山茱萸總苷分離純化工藝研究

1、山茱萸總苷分散純化工藝研究李小娜呂立勛周潔徐海燕陳蘋蘋【摘要】目的應用大孔吸附樹脂對山茱萸中環(huán)烯醚萜苷類身分舉行分散純化，觀察大孔樹脂純化山茱萸總苷的工藝參數(shù)。要領觀察上樣量、洗脫劑濃度、洗脫體積、上樣濃度等因素對HPD-100大孔吸附樹脂純化山茱萸環(huán)烯醚萜苷的影響。以洗脫液中莫諾苷和馬錢苷含量作為觀察指標，用HPL法測定其含量，確定最正確工藝參數(shù)。結果洗脫溶劑應為50%乙醇，大孔樹脂每利用兩次必要再生1次，最正確上樣濃度為0.25g/l，洗脫溶劑的用量為8倍的吸附原液體積，吸附容量為10l。結論接納大孔樹脂分散純化的山茱萸總苷可用于制備環(huán)烯醚萜苷制劑?！娟P鍵詞】山茱萸總苷；大孔吸附樹脂；高效

2、液相色譜法；純化Abstrat：bjetiveTstudythetehnlgialparaetersfpurifiatinfttalglysidefrrnusffiinalisitharprusresin.ethdsThesaplevlue,elutinnentratin,vlueandsaplenentratinerebservedandparediththseelutinslvents.ThepurifiatinfirididglysidesasevaluatedithntentsfrrnisideandlganinbyHPLethdsResultsElutingslventas50%et

3、hanl,thearprusresinusedtienededtbereneed,thebestsaplenentratinas0.25g/l,thevluefelutingslventasEighttiesthefvluefsapleslutin,theabsrptinapaityas10l.nlusinIrididglysideanbepurifiedbyarprusItisafeasibleethdtprduepreparatinKeyrds：Ttalglysidesfrusffiinalis;arprusresin;HPL;Purifiatin山茱萸總苷(Ttalglusidesfrr

4、nusffiinalis，TG)為中藥山茱萸的重要藥效部位，包羅馬錢苷lganin、莫諾苷rrniside、獐牙菜苷、馬鞭草苷、山茱萸新苷等十余種環(huán)烯醚萜苷，已經證明可以或許落血糖并對糖尿病心臟和腎病病變有必然的庇護作用13，有抗炎、免疫按捺作用46，對阿爾采末病和腦堵塞有治療作用78。大孔吸附樹脂對單味中藥提取物中苷類、黃酮、生物堿的分散純化結果精良9，10。本工藝應用大孔吸附樹脂對山茱萸中環(huán)烯醚萜苷類身分舉行分散純化，并觀察大孔樹脂純化山茱萸總苷的參數(shù)。1儀器與試藥1.1儀器Agilent1100Series高效液相色譜儀安捷倫科技；KD-16H高速型離心機科大創(chuàng)新股份中佳分公司；BT12

5、5D十萬分之一天平塞多利斯細密科學儀器；Heidlph2旋轉蒸發(fā)儀。1.2藥品與試劑山茱萸藥材購于唐山市醫(yī)藥藥材公司；馬錢苷、莫諾苷比較品自提娶精制，經1H-NR和13-NR確定為馬錢苷和莫諾苷，歸一化法測定含量大于99.3%；HPD-100大孔樹脂滄州寶恩化工；甲醇為色譜純FisherheAlert，別的試劑均為闡發(fā)純，水為重蒸餾水。2要領與結果2.1山茱萸吸附原液的制備稱取山茱萸粉40目200g，加8倍量30乙醇浸泡留宿，回流提取2次，1h/次，過濾，歸并濾液，濾液接納乙醇，濃縮制成每毫升相稱于0.25g生藥的溶液，靜置，濾過，即得山茱萸吸附原液，4保存?zhèn)溆谩?.2大孔吸附樹脂預處置懲罰與

6、再生大孔吸附樹脂一樣平常含有未聚合的單體及殘留溶劑，利用前須先行撤除。樹脂用95%乙醇浸泡24h，傾去上浮物后濕法裝柱，用乙醇洗至流出液與水混淆不出現(xiàn)白色乳濁征象即可，然后以大量蒸餾水洗凈柱中乙醇，水浸泡備用；再生時用90乙醇洗脫至流出液無色，以大量水洗去乙醇即可。假設樹脂顏色較深，用0.1l/L氫氧化鈉溶液浸泡2h，用水洗至中性，再加0.1l/L鹽酸溶液浸泡2h，用水洗至中性，末了用95%乙醇洗至洗脫液與等體積水混淆不污濁，用蒸餾水洗至無醇，備用。2.3山茱萸總苷中莫諾苷和馬錢苷的含量測定色譜柱為Diansil18色譜柱2504.6，5；活動相為甲醇-水溶液梯度洗脫，洗脫劑甲醇在08in為3

