免疫擴(kuò)散技術(shù)——IgG測定課件

1、膠乳凝集試驗(yàn)RF測定實(shí)驗(yàn)原理以聚苯乙烯膠乳顆粒為載體的間接凝集試驗(yàn)： 聚苯乙烯顆粒具有很強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的能力，借此將抗原（變性IgG）與膠乳顆粒結(jié)合成致敏顆粒，直接與待測標(biāo)本中的抗體（RF）發(fā)生凝集反應(yīng)。 RF為抗變性IgG的抗體，因此本實(shí)驗(yàn)使用的是人IgG致敏的聚苯乙烯顆粒。試劑和器材RF檢測試劑（商品化試劑）RF陰性血清和陽性血清（試劑盒自帶）黑色反應(yīng)板、滴管、攪拌棒等操作方法在黑色反應(yīng)板上取3格，用滴管分別加待測血清、陽性血清和陰性血清各1滴，然后每格加入1滴致敏膠乳顆粒試劑。用攪拌棒充分混勻后，連續(xù)搖動23min后與對照比較，觀察結(jié)果。結(jié)果判斷膠乳顆粒凝集且液體澄清者為陽性， 膠乳顆粒

2、不凝集仍保持均勻膠乳狀者為陰性；首先觀察陽性血清和陰性血清的反應(yīng)結(jié)果，若前者為陽性反應(yīng)后者為陰性反應(yīng)，說明試劑有效；然后再觀察待測樣品的反應(yīng)情況，并判斷陰陽性。方法學(xué)評價該試驗(yàn)方法簡單、快速、特異性強(qiáng)、結(jié)果清晰易觀察判斷。觀察時應(yīng)注意排除非特異性凝集反應(yīng)。如何進(jìn)行半定量分析？ CIC測定實(shí)驗(yàn)原理： PEG沉淀法 聚乙二醇（PEG），分子量6000，具有較強(qiáng)的脫水作用，可引起蛋白質(zhì)沉淀，沉淀具有選擇性且對蛋白質(zhì)生物活性無影響。是免疫濁度測定技術(shù)中常用的增濁劑。PEG沉淀蛋白質(zhì)的選擇性與其濃度相關(guān)：2%PEG只能沉淀大分子， 4%PEG能沉淀較小分子的循環(huán)免疫復(fù)合物 大于5%PEG，選擇性沉淀特性

3、消失。在PH、離子強(qiáng)度等條件固定時，蛋白質(zhì)分子量越大，用以沉淀的PEG濃度越小。分離血清免疫復(fù)合物一般采用最終濃度為3%4%PEG。血清中加入最終濃度約為3.5%的PEG后，其濁度與血清中免疫復(fù)合物含量相關(guān)，用分光光度計測定其A值，代表免疫復(fù)合物相對含量。試劑和器材試劑1：0.1mol/L PH8.6硼酸緩沖液 試劑2：3.75%PEG-硼酸緩沖液 （已備好）儀器：721分光光度計 操作方法加樣：對每一份標(biāo)本，取兩試管按下表操作 加入物（單位：mL）對照管測定管待測血清0.10.1試劑1（硼酸緩沖液 ）3試劑2（PEG-硼酸緩沖液 ）3操作方法將以上反應(yīng)管充分混勻，置室溫1小時。用721分光光度計在460nm波長下混勻測定OD值。關(guān)機(jī)，清潔儀器，蓋上布罩。 正常參考值：OD0.15結(jié)果易受多種大分子蛋白質(zhì)的干擾，特異性差。CIC的檢出可以為多種與自身免疫相關(guān)疾病提供輔助診斷診斷指標(biāo)，但由于方法上的問題，其測定結(jié)果尚不能作