟲1種、弓形蟲） 蜱主要危害野生貓2000余個(gè)/只，一只飽血蜱吸 血是1-2毫升。癢螨主要危害圈養(yǎng)貓吸血性線蟲-熊貓鉤口線蟲野生大熊貓鉤蟲

2、卵的陽性率為7.49（17/227）腸道原蟲-隱孢子蟲 幼齡動(dòng)物和免疫功能低下者，可引起腹瀉。 以隱孢子蟲 18SrRNA基因?yàn)榘谢?，?duì)322個(gè)大熊貓糞樣作了分子檢測(cè)，檢測(cè)出安氏隱孢子蟲（ Cryptosporidium andersoni），圈養(yǎng)貓陽性效率為15.6%（19/122），野生貓糞樣0.5%（1/200）。二、重要寄生蟲（西氏貝蛔蟲）研究進(jìn)展 西氏貝蛔蟲（Baylisascaris schroederi）是大熊貓?zhí)赜械募纳x，主要寄生于小腸，也可見于胃、膽管、胰管，野生貓感染強(qiáng)度可達(dá)2000條以上/只。 圈養(yǎng)大熊貓也常有發(fā)生，有較大的危害。1、分類地位 通過核糖體基因（ITS-

3、2、18S、28S）和線粒體基因（12S、COX、COX）和線粒體全基因組分析，從分子水平明確了該蛔蟲分類地位與系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系 1 大熊貓等八種野生珍稀動(dòng)物蛔蟲ITS-2基因的序列分析. 中國(guó)獸醫(yī)科學(xué),2008,38(11):933-938 2基于cytb基因?qū)Υ笮茇埖攘N珍稀野生動(dòng)物感染蛔蟲的種系發(fā)育分析. 中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，2012,42(9):895-899 3大熊貓等八種野生哺乳動(dòng)物蛔蟲的線粒體COX和COX基因的親緣關(guān)系分析. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),2012,43(10):1645-1650 4 Molecular characterization and phylogenetic analysi

4、s of ascarid nematodes from twentyone species of captive wild mammals based on mitochondrial and nuclear sequences. Parasitology, 2012,139(10):1329-1338 5 Complete mitochondrial genomes of Baylisascaris schroederi, Baylisascaris ailuri and Baylisascaris transfuga from giant panda, red panda and pola

5、r bear. Gene, 482 (2011) 59672、種群遺傳結(jié)構(gòu)分析 采用線粒體基因（12S、cytb、atp6和cox1）全序列對(duì)不同山系野生大熊貓蛔蟲的種群遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析 1基于線粒體12S對(duì)中國(guó)兩大山系大熊貓西氏貝蛔蟲種群遺傳多樣性的分析. 獸類學(xué)報(bào)，2015,35（3）:328-3352Analysis of the genetic diversity of the nematode parasite Baylisascaris schroederi from wild giant pandas in different mountain ranges in China.

6、 Parasite &Vector,2013,6:2333Absence of genetic structure in Baylisascaris schroederi populations, a giant panda parasite,determined by mitochondrial sequencing. Parasites & Vectors 2014, 7:6063、功能基因 評(píng)價(jià)了5個(gè)功能基因作為疫苗或診斷用重組抗原候選基因的潛力1Cloning, expression and evaluation of the efficacy of a recombinant Bay

7、lisascaris schroederi Bs-Ag3 antigen in mice. Vaccine,2008,26:6919-69242Sequence analysis of Bs-Ag2 gene from Baylisascaris schroederi of giant panda and evaluation of the efficacy of a recombinant Bs-Ag2 antigen in mice. Vaccine, 27(2009):3007-30113Sequence Analysis of the Bs-Ag1 Gene of Baylisasca

8、ris schroederi from the Giant Panda and an Evaluation of the Efficacy of a Recombinant Baylisascaris schroederi Bs-Ag1 Antigen in Mice. DNA and Cell Biology, 2012,31(7): 117411814Potential of recombinant inorganic pyrophosphatase antigen as a new vaccine candidate against Baylisascaris schroederi in

