瘧原蟲鏡檢技術(shù)培訓(xùn)手冊(cè)

1、目 錄瘧原蟲生活史一、概述二、人體內(nèi)發(fā)育三、蚊體內(nèi)的發(fā)育瘧原蟲鏡下形態(tài)一、薄血膜中瘧原蟲形態(tài)二、厚血膜中瘧原蟲形態(tài)顯微鏡使用及維護(hù)一、顯微鏡的構(gòu)造二、顯微鏡使用 三、使用注意事項(xiàng)四、顯微鏡的維護(hù)保養(yǎng)血片制作與染色一、血片制作二、血膜的染色瘧原蟲鏡檢技術(shù)一、血液二、血液中各種正常細(xì)胞形態(tài)三、薄血膜鏡檢四、厚血膜鏡檢五、雜質(zhì)與瘧原蟲的鑒別六、瘧原蟲計(jì)數(shù)附錄：瘧原蟲圖譜第一章 瘧原蟲生活史一、概述瘧原蟲是瘧疾的病原體。瘧原蟲為單細(xì)胞真核生物，屬原生動(dòng)物亞界頂端復(fù)合物門、孢子綱、真球蟲目、瘧原蟲科、瘧原蟲屬。人體瘧原蟲有4種：間日瘧原蟲（Plasmodium vivax）、惡性瘧原蟲(P.falcip

2、arum)、三日瘧原蟲(P.malariae)和卵形瘧原蟲(P.ovale)，依次引起間日瘧、惡性瘧、三日瘧和卵形瘧。在我國間日瘧較常見，惡性瘧次之，但對(duì)人體危害較間日瘧嚴(yán)重，三日瘧偶爾發(fā)現(xiàn)，卵形瘧已無病例報(bào)告。4種人體瘧原蟲的生物學(xué)特征見表1-1。瘧原蟲的發(fā)育和繁殖，必須通過脊椎動(dòng)物與昆蟲媒介兩個(gè)宿主，人體瘧原蟲的宿主是人和按蚊。瘧原蟲在人體分別寄生于肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞和血液中的紅細(xì)胞內(nèi)，在蚊體內(nèi)則寄生于蚊胃，最后積聚于唾腺。4種人體瘧原蟲的生活史基本相同，包括在人體內(nèi)的紅細(xì)胞外期和紅細(xì)胞內(nèi)期以及在蚊體內(nèi)的配子生殖和孢子增殖兩個(gè)階段。二、人體內(nèi)發(fā)育瘧原蟲在人體內(nèi)的發(fā)育分成肝細(xì)胞內(nèi)的發(fā)育和紅細(xì)胞內(nèi)的發(fā)

3、育兩個(gè)階段。（一） 紅細(xì)胞外期按蚊吸人血時(shí)，按蚊唾腺中的子孢子隨唾液進(jìn)入人體的末梢血液中，在30分鐘內(nèi)，隨血流進(jìn)入肝臟，在肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞內(nèi)發(fā)育，進(jìn)行裂體增殖，此時(shí)期稱紅細(xì)胞外期（簡稱紅外期）或肝細(xì)胞期（簡稱肝期），此時(shí)期的瘧原蟲稱肝期裂殖體。成熟肝期裂殖體直徑為4560m，內(nèi)含數(shù)以萬計(jì)的肝期裂殖子。肝期裂殖體成熟致使肝細(xì)胞破裂，肝期裂殖子釋入血液。不同種瘧原蟲的此期所需時(shí)間不同，從612天不等。間日瘧原蟲的紅外期裂體增殖較為復(fù)雜。目前認(rèn)為間日瘧原蟲的子孢子在遺傳學(xué)上具有兩種不同的類型，即速發(fā)型子孢子和遲發(fā)型子孢子。速發(fā)型子孢子侵入肝細(xì)胞后，遂開始紅外期裂體增殖，釋放出肝期裂殖子侵入紅細(xì)胞，經(jīng)裂體增

4、殖引起臨床發(fā)作。遲發(fā)型子孢子侵入肝細(xì)胞后暫不繼續(xù)發(fā)育，處于休眠狀態(tài)（休眠體），經(jīng)過一段休眠期后，再發(fā)育成為成熟的紅外期裂殖體，釋放出肝期裂殖子侵入紅細(xì)胞引起復(fù)發(fā)。惡性瘧原蟲和三日瘧原蟲無遲發(fā)型子孢子，因而惡性瘧和三日瘧也無復(fù)發(fā)現(xiàn)象（二）紅細(xì)胞內(nèi)期 紅外期裂殖子從肝細(xì)胞釋放出來進(jìn)入血液后，一部分被吞噬細(xì)胞消滅，一部分在數(shù)分鐘后侵入紅細(xì)胞并開始發(fā)育，進(jìn)行裂體增殖，這個(gè)時(shí)期稱為紅細(xì)胞內(nèi)期(簡稱紅內(nèi)期)。裂殖子進(jìn)入紅細(xì)胞后，其細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)一個(gè)較大的空泡，最初為圓形，細(xì)胞質(zhì)少，圍繞著空泡，細(xì)胞核在蟲體的一側(cè)，頗似戒指的寶石，發(fā)育成早期滋養(yǎng)體（亦稱環(huán)狀體）。以后逐漸發(fā)育，蟲體和細(xì)胞核都漸漸增大，細(xì)胞質(zhì)增多

5、，并分解血紅蛋白產(chǎn)生瘧色素，其色澤、形狀有種的差別，此時(shí)的瘧原蟲稱為晚期滋養(yǎng)體（亦稱大滋養(yǎng)體），因其細(xì)胞質(zhì)向外伸出不規(guī)則的偽足，能呈阿米巴樣運(yùn)動(dòng)，也稱為阿米巴樣體。惡性瘧原蟲的環(huán)狀體，在外周血液中經(jīng)十幾個(gè)小時(shí)的發(fā)育，逐漸隱匿在微血管、血竇或其他血流緩慢處，發(fā)育成大滋養(yǎng)體及裂殖體，因此在外周血液中很難看到這兩個(gè)時(shí)期。瘧原蟲由小滋養(yǎng)體發(fā)育成大滋養(yǎng)體的時(shí)間間日瘧約須8-10個(gè)小時(shí)，惡性瘧原蟲10余個(gè)小時(shí)。大滋養(yǎng)體發(fā)育成熟后蟲體變圓，胞質(zhì)內(nèi)的空泡消失，核開始分裂，逐漸發(fā)育成為成熟裂殖體。成熟裂殖體的每個(gè)核被一份胞質(zhì)包繞，核的數(shù)量因不同蟲種而異，一般為832個(gè)，稱為裂殖子。裂殖體成熟后，被寄生的紅細(xì)胞破

