農(nóng)業(yè)微生物配套實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)二培養(yǎng)基的制備和滅菌

1、農(nóng)業(yè)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)1實(shí)驗(yàn)二培養(yǎng)基的制備和滅菌 1本實(shí)驗(yàn)的目的和要求 了解配制培養(yǎng)基的原理，并掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟；了解加壓蒸汽滅菌的原理，并掌握其具體操作方法。2實(shí)驗(yàn)二 培養(yǎng)基的制備和滅菌2實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和原理 馬丁氏培養(yǎng)基的配制 手提式高壓蒸汽滅菌鍋的使用 生理鹽水的配制3實(shí)驗(yàn)二培養(yǎng)基的制備和滅菌馬丁氏培養(yǎng)基 馬丁氏培養(yǎng)基是一種用來分離真菌的選擇性培養(yǎng)基。4馬丁氏培養(yǎng)基配方如下： 葡萄糖 10g蛋白胨 5g KH2PO4 1g MgSO47H2O 05g 瓊脂 1520g 水 -1000ml pH 自然 此培養(yǎng)液1000ml加1%孟加拉紅水溶液3.3ml。臨用時(shí)每100ml培養(yǎng)基中加1%鏈

2、霉素液0.3ml。 5實(shí)驗(yàn)二培養(yǎng)基的制備和滅菌高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個(gè)密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時(shí)由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌器內(nèi)的壓力，從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100的溫度。導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。6實(shí)驗(yàn)二培養(yǎng)基的制備和滅菌需用的儀器和試劑等 KH2PO4、MgSO47H2O、蛋白胨，葡萄糖、瓊脂、孟加拉紅、試管、三角瓶、燒杯、量杯、天平、手提式高壓蒸汽滅菌鍋，牛角匙、pH試紙、棉花、牛皮紙等。7實(shí)驗(yàn)二培養(yǎng)基的制備和滅菌4實(shí)驗(yàn)步驟 培養(yǎng)基的配制 稱量溶化

3、調(diào)pH過濾分裝加塞包扎滅菌 無菌檢查 8馬丁氏培養(yǎng)基的配制1稱量和溶化 按培養(yǎng)基配方，準(zhǔn)確稱取各成分，并將各成分依次溶化在少于所需要的水量中。待各成分完全溶化后，補(bǔ)足水分到所需體積。再將孟加拉紅配成1%的溶液，在1000ml培養(yǎng)液中加入1%的孟加拉紅溶液33ml，混勻后，加入瓊脂加熱溶化。 2分裝、加塞、包扎、滅菌，無菌檢查。 3鏈霉素的加入 由于鏈霉素受熱容易分解，所以臨用時(shí)，將培養(yǎng)基溶化后待溫度降至45左右時(shí)才能加入。9滅菌操作步驟1首先將內(nèi)層滅菌桶取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。 2放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠，以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果。

4、三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。 3加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對稱的方式同時(shí)旋緊相對的兩個(gè)螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。10滅菌操作步驟4加熱，并同時(shí)打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣。待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時(shí)，控制熱源，維持壓力至所需時(shí)間。 本實(shí)驗(yàn)用 105kg/cm2，1213，25分鐘滅菌。 5滅菌所需時(shí)間到后，切斷電源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降至0時(shí)，打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品。6將取出的滅菌培養(yǎng)基放入 37溫箱培養(yǎng)24小時(shí)，經(jīng)檢查若無雜菌生長，即可待用。11實(shí)驗(yàn)二培養(yǎng)基的制備和滅菌生理鹽水的配制 0.85%的氯化鈉水溶液例如： 100ml生理鹽水配制：稱取0.85克氯化鈉，溶解在少量蒸餾水中，定容到100毫升。12實(shí)驗(yàn)二培養(yǎng)基的制備和滅菌1. 制備培養(yǎng)基 馬丁氏培養(yǎng)基 400ml/瓶，共3瓶 2.制備無菌生理鹽水（供稀釋平板計(jì)數(shù)用） 9ml/支 20支；90ml/瓶，4瓶（加玻璃珠）3.滅菌 121 25