9、 mice. Veterinary Research 2013, 44:905Cloning and characterization of a novel sigma-like glutathione S-transferase from the giant panda parasitic nematode, Baylisascaris schroederi. Parasites & Vectors,2015,8:444、蟲卵PCR檢測(cè)方法建立 通過擴(kuò)增線粒體12S基因片段（291bp）和COX2基因片段（331bp）建立了特異、靈敏的蟲卵PCR檢測(cè)方法1A sensitive and sp

10、ecific PCR assay for the detection of Baylisascaris schroederi eggs in giant panda feces. Parasitology International,2013,62: 4354362Molecular Diagnosis of Baylisascaris schroederi Infections in Giant Panda (Ailuropoda melanoleuca) Feces Using PCR. Journal of Wildlife Diseases, 2013,49(4):105210555、

11、基因組與轉(zhuǎn)錄組 西氏貝蛔蟲雌蟲和雄蟲的基因組測(cè)序及分析，同時(shí)進(jìn)行了基因組精細(xì)圖譜的構(gòu)建； 西氏貝蛔蟲胚胎期蟲卵、一期幼蟲（蟲卵內(nèi)）、二期幼蟲（蟲卵內(nèi)）、腸道四期幼蟲及成蟲五個(gè)時(shí)期的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及分析。 基因組為290 Mb6、存在問題 （1）藥物防治與耐藥性； 四川地區(qū)圈養(yǎng)大熊貓蛔蟲感染率為25.71（54/210）。【經(jīng)濟(jì)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2014，18（4）：214-216】 伊維菌素（膏劑，0.2mg/kg體重，每天1次，連用2天）、伊維菌素（片劑，0.2mg/kg體重，每天1次，連用2天）和雙羥萘酸噻嘧啶（膏劑，10mg/kg體重，每天1次，連用2天），結(jié)果：伊維菌素（膏劑）組、伊維菌素（片劑）

12、組和雙羥萘酸噻嘧啶（膏劑）組的蟲卵轉(zhuǎn)陰率分別為44.44、0.00和80.00?！拘竽僚c獸醫(yī)，2015，47（6）：87-89】 耐藥性問題？ （2）大熊貓伊維菌素中毒機(jī)理； 文獻(xiàn)報(bào)道犬、貓伊維菌素中毒后主要臨床表現(xiàn)為昏迷、抽搐和瞳孔放大。3只大熊貓伊維菌素中毒癥狀與犬、貓癥狀基本相似，但最大的不同是3只中毒個(gè)體都表現(xiàn)為瞳孔縮小。3只大熊貓個(gè)體在發(fā)病時(shí)間和季節(jié)上非常接近，且均是在口服伊維菌素后的10-12h發(fā)病?！疽吧鷦?dòng)物學(xué)報(bào)，2015,36（3）:337-341】 伊維菌素為一種神經(jīng)遞質(zhì)抑制劑，通過促進(jìn)-GABA的釋放，-GABA能夠阻礙節(jié)肢動(dòng)物肌纖維和線蟲比鄰神經(jīng)原的節(jié)后神經(jīng)傳遞，從而導(dǎo)致

13、節(jié)肢動(dòng)物和線蟲類的麻痹和死亡。 家犬的常規(guī)推薦治療劑量為0.2-0.3mg/kg體重，口服或者皮下注射。伊維菌素?zé)o論口服還是皮下注射均能廣泛分布于全身各組織，但很難滲透進(jìn)入腦脊液從而降低了自身毒性。 但柯利犬（Collie）或帶有柯利血緣的雜交犬因?yàn)樘厥獾幕蛉毕輰?dǎo)致伊維菌素更多地滲透進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，從而出現(xiàn)中毒反應(yīng)。柯利犬伊維菌素中毒機(jī)理 對(duì)伊維菌素敏感的柯利牧羊犬在MDR基因的第一個(gè)外顯子上缺失了ATAG四個(gè)堿基，結(jié)果造成開放閱讀框移位，所編碼的肽鏈在第91個(gè)位置提前終止，形成了不成熟的P-糖蛋白，從而使“血腦屏障”失效，伊維菌素進(jìn)入大腦組織，引起神經(jīng)中毒癥狀。 大熊貓伊維菌素中毒機(jī)理 參考犬類MDR的全長(zhǎng)cDNA，在大熊