6、裂，釋放出裂殖子。破裂的紅細(xì)胞碎片、裂殖子和瘧色素等進(jìn)入血液，引起瘧疾臨床發(fā)作。一部分裂殖子被巨噬細(xì)胞吞食，一部分裂殖子再侵入正常紅細(xì)胞，開始新一輪的紅內(nèi)期發(fā)育，如此循環(huán)往復(fù)，稱為裂體增殖周期。紅內(nèi)期發(fā)育成熟的時(shí)間，因不同蟲種而異，間日瘧原蟲和卵形瘧原蟲為48小時(shí)，惡性瘧原蟲為2438小時(shí)，三日瘧原蟲為72小時(shí)，產(chǎn)生相應(yīng)的間日發(fā)熱和三日發(fā)熱等不同發(fā)熱周期。紅細(xì)胞內(nèi)的瘧原蟲經(jīng)過數(shù)次裂體增殖后，部分侵入紅細(xì)胞的裂殖子不再進(jìn)行核分裂，而逐漸發(fā)育成為雌、雄配子體，或稱大、小配子體，這是瘧原蟲有性生殖的開始。成熟的雌、雄配子體被雌性按蚊吸入后，便在蚊胃內(nèi)進(jìn)行有性生殖。瘧原蟲的生活史參見圖1-1。三、蚊體

7、內(nèi)的發(fā)育在按蚊叮吸攜帶有雌、雄配子體的人血時(shí)，紅內(nèi)期瘧原蟲進(jìn)入蚊胃，但只有雌、雄配子體能在蚊體內(nèi)發(fā)育和繁殖，其余各期均被消化。雌、雄配子體在蚊體內(nèi)的發(fā)育和繁殖，包括配子生殖和孢子增殖兩個(gè)期。（一）配子生殖在蚊胃內(nèi)，雌配子體的核經(jīng)過減數(shù)分裂，形成圓形不活動(dòng)的雌配子。雄配子體的核分裂成48個(gè)，細(xì)胞漿伸出鞭毛狀細(xì)絲，每1細(xì)胞核進(jìn)入一條鞭毛狀細(xì)絲內(nèi)，形成雄配子。雄配子游近雌配子，雌、雄配子結(jié)合形成圓形的合子，并進(jìn)一步發(fā)育成長形能蠕動(dòng)的動(dòng)合子。動(dòng)合子穿過蚊胃壁的上皮細(xì)胞，停留于上皮細(xì)胞和彈性纖維膜之間，發(fā)育成卵囊。此時(shí)約為吸血后的第2472小時(shí)。（二）孢子增殖在卵囊內(nèi)核反復(fù)分裂，形成許多梭狀子孢子。蚊胃

8、壁上的卵囊可有數(shù)個(gè)到數(shù)十個(gè)或上百個(gè)，一個(gè)發(fā)育成熟的卵囊內(nèi)可有1 000到10 000個(gè)子孢子。瘧原蟲在蚊體內(nèi)發(fā)育時(shí)間的長短與溫度和濕度有關(guān)，室溫2426，相對(duì)濕度7580，是蚊體內(nèi)瘧原蟲孢子生殖最適宜的條件。氣溫低于16或高于30時(shí)，發(fā)育變慢，并退化變性，直至死亡。成熟子孢子通過卵囊的微孔逸出或卵囊破裂后擴(kuò)散入血腔，最后聚集于唾腺內(nèi)。當(dāng)含子孢子的雌蚊吸血時(shí)，子孢子隨唾液進(jìn)入人體，瘧原蟲開始其在人體內(nèi)的發(fā)育過程。表1 4種人體瘧原蟲的生物學(xué)特征惡性瘧原蟲間日瘧原蟲卵形瘧原蟲三日瘧原蟲紅外期發(fā)育天數(shù)58914-15休眠體無有有無紅外期裂殖子數(shù)30000100001500015000裂體增殖周期（小

9、時(shí)）36-48484872寄生的紅細(xì)胞特征幼紅細(xì)胞Duffy陽性網(wǎng)織紅細(xì)胞和幼紅細(xì)胞網(wǎng)織紅細(xì)胞和幼紅細(xì)胞正常紅細(xì)胞紅細(xì)胞脹大無明顯脹大略脹大無紅細(xì)胞斑點(diǎn)茂氏點(diǎn)薛氏點(diǎn)薛氏點(diǎn)齊氏點(diǎn)瘧色素黃褐色棕黃色棕黃色深褐色紅內(nèi)期裂殖子數(shù)8-2612-246-126-12配子體新月/臘腸形圓形圓形圓形蚊內(nèi)發(fā)育天數(shù)108-912-1414-15卵囊內(nèi)瘧色素鏈狀和條狀皇冠羽毛狀交叉線聚集于邊緣圖1-1瘧原蟲的生活史 瘧原蟲鏡下形態(tài)采患者的血液制作涂片并染色后，可以在顯微鏡下觀察到瘧原蟲形態(tài)。常用的血涂片有兩種：一種是借推片將血液薄薄地涂在載玻片上，使每個(gè)紅細(xì)胞平鋪在玻片上，稱薄血膜，因薄血膜血液干燥快，原蟲形態(tài)極少

10、變形，多用于以觀察瘧原蟲形態(tài)與鑒別蟲種；另一種是把較多的血液涂成圓形，血膜中血細(xì)胞重疊，原蟲較為集中，稱為厚血膜。厚血膜涂布面積小，陽性檢出率高，厚血膜的鏡檢效率比薄血膜約高六倍?，F(xiàn)常用的一張載玻片上同時(shí)做厚薄血膜各一，厚血膜用來檢查，薄血膜供編號(hào)和鑒別蟲種用。一、薄血膜中瘧原蟲形態(tài)薄血膜涂制均勻時(shí)瘧原蟲著色良好，結(jié)構(gòu)清晰，便于觀察形態(tài)和鑒別蟲種。薄血膜上各種紅內(nèi)期瘧原蟲的形態(tài)，見表2-1和圖2-1核被寄生的紅細(xì)胞胞漿空泡 薛氏小點(diǎn)瘧色素核 表2-1 四種瘧原蟲薄血膜形態(tài)鑒別(吉氏染色)間日瘧原蟲惡性瘧原蟲三日瘧原蟲卵形瘧原蟲被寄生紅細(xì)胞大小形狀脹大正常正?；蚩s小正?；蛏悦洿?，卵圓形或邊緣呈傘

11、矢狀顏色褪色正?；蛏宰险Ｍ噬唿c(diǎn)薛氏點(diǎn)出現(xiàn)稍晚，紅色，細(xì)小數(shù)多茂氏點(diǎn)紅色，粗大數(shù)少齊氏點(diǎn)淡紅色，微細(xì)薛氏點(diǎn)出現(xiàn)較早粗大，數(shù)多小滋養(yǎng)體大小較大，約占紅細(xì)胞直徑的1/ 3小環(huán)狀體較小，約占紅細(xì)胞直徑1/6, 大環(huán)狀體與間日瘧原蟲相似中等中等核1個(gè)1或2個(gè)1個(gè)1個(gè)胞漿較薄小環(huán)狀體纖細(xì)，大環(huán)狀體與間日瘧原蟲相似較粗厚較粗厚色素?zé)o無偶見細(xì)小褐色顆粒無大滋養(yǎng)體大小較大較小較小較小核多見1個(gè)1或2個(gè)1個(gè)1個(gè)胞漿阿米巴樣，常含空泡圓形，空泡不顯著帶狀，空泡不顯著圓形，空泡不顯著色素黃褐色，細(xì)小，桿狀，散在分布黃褐色，細(xì)小，結(jié)成團(tuán)塊后，呈黑褐色深褐色，粗大，沿邊緣分布棕黃色，較粗大未成熟裂殖體大小較大較小較小