7、2%，在815in為32%36%，在1520in為36%；柱溫為室溫；流速1l/in；檢測波長237n；進樣量20l。配制莫諾苷和馬錢苷的系列比較品溶液，20l進樣闡發(fā)。以莫諾苷和馬錢苷的峰面積Y為縱坐標，莫諾苷和馬錢苷的濃度為橫坐標，經回歸處置懲罰得尺度曲線的回歸方程。此中莫諾苷為Y=25404+21.01r=0.9995，馬錢苷為Y=20518+25.36r=0.9993。莫諾苷和馬錢苷在0.01360.533g/l范疇內線性精良。2.4HPD-100大孔樹脂純化山茱萸總苷工藝參數(shù)的研究取HPD-100大孔樹脂20g，濕法裝柱，預處置懲罰后備用。別離取0.25g/l的吸附原液5l，5支大孔

8、樹脂柱上樣，通過舉舉措態(tài)吸附。用水洗脫樹脂柱至洗脫液近無色，再用10%，30%，50%，70%，95%乙醇50l洗脫，網絡洗脫液，定容50l，測定莫諾苷和馬錢苷的含量。結果見表1。由表1可知山茱萸總苷最正確洗脫劑為50%乙醇。取差異濃度0.25，0.5，1，2g/l的山茱萸吸附原液5l，用50%乙醇50l洗脫，網絡洗脫液，定容50l，測定莫諾苷和馬錢苷的含量。結果見表2。由表2可知SPF-100大孔樹脂的最正確上樣濃度為0.25g/l的吸附原液。表2差異上樣濃度的含量測定結果略別離取0.25g/l的吸附原液5l，大孔樹脂柱上樣，用水洗脫樹脂柱至洗脫液近無色，再別離用50%乙醇30l(6倍，40

9、l(8倍，50l10倍洗脫，網絡洗脫液，定容50l，測定莫諾苷和馬錢苷的含量。結果見表3。由表3可知SPF-100大孔樹脂的洗脫溶劑的用量10倍的吸附原液體積，但綜合思量洗脫溶劑用量及接納溶劑等因素，可選8倍量的洗脫溶劑。表3差異洗脫溶劑用量的含量測定結果略別離取0.25g/l的吸附原液5，10，15，20l，大孔樹脂柱上樣，用水洗脫樹脂柱至洗脫液近無色，再別離用50%乙醇50l洗脫，網絡洗脫液，定容50l，測定莫諾苷和馬錢苷的含量。結果見表4。由表4可知SPF-100大孔樹脂在吸附原液為5l時吸附最完全，但綜合思量，吸附原液為10l時服從最高。表4差異吸附容量的含量測定結果略3討論大孔樹脂精

10、制苷類具有吸附容量大、洗脫服從高等長處，使馬錢苷和莫諾苷的含量進步，在預處置懲罰的條件下不失為一種提取苷類的精良吸附劑。中藥身分在樹脂上的吸附大概為放熱歷程，低溫有利于進步中藥身分的比上柱量，因此上樣前將吸附原液放冰箱低溫處置懲罰可增大吸附量。吸附原液上柱前，必需舉行抽濾或離心等預處置懲罰以撤除沉淀和雜質，上樣液愈澄清，山茱萸總苷的純化率愈高，亦能進步樹脂的利用壽命。曾接納紫外法測定山茱萸總苷的含量，但是經大孔樹脂富集后得到的總苷在237n擺布并沒有最大汲取峰，加上紫外法滋擾多，特殊是在中藥身分龐大的環(huán)境下很難確定其正確性，莫諾苷和馬錢苷是山茱萸總苷中含量最高的兩種環(huán)烯醚萜苷，約占總苷的85，

11、應選用了HPL法同時測定莫諾苷和馬錢苷的要領確定山茱萸總苷的分散純化工藝。【參考文獻】1陳霞,沈愛寶,錢東生.山茱萸差異提取部位對小鼠血糖的影響J.南通醫(yī)學院學報,2022,24(4):365.2時艷,許惠琴.山茱萸環(huán)烯醚萜總苷對實行性糖尿病心臟病變的庇護作用J.南京中醫(yī)藥大學學報,2022,22(1):35.3XuHQ,HaHP,ZhangX,etal.rrnisideprtetsulturedhuanubilialvEinendthelialellsfrdaagebyhighabientgluseJ.AtaPharalgiaSinia,2022,25(4):412.4趙世萍,陳玉武,郭景珍.山茱萸總甙的抗炎免疫按捺作用J.中日友愛病院學報,1996,10(4):295.5李建民,周勇,張麗,等.山茱萸總甙對HUVE表達IA-1、D44的影響J.中國免疫學雜志,2000,16(11):604.6孟晶，唐仕波，李辰，等.山茱萸總甙對大鼠角膜移植排擠反響免疫按捺作用機制研究J.中國病理生理雜志，2022，21(5):927.7褚燕琦，李瑋，張?zhí)m，等.山茱萸環(huán)烯醚萜苷對卵白磷酸酶按捺劑岡田酸擬阿爾采末病細胞模子的作用J.中國藥理學轉達，2022，22(8):96