農(nóng)業(yè)微生物配套實驗實驗二培養(yǎng)基的制備和滅菌

1、農(nóng)業(yè)微生物學(xué)實驗1實驗二培養(yǎng)基的制備和滅菌 1本實驗的目的和要求 了解配制培養(yǎng)基的原理，并掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟；了解加壓蒸汽滅菌的原理，并掌握其具體操作方法。2實驗二 培養(yǎng)基的制備和滅菌2實驗內(nèi)容和原理 馬丁氏培養(yǎng)基的配制 手提式高壓蒸汽滅菌鍋的使用 生理鹽水的配制3實驗二培養(yǎng)基的制備和滅菌馬丁氏培養(yǎng)基 馬丁氏培養(yǎng)基是一種用來分離真菌的選擇性培養(yǎng)基。4馬丁氏培養(yǎng)基配方如下： 葡萄糖 10g蛋白胨 5g KH2PO4 1g MgSO47H2O 05g 瓊脂 1520g 水 -1000ml pH 自然 此培養(yǎng)液1000ml加1%孟加拉紅水溶液3.3ml。臨用時每100ml培養(yǎng)基中加1%鏈

2、霉素液0.3ml。 5實驗二培養(yǎng)基的制備和滅菌高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。待水蒸汽急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時由于蒸汽不能溢出，而增加了滅菌器內(nèi)的壓力，從而使沸點增高，得到高于100的溫度。導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。6實驗二培養(yǎng)基的制備和滅菌需用的儀器和試劑等 KH2PO4、MgSO47H2O、蛋白胨，葡萄糖、瓊脂、孟加拉紅、試管、三角瓶、燒杯、量杯、天平、手提式高壓蒸汽滅菌鍋，牛角匙、pH試紙、棉花、牛皮紙等。7實驗二培養(yǎng)基的制備和滅菌4實驗步驟 培養(yǎng)基的配制 稱量溶化

3、調(diào)pH過濾分裝加塞包扎滅菌 無菌檢查 8馬丁氏培養(yǎng)基的配制1稱量和溶化 按培養(yǎng)基配方，準(zhǔn)確稱取各成分，并將各成分依次溶化在少于所需要的水量中。待各成分完全溶化后，補足水分到所需體積。再將孟加拉紅配成1%的溶液，在1000ml培養(yǎng)液中加入1%的孟加拉紅溶液33ml，混勻后，加入瓊脂加熱溶化。 2分裝、加塞、包扎、滅菌，無菌檢查。 3鏈霉素的加入 由于鏈霉素受熱容易分解，所以臨用時，將培養(yǎng)基溶化后待溫度降至45左右時才能加入。9滅菌操作步驟1首先將內(nèi)層滅菌桶取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。 2放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠，以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果。

4、三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。 3加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。10滅菌操作步驟4加熱，并同時打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣。待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時，控制熱源，維持壓力至所需時間。 本實驗用 105kg/cm2，1213，25分鐘滅菌。 5滅菌所需時間到后，切斷電源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降至0時，打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品。6將取出的滅菌培養(yǎng)基放入 37溫箱培養(yǎng)24小時，經(jīng)檢查若無雜菌生長，即可待用。11實驗二培養(yǎng)基的制備和滅菌生理鹽水的配制 0.85%的氯化鈉水溶液例如： 100ml生理鹽水配制：稱取0.85克氯化鈉，溶解在少量蒸餾水中，定容到100毫升。12實驗二培養(yǎng)基的制備和滅菌1. 制備培養(yǎng)基 馬丁氏培養(yǎng)基 400ml/瓶，共3瓶 2.制備無菌生理鹽水（供稀釋平板計數(shù)用） 9ml/支 20支；90ml/瓶，4瓶（加玻璃珠）3.滅菌 121 25