12、較小核2個(gè)以上2個(gè)以上2個(gè)以上2個(gè)以上胞漿圓形或不規(guī)則，空泡消失圓形，空泡消失圓形，空泡消失圓形或卵圓形，空泡消失色素黃褐色，分布不勻黑褐色團(tuán)塊狀深褐色，分布不勻棕黃色，分布不勻成熟裂殖體大小大于正常紅細(xì)胞小于正常紅細(xì)胞小于正常紅細(xì)胞小于正常紅細(xì)胞裂殖子1224個(gè)，常為1618個(gè)，排列不規(guī)則，較大826個(gè)，常為818個(gè)，排列不規(guī)則，較小612個(gè)，常為8個(gè)，常排列如菊花狀，較大614個(gè)，常為8個(gè)，排列不規(guī)則，較大色素黃褐色，常聚集一側(cè)黑褐色團(tuán)塊深褐色，常聚集中央棕黃色，聚集中央或一側(cè)雌配子體大小形狀大于正常紅細(xì)胞，圓形較大，新月形，兩端尖銳小于正常紅細(xì)胞，園形小于正常紅細(xì)胞，圓形核1個(gè)，較小，深

13、紅色，位于一側(cè)1個(gè)，較小，深紅色，位于中央1個(gè)，較小，深紅色，位于一側(cè)1個(gè)，較小，深紅色，位于一側(cè)胞漿深藍(lán)色深藍(lán)色深藍(lán)色深藍(lán)色色素黃褐色，均勻散在黑褐色，緊密分布于核周圍深褐色，均勻散在棕黃色，散在雄配子體大小形狀大于正常紅細(xì)胞，園形較大，臘腸形，兩端鈍園小于正常紅細(xì)胞，圓形小于正常紅細(xì)胞，圓形核1個(gè)，較大，淡紅色，位于中央1個(gè)，較大，淡紅色，位于中央1個(gè)，較大，淡紅色，位于中央1個(gè)，較大，淡紅色，位于中央胞漿淺藍(lán)色淺藍(lán)色或淡紅色淺藍(lán)色淺藍(lán)色色素黃褐色，均勻散在黑褐色，松散分布于核周圍深褐色，均勻散在棕黃色，散在 二、厚血膜中瘧原蟲形態(tài)厚血膜由于用血量多，細(xì)胞重疊，干燥緩慢，以致蟲體皺縮，空泡

14、消失，胞質(zhì)變形，加之紅細(xì)胞溶解，所以蟲種和蟲體的鑒別比薄血膜困難。厚血膜中4種瘧原蟲形態(tài)鑒別要點(diǎn)，見表2-2表2-2 四種瘧原蟲厚血膜形態(tài)鑒別(吉氏染色)間日瘧原蟲惡性瘧原蟲三日瘧原蟲卵形瘧原蟲小滋養(yǎng)體較大。核1個(gè)，較大，胞漿較厚。常呈！或，狀較小。核12個(gè)，較小，胞漿纖細(xì)。常呈！、飛鳥、和斷環(huán)狀中等。核1個(gè)，較大，胞漿粗厚。常呈 環(huán)狀或鳥眼狀大小與間日瘧原蟲相似，胞漿致密，核較大。大滋養(yǎng)體較大。呈阿米巴樣，形狀不規(guī)則。核位于胞漿之中或外邊，胞漿?？s成圓形或斷裂成數(shù)塊。色素分布不勻較小。常呈圓形，色素細(xì)小或結(jié)成12個(gè)團(tuán)塊中等。常呈圓形，色素粗大大小與間日瘧原蟲相似，胞漿呈深藍(lán)色，核較大裂殖體較

15、大。裂殖子1224個(gè)。裂殖子較大較小。裂殖子826個(gè)。裂殖子較小較小。612個(gè)。裂殖子大于間日瘧原蟲裂殖體大小與間日瘧原蟲相似，裂殖子614個(gè)，核較大配子體較大。圓形，色素粗大。雌配子體較大，核小，胞漿深藍(lán)色，雄配子體較小，核大，胞漿淺藍(lán)色雌配子體新月形，雄配子體臘腸形與間日瘧原蟲相似，但較小。色素較粗大卵圓形，大小與間日瘧原蟲相似， 雌配子體核致密，偏于一側(cè)，雄配子體核疏松色素黃褐色，細(xì)小。桿狀，或結(jié)成粗大顆粒。分布不勻黃褐色，顆粒細(xì)小，結(jié)成團(tuán)塊后，呈黑褐色。配子體色素粗大，分布于核周圍有時(shí)小滋養(yǎng)體可見色素，深褐色，較粗大。沿邊分布色素顆粒較大，呈深棕色，分布彌散被寄生紅細(xì)胞常見紅細(xì)胞“影子

16、”和薛氏點(diǎn)可見紅細(xì)胞“影子”和茂氏點(diǎn)可見紅細(xì)胞“影子”小滋養(yǎng)體時(shí)即可見薛氏點(diǎn)其他?？刹榈礁麟A段的瘧原蟲僅見小滋養(yǎng)體(或)和配子體。一般不見大滋養(yǎng)體和裂殖體?？刹榈礁麟A段瘧原蟲?？刹榈礁麟A段瘧原蟲圖2-1 間日瘧原蟲形態(tài)圖2-2 惡性瘧原蟲形態(tài)圖2-3三日瘧原蟲形態(tài)圖2-4卵形瘧原蟲形態(tài)第三章 顯微鏡使用及維護(hù) 發(fā)熱病人血涂片的顯微鏡檢查（簡稱發(fā)熱病人血檢）是瘧疾控制和檢測的重要手段，因此掌握顯微鏡的使用方法和日常維護(hù)是十分必要的。一、顯微鏡的構(gòu)造 顯微鏡通常有4個(gè)部分組成：A.支撐系統(tǒng)；B.放大系統(tǒng)；C.照明系統(tǒng)；D.調(diào)節(jié)系統(tǒng)；見圖3-1。 圖3-1 顯微鏡的構(gòu)造（）支撐系統(tǒng)：1，鏡座；2，鏡

