普通固體制劑2015版微生物限度方法適用性

1、XX制藥有限公司第2頁(yè)共10頁(yè)普通固體制劑2015版微生物限度方法適用性試驗(yàn)報(bào)告微生物限度方法適用性試驗(yàn)報(bào)告文件編號(hào)：XXXXXXX制藥有限公司微生物限度方法適用性試驗(yàn)報(bào)告第 頁(yè)共10頁(yè)微生物限度方法適用性試驗(yàn)報(bào)告第 頁(yè)共10頁(yè)微生物限度方法適用性試驗(yàn)報(bào)告起草人部門日期審核人部門日期批準(zhǔn)人日期1、概述本公司主要產(chǎn)品之一，本產(chǎn)品已進(jìn)行批量生產(chǎn)并已進(jìn)行工藝驗(yàn)證,微生物檢驗(yàn)相對(duì)穩(wěn)定，由于中華人民共和國(guó)藥典2015年版對(duì)微生物限度檢查方法改變，其產(chǎn)品的微生物檢驗(yàn)方法和培養(yǎng)基發(fā)生改變，可能影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。為確保檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性及適應(yīng)性，測(cè)定方法的可靠性進(jìn)行驗(yàn)證，根據(jù)樣品特性制定檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)條件，

2、按制定的方法進(jìn)行試驗(yàn)，根據(jù)驗(yàn)證結(jié)果判斷是否符合驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。2、驗(yàn)證依據(jù)：中華人民共和國(guó)藥典2015版四部通則1105非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法、1106非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法、1107非無(wú)菌藥品微生物限度標(biāo)準(zhǔn)。3、驗(yàn)證目的建立該產(chǎn)品的微生物限度檢查方法，并對(duì)其有效性進(jìn)行評(píng)價(jià)，確保試驗(yàn)方法的完整性，保證檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性。4、驗(yàn)證小組成員及職責(zé)人員姓名職位職責(zé)組長(zhǎng)質(zhì)量部經(jīng)理質(zhì)量負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)驗(yàn)證報(bào)告的審核、批準(zhǔn)。副組長(zhǎng)質(zhì)量部QC主任負(fù)責(zé)對(duì)確認(rèn)記錄、數(shù)據(jù)進(jìn)行復(fù)核，確認(rèn)報(bào)告的總結(jié)。負(fù)責(zé)對(duì)驗(yàn)證及檢驗(yàn)記錄、數(shù)據(jù)、結(jié)果進(jìn)行分析和匯總。成員檢驗(yàn)人員1、負(fù)責(zé)驗(yàn)證報(bào)告的起草2、負(fù)責(zé)檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的

3、收集、記錄的填寫5、主要驗(yàn)證用儀器儀表的校驗(yàn)儀器名稱規(guī)格型號(hào)檢定情況檢定部門立式壓力蒸汽滅菌器生化培養(yǎng)箱超凈工作臺(tái)結(jié)果：確認(rèn)人：日期6、驗(yàn)證用菌種及培養(yǎng)基菌種名稱編號(hào)（批號(hào)）來(lái)源購(gòu)進(jìn)日期傳代日期傳代次數(shù)銅綠假單胞菌大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽抱桿菌白色念珠菌黑曲霉培養(yǎng)基、緩沖液名稱批號(hào)配制批號(hào)有效期至胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基麥康凱液體培養(yǎng)基麥康凱瓊脂培養(yǎng)基pH70無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液復(fù)核人日期7、試驗(yàn)菌懸液制備7.1需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)、霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)菌株培養(yǎng)接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)

4、基上，于30-35C培養(yǎng)3天；接種白色念珠菌、黑曲霉于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上，于30-35C培養(yǎng)5天，用于需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)。接種白色念珠菌、黑曲霉于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，于20-25C培養(yǎng)5天，用于霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)。取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物，用PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的菌懸液；取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物加人35ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH70無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液將抱子洗脫。然后，采用適宜的方法吸出抱子懸液至無(wú)菌試管內(nèi)，用含005%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無(wú)菌氯化鈉-

5、蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的黑曲霉抱子懸液。菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用；若保存在28C，可在24小時(shí)內(nèi)使用。黑曲霉抱子懸液可保存在28C，在驗(yàn)證過(guò)的貯存期內(nèi)使用。72大腸埃希菌檢查方法適用性實(shí)驗(yàn)菌株培養(yǎng)將大腸埃細(xì)菌接種于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上，30-35C培養(yǎng)18-24小時(shí)，取培養(yǎng)物適量，用PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液制成適宜濃度的菌懸液。菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用；若保存在28C，可在24小時(shí)內(nèi)使用。8、供試液的制備取供試品10g，加PH7.0無(wú)菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，混勻，制成1：10的供試液。81需氧菌總數(shù)、霉菌及酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)方法適用性試