17、臂；3，鏡頭座；4，載物臺(tái)；5，持片夾（圖3-2）。圖3-2 顯微鏡支撐系統(tǒng)（）放大系統(tǒng)：1、目鏡：放大尺寸為10倍（圖3-3）；圖3-3 顯微鏡目鏡2、物鏡：放大倍數(shù)分別為10倍、40倍、100倍，在使用100倍時(shí)需要使用鏡油（圖3-4）。圖3-4 顯微鏡物鏡（C）照明系統(tǒng)：1，反光鏡；2，聚光器；3，光圈；固定在聚光器內(nèi)，它可以調(diào)節(jié)通過聚光器的光線的強(qiáng)弱（彩圖3-5）。圖3-5 顯微鏡照明系統(tǒng)D）調(diào)節(jié)系統(tǒng)：1，粗對(duì)焦螺旋；2，細(xì)對(duì)焦螺旋：緩慢移動(dòng)觀察物用以精確調(diào)節(jié)；3，光圈調(diào)節(jié)杠桿；4，持片夾：控制玻片向前向后向左向右移動(dòng)。二、顯微鏡使用 （一） 使用環(huán)境與工作習(xí)慣顯微鏡的工作場所應(yīng)當(dāng)清潔

18、、干燥、無震動(dòng)、無腐蝕性氣體存在。臺(tái)面和凳子的高度要適當(dāng)。鏡檢時(shí)，即便用單目顯微鏡，也須兩眼同時(shí)睜開。（二）聚光器及可變光闌的用法 一般的聚光鏡，在平行光照射的情況下，其焦點(diǎn)落在它上端透鏡平面中心上方約1.25mm處。當(dāng)使用高倍或油鏡時(shí)，由于放大率大，鏡像亮度小，需要較強(qiáng)的照明。因此，應(yīng)把聚光器升至最高，以便使聚光鏡的焦點(diǎn)正好落在標(biāo)本平面上。但在使用低倍鏡時(shí)，可將聚光器適當(dāng)下降。 可變光闌一是控制射向標(biāo)本的光通量；二是改變聚光器的數(shù)值孔徑。在這兩個(gè)作用中，后者是主要的。為了使物鏡的分辨率得到充分的利用，從原則上說，聚光器的數(shù)值孔徑應(yīng)與物鏡的相同。否則，分辨率或清晰度就要下降。 （三）物鏡的正確

19、調(diào)焦 對(duì)光完成后，升高鏡筒，將標(biāo)本玻片夾在移動(dòng)器上，并將欲檢查的部分移至載物臺(tái)通光孔的中央，然后開始調(diào)焦。 無論作何種檢查，均應(yīng)從低倍鏡開始。調(diào)焦時(shí)，先用粗動(dòng)手輪將鏡筒下降，使低倍鏡的前透鏡與蓋玻片之間的距離略縮小于該物鏡的工作距離（5mm以下）。為了避免物鏡壓在載玻片上，可從側(cè)面窺視。然后，一邊從目鏡中觀察視野，一邊利用粗動(dòng)手輪將鏡筒徐徐上升，待初見物像后，改用微動(dòng)手輪作精細(xì)調(diào)焦，直至物像最清晰為止。低倍物鏡的視場大，有利于觀察標(biāo)本的全貌。從低倍鏡轉(zhuǎn)換為高倍鏡時(shí)，如果物鏡是顯微鏡的原配物鏡，所用的載玻片、蓋玻片有符合標(biāo)準(zhǔn)，一般都可以進(jìn)行等高轉(zhuǎn)換。即轉(zhuǎn)換后，只要稍微調(diào)節(jié)一下微調(diào)旋鈕，即可看到清

20、晰的圖像。但油鏡不強(qiáng)求齊焦，最好先將鏡筒升高后再轉(zhuǎn)換，最后按低倍鏡的調(diào)焦方法重新調(diào)焦。用油鏡觀察時(shí)，要先將物鏡移開，在要觀察的部位加一滴香柏油，然后將油鏡放正，并慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器，降下鏡筒，使鏡頭浸入油滴中。可下降至幾乎與制片接觸，但切不可壓及玻片。然后，向上微微轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器，使鏡筒上升，當(dāng)視野中出現(xiàn)有模糊的影像時(shí)，改用細(xì)調(diào)節(jié)器向上轉(zhuǎn)到直至影像清晰為止。在使用油鏡時(shí)，在聚光鏡與標(biāo)本之間滴加浸油，可提高物鏡的分辨率。在整個(gè)調(diào)焦過程中（尤其是高倍物鏡和油鏡的調(diào)焦），每個(gè)動(dòng)作都要緩慢進(jìn)行。否則，物像會(huì)一閃而過，找不到觀察目標(biāo)。 油鏡使用完畢后，要及時(shí)將浸油擦拭干凈。鏡頭上可先用干凈的擦鏡紙擦干凈即行

21、。聚光鏡的擦拭方法與此相同。 三、使用注意事項(xiàng)（一） 取出顯微鏡時(shí)，要用右手握住執(zhí)手，左手托住鏡座，小心地放到桌面上，不可單手拎著移動(dòng)。（二）任何旋鈕轉(zhuǎn)動(dòng)有困難時(shí)，絕不能用力過大，而應(yīng)查明原因，排除障礙。如果自己不能解決時(shí)，要向?qū)I(yè)人員請(qǐng)求解決。所有的鏡頭均經(jīng)校驗(yàn)，請(qǐng)勿自行拆開。（三）保持顯微鏡的清潔，盡量避免灰塵落到鏡頭上，否則容易磨損鏡頭。同時(shí)要盡量避免試劑或溶液滴到顯微鏡上，特別是用高倍物鏡觀察時(shí)，鏡頭很容易被染料或試劑玷污，一旦被玷污，應(yīng)立即用擦鏡紙擦拭干凈，油鏡頭還應(yīng)使用清潔劑擦拭。由于光學(xué)玻璃比一般玻璃的硬度小，易于損傷。因此擦拭光學(xué)透鏡只能用專用的擦鏡紙，不能用棉花、棉布或其它物

22、品擦拭。擦?xí)r要先將擦鏡紙折疊為幾折，從一個(gè)方向輕輕擦拭鏡頭，每擦一次，擦鏡紙就要折疊一次，以免沾在擦鏡紙上的灰塵損傷透鏡，使鏡面出現(xiàn)一條條的劃痕。（四）每次使用結(jié)束時(shí)，并光源調(diào)節(jié)器調(diào)至最小后關(guān)閉，并將物鏡轉(zhuǎn)成“八”字形垂于鏡筒下，然后降下鏡筒，避免物鏡鏡頭下落時(shí)與聚光器相碰撞。顯微鏡應(yīng)存放于陰涼干燥的地方，若放在潮濕處，一旦鏡片上著生霉菌，就會(huì)腐蝕鏡片，且很難除去。四、顯微鏡的維護(hù)保養(yǎng)（一） 防高熱：顯微鏡是由精密的機(jī)械和光學(xué)鏡頭組成的，由于各種材料熱膨脹系數(shù)不同，所以顯微鏡不能在陽光了曝曬，也不能放在靠近火爐和暖氣的地方。只能室內(nèi)存放，其工作的溫度范圍一般為540。（二） 防潮：如果長期受潮

23、，透鏡很容易發(fā)霉，表面還會(huì)腐蝕，所以應(yīng)在干燥環(huán)境下保存。在31時(shí)濕度不得大于80，溫度每升高3攝氏度，相對(duì)濕度要設(shè)法降低10。（三） 防塵 ：灰塵不僅會(huì)影響成像質(zhì)量，而且灰塵中往往也帶有含酸、堿等腐蝕性的塵粒，容易腐蝕鏡面。而硬度大的塵粒還可能在擦拭鏡頭時(shí)在鏡面上劃出傷痕，損壞鏡頭。此外，灰塵掉進(jìn)機(jī)械活動(dòng)部分時(shí)容易造成機(jī)械部分轉(zhuǎn)動(dòng)不靈活，甚至損壞。（四）防腐蝕：顯微鏡不能接觸酸類和堿類物質(zhì)。也不要與揮發(fā)性很強(qiáng)的化學(xué)藥品及其它有害藥品放在一起，以免腐蝕鏡頭。（五）防震：顯微鏡是精密儀器，劇烈的震動(dòng)會(huì)造成精密度的降低。要輕拿輕放，擱置要平穩(wěn)，使用時(shí)動(dòng)作應(yīng)輕柔。（六）擦拭：.機(jī)械裝置的擦拭:機(jī)械裝置

24、如有污漬，可用干凈的柔軟細(xì)布擦拭；如果擦不掉，可用擦鏡紙或細(xì)綢布蘸點(diǎn)二甲苯擦拭。應(yīng)注意不能用酒精、乙醚等化學(xué)品，以免腐蝕裝置表面的油漆。光學(xué)鏡頭的擦拭：一般采用先吹，后刷，再擦拭的方法。吹，就是用吹氣球(或用洗耳球)吹掉鏡頭表面的附著物。但不能用口直接吹氣。吹不掉時(shí)，可用干凈的專用清潔毛刷輕輕地刷。經(jīng)上述兩種方法處理后鏡頭表面仍有污物時(shí)，用擦鏡紙稍蘸一點(diǎn)二甲苯或是專用清潔劑輕輕擦拭。如果發(fā)現(xiàn)鏡頭發(fā)霉長霧時(shí)，可用擦鏡紙蘸少許無水酒精和乙醚的混合液擦拭，但液體不能太多，停留時(shí)間要短，以免滲入鏡頭內(nèi)部造成腐蝕。 油鏡頭每次用過后要及時(shí)擦拭，先用干擦鏡紙擦一兩次，把大部分介質(zhì)油去掉，再用二甲苯滴濕擦鏡

25、紙擦兩次，最后再用干擦鏡紙擦一次。第四章 血片制作與染色一、血片制作（一）所需器材1、載玻片：玻片使用前應(yīng)清洗。新玻片應(yīng)先浸入有液態(tài)洗滌劑的清水中1020分鐘，然后用干凈棉巾逐個(gè)擦拭，再用清水沖洗干凈，晾干，最后用干凈、柔軟的棉巾將玻片擦亮。用于特殊的目的時(shí)，最后可將玻片浸泡在95酒精中510分鐘，再將玻片擦干擦亮。已用過的玻片應(yīng)先浸泡于洗滌劑溶液中12天，或浸泡于煮沸的5肥皂水中12小時(shí)，再移到新配置的洗滌劑溶液中12小時(shí)，逐個(gè)擦去玻片上舊的血膜痕跡，用清水漂洗干凈，再將玻片擦干擦亮。洗凈的玻片每1020張用白紙包好放入塑料袋內(nèi)，保存于干燥環(huán)境中備用。2、采血針：使用一次性釆血針。3、玻片盒

26、：為防止污染和蒼蠅吸食血膜，新制作的血膜應(yīng)放在玻片盒中，厚血膜放置時(shí)要保持水平，直到充分干燥。4、75酒精棉球：用于采血前后的消毒。5、記號(hào)筆或鉛筆：用于玻片上書寫號(hào)碼。（二）采血部位及取血方法采血部位以耳垂較為合適，也可在手指末端采血，嬰兒可從拇趾或足跟取血。先用75酒精棉球消毒取血部位后，以一次性采血針迅速刺入取血部位12mm深，然后用左手大拇指、食指和右手中指協(xié)同擠出血滴。（三）涂制血膜取玻片2張，1張作載片，1張作推片（具有光滑邊緣）。用右手拇指和食指夾持推片側(cè)緣中部，用推片的左下角刮取血液45l，再用該端中部刮取血液11.5l。將左下角的血滴涂于載片的中央偏右處，由里向外劃圈涂成直徑

27、為0.81cm的圓形厚血膜（厚度以1個(gè)油鏡視野內(nèi)可見到510個(gè)白細(xì)胞為宜）。用干棉球抹凈玻片角上的血漬，然后將推片下緣平抵載玻片的中線，當(dāng)血液在載玻片與推片之間向兩側(cè)擴(kuò)展至約2cm寬時(shí)，使兩玻片保持2535角，從右向左迅速向前推成舌狀薄血膜，制成的薄血膜應(yīng)在玻片上形成平鋪的血細(xì)胞，細(xì)胞之間互相接觸而不相互重疊。每張載玻片上分別做1個(gè)薄血膜，1個(gè)厚血膜。標(biāo)準(zhǔn)血膜的位置如圖4-1所示。取干凈玻片及推片各一張，用右手大拇指和食指夾持推片側(cè)緣中部，用推片的左下角刮取血液45l（約火柴頭大?。?，再用該端中部刮取血液11.5l。將左下角的血滴涂于載片的中央偏右，由里向外劃圈涂成直徑為0.81cm的圓形厚血

28、膜（厚血膜的厚度以一個(gè)油鏡視野內(nèi)可見到510個(gè)白細(xì)胞為宜）。用干棉球抹凈角上的血漬，然后將推片下緣平抵載玻片的中線，當(dāng)血液在載玻片與推片之間向兩側(cè)擴(kuò)展至約2cm寬時(shí)，使兩玻片保持2535角，從右向左迅速向前推成舌狀薄血膜。薄血膜 厚血膜 標(biāo)記處圖4-1（四）血膜的保存血膜制成后，立即將受檢者號(hào)碼寫在玻片上，血膜朝下插入直豎的標(biāo)本盒內(nèi)，讓血膜自然干燥后才能染色。吉氏染色時(shí)薄血膜在染色前須經(jīng)甲醇固定，而厚血膜在染色前必須溶血，但新制作的厚血膜也可直接染色。血膜放置時(shí)間，夏天不宜超過48小時(shí)，冬天不宜超過72小時(shí)，否則厚血膜會(huì)自然固定而不能溶血，影響鏡檢。不能及時(shí)染色的血膜，可先用甲醇固定薄血膜，將