6、驗(yàn)8.1.1試驗(yàn)組取上述1:10供試液1ml和不大于100cfu試驗(yàn)菌(金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌、白色念珠菌、黑曲霉)，分別注入無(wú)菌平皿中，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，按平皿法測(cè)定其菌數(shù)。取上述1:10供試液1ml和不大于100cfu試驗(yàn)菌(白色念珠菌、黑曲霉)，分別注入無(wú)菌平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，按平皿法測(cè)定其菌數(shù)。胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基用于需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)；沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基用于霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)。8.1.2供試品對(duì)照組取規(guī)定量供試液，按平皿法測(cè)定供試品本底菌數(shù)。8.1.3菌液對(duì)照組：測(cè)定所加的菌液數(shù)

7、。814陰性對(duì)照組：取試驗(yàn)用的稀釋液1ml,置無(wú)菌平皿中，注入培養(yǎng)基，凝固，倒置培養(yǎng)。每種計(jì)數(shù)用的培養(yǎng)基各制備2個(gè)平板，均不得有菌生長(zhǎng)。8.1.5培養(yǎng)：需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)平板倒置于3035C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天，霉菌、酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)平板倒置于2025C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5天。8.1.6回收率計(jì)算：試驗(yàn)組的回收率（）=試驗(yàn)組平均菌落數(shù)-供試品對(duì)照組平均菌落數(shù)菌液對(duì)照組的平均菌落數(shù)%8.1.7結(jié)果判斷：試驗(yàn)組的菌回收率（試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)減去供試品對(duì)照組的平均菌落數(shù)的值占菌液對(duì)照組的平均落數(shù)的百分率）應(yīng)在0.52范圍內(nèi)。8.2控制菌檢驗(yàn)方法驗(yàn)證8.2.1大腸埃希菌：8.2.1.1試驗(yàn)組：取1：10的供試液10m

8、l和不大于100cfu的大腸埃希菌菌液1ml,接種至100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，3035C培養(yǎng)18小時(shí)。8.2.1.2供試品對(duì)照組：取1：10的供試液10ml接種至100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，3035C培養(yǎng)18小時(shí)。8.2.1.3陽(yáng)性對(duì)照組：取不大于100cfu的大腸埃希菌菌液1ml，接種至100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，3035C培養(yǎng)18小時(shí)。8.2.1.4陰性對(duì)照組：取試驗(yàn)用的稀釋液10ml，接種至100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，3035C培養(yǎng)18小時(shí)。取上述培養(yǎng)物1ml接種100ml麥康凱液體培養(yǎng)基中，4244C培養(yǎng)24小時(shí)。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線

9、接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，3035C培養(yǎng)18小時(shí)。若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上有菌落生長(zhǎng)，應(yīng)進(jìn)行分離、純化適宜的鑒定試驗(yàn)，確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上沒(méi)有菌落生長(zhǎng)，或雖有菌落生長(zhǎng)但鑒定結(jié)果為陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌。8.2.1.6結(jié)果判斷：在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，陰性對(duì)照組與供試品對(duì)照組應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，其他各試驗(yàn)組應(yīng)有菌落生長(zhǎng)，并且經(jīng)鑒定，顯MUG與靛基質(zhì)陽(yáng)性。XX制藥有限公司第 頁(yè)共10頁(yè)微生物限度方法適用性試驗(yàn)報(bào)告第 頁(yè)共10頁(yè)菌種產(chǎn)品批號(hào)試驗(yàn)組（cfu）供試品對(duì)照組（cfu）菌液組皿1皿2平均皿1皿2平均皿1皿銅綠假單胞菌金黃色葡萄球菌枯草芽抱桿菌白色念珠菌黑曲霉結(jié)論檢驗(yàn)人日期復(fù)核人日期9、需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)記錄菌種產(chǎn)品批號(hào)試驗(yàn)組（cfu）供試品對(duì)照組（cfu）菌液組皿1皿2平均皿1皿2平均皿1皿白色念珠菌黑曲霉結(jié)論檢驗(yàn)人日期復(fù)核人日期10、霉菌及酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)記錄11、大腸埃希菌檢查方法適用性試驗(yàn)記錄產(chǎn)品批號(hào)試驗(yàn)組麥康凱瓊脂培養(yǎng)基BL（ml）MUG靛基質(zhì)供試品對(duì)照組試驗(yàn)組陽(yáng)性對(duì)照組陰性對(duì)照組供試品對(duì)照組試驗(yàn)組陽(yáng)性對(duì)照組陰性對(duì)照組供試品對(duì)照組試驗(yàn)組陽(yáng)性對(duì)照組陰性對(duì)照組結(jié)論檢驗(yàn)員日期復(fù)核人日期備注：“+”為有菌生長(zhǎng)或呈陽(yáng)性，“-”為無(wú)菌落生長(zhǎng)或呈陰性。12、結(jié)論：本