29、厚血膜溶血，晾干后包好，放入干燥器中，置于冰箱內(nèi)保存。臨用時(shí)，將干燥器放置室溫中12小時(shí)后取出血片。二、血膜的染色（一） 染色液的制備 目前常用的血膜染劑有吉氏和瑞氏兩種。吉氏染劑不僅適用于厚血膜和批量血膜的染色，而且效果穩(wěn)定，染色時(shí)間和染液濃度對(duì)染色結(jié)果影響較小，染色后的血膜保存時(shí)間較長，同時(shí)吉氏染劑能長期保存而不變質(zhì)，染色技術(shù)也易掌握，被推薦使用。吉氏粉 5g，甲醇250ml，甘油250ml。將吉氏粉置于研缽中，加入少量甘油充分研磨，邊加邊磨，至甘油加完為止，倒入500ml有塞玻璃瓶中。在研缽中加入少量甲醇，洗掉剩余部分，倒入瓶內(nèi)，再次加甲醇，洗后再倒入瓶中，至甲醇洗凈研缽為止。塞緊瓶塞，

30、充分搖勻，室溫內(nèi)放置，每天用力搖動(dòng)溶液5分鐘，3天后即可使用。另一種方法是在帶有緊口瓶塞的硬質(zhì)玻璃瓶中放入約50個(gè)玻璃珠（直徑35mm）。用玻璃漏斗把甘油灌入瓶中，把吉氏粉放入漏斗中，用甲醇緩慢地把所有染料粉沖入瓶內(nèi)，將瓶塞塞緊，置于室溫內(nèi)，每天用力搖動(dòng)5分鐘，3天后即可使用，保存時(shí)間長則更好。（二）染色用水常用的染液的稀釋用水和染色的沖洗用水，是中性的蒸餾水或經(jīng)煮沸過濾的冷開水，也可用井水、河水、泉水或雨水。為了使血膜著色較好，應(yīng)用pH7.07.2水效果最佳。為此，可配制緩沖液用于染液的稀釋和染色后的沖洗。配制pH6.67.4緩沖液時(shí)，先制備好兩種貯備液。貯備液為每1 000ml蒸餾水含9.

31、5g 磷酸氫二鈉，貯備液為每1 000ml蒸餾水含9.07g 磷酸二氫鉀。配制pH6.67.4的緩沖液時(shí)，將兩種貯備液按一定比例混合后，用蒸餾水稀釋成各種濃度的溶液。兩種貯備液的用量見表4-1。表4-1 配制pH6.67.4緩沖液兩種貯備液用量表pH溶液溶液ml磷酸氫二鈉含量(g)ml磷酸二氫鉀含量(g)6.654.70.52148.81.356.868.40.65126.81.157.089.50.8599.20.907.196.80.9288.20.807.2105.01.0077.20.707.4126.31.2055.10.50注：用于薄血膜的染色和一般漂洗時(shí)，用蒸餾水稀釋至1 000

32、ml，用于厚血膜及同一張玻片上厚血膜與薄血膜的染色時(shí)，用蒸餾水稀釋至500ml。（三）吉氏染色方法染色前薄血膜要用甲醇或無水乙醇固定，厚血膜用蒸餾水或清水溶血。單張血膜染色可取蒸餾水或緩沖液1ml加入吉氏染液1滴，混合均勻后，滴在厚、薄血膜上，染色2030分鐘，然后水洗、晾干。成批染色時(shí)，將血膜朝一個(gè)方向插入染色缸中，或每對(duì)玻片血膜朝外，背靠背插入染色缸中，倒入新配的2吉氏染液(2ml吉氏原液同98ml蒸餾水緩沖液混勻），浸沒厚薄血膜，染色30分鐘后，向染色缸中注入緩沖液或自來水，直到溢出，除掉染液表面上的浮渣，將染色缸中殘余的染液傾出，加入新水，反復(fù)沖洗23次，取出玻片，將血膜朝下插在晾片板

33、上干燥。染薄血膜時(shí)，染液濃度可稍高、時(shí)間稍長一些，而染厚血膜時(shí)，則染液濃度可稍低、時(shí)間稍短一些。當(dāng)同一張玻片上厚血膜與薄血膜同時(shí)染色時(shí)，應(yīng)按照厚血膜的染色方法，以免厚血膜過染而鏡檢困難。褪色或染色效果不佳時(shí)，可重新染色，先用二甲苯反復(fù)洗去血膜上的油跡，再用75酒精滴在厚、薄血膜上，用水反復(fù)沖洗數(shù)次，至厚血膜不見藍(lán)色為止。取1ml蒸餾水加入1滴吉氏染液，混勻后滴在厚、薄血膜上，染色14小時(shí)（根據(jù)血片存放時(shí)間而定)。清水沖洗23分鐘，加12滴75酒精于血膜上，12秒鐘后用水沖洗，待干。（四）影響血膜染色質(zhì)量的因素血片染色好壞，除與玻片的清潔程度、血膜制作的質(zhì)量和染色技術(shù)等有關(guān)外，還與下列因素有關(guān):

34、1、染劑和溶劑的質(zhì)量：染料、甲醇和甘油如不純，常使配成的染液偏酸或偏堿，影響染色效果。因此，必須用分析純的甲醇和中性甘油，配制時(shí)所用器具必須干凈無水。新配制的染液應(yīng)先試染，以酸堿度最適宜的水稀釋，觀察染色是否理想，否則需重新制備染液。2、染液的新舊：新配制的染液，一般染色力較弱，且常呈堿性。染液放置時(shí)間稍長，染色力逐漸增加，故應(yīng)在染色前12周先將染液制備好。盛染液的瓶子應(yīng)密封，以免影響染液質(zhì)量。3、染液的稀釋濃度：染液濃度高，著色快，各種細(xì)胞著色深，薛氏點(diǎn)、茂氏點(diǎn)等粗大顯著；染液濃度低，著色慢，但各種細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)著色均勻、清晰，如環(huán)狀體、子孢子及瘧色素等顏色分明，但薛氏點(diǎn)、茂氏點(diǎn)不夠清楚。染液

35、稀釋后，一般在半小時(shí)內(nèi)使用，時(shí)間太長也會(huì)影響染色效果。4、染色時(shí)間：染色時(shí)間長，染色效果好，反之則差。染色時(shí)間長短與溫度有關(guān)，溫度高著色快，故染色時(shí)間可適當(dāng)縮短，溫度低染色慢，則時(shí)間可適當(dāng)延長。所以染色時(shí)間長短要隨著染液的質(zhì)量、新舊、濃度及溫度而決定。5、稀釋和沖洗用水：為使厚、薄血膜著色好，應(yīng)使稀釋的染液呈中性或稍偏堿性，故應(yīng)用pH7.07.2的水稀釋。當(dāng)染色太藍(lán)，可用pH較低的緩沖水沖洗；如染色太紅，則用pH較高的緩沖液沖洗；如染色太深，可延長沖洗時(shí)間，予以校正。6、沖洗方法：染色后不要直接將染液倒掉，應(yīng)將玻片連同染液一起放在水中漂洗，或沿玻片及染色缸邊緣加水使染液表層溢出，并輕輕沖洗，以

36、免染液色素顆粒玷污血膜。如果你染色的質(zhì)量不高應(yīng)該做些什么？首先，檢查每一個(gè)技術(shù)步驟是否合理如果血涂片、固定、稀釋染液，清洗染液器具以及儲(chǔ)存各項(xiàng)操作都符合要求，你依然得不到合格的染色后的血片。那么很可能是水的質(zhì)量不過關(guān)（PH值不合適）或者吉氏原液自身質(zhì)量不過關(guān)。有時(shí)候僅僅是一些片子的染色不理想，這種情況下，可以重新涂片。如果情況不允許，你可以重新染色。瘧原蟲鏡檢技術(shù)瘧原蟲鏡檢時(shí)，首先須對(duì)正常薄厚血膜中各種細(xì)胞的形態(tài)、內(nèi)部結(jié)構(gòu)和染色性質(zhì)加以識(shí)別。這樣在陽性血膜中才能及時(shí)正確診斷并判斷瘧原蟲的蟲種和各期形態(tài)。一、血液血液由血漿和血細(xì)胞組成。從血管取少量血液加入適量抗凝劑（如枸櫞酸鈉）經(jīng)自然沉降或離心

37、沉淀后，血液可分出三層：上層為淡黃色的血漿，下層為紅細(xì)胞，中間的薄層為白細(xì)胞和血小板。血細(xì)胞約占血液容積的45%，包括紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板。在正常生理情況下，血細(xì)胞和血小板有一定的形態(tài)結(jié)構(gòu)，并有相對(duì)穩(wěn)定的數(shù)量。血細(xì)胞分類和計(jì)數(shù)的正常值如下： 紅細(xì)胞350萬550萬個(gè)/l 中性粒細(xì)胞5070有粒白細(xì)胞嗜酸性粒細(xì)胞0.53 白細(xì)胞 （粒細(xì)胞） 嗜堿性粒細(xì)胞01血細(xì)胞400010000個(gè)/l 淋巴細(xì)胞2030無粒白細(xì)胞血小板 單核細(xì)胞3810萬40萬個(gè)/l 二、血液中各種正常細(xì)胞形態(tài)（一）紅細(xì)胞：直徑通常是6m8m；形狀：人類的紅細(xì)胞是雙面凹的圓餅狀。邊緣較厚，而中間較薄，就好像是一個(gè)甜甜圈一樣，

38、只是當(dāng)中沒有一個(gè)洞而已。這種形狀可以最大限度的從周圍攝取氧氣。 圖5-1 紅細(xì)胞（二）白細(xì)胞：血液中的白細(xì)胞有五種，按照體積從小到大是：淋巴細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞。1、淋巴細(xì)胞：占白細(xì)胞總數(shù)的2030，圓形或橢圓形，大小不等。直徑68m的為小淋巴細(xì)胞， 912m的為中淋巴細(xì)胞， 1320m的為大淋巴細(xì)胞。小淋巴細(xì)胞數(shù)量最多，細(xì)胞核圓形，一側(cè)常有小凹陷，染色質(zhì)致密呈塊狀，著色深，核占細(xì)胞的大部，胞質(zhì)很少，在核周成一窄緣，嗜堿性，染成蔚藍(lán)色，含少量嗜天青顆粒。中淋巴細(xì)胞和大淋巴細(xì)胞的核橢圓形，染色質(zhì)較疏松，故著色較淺，胞質(zhì)較多，胞質(zhì)內(nèi)也可見少量嗜天青顆粒。少數(shù)大、中

39、淋巴細(xì)胞的核呈腎形，胞質(zhì)內(nèi)含有較多的大嗜天青顆粒，稱為大顆粒淋巴細(xì)胞，見圖5-2。圖5-2淋巴細(xì)胞2、嗜堿性粒細(xì)胞呈圓形：數(shù)量最少，占白細(xì)胞總數(shù)的01%。細(xì)胞呈球形，直徑1012m。胞核分葉或呈S形或不規(guī)則形，著色較淺。胞質(zhì)內(nèi)含有嗜堿性顆粒，大小不等，分布不均，染成藍(lán)紫色，可覆蓋在核上（圖53）。圖5-3嗜堿性粒細(xì)胞3、嗜酸性粒細(xì)胞：占白細(xì)胞總數(shù)的0.53。細(xì)胞呈球形，直徑1015m，核常為23葉，呈眼鏡狀，深紫色，胞質(zhì)內(nèi)充滿粗大（直徑0.51.0m）、均勻、略帶折光性的嗜酸性顆粒，染成桔紅色（圖54）。通常有嗜酸性粒細(xì)胞容易破碎，顆?？煞稚⒂诩?xì)胞周圍。嗜酸性粒細(xì)胞也能作變形運(yùn)動(dòng)，并具有趨化性

40、。它能吞噬抗原抗體復(fù)合物，釋放組胺酶滅活組胺，從而減弱過敏反應(yīng)。嗜酸性粒細(xì)胞還能借助抗體與某些寄生蟲表面結(jié)合，釋放顆粒內(nèi)物質(zhì)，殺滅寄生蟲。故而嗜酸性粒細(xì)胞具有抗過敏和抗寄生蟲作用。在過敏性疾病或寄生蟲病時(shí)，血液中嗜酸性粒細(xì)胞增多。它在血液中一般僅停留數(shù)小時(shí)，在組織中可存活812天。圖5-4 嗜酸性粒細(xì)胞4、中性粒細(xì)胞：中性粒細(xì)胞占白細(xì)胞總數(shù)的5070，是白細(xì)胞中數(shù)量最多的一種。細(xì)胞呈球形，直徑1012m，核染色質(zhì)呈團(tuán)塊狀。核的形態(tài)多樣，有的呈臘腸狀，稱桿狀核；有的呈分葉狀，葉間有細(xì)絲相連，稱分葉核。細(xì)胞核一般為25葉，正常人以23葉者居多。中性粒細(xì)胞的胞質(zhì)染成粉紅色，含有許多細(xì)小的淡紫色及淡紅

41、色顆粒，顆?？煞譃槭忍烨囝w粒和特殊顆粒兩種。嗜天青顆粒較少，呈紫色，約占顆粒總數(shù)的 20%，光鏡下著色略深，體積較大。中性粒細(xì)胞在血液中停留約67小時(shí)，在組織中存活約13天。圖5-5中性粒細(xì)胞5、單核細(xì)胞：占白細(xì)胞總數(shù)的38。它是白細(xì)胞中體積最大的細(xì)胞。直徑1420m，呈圓形或橢圓形。胞核形態(tài)多樣，呈卵圓形、腎形、馬蹄形或不規(guī)則形等。核常偏位，染色質(zhì)顆粒細(xì)而松散，故著色較淺。胞質(zhì)較多，呈弱嗜堿性，含有許多細(xì)小的嗜天青顆粒，使胞質(zhì)染成深淺不勻的灰藍(lán)色。顆粒內(nèi)含有過氧化物酶、酸性磷酸酶、非特異性酯酶和溶菌酶，這些酶不僅與單核細(xì)胞的功能有關(guān)，而且可作為與淋巴細(xì)胞的鑒別點(diǎn)。圖5-6單核細(xì)胞（三）血小板

42、：血小板或稱血栓細(xì)胞, 正常數(shù)值為10萬40萬l。它是骨髓中巨核細(xì)胞胞質(zhì)脫落下來的小塊，故無細(xì)胞核，表面有完整的細(xì)胞膜。血小板體積甚小，直徑24m，呈雙凸扁盤狀；當(dāng)受到機(jī)械或化學(xué)刺激時(shí)，則伸出突起，呈不規(guī)則形。在血涂片中，血小板常呈多角形，聚集成群。血小板中央部分有著藍(lán)紫色的顆粒，周邊部呈均質(zhì)淺藍(lán)色（圖57）。圖5-7 血小板三、薄血膜鏡檢鏡檢瘧原蟲一般查厚血膜，薄血膜僅作為原蟲分類時(shí)的參考和血片編號(hào)之用切記在只鏡檢薄血膜時(shí)不能得出陰性的結(jié)論。（一）各種瘧原蟲各期形態(tài)鑒別1、被寄生的紅細(xì)胞形態(tài)大小及染色深淺度（是否褪色）；2、胞漿色彩及其濃淡，結(jié)構(gòu)疏密，有否空泡及不著色帶，體積大??；3、色素斑

43、點(diǎn)（薛氏點(diǎn)、茂氏點(diǎn)）；4、查其他各期形態(tài)是否存在作參考；5、色素顆粒的形態(tài)、顏色、排列。對(duì)于這一點(diǎn)應(yīng)掌握，尤其是厚血膜更為重要。否則在形態(tài)鑒別上會(huì)混淆弄錯(cuò)。（二）瘧色素顆粒鑒別1、與原蟲在同一水平面；2、有立體感；3、色澤特殊，只有單色（色澤與背景色有關(guān)，須將視野放暗些）；4、形狀如米粒狀、沙粒狀、顆粒狀、短桿狀，細(xì)?？赡鄢啥?。（三）大滋養(yǎng)體與大配子體的形態(tài)鑒別1、大滋養(yǎng)體：大小一般不超過被寄生的紅細(xì)胞的3/4。核一個(gè)或延長呈帶狀，周圍不著色帶不明顯。胞漿邊緣不整齊，有時(shí)有空泡。在厚血膜上表現(xiàn)有活動(dòng)性，故形態(tài)變化很大，胞漿收縮不均勻，有時(shí)斷裂成團(tuán)塊，瘧色素分布凌亂。2、大配子體：大小幾乎充滿

44、真?zhèn)€紅細(xì)胞。核一個(gè)，較緊密，常偏于一側(cè)，周圍有一圈不染色帶。胞漿邊緣整齊，無空泡。瘧色素平均散在分布。在厚血膜上則體形較小，胞漿收縮均勻，不染色帶明顯，瘧色素分布規(guī)則則沿邊分布。（四）裂殖子與血小板的形態(tài)鑒別1、血小板：由骨髓巨噬細(xì)胞成熟脫落后解離而成，因此結(jié)構(gòu)松散，嚴(yán)格地說不是個(gè)完整細(xì)胞（無核）。在吉氏染色中多見顯淡紅色或淡紫色，中間顆粒為紫紅色，形狀近似石榴子，且邊緣不甚光滑。2、裂殖子：由成熟裂殖體破裂逸出，以致類似血小板聚集一起，或單個(gè)、或三五成群，但形體較血小板小，直徑微米。核較大，相對(duì)的難見到胞漿，核染深紅色或紫紅色，四周胞漿圍繞，染藍(lán)色，呈卵園形，邊緣光滑。如附近查有瘧色素顆粒是

45、有力的佐證。四、厚血膜鏡檢厚血膜由于細(xì)胞重迭，干燥緩慢，以致蟲體皺縮，空泡消失，胞質(zhì)變形，加之紅細(xì)胞被溶解，所以蟲種和蟲體的鑒別比薄血膜困難，但用血量多，瘧原蟲鏡下密度高，因此檢出率，常用于瘧原蟲檢出。（一）檢查方法1、在厚血膜上先滴香柏油一滴，用油鏡（100）鏡檢。2、鏡檢時(shí)應(yīng)從厚血膜上開始。從上而下，從左到右，在由右至左，這樣往返一行接一行，一個(gè)視野接一個(gè)視野順序的查完整個(gè)血膜。（二）鑒別要點(diǎn)1、在厚膜中必須根據(jù)瘧原蟲的核、胞漿、瘧色素三個(gè)條件鑒別是否是瘧原蟲及何種蟲種。在一般情況下，具備三條中的二條也能給以判定。2、有時(shí)因染色較淺，不見原蟲的核和胞漿，只見到典型的瘧色素可斷定。3、僅見到

46、核和少許胞漿，或者因染液過偏酸性連胞漿也看不清楚，同時(shí)又不見色素，但是只要對(duì)被染血膜的顏色、紅細(xì)胞的殘影、瘧原蟲所處的背景加以綜合分析，仍可正確做出判斷。看完血片后，若為陽性，應(yīng)立即按血片編號(hào)登記原蟲的種、期，以防差錯(cuò)。為檢查后記錄結(jié)果方便起見，對(duì)瘧原蟲的種、期可使用英文字母縮寫作為代號(hào)。間日瘧=P.v；惡性瘧=P.f；三日瘧=P.m；卵形瘧=P.o；環(huán)形體=R（Ring form）；大滋養(yǎng)體=T(trophozoite)；裂殖體=S(Schizont)；配子體=G(Gametocytr)。五、雜質(zhì)與瘧原蟲的鑒別由于染液和載玻片上可能存在雜質(zhì)以及染液酸堿度的影響，常與瘧原蟲混淆，應(yīng)注意鑒別！見圖5-8（一）疑似瘧色素 血魔上的染料殘?jiān)盎覊m，有時(shí)被誤認(rèn)為瘧色素，可依據(jù)顆粒的大小，色澤及分布范圍加以區(qū)別。轉(zhuǎn)動(dòng)顯微鏡微調(diào)時(shí)，可見其浮于紅細(xì)胞上，與瘧原蟲不在一個(gè)平面。（二）疑似瘧原蟲核 細(xì)菌尤其是球菌或白細(xì)胞破裂后散出的顆粒，皆為紅色小點(diǎn)，最易混淆。但球菌形體較大，邊緣光滑，常多見聚集一處，分布較廣。嗜中性和嗜酸性粒細(xì)胞顆粒，著色較淡，邊緣整齊，附近常有白細(xì)胞的碎屑。（三）疑似瘧原蟲胞質(zhì) 網(wǎng)織紅細(xì)胞殘留物和白細(xì)胞殘留物通常為藍(lán)色，與瘧原蟲的胞質(zhì)相似，如與某些紅點(diǎn)結(jié)合在一起，易被誤認(rèn)為是瘧原蟲。鑒別時(shí)如形同大滋養(yǎng)體，可依據(jù)瘧色素的特點(diǎn)加以區(qū)別；如形狀似小滋養(yǎng)體，可依據(jù)蟲體大小、